КОЛИЧЕСТВЕННОЕ СОДЕРЖАНИЕ N-ДЕЗАЦЕТИЛЛАППАКОНИТИНА ВО ВТОРИЧНЫХ ПРОДУКТАХ ПРОИЗВОДСТВА АЛЛАПИНИНА Текст научной статьи по специальности «Промышленные биотехнологии»

ХИМИЧЕСКИЕ НАУКИ

АНАЛИТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ

DOI - 10.32743/UniChem.2022.97.7.13882

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ СОДЕРЖАНИЕ N-ДЕЗАЦЕТИЛЛАППАКОНИТИНА ВО ВТОРИЧНЫХ ПРОДУКТАХ ПРОИЗВОДСТВА АЛЛАПИНИНА

Муталова Дилноза Каримбердиевна

мл. науч. сотр.

Института химии растительных веществ Академии наук Республики Узбекистан,

Республиш Узбекистан, г. Ташкент E -mail: noza-gold@mail. ru

Отаева Шахзода Ахтамовна

начальник

отдел контроля и качества Опытного производства Института химии растительных веществ Академии наук Республики Узбекистан,

Республика Узбекистан, г. Ташкент

Ботиров Рузали Анварович

д-р философии по техн. наук, ст. науч. сотр. экспериментально-технологической лаборатории Института химии растительных веществ Академии наук Республики Узбекистан,

Республиш Узбекистан, г. Ташкент

Алимджан Заирович Садиков

д-р техн. наук,

вед. науч. сотрудник экспериментально-технологической лабораторией Института химии растительных веществ Академии наук Республики Узбекистан,

Республиш Узбекистан, г. Ташкент

Сагдуллаев Шамансур Шахсаидович

д-р техн. наук, проф. зав. Отделом технологии Института химии растительных веществ Академии наук Республики Узбекистан,

Республиш Узбекистан, г. Ташкент

QUANTITATIVE CONTENT N-DEACETYLAPPACONITINE IN SECONDARY PRODUCTS

OF ALLAPININ PRODUCTION

Dilnoza Mutalova

Junior researcher of the, Institute of the Chemistry of Plant Substances, Academy of science of the Republic of Uzbekistan, Republic of Uzbekistan, Tashkent

Shaxzoda Otayeva

Head of Control and Quality Department Pilot production Institute of the Chemistry of Plant Substances, Academy of science of the Republic of Uzbekistan, Republic of Uzbekistan, Tashkent

Библиографическое описание: КОЛИЧЕСТВЕННОЕ СОДЕРЖАНИЕ N-ДЕЗАЦЕТИЛЛАППАКОНИТИНА ВО ВТОРИЧНЫХ ПРОДУКТАХ ПРОИЗВОДСТВА АЛЛАПИНИНА // Universum: химия и биология : электрон. научн. журн. Муталова Д.К. [и др.]. 2022. 7(97). URL: https://7universum. com/ru/nature/archive/item/13882

Д • 7universum.com

A UNIVERSUM:

№ 7 (97) /YY\ химия И БИОЛОГИЯ июль, 2022 г.

Ro'zali Botirov

Doctor of philosophy in technical sciences, senior researcher of the experimental technological laboratory, Institute of the Chemistry of Plant Substances, Academy of science of the Republic of Uzbekistan, Republic of Uzbekistan, Tashkent

Alimdjan Sadykov

Doctor of technical sciences, Leading Researcherof the Experimental-technological laboratory of the Institute of Chemistry of Plant Substances Academy of sciences of the Republic of Uzbekistan, Republic of Uzbekistan, Tashkent

Shamansur Sagdullayev

Doctor of technical sciences, Professor, Institute of the Chemistry of Plant Substances, Academy of sciences of the Republic of Uzbekistan, Republic of Uzbekistan, Tashkent

АННОТАЦИЯ

Целью настоящей работы являются исследования по обоснованию подходов к химической стандартизации лекарственного растительного сырья (ЛРС) и препаратов, содержащих алкалоиды. Стандартизация ЛРС и ЛРП является гарантией их качества и обеспечивает эффективность и безопасность их применения.

Основная цель исследования заключалась в определении количества N-деацетиллаппаконитина, основного действующего алкалоида препарата Антиаритмина, из вторичных продуктов производства препарата Аллапинин, производимого в Институте химии растительных веществ. Для определения N-дезацетиллаппаконитина в сырье, использовали метод ВЭЖХ. Рассчитаны метрологические характеристики анализа.

ABSTRACT

The purpose of this work is to study the substantiation of approaches to the chemical standardization of medicinal plant materials (MPs) and preparations containing alkaloids. The standardization of MMR and MRP is a guarantee of their quality and ensures the effectiveness and safety of their use.

The main goal of the study was to determine the amount of N-deacetylappaconitine, the main active alkaloid of the Antiarrhythmin drug, from the secondary products of the production of the Allapinin drug, produced at the Institute of Chemistry of Plant Substances. To determine N-deacetylappaconitine in raw materials, the HPLC method was used. The metrological characteristics of the analysis are calculated.

Ключевые слова: стандартизация, N-дезацетиллаппаконитин, алкалоид, ВЭЖХ, метод, метрология.

Keywords: standardization, N-dezacetylappaconitine, alkaloid, HPLC, method, metrology.

Введение. Среди широкого спектра лекарственных средств, применяемых в медицинской практике, особое место занимают препараты на основе лекарственного растительного сырья.

В многообразии современных физико-химических методов хроматография занимает одно из ведущих мест, так как позволяет осуществить разделение веществ, их идентификацию и количественное определение. Среди хроматографических методов высокоэффективная жидкостная хроматография занимает прочную позицию как селективный высокоточный метод анализа многокомпонентных лекарственных препаратов [1,2].

Данная работа посвящена определению N дезацетиллаппаконитина гидробромида во вторичных продуктах производства антиаритмического препарата Аллапинина. Это соединение является действующим веществом препарата Антиаритмин [3].

При изучении фармакологических и токсикологических свойств было выявлено, что главный метаболит

лаппаконитина (Аллапинина) - ^дезацетиллаппа-конитин (Антиаритмин) обладает выраженным противоаритмическим и противофибрилляторным действием при нарушениях сердечного ритма, индуцированных у различных животных аконитином, хлоридом бария, электрическим раздражением камер сердца и окклюзией коронарной артерии. В отличие от Аллапинина, Антиаритмин менее токсичен, обладает большей терапевтической широтой, превосходит аллапинин по быстроте развития противоаритмического эффекта [4,5,6].

Сырье для получения Антиаритмина - высушенный вторичный продукт производства после перекристаллизации технического аллапинина -представляет собой измельченное порошкообразное вещество коричневого цвета, которое помимо бро-мистоводородной соли алкалоида ^дезацетиллап-паконитина содержит еще ряд других дитерпеновых алкалоидов и их производных (ранаконитин, сепако-нитин, ^ацетилсепаконитин и др.).

Д • 7universum.com

A UNIVERSUM:

№ 7 (97) /YY\ химия И БИОЛОГИЯ июль, 2022 г.

Для разработки технологии производства субстанции препарата Антиаритмин изучали по стадиям технологический процесс производства субстанции препарата Аллапинин, с целью изучения накопления алкалоида К-дезацетиллаппоконитина в полупродуктах, техническом и конечном продуктах.

Экспериментальная часть. Качество анализа напрямую зависит от правильного выбора условий хроматографического разделения. Выбор хроматогра-фической колонки основывается на физико -химических свойствах анализируемых веществ. На

хроматографическое разделение также влияет рН подвижной фазы, соотношение органических и водных компонентов, наличие ионов-модификаторов для образования ионных пар в случае необходимости.

Выбор аналитической длины волны. В качестве аналитической выбрана длина волны 330±2 нм, поскольку в данной области спектра изучаемые вещества характеризуются максимальным поглощением (рис. 1.), что в итоге обеспечит наибольшую чувствительность методики при определении примесей.

1 ,046

400,00

Рисунок 1. УФ-спектр стандартного образца алкалоида N-дезацетиллаппоконитина

Условия хроматографического разделения

Определения К-дезацетиллаппаконитина методом ВЭЖХ, проводимые на жидкостном хроматографе высокого давления системе Shimadzu, снабженной спектрофотометрическим детектором, разделение

проводилось с колонкой Shimadzu С18, 4,6*250 мм, с размером частиц 5 мкм. на обращённо-фазной колонке.

Экспериментально установленные оптимальные условия хроматографического разделения представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Параметры хроматографического разделения

-0.596

Параметры

Насос

-состав подвижной фазы А-буферный раствор рН 8,0±0,1 В-ацетонитрил

-режим элюирование Изократическое элюирование A:B (40:60)

-скорость потока 1,0мл/мин

Инжектор

-объём ввода 20 мкл

Термостат колонок

-Температура 40°С

Детектирование УФ-спектрофотометрическое при А=330±2 нм

Хроматографические характеристики методики

- примерное время удерживания, мин. (tR) 4,4 мин

В конечном итоге проведенных исследований, разработан метод определения ^дезацетиллап-паконитина гидробромида во вторичных продуктах производства (далее сырье) субстанции препарата Аллапинина. Маточного раствора, полученного после перекристаллизации Аллапинина из метанола сгущают и упаривают досуха. Полученный сухой остаток измельчают на мельнице. Измельченное порошкообразное вещество является сырьем для получения Антиаритмина.

Определение ^дезацетиллаппаконитина гидробромида в сырье проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе. В качестве стандартного образца использовали Антиаритмин-стандартный образец (ВФС 42 Уз-3259-2017). Приготовление испытуемого раствора сырья и стандартного раствора Антиаритмина проводили следующим образом:

Около 10 мг (точная навеска) порошка сырья помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили объем водой до метки, перемешивали. 5,0 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили объём подвижной фазой до метки и перемешивали (испытуемый раствор).

Около 5 мг (точная навеска) стандартного образца Антиаритмина помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили объём водой до метки, перемешивали. 5,0 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили объём подвижной фазой до метки и перемешивали (раствор СО).

Содержание ^дезацетиллаппаконитина в сырье в процентах (X) в пересчёте на безводное вещество вычисляли по формуле:

Х =

5исхтстхУисхРх100 . 5стхтисхУстх(100-Ж)'

где Suc - площадь пика N-дезацетиллаппаконитина на хроматограмме испытуемого раствора;

Sct - площадь пика N-дезацетиллаппаконитина на хроматограмме раствора СО;

mcT - навеска СО N-дезацетиллаппаконитина, в граммах;

muc - навеска сырья, в граммах; Р- содержание N-дезацетиллаппаконитина в СО, в процентах;

W- суммарное содержание воды, в процентах. Хроматографировали раствор стандартного образца и испытуемый раствор, получая не менее трёх хроматограмм для каждого (рис. 1,2).

Рисунок 2. Хроматограмма стандартного образца препарата Антиаритмин

Рисунок 3. Хроматограмма вторичного продукта (сырья) препарата Антиаритмин

На рисунке 2 и 3 представлены хроматограммы СО и сырья препарата Антиаритмин. Показано что в сырье основным по содержанию является ^дезаце-тиллаппаконитин.

Результаты количественного содержания ^дез-ацетиллаппаконитина в сырье и метрологические характеристики результатов приведены в таблице 2.

Таблица 2.

Результаты статистической обработки анализа образцов сырья

№ Взято, мкг/мл (С1) Найдено, % Метрологические характеристики (Р=95%, n=7)

1 10,50 32,55 Хср =32,52 S2=0,008 S=0,14 P,%=95 t(P,f)=2,45 ±Ax=0,16 e,%=1,1 s,%=0,49 RSD,%=0,066

2 10,60 32,54

3 10,20 32,52

4 10,40 32,55

5 10,70 32,5

6 10,70 32,5

7 10,50 32,52

Нами было исследовано несколько образцов сырья препарата Антиаритмина. Содержание N-дезацетиллаппаконитина в сырье варьировалось от 25,0 до 45,0% в зависимости от исходного сырья. На основании полученных данных предложено нормировать содержание N-дезацетиллаппаконитина в сырье не менее 22,0%.

Вывод

1. Выбраны условия определения N-дезацетиллаппаконитина методом ВЭЖХ, проводимые на жидкостном хроматографе высокого давления системе Shimadzu, снабженной спектрофотометри-ческим детектором, разделение проводилось с колонкой Shimadzu С18, 4,6*250 мм, с размером

частиц 5 мкм. на обращённо-фазной колонке. Изокра-тическое элюирование подвижной фазой состава: буферный раствор с рН 8,0- ацетонитрил (40:60) при скорости потока 1,0 мл/мин позволяет эффективно разделять исследуемые соединения.

2. Разработанная методика успешно используется для изучения постадийного контроля производства субстанции препарата Антиаритмин.

3. С помощью разработанных условий произведено исследование серийных субстанций Антиа-ритмин. По результатам предложено нормировать содержание К-дезацетиллаппаконитина гидробромида в сырье не менее 25,0%.

Список литературы:

1. Саканян Е.И., Ковалева Е.Л., Фролова Л.Н., Шелестова В.В. Современные требования к качеству лекарственных средств растительного происхождения. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. 2018;8(3):170-178. https://doi.org/10.30895/1991-2919-2018-8-3-170-178

2. Kazakevich Y., Lobrutto R. HPLC for pharmaceutical scientists. - New Jersey: John Wiley, 2007. - 1135 p.

3. Патент РУз №IAP 04858. Способ получения N-дезацетил-лаппаконитина гидробромида, обладающего антиаритмическим действием / Садиков А.З., Сагдуллаев Ш.Ш., Валиев Н.В., Джахангиров Ф.Н., Абдуллаев Н.Д., Турсунходжаева Ф.М., Усманова С.К. // Расмий ахборотнома. - 2014. - № 4.

4. Крыжановский С.А., Юнусов М.С., Цорин И.Б., Барчуков В.В., Барчукова Е.И. Антиаритмические свойства монохлоргидрата N-дезацетиллаппаконитина. Фармакокинетика и Фармакодинамика. 2021;(2):19-24. https://doi.org/10.37489/2587-7836-2021-2-19-24.

5. Djahangirov F.N., Sadikov A.Z., Sagdullaev Sh.Sh., Valiev N.V., Jenis J. New Pharmacological Properties of Antiarrythmic Preparation N-Desacetyl-lappaconitine Hydrobromide. // 8th International Symposium on the Chemistry of Natural Compounds. - Eskisehir (Turkey), 2009 - p.108.

6. Джахангиров Ф.Н., Ташходжаев Б., Султанходжаев М.Н., Салимов Б.Т. Дитерпеноидные алкалоиды -как новый класс антиаритмических средств // Химия природ. соед. - 1997. - № 5. - С. 254.

7. ОФС 1.1.0013.15 «Статистическая обработка результатов химического эксперимента».