Количественное определение бортезомиба в плазме крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Биомедицина • № 4, 2010, С. 93-94

Количественное определение бортезомиба в плазме крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором

Т.Д.Исмагилов

Институт клинической фармакологии ФГУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Росздрава, Москва

Множественная миелома (ММ) - это злокачественное лимфопролиферативное заболевание, характеризующееся инфильтрацией костного мозга плазматическими клетками, наличием моноклонального иммуноглобулина в сыворотке крови и/или в моче и остеолитиче-скими поражениями костей. ММ составляет 1% от всех онкологических заболеваний и немногим более 10% среди всех гемобластозов. Благодаря значительным успехам в фундаментальных исследованиях, посвященных биологии ММ, на рубеже XXI века появились новые эффективные лекарственные препараты. Целый ряд лекарственных средств разработан на основе воздействия на механизмы, посредством которых регулируется рост миеломных клеток и их апоптоти-ческая смерть, состояние микроокружения костного мозга, межклеточная передача сигналов в миеломные клетки.

К наиболее перспективным лекарственным препаратам относится бортезомиб. Актуальным представляется клиникофармакологическое изучение российского генерического препарата бортезо-миба - Миланфора.

Цель. Разработка метода количественного определения бортезамиба в плазме крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с масс-спектрометрическим детектором и изучение фармакокинетики бортезоми-ба после однократного и на фоне курсо-

93

вого применения препарата Миланфор у пациентов с миеломной болезнью.

Материалы и методы

Концентрация бортезомиба определяется методом жидкостной хромотогра-фии с масс-спектрометрическим детектором. Препарат Миланфор вводили путем в/в болюсной инъекции в дозе 1,3 мг/ м2 через периферический или центральный венозный катетер, который затем промывали 0,9 % раствором натрия хлорида для инъекций. Также у данных пациентов определялась равновесная концентрация бортезомиба на фоне курсового лечения на 4, 8, 11 день 1-го цикла и 1 день 2-го цикла через 2 часа после введения очередной дозы препарата. Отбор проб проводили через определенные промежутки времени, в гепаринизирован-ные пробирки. Кровь центрифугировали при 3000 об/мин и полученную плазму хранили при -35°С до анализа.

Подготовка проб плазмы крови для анализа:

К 0,5 мл плазмы добавляли 2 мл ацетонитрила с 0,1% раствором муравьиной кислоты, встряхивали на вихревой мешалке vortex 5 минут и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 минут. Супернатант переносили в чистые пробирки, упаривали, сухой остаток растворяли в 100 мкл смеси вода - ацетонитрил (90:10) с 0,1 % муравьиной кислотой, встряхивали на vortex, 50 мкл полу-

Biomedicine № 4, 2010

ченного раствора вводили в автосамплер хроматографа.

Хроматографическое определение: Анализ проводили на жидкостном хроматографе «Agilent 1100» (США) с масс-спектрометрическим детектором. Колонка Zorbax C18, (4,6 х 150 мм, 5 мкм) Температура разделения 30°С. Исследование осуществлялось в градиентном режиме.

Скорость потока 0,7 мл/мин. Время выхода пика бортезомиба 1,6 мин. Детектирование проводилось по протони-рованному молекулярному иону борте-замиб с m/z ... Фрагментатор 35В, температура азота -300°С, расход газа 3 л/

мин, давление небулайзера 35 psig.

Основой для количественного определения (метод абсолютной калибровки) бортезомиба в плазме крови служили калибровочные зависимости, для построения которых были проанализированы образцы плазмы крови с различной концентрацией определяемого вещества с использованием программного обеспечения фирмы «Agilent». Калибровочная зависимость носила линейный характер в диапазоне концентраций 0,5-100 нг/мл. Коэффициент корреляции составил r2=0,99.

Результаты и их обсуждение

Максимальная концентрация борте -замиба после однократного в/в введения достигается практически сразу и со-

ставляет 96,6±52,8 нг/мл. При этом наблюдается выраженный индивидуальный разброс значений (до 60Д%). Далее концентрация бортезомиба в плазме резко снижается, переходя в более длительные фазы распределения и терминальную фазу. Для исследуемого препарата характерен сравнительно высокий общий клиренс после однократного введения с высоким уровнем распределения, что свидетельствует об интенсивном распределении препарата в пере-ферических тканях. На фоне курсового применения отмечается уменьшение клиренса и увеличение периода полувы-

ведения, что связано с кумуляцией препарата в организме.

Выводы

Разработана высокочувствительная и селективная методика экстракции и количественного определения бортезамиба в плазме крови с использованием ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детекцией. Методика характеризуется высокой воспроизводимостью и низким пределом обнаружения (1 нг/мл). С помощью рзрабо-танной методики изучена фармакокинетика препарата Миланфор после однократного и курсового применения. Показано, что равновесная концентрация бортезоми-ба при приеме препарата Миланфор находилась в терапевтическом диапазоне.

Таблица

Экспозиция препарата в подвижной фазе

Время, мин А, % В, %

0-0,25 90 10

0,25-1,0 - 100

1,0-2,5 90 10

Примечание: Подвижная фаза: А - вода, 0,1 % муравьиная кислота; В - 90% ацетонитрил, 10 % вода, 0,1 % муравьиная кислота.

Биомедицина № 4, 2010 94