CC BY
86
ЭКОЛОГИЧЕСКАЯ ИММУНОЛОГИЯ
© коллектив авторов, 2015 удк 612.015.017.1:546.76].084
Михайлова И.В1., Смолягин А.И1., Красиков С.И1., Караулов А.В2.
комплексная оценка воздействия хрома на организм крыс: иммунология, биохимия, микроэлементы
1ГБОУ ВПО Оренбургский государственный медицинский университет Минздрава России, 460000, Оренбург; 2ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Минздрава России, 119991, Москва
В условиях модельного эксперимента исследовали влияние шестивалентного хрома на иммунологические, биохимические показатели и уровень микроэлементов экспериментальных животных с определением некоторых механизмов данного воздействия. Установлено: уменьшение фагоцитарного показателя, фагоцитарного индекса и метаболической активности нейтрофилов в спонтанном и индуцированном НСТ-тесте; снижение массы тимуса, селезенки и количества клеток в этих органах, а также изменение клеточного состава селезенки и костного мозга; ослабление интенсивности реакции гиперчувствительности замедленного типа, наиболее выраженное на 90-е сутки экспозиции; активация процесса апоптоза спленоцитов крыс Вистар, свободно-радикального окисления и перекисного окисления липидов на фоне подавления активности антиоксидантных ферментов; изменение уровня микроэлементов в крови и органах (селезенка, печень) крыс. В основе выявленных изменений параметров иммунной системы может лежать способность хрома активировать процессы свободно-радикального окисления, которую можно расценивать как значимый механизм цитотоксичности данного вещества.
Ключевые слова: хром; иммунитет; биохимия; микроэлементы.
Для цитирования: Иммунология. 2015; 36 (5): 300-305.
Mihaylova I.V1., Smolyagin A.I1., Krasikov S.I1., Karaulov A.V2.
COMPLEX ASSESSMENT OF CHROMIUM ON RATS: IMMUNOLOGY, BIOCHEMISTRY, TRACE ELEMENTS
'"Orenburg State Medical University, Ministry of Health of Russia", 460000, Orenburg; 2I.M. Sechenov First Moscow State Medical University. Ministry of Health of Russia, Moscow 119991
In the model experiment investigated the effects of hexavalent chromium in the immunological, biochemical parameters and the level of trace elements in experimental animals with the definition of some of the mechanisms of action. Established that reduction of phagocytic index, phagocytic index and metabolic activity of neutrophils in spontaneous and induced NBT-test; reduction in thymus weight, and spleen cell number in these organs, as well as changes in the cell composition of the bone marrow and spleen; reduces the intensity of delayed-type hypersensitivity, most pronounced on the 90 th day of exposure; activation of apoptosis of splenocytes Wistar rats, free-radical oxidation and lipid peroxidation in the repression activity of antioxidant enzymes; change in level of microelements in the blood and organs (spleen, liver) rats. The basis of the identified changes in the parameters of the immune system may be based on the ability of chromium to activate the process of free-radical oxidation, which can be regarded as a significant mechanism of cytotoxicity of the substance.
Keywords: chrome; immunity; biochemistry; trace elements; rats.
citation: Immunologiya. 2015; 36 (5): 300-305.
Многие экологические факторы влияют на различные звенья иммунитета, поскольку иммунная система является одной из наиболее чувствительных систем чутко реагирующей на любой контакт с химическими веществами на самых ранних этапах. Хром и его соединения заслуживают особого внимания поскольку, во-первых, относятся к тяжелым металлам, особенности циркуляции которых в окружающей среде определяются их устойчивостью, биологической доступностью и вероятностью вызывать негативные эффекты в очень малых концентрациях; во-вторых, хром является эссенциаль-ным нутриентом. Вместе с тем необходимо отметить и тот факт, что растворимые соединения шестивалентного хрома (хроматы и бихроматы) и их накопление в окружающей среде в результате производственной деятельности оказывают
Для корреспонденции: Михайлова Ирина валерьевна, [email protected]
For correspondence: Mihaylova Irina Valer'evna, probllab. [email protected]
более выраженное токсическое действие на организм человека и животных, чем соединения трехвалентного хрома и нерастворимые соединения шестивалентного хрома [1, 2]. В связи с этим особый интерес представляет комплексное исследование длительного воздействия малых доз хрома и его соединений на организм экспериментальных животных. Целью работы явилась комплексная оценка хронического воздействия хрома на иммунологические, биохимические показатели и уровень микроэлементов (МЭ) крыс Вистар с установлением некоторых механизмов данного влияния.
Материалы и методы. Экспериментальные исследования проведены на 308 здоровых половозрелых крысах-самцах линии Вистар массой 250-300 г. Доза токсиканта соответствовала одной ПДК [3]. Все животные, включенные в исследование, содержались на стандартном пищевом рационе и были разделены на 2 группы. Животные 1-й группы (контроль) содержались в том же виварии и получали воду. Животные 2-й группы вместе с питьевой водой перорально получали бихромат калия («Полихим», Россия) из расчета 20 мг/кг. Через 45, 90 и 135 суток животные выводились из
эксперимента летальной дозой эфирного наркоза. Результаты, полученные у животных первой группы в каждой серии экспериментов, достоверно не отличались между собой, что позволило объединить их и использовать в качестве контроля. Эксперименты проведены в соответствии с этическими нормами и рекомендациями по гуманизации работы с лабораторными животными, отраженными в «Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей» (Страсбург, 1985). В крови, тимусе, селезенке и костном мозге определяли число и состав клеток в соответствии с лабораторными методами исследования экспериментальных животных [4]. Фагоцитарная и метаболическая активность сегментоядерных нейтрофилов периферической крови и перитонеальных макрофагов оценивалась по фагоцитарному показателю (ФП), фагоцитарному индексу (ФИ) и тесту восстановления нитросинего тетразо-лия [5]. Клеточный цикл и апоптоз спленоцитов оценивали методом окрашивания ДНК-флуорохромами с последующей цитофлюометрией на проточном цитометре FACS Calibur [6]. Интенсивность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали по величине спонтанной и железоинду-цированной хемилюминесценции (ХЛ) в сыворотке крови и гомогенатах печени и селезенки [7]. В эритроцитарной массе определяли активность антиоксидантных ферментов: ката-лазы - по скорости утилизации перекиси водорода, супер-оксиддисмутазы (СОД) - по аутоокислению адреналина [8]. В гомогенатах печени и селезенки исследовали содержание малонового диальдегида (МДА) по методу, основанному на тесте с 2-тиобарбитуровой кислотой и диеновыми конъю-гатами (ДК) по характерному для последних максимуму поглощения раствора липидов в системе изопропанол-гептан (1:1) при длине волны 233 нм. Динамику нарастания концентрации МДА в печени и селезенке определяли посредством стимуляции ПОЛ с помощью Fe2+ . Интенсивность хемилюминесценции регистрировали на приборе «Хемилюминомер ХЛ-003» (Россия), оптическую плотность проб измеряли на спектрофотометре «Genesys 5» (США). Содержание МЭ (Fe2+, Cu2+, Zn2+, Cr3+, Ni2+) в крови и органах (печень, селезенка) крыс Вистар определялось атомно-адсорбционным методом [9] на спектрометре «КВАНТ-2А». Результаты проведенных исследований обработаны методами вариационной статистики с использованием пакета программ для ПК «Microsoft Excel 7.0», «STATISTICA 10.0», включая параметрические (критерий Стьюдента-Фишера) и непараметрические (критерий Вилкоксона) критерии. Результаты исследования представлены в виде медианы (Ме) и интерквартильного размаха (25-й и 75-й процентиль), а также в виде среднеарифметического значения (M±m). Для сравнения групп использовали U-критерий Манна-Уитни и критерий Стьюдента.
Результаты и обсуждение. Исследование периферической крови у крыс показало отсутствие выраженных изменений числа лейкоцитов и лейкоцитарной формулы на протяжении всего эксперимента. Изучение фагоцитарной и метаболической активности сегментоядерных нейтрофилов периферической крови крыс Вистар установило наиболее выраженное уменьшение ФП (24,00±2,14 - 90-е сутки, контроль - 31,86±1,69%), ФИ (3,86±0,35 - 135-е сутки, контроль
- 4,54±0,16) и метаболической активности нейтрофилов в спонтанном (2,67±0,29 - 135-е сутки, контроль - 3,99±0,26%) и индуцированном (10,59±0,87 - 90-е сутки; контроль -13,39±0,95%) НСТ-тесте. Воздействие хрома на лимфоидные органы крыс выражалось в уменьшении их массы и количества клеток в органах. Так, наиболее выраженные изменения установлены на 135-е сутки экспериментального исследования в виде снижения массы тимуса (164±7, контроль
- 247±8 мг) и селезенки (757±28, контроль - 1042±20 мг), а также количества клеток на орган: в тимусе (195±9, контроль - 434±23 106/орган) и селезенке (589±22, контроль -1031±30 106/орган). В костном мозге снижение количества ядросодержащих клеток выявлено на 90-е сутки экспозиции и составило 70±1,31- 106/орган (контроль - 79±3,12- 106/орган). Исследование клеточного состава селезенки у крыс опытной
группы обнаружило наиболее выраженное снижение на 90-е сутки относительного 87,40±0,62 (контроль - 92,15±15%) и абсолютного 852±70,96 (контроль - 960,45±27,19-106) количества лимфоцитов.
Напротив, в костном мозге экспериментальных животных на всех сроках наблюдения отмечено увеличение относительного и абсолютного числа лимфоцитов с максимумом на 90-е сутки (32,27±0,93, контроль - 13,08%). Причина уменьшения клеточности в органах кроветворения и лим-фоидных органах может быть связана, с одной стороны, с прямым повреждающим действием хрома на клетки, нарушающим энергетический обмен и приводящим к энергетическому дефициту [10], с другой,- с ускоренной миграцией клеток, приводящей к опустошению лимфоидных органов. Основными причинами убыли клеток в тимусе является их миграция из коркового вещества сначала в мозговое вещество, а затем в кровоток [11]. Однако при некоторых воздействиях определенное значение может иметь и лизис тимоци-тов, причем степень лизиса лимфоидных клеток зависит от силы и характера воздействия [12, 13]. Так, увеличение относительного и абсолютного числа клеток лимфоидного ряда в костном мозге, выявленное в миелограмме, можно объяснить поступлением лимфоцитов за счет клеток тимуса или селезенки, установленное нами в эксперименте, что обусловлено их мобилизацией и перераспределением в связи с необходимостью пополнения пула лимфоцитов в данном органе [12, 14]. По данным литературы, увеличение количества лимфо-идных клеток происходит за счет миграции в костный мозг внекостномозговых лимфоцитов, необходимых для стимуляции гемопоэза. Снижение количества миелоидных клеток и нейтрофилов, возможно, связано с механизмом мобилизации нейтрофилов из костного мозга в кровоток, что подтверждается установленным в эксперименте нарастанием количества нейтрофилов в периферической крови. Одним из механизмов опустошения селезенки может быть угнетение пролиферации лимфоидных клеток, то есть убыль числа клеток может зависеть от их естественной миграции из органа на фоне сниженного воспроизводства, что было показано при исследовании митотической активности и продолжительности митоза, что позволило определить количество клеток, покидающих орган [15]. Наряду со снижением числа лимфоцитов в селезенке крыс, подвергшихся воздействию хрома, в ранее проведенных работах на аналогичной модели [16] было установлено снижение относительного и абсолютного числа CD3+-, CD4+-, CD8+-лимфоцитов в селезенке крыс чаще всего на 90-е сутки экспозиции и уменьшение продукции ИЛ-6 на фоне повышения выработки ИЛ-4 спленоцитами животных опытной группы.
Для дальнейшего изучения некоторых механизмов выявленных сдвигов иммунологических параметров были исследованы особенности воздействия хрома на свободно-радикальное окисление (СРО) липидов и антиоксидантный статус. Установлено что, активация процессов СРО в селезенке и печени крыс опытной группы характеризовалась увеличением интенсивности светосуммы быстрой вспышки, наиболее выраженным на 135-е сутки: в селезенке 3,17±0,16 (контроль - 1,96±0,11 у.е.); в печени - 3,93±0,45 (контроль -1,74±0,10 у.е.).
Негативные результаты нарушения окислительно-восстановительного баланса клетки реализуются, прежде всего, через усиление процесса ПОЛ и накопление продуктов окисления в печени и селезенке крыс. Так, наиболее выраженное повышение уровня ДК в печени установлено на 90-е сутки (0,57±0,01, контроль - 0,40±0,02 ед. опт. пл./мг белка), концентрации МДА - на 45-е сутки (8,28±1,71, контроль - 3,73±0,53 нмоль/мг белка); в селезенке содержания ДК - на 90-е сутки (0,47±0,01, контроль - 0,39±0,01 ед. опт. пл./мг белка), МДА - на 135-е сутки (4,10±1,18, контроль -1,33±0,09 нмоль/мг белка). Как одну из причин активации СРО следует отметить и возможность снижения активности антиоксидантных ферментов, поэтому была также исследована активность СОД и каталазы в различные сроки воздей-
Контроль 45 суток
135 суток
Влияние хрома на активность супероксиддисмутазы (а) и каталазы (б) в эритроцитах крыс Вистар.
ствия изучаемых веществ. Выявлено, что активность антиок-сидантных ферментов в эритроцитах крыс опытной группы характеризовалась снижением, при этом активность СОД была минимальной на поздних сроках эксперимента (рисунок).
Таким образом, воздействие хрома на крыс приводило к активации процессов СРО и ПОЛ на фоне подавления активности антиокислительных ферментов, что выражалось в падении активности каталазы и СОД эритроцитов крови и нарастании концентрации МДА, ДК в гомогенатах печени и селезенке экспериментальных животных.
Негативные результаты нарушения окислительно-восстановительного баланса клетки реализуются, прежде всего, через усиление процесса ПОЛ, в который вовлекаются
полиненасыщенные жирные кислоты в составе клеточных мембран. Поскольку следствием избыточной активации ПОЛ является активация апоптоза, было проведено исследование влияния хрома на апоптоз спленоцитов крыс Вистар, которое выявило усиление интенсивности данного процесса на 90-е сутки экспозиции, проявившееся увеличением количества клеток, находящихся в апоптозе (4,5±0,87%, контроль - 1,52±0,48%) и тенденцией к уменьшению числа клеток, находящихся в покое и пресинтетическом клеточном цикле и митотически активных клеток. Обнаруженное повышение числа апоптирующих клеток, возможно, является следствием повышенной концентрации хрома, так как Сг (III) и Сг (VI) индуцируют формирование свободных радикалов, особенно в регуляторных областях генов транскрипционных факторов и анти-онкогенов, т. е. генов, требующих в процессе функционирования многочисленных взаимодействий «ген - белок» и «ген - ген» и способствуют истощению внутриклеточного пула антиоксидантов [17]. В этих условиях возникают многочисленные одиночные разрывы ДНК, перекрестные связи, что запускает программированную смерть клетки. Ведущую роль в Сг (III)- и Сг ^^-индуцированном апоптозе играет генерация свободных радикалов, под действием которых возникает значительное количество потенциально нерепарируе-мых повреждений ДНК [18, 19]. С другой стороны, выявленное снижение активности СОД также могло способствовать усилению программированной смерти клеток, так как известно, что СОД является ранним ингибитором апоптоза [20].
Учитывая данные литературы о том, что изменение уровня отдельных микроэлементов влияет как на иммунологические, так и на биохимические параметры [21, 22], представляло интерес исследование уровня микроэлементов в крови и органах крыс для выяснения их участия в механизмах, лежащих в основе изменений иммунологических и биохимических параметров. В периферической крови крыс опытной
Влияние хрома на уровень микроэлементов в крови, селезенке и печени крыс Вистар (Ме, 25-й и 75-й процентиль)
Группа Сутки Си Zn Fe № Сг
1-я
2-я
1-я
2-я
1-я
2-я
п = 24
45 п = 20
90 п = 11 135 п = 5
п = 17
45 п = 10
90 п = 6 135 п = 5
Кровь
0,87 [0,79; 1,02] 0,83 [0,74; 1,12] 0,65 ▲ [0,59; 0,71] 0,52 А# [0,36; 0,69]
1,82 [1,58; 3,78] 2,06 [1,36; 3,72] 3,83А [2,35; 4,71] 2,46 [2,39; 2,53]
4,92 [4,0; 5,47] 5,32 [4,48; 7,14] 5,62 [5,02; 6,7]
368 [292; 477]
319 [276; 384]
399 [330; 473]
3,88А# [2,68; 5,09] 202А# [125; 279]
Селезенка 18,53 [15,7; 22,67] 280 [127; 424]
21,57 [15,86; 25,52] 12,6А [8,20; 23,64]
138 [85; 231] 141 [87; 173]
18,32 [18,15; 18,48] 490А# [430; 549]
Печень
0,07 [0,03; 0,20] 0,03 [0,02; 0,07] 0,07 [0,03; 0,08] 0,02# [0,02; 0,03]
0,48 [0,12; 1,21] 0,33 [0,05; 0,99] 1,24А [0,72; 1,64] 1,27А [1,17; 1,37]
0 [0; 0,02]
0,33 [0,22; 0,43] 0,23 А [0,09; 0,29] 0,52 А# [0,36; 0,68]
0,3 [0,02; 1,11] 3,39 [1,6; 7,65] 2,60 [1,37; 5,71] 18 А# [13,85; 23,50]
2,82 [2,85; 3,11] п = 19 45 2,28 [2,07; 2,75] п = 15 90 2,23А [2,01; 2,65] п = 8 135 3,23 А# [2,81; 3,42] п = 5 20,32 [16,46; 25,24] 64,38 [55; 88] 0,07 [0,03; 0,08] 0,02 [0; 0,05]
17,04 [13,78; 18,92] 42,44 [27; 48] 0,08 [0,03; 0,17] 3,32 [2,61; 3,85]
17,6 [13,26; 20,36] 44,81 [36; 49] 0,14 [0,06; 0,19] 3,03 [1,94; 3,61]
32 А# [23,66; 73,53] 103 А# [98; 113] 0,05 [0,03; 0,13] 10,72 А# [8,65; 13,65]
Примечание. Обозначены достоверные отличия (р < 0,05): жирным шрифтом - по отношению к контролю; А # - 90 и 135 дней.
45 и 90, 45 и 135 дней;
группы из пяти изученных микроэлементов на сроке 45, 90 и 135 дней обращала на себя внимание общая тенденция к снижению концентрации меди, железа, никеля и, напротив, к увеличению содержания хрома и цинка. Данная тенденция была наиболее выражена через 135 дней после начала эксперимента (таблица). Микроэлементный состав селезенки и печени крыс опытных групп характеризовался увеличением концентрации хрома и разнонаправленными изменениями уровней меди, цинка и железа в различные сроки наблюдения (см. таблицу).
Установленный дисбаланс МЭ также может быть одной из причин обнаруженных сдвигов иммунологических показателей. Изменение же содержания МЭ можно объяснить тем, что хроническое поступление Сг (VI) приводит к его кумуляции в организме с одновременным снижением уровня важнейших МЭ - меди, железа, никеля и цинка. Подобный эффект объясняется тем, что ионы шестивалентного хрома, находящиеся обычно в тетраэдрической конфигурации, активно проникают в клетки через каналы для транспорта изо-структурных фосфатов и сульфатов [23].
Одновременно с этим постоянное поступление хрома с питьевой водой приводит к его накоплению в организме с последующим нарушением всасывания других элементов в кишечнике. В основе данного нарушения может лежать окисление других ионов хромом, в частности железа, до форм, не способных всасываться. Окислительная способность Сг (VI) объясняется более высоким редокс-потенциалом относительно других элементов. Другая причина обусловлена возможной конкуренцией за белки - переносчики металлов на мембранах энтероцитов, которые в присутствии высоких доз Сг (VI) способствуют вытеснению им из транспорта прочих микроэлементов. Кроме того, снижение концентрации МЭ может быть также связано с нарушением механизмов ли-гандного гомеостаза, что проявляется в конкуренции за центры связывания металлов в белках-переносчиках, и, как следствие, вытеснение хромом других элементов. Обнаруженный в плазме крови дефицит железа, меди может быть причиной нарушения образования антиоксидантных ферментов, которое наблюдалось уже на начальных стадиях эксперимента, поскольку данные МЭ являются составной частью кофактора этих ферментов. В свою очередь, низкий уровень активности антиоксидантных ферментов может быть причиной выраженной активации процессов СРО и окислительного стресса. Сдвиги в содержании МЭ можно также объяснить их взаимодействием друг с другом, которое проявляется в виде синергических и антагонистических эффектов [24]. Так, в настоящее время установлен антогонизм ^п и Си; Fe и Сг, Zn и Сг) и синергизм (Ре и №) изученных нами металлов.
Таким образом, с одной стороны хром, приводя к дисбалансу МЭ, может способствовать развитию выявленных сдвигов иммунологических и биохимических показателей. С другой стороны, он способствует активации процессов СРО [1, 23], тем самым вызывая изменения изученных параметров по сравнению с контрольной группой животных. Что же касается рассмотренных механизмов, которые могут лежать в основе выявленных сдвигов, то необходимо отметить, что установленную способность хрома активировать процессы СРО можно расценивать как значимый механизм цитотоксичности данного вещества, определяющий установленные в работе изменения иммунологических показателей при его воздействии. Этот механизм запускается с определенного порогового уровня АФК, при этом мобилизация защитных систем клетки ослабевает, тогда как стимуляция апоптоза продолжает нарастать, что играет значимую роль в клеточном опустошении органов системы иммуногенеза и в развитии иммуносупрессии в условиях воздействия хрома.
Выводы:
1. Длительное поступление хрома в организм крыс оказывало угнетающее влияние на количественные и функциональные параметры иммунной системы крыс Вистар, приводило к дисбалансу микроэлементного состава биосред и активации процессов СРО.
2. В основе выявленных сдвигов параметров иммунной системы выявлено повышение интенсивности процессов СРО у крыс (селезенка, печень) и ПОЛ, выражавшихся в нарастании концентрации ДК и МДА (селезенка, печень) на фоне снижения активности каталазы и СОД (эритроциты крыс), изменении уровня микроэлементов у крыс (снижение концентрации меди, никеля, железа в крови и печени), повышении содержания хрома (кровь, селезенка, печень).
литература
1. Мамырбаев А.А. Токсикология хрома и его соединений. Акто-бе; 2012.
2. Dayan A.D., Paine A.J. Mechanisms of chromium toxicity, carcinogenicity and allergenicity: review of the literature from 1985 to 2000. Hum Exp. Toxicol. 2001; 20 (9): 439-51.
3. ГН 2.1.5.2280-07 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) химических веществ в воде водных объектов хозяйственно-питьевого и культурно-бытового водопользования». Роспотребнадзор. М.; 2008.
4. Волчегорский И.А. Долгушин И.И., Колесников О.Л. Экспериментальное моделирование и лабораторная оценка адап-тивныхреакций организма. Челябинск; 2000.
5. Меньщиков В. В., Дилекторская Л.Н., Золотницкая Л.П. и др. Лабораторные методы исследования в клинике: справочник, ред. В.В. Меньщикова. М.: Медицина; 1987.
6. Сибирияк С.В., Хайдуков С.В., Зурочка А.В., Черешнев В.А. Оценка апоптоза в иммунологических исследованиях. Екатеринбург: Уро РАН; 2008.
7. Фархутдинов Р.Р. Свободнорадикальное окисление в биологическом материале и хемилюминесцентные методы исследования в экспериментальной и клинической медицине. Уфа; 2002.
8. Сирота Т.В. Новый подход в исследовании процесса аутоо-кисления адреналина и использование его для измерения активности супероксиддисмутазы. Вопросы медицинской химии. 1999; 45 (3): 263-72.
9. Методы контроля. Химические факторы. Определение химических соединений в биологических средах. Сборник методических указаний МУК 4.1.763 - 4.1.779-99. Минздрав России, Москва. 2000.
10. Изтлеутов М.К. Патогенез нарушений гомеостаза, вызванных избыточным поступлением хрома в организм, и пути их коррекции: Дисс. ... д-ра мед. наук. М.; 2004.
11. Ярилин А.А. Иммунология: учебник. М.: ГЭОТАР-Медиа; 2010.
12. Михайленко А.А., Коненков В.И., Базанов Г.А., Покровский В.И. Руководство по клинической иммунологии, аллергологии, иммуногенетике и иммунофармакологии (для врачей общеклинической практики), ред. В.И. Покровского. т. 1. Тверь: ООО «Издательство «Триада»; 2005.
13. Курляндский Б.А., Филов В.А., ред. Общая токсикология. М.: Медицина; 2002.
14. O'Brien T. J., Ceryak S., Patierno S. R. Complexities of chromium carcinogenesis: role of cellular response, repair and recovery mechanisms. Mutat. Res. 2003; 533 (1-2): 3-36.
15. Куценко С.А. Основы токсикологии. СПб.; 2004.
16. Михайлова И.В., Смолягин А.И., Красиков С.И. Влияние хрома и бензола на субпопуляционный состав спленоцитов и биохимические показатели крыс Вистар. Российский иммунологический журнал. 2012; 6 (14); 3 (1): 107-8.
17. Endoh K., Murakami M., Sugiyama T. et al. Low Folate Status Enchanced Benzen - Induced Cytogenetic Damage in Bone Marrow of Mice: A Relationship Between Dietary Intake and Tissue Levels of Folate. Nutrition and Cancer. 2007; 59 (1): 99-105.
18. Ross D. The role of metabolism and specific metabolites in benzene-induced toxicity : evidence and issues. J. Toxicol. Environ Health A. 2000; 61: 357-72.
19. Walker L.S.K. Folate receptor 4: A new handle on regulation and memory? Immunol. and Cell. Biol. 2007. 85 (7): 506-7.
20. Филатов А.В., Шмиголь И.Б. Антитело-индуцированные транслокации в липидные рафты и их роль в иммунологиче-
ских процессах. В кн.: Материалы 5 конгресса РААКИ «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммуно-фармакологии» 12-14 ноября 2002. М.; 2002; т. 2: 23.
21. Курец Н.И. Роль дисбаланса химических элементов в формировании хронической патологии у детей. Медицинские новости. 2006; 2: 7-17.
22. Скальный А.В., Рудакова И.А. Биоэлементы в медицине. М.: Издательский дом «ОНИКС 21 век»: Мир; 2004.
23. Valko M., Morris H., M.T.D. Cronin. Metals, toxicity, oxidative stress. Current Medicinal chemistry. 2005; 12 (10): 1177-80.
24. Боев В.М. Микроэлементы и доказательная медицина. М.: Медицина; 2005.
Поступила 24.06.15
references
1. Mamyrbaev A.A. Toxicology chromium and its compounds. Ak-tobe; 2012. (in Russian)
2. Dayan A.D, Paine A.J. Mechanisms of chromium toxicity, carcinogenicity and allergenicity: review of the literature from 1985 to 2000. Hum Exp. Toxicol. 2001; 20 (9): 439-51.
3. GN2.1.5.2280-07 "Maximumpermissible concentration (MPC) of chemical substances in water bodies drinking and cultural and community water use." CPS. Moscow; 2008. (in Russian)
4. Volchegorskiy I.A. Dolgushin I.I., Kolesnikov O.L. Experimental modeling and laboratory evaluation of adaptive reactions of the organism. Chelyabinsk; 2000. (in Russian)
5. Men's^hib^ V.V., Dilektorskarn L.N., Zolotnitskaya L.P. et al. Laboratory Methods in the clinic: A Handbook, ed. V.V. Men'shchikov. Moscow: Meditsina; 1987. (in Russian)
6. Sibiriyak S.V., Khaydukov S.V., Zurochka A.V., Chereshnev V.A. Evaluation of apoptosis in immunological research. Ekaterinburg: Ural Division; 2008. (in Russian)
7. Farhhutdinov R.R. Free radical oxidation of the biological material and chemiluminescent methods in experimental research and clinical medicine. Ufa; 2002. (in Russian)
8. Sirota T. V. A new approach to the study of the process of auto-oxidation of adrenaline and use it to measure the activity of superoxide dismutase. Voprosy meditsinskoy khimii. 1999; 45 (3): 263-72. (in Russian)
9. Control methods. Chemical factors. Determination of chemical compounds in biological fluids. Collection of guidelines MUK 4.1.763 - 4.1.779-99. Ministry of Health of Russia, Moscow; 2000. (in Russian)
10. Iztleutov M.K. The pathogenesis of disorders of homeostasis
caused by excessive intake of chromium in the body, and how to correct them: Diss. Moscow; 2004. (in Russian)
11. Yarilin A.A. Immunology: a textbook. Moscow: GEOTAR-Media; 2010. (in Russian)
12. Mikhaylenko A.A., Konenkov V.I., Bazanov G.A., Pokrovskiy V.I. Manual of Clinical Immunology, Allergology, immunogenetics and immunopharmacology (general clinical practice for physicians), ed. V.I. Pokrovskiy. Vol. 1. Tver': LLC "Publisher "Triada"; 2005. (in Russian)
13. Kurlyandskiy B.A., Filov V.A., eds. General toxicology. Moscow: Meditsina; 2002. (in Russian)
14. O'Brien T.J., Ceryak S., Patierno S.R. Complexities of chromium carcinogenesis: role of cellular response, repair and recovery mechanisms. Mutat. Res. 2003; 533 (1-2): 3-36.
15. Kutsenko S.A. Fundamentals of toxicology. St. Petersburg; 2004. (in Russian)
16. Mikhaylova I.V., Smolyagin A.I., Krasikov S.I. Effect ofchromium and benzene on subpopulations of splenocytes and biochemical parameters of Wistar rats. Russian Journal of immunological. 2012; 6 (14); 3 (1): 107-8. (in Russian)
17. Endoh K., Murakami M., Sugiyama T. et al. Low Folate Status Enchanced Benzen -Induced Cytogenetic Damage in Bone Marrow of Mice: A Relationship Between Dietary Intake and Tissue Levels of Folate. Nutrition and Cancer. 2007; 59 (1): 99-105.
18. Ross D. The role of metabolism and specific metabolites in benzene-induced toxicity : evidence and issues. J. Toxicol. Environ Health A. 2000; 61: 357-72.
19. Walker L.S.K. Folate receptor 4: A new handle on regulation and memory? Immunol. and Cell. Biol. 2007. 85 (7): 506-7.
20. Filatov A.V., Shmigol' I.B. Antibody-induced translocation into lipid rafts and their role in the immunological processes. Proc .: Proceedings of the Congress 5 Raak "Modern Problems of Allergy, Immunology and immunopharmacology" 12-14 November 2002. Moscow; 2002; t. 2: 23. (in Russian)
21. Kurets N.I. The role of the imbalance of chemical elements in the formation of chronic disease in children. Meditsinskiye novosti. 2006; 2: 7-17. (in Russian)
22. Skal'nyy A.V., Rudakova I.A. Bioelements in medicine. Moscow: Publishing House "ONYX 21": Peace; 2004. (in Russian)
23. Valko M., Morris H., M.T.D. Cronin. Metals, toxicity, oxidative stress. Current Medicinal chemistry. 2005; 12 (10): 1177-80.
24. Boev V.M. Trace elements and evidence-based medicine. Moscow: Meditsina; 2005. (in Russian)
Received 24.06.15
