CC BY
35
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К АДЕНОЗИНДЕЗАМИНАЗЕ У ЖЕНЩИН С ПРИВЫЧНЫМ НЕВЫНАШИВАНИЕМ БЕРЕМЕННОСТИ
Н.В. Александрова1, Л.В. Ткаченко2, И.Ю. Алехина1, А.В. Александров1, М.А. Махачев1, И.А. Зборовская3
1 ГУ НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН ул. Землячки, 76, Волгоград, Россия, 400138
2 Кафедра акушерства и гинекологии ФУВ 3 Кафедра госпитальной терапии ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» пл. Павших борцов, 1, Волгоград, Россия, 400131
В последние годы все большее внимание исследователей привлекают аутоиммунные аспекты невынашивания беременности. Наряду с этим при аутоиммунных заболеваниях в сыворотке крови больных часто обнаруживаются аутоантитела к различным ферментам, но клинико-диагностическое значение таких антител зачастую неясно. Аденозиндезаминаза — ключевой фермент пуринового метаболизма, с активностью которого тесно связаны иммунологические процессы в организме. Работа посвящена изучению процессов антителогенеза к АДА у женщин с привычным невынашиванием беременности и выявление связей изучаемых антител с клинико-лабораторными особенностями аутоиммунной патологии.
Одной из самых сложных, многоплановых и, несомненно, актуальных проблем современного акушерства является невынашивание беременности. Частота ранних выкидышей и замершей беременности в последние годы значительно увеличилась и колеблется от 15 до 25% без тенденции к снижению, причем в 50% этиопатогенетическая причина плодных потерь остается неясной [3, 6]. В настоящее время среди возможных причин невынашивания беременности, наряду с доминирующими ранее заболеваниями эндокринной системы и истмико-цервикаль-ной недостаточностью, на первое место выступают инфекции, передаваемые половым путем, и иммунные нарушения в организме женщины.
В иммунологии беременности, относительно новом и активно развивающемся на стыке науки и медицины направлении, главная роль в осуществлении репродуктивной функции женщины отводится гармоничному функционированию иммунобиохимических и иммунобиологических механизмов. Нарушения в иммунной системе нередко приводят к патологическому течению беременности, причем сбой иммунных механизмов через активацию клеточных и биохимических реакций запускает целый каскад патофизиологических процессов, приводящих в итоге к отторжению плода.
Среди предполагаемых иммунологических механизмов, участвующих в патогенезе прерывания беременности, выделяют алло- и аутоиммунные. Именно
аутоиммунным причинам привычного невынашивания беременности (ПНБ), таким как выработка аутоантител к гормонам, имеющим важнейшее значение для нормального развития беременности (например, к хорионическому гонадотропи-ну человека и прогестерону), антифосфолипидному синдрому и др., посвящены многочисленные исследования последних лет [1, 3].
Наряду с этим продолжает сохраняться интерес к изучению различных нарушений, связанных с метаболическими процессами, происходящими на клеточном или субклеточном уровнях, медиаторами которых являются ферменты. Биохимические реакции, составляя материальную основу всех функциональных процессов организма, несут адаптационную, гомеостатическую миссию. Хорошо известно, что с активностью аденозиндезаминазы (АДА, ЕС 3.5.4.4), являющейся ключевым ферментом пуринового метаболизма (ПМ), тесно связаны иммунологические процессы в организме. От активности данного фермента зависит внутриклеточная концентрация аденозина и дезоксиаденозина — пуриновых метаболитов, играющих важную роль в процессах кооперативных взаимодействий клеток иммунной системы. Метаболизм аденозина может играть роль биологического асцилятора, координирующего и/или модулирующего энергетический метаболизм и физиологический статус в живом организме [5]. Обсуждается физиологическая роль аденозиндезаминазы и значение метаболизма субстратов для выживания плода [4].
В сыворотке крови больных с аутоиммунной патологией (системной красной волчанкой, ревматоидным артритом и др.) часто обнаруживаются аутоан-титела к различным ферментам, в том числе и к ферментам ПМ, но клиническое значение таких антител зачастую неясно.
Целью работы явилось изучение процессов антителогенеза к АДА у женщин с привычным невынашиванием беременности и выявление связей изучаемых антител с клинико-лабораторными особенностями патологического процесса.
Материалы и методы исследования. При проведении скрининга на наличие анти-АДА было обследовано 86 женщин (средний возраст 30,8 ± 6,1 лет), проходивших лабораторное обследование по поводу привычной потери беременности в клинико-диагностических центрах г. Волгограда. У 64 (74,4%) женщин (по данным анамнеза) отмечено привычное невынашивание беременности ранних сроков (от 2 до 5 самопроизвольных выкидыша и/или неразвивающихся беременностей в сроках 5—12 недель гестации), у 13 (15,1%) женщин — поздние гестационные потери (в сроках 16—24 недель беременности), у 9 (10,5%) — антенатальная гибель плода (в сроках 24—38 недель беременности). По результатам скрининга были сформированы две группы исследования: основная — 30 женщин с наличием анти-АДА; группа сравнения — 56 женщин с ПНБ в анамнезе и отсутствием ау-тосенсибилизации к АДА. Критериями отбора явились: репродуктивный возраст; наличие/отсутствие анти-АДА; отсутствие по данным клинико-лабораторного обследования активации бактериально-вирусной инфекции и аутоиммунной патологии; отсутствие пороков развития матки; отсутствие аномалий кариотипа. Все женщины прошли клиническое и лабораторно-инструментальное обследование,
включая иммунологические, биохимические, микробиологические, вирусологические, генетические и ультразвуковые методы исследования.
В группу контроля были включены 30 женщин фертильного возраста (не имеющих в анамнезе ни ПНБ, ни аутоиммунных состояний) и 60 пациенток ревматологического отделения МУЗ «Городская клиническая больница № 25» г. Волгограда с системной красной волчанкой (СКВ) (средний возраст 36,3 ± 15,3 лет; продолжительность болезни 8,0±7,4 лет; возраст дебюта СКВ 28,6 ± 13,2 лет, М ± SD) с различными клиническими проявлениями (18 женщин имели в анамнезе ПНБ). Диагноз СКВ верифицировался по критериям американской коллегии ревматологов 1997 года. Активность СКВ оценивалась с помощью индексов Systemic Lupus Erythematosus Disease Activity Index (SLEDAI) и European Consensus Lupus Activity Measure (ECLAM), а также по критериям, предложенными В.А. Насоновой (1985 г.): 9 человек имели I (низкую) степень активности заболевания, 34 человека — II (умеренную) и 17 человек — III (высокую) степень активности патологического процесса. Самыми частыми проявлениями СКВ в дебюте были кожные изменения (48,3%) и суставной синдром (46,7%).
Объектом исследований служила сыворотка крови. Антитела класса IgG к АДА (анти-АДА) определяли с помощью разработанной в НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН (лаборатория клинической иммунологии, зав. лабораторией — д.м.н., проф. И.П. Гонтарь) методике непрямого ELISA-теста. В качестве антигенной матрицы использовали коммерческий препарат АДА («Sigma», США, Cat. № А5043) с активностью 130 Ед/мл и концентрацией белка 95,6 мг/мл. Результаты учитывали на многоканальном микропланшетном спектрофотометре «Multiskan EX» (Thermo, Electron Corporation) при длине волны 405 нм, полученные значения выражали в единицах оптической плотности (Ед). Положительными считались результаты, превышающие 2 стандартных отклонения показателей, полученных при обследовании здоровых лиц (>0,108 Ед).
ß2-гликопротеин-I-зависимые аФЛ класса IgG и ^М определяли с использованием коммерческого тест-набора «Anti-Phospholipid Screen IgG/IgM» (Orgentec Diagnostica GmbH, Lot 52953136). В группе здоровых лиц уровень аФЛ IgG/^М не превышал 10 Ед/мл.
Статистический анализ экспериментальных данных выполнялся с помощью программных пакетов SPSS («SPSS for Windows», Release 12.0, SPSS Inc., Chicago, IL, США) и Statistica («Statistics for Windows», Release 6.0, StatSoft Inc., США). Представление описательных статистик и выбор статистических критериев производились исходя из цели исследования, решаемых задач и рекомендаций руководств по биостатистике.
Результаты и их обсуждение. По результатам проведенного скрининга ан-ти-АДА были выявлены у 30 (34,9%) женщин, обратившихся за обследованием по подозрению в наличии ПНБ. Учитывая, что предшествующие искусственные и самопроизвольные репродуктивные потери сопровождаются иммуногормональ-ным стрессом и могут способствовать синтезу различных аутоантител [7], нами было проведено сравнительное изучение содержания антител в исследуемых группах.
Таблица 1
Содержание различных антител у женщин с ПНБ
Антитела Основная группа (п = 30) Группа сравнения (п = 56)
абс. % абс. %
аФЛ-^, Ед/мл 8 26,67 4 7,14
аФЛ-IgM, Ед/мл 5 16,67 3 5,36
Антинуклеарные антитела (титр) 4 13,33 4 7,14
Антикардиальные антитела (титр) — — — —
Антитела к нативной ДНК (титр) — — — —
Антитела к денатурированной ДНК (титр) 3 10,0 2 3,57
Ревматоидный фактор (титр) 6 20,0 2 3,57
Циркулирующие иммунные комплексы, Ед. 8 26,67 3 5,36
Волчаночный антикоагулянт 1 3,33 3 7,14
Антиспермальные антитела, Ед/мл — — — —
Антиовариальные антитела, Ед/мл 1 3,33 1 1,78
Ат к тироидной пероксидазе, ед/мл — — — —
Ат к тиреоглобулину, ед/мл 2 6,67 2 3,57
Сравнение между собой групп обследуемых женщин, позитивных (30 человек) и негативных (56 человек) по анти-АДА, продемонстрировало большую частоту выявления аФЛ-1^ (х2 с поправкой Йетса = 4,68, р = 0,031), ревматоидного фактора (х2 с поправкой Йетса = 4,45, р = 0,0348) и циркулирующих иммунных комплексов (х2 с поправкой Йетса = 6,16, р = 0,013) у пациенток, имевших аутоан-титела к АДА. Ранее было отмечено, что осаждение иммунных комплексов, циркулирующих в крови и находящихся в избытке антигенов в межворсинчатом пространстве, содержащем кровь матери, происходит в области базальных мембран трофобласта и сосудов ворсин хориона, способствуя развитию хронической недостаточности плаценты.
Наряду с этим была отмечена связь анти-АДА с хроническими воспалительными процессами в органах малого таза, что может свидетельствовать об участии иммуносупрессивного воздействия, связанного с ингибированием Т-системы иммунитета, в развитии данных процессов [2].
Был выявлен ряд статистически значимых корреляций уровня анти-АДА с клиническими и лабораторными показателями женщин с ПНБ. Корреляционный анализ продемонстрировал статистически значимую связь средней силы уровня анти-АДА с уровнем билирубина крови (г = 0,342; р = 0,011). Интересна обратная корреляция уровня анти-АДА с уровнем гемоглобина (г = -0,258; р = 0,039), числом лимфоцитов (г = -0,263; р = 0,041) и эритроцитов (г = -0,26; р = 0,043) крови, что может свидетельствовать о непосредственном повреждающем воздействии аутоантител к АДА на клетки крови.
В своей работе мы также попытались выявить закономерности образования анти-АДА и оценить взаимосвязь данных аутоантител с клинико-лабораторными проявлениями СКВ, риск невынашивания при которой очень высок (около 50%).
Антитела к АДА были обнаружены у 26 больных СКВ (36,6%) и не были выявлены ни у одной обследованной в контрольной группе. При анализе зависимостей уровня анти-АДА была выявлена тесная связь с активностью СКВ: коэффициент корреляции с индексами активности SLEDA и Е^АМ составил 0,312
(р = 0,017) и 0,328 (р = 0,009), соответственно. Уровень анти-АДА (М ± SD) у больных с умеренной (0,132 ± 0,076) и высокой (0,154 ± 0,082) активностью был значимо выше, чем у больных с низкой активностью СКВ (0,067 ± 0,023). У больных с низкой активностью СКВ повышенные уровни анти-АДА выявлялись крайне редко (11,1%), в то время как у больных с умеренной активностью они определялись у 52,9% пациенток, а при высокой активности — у 76,5% больных СКВ.
В группе больных СКВ аФЛ класса IgG были выявлены у 32 (45,1%), а аФЛ класса ^М — у 23 (32,4%) человек. Было отмечено, что IgG-аФЛ чаще и в более высоком титре обнаруживались у анти-АДА-позитивных пациентов, чем у анти-АДА-негативных больных СКВ (х2 = 6,4; р < 0,02). Не было выявлено статистически значимых различий в содержании ^М-аФЛ у больных СКВ в зависимости от наличия анти-АДА (р > 0,05). Развитие цитопенического синдрома достоверно чаще отмечено у больных СКВ с сочетанным наличием IgG-аФЛ и анти-АДА по сравнению с пациентами, не имевшими сочетания данных антител в крови (х2 = 3,9; р < 0,05). Повышенные уровни анти-АДА выявлены у 11 из 18 женщин с ПНБ, причем чаще обнаруживалось сочетание анти-АДА и аФЛ (9/18), чем изолированное определение анти-АДА (2/18, х2 = 6,5; р < 0,02) или изолированное определение аФЛ (3/18, х2 = 4,5; р < 0,05).
Принимая во внимание, что определенная часть АДА сосредоточена во фракции плазматических мембран эритроцитов и тромбоцитов в виде комплекса с гли-копротеидами, представляется вероятным возможность конформационного воздействия анти-АДА на Р2-гликопротеин-1 (Р2-ГП-1), что способствует экспрессии «скрытых» эпитопов в молекуле Р2-ГП-1 и индукции синтеза аФЛ.
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о существенных изменениях в системе пуринового метаболизма при СКВ, причем по изменению иммунологической активности АДА можно судить, в первую очередь, об активности заболевания, а также использовать данные показатели в улучшении диагностики и изучении отдельных патогенетических звеньев данной аутоиммунной патологии.
Заключение. Учитывая дисбаланс иммунорегуляторных процессов при ПНВ на фоне как спонтанного, так и индуцированного появления аутоантител, представляется перспективным дальнейшее изучение процессов аутоантителообразо-вания к АДА, что позволит глубже понять патогенетические механизмы метаболических и иммунологических нарушений. Наличие ПНБ в анамнезе свидетельствует о необходимости тщательного мониторинга не только аФЛ, но и анти-АДА у женщин для предупреждения плодных потерь и назначения адекватной и наиболее патогенетически обоснованной терапии.
ЛИТЕРАТУРА
[1] Калашникова Е.А. Антигены сперматозоидов и антиспермальные антитела, ассоциированные с бесплодием // Проблемы репродукции. — 2004. — 4. — С. 55—60.
[2] Серов В.Н. Акушерская патология и синдром системного воспалительного ответа // Сб. Современные проблемы диагностики и лечения нарушений репродуктивного здоровья женщин. — Ростов, 2005. — С. 35—38.
[3] Сидельникова В.М. Привычная потеря беременности. — М.: Триада-Х, 2002. — С. 304.
[4] Blackburn M.R., Wakamiya M., Caskey T.C., Kellems R.E. Tissue-specific rescue suggests that placental adenosine deaminase is important for fetal development in mice // J. Biol. Chem. — 1995. — 41. — P. 23891—4.
[5] Chagoya-de-Sanchez V., Hernandez-Munoz R., Suarez J. et al. Temporal variations of adenosine metabolism in human blood // Chronobiol. Int. — 1996. — 3. — P. 163—177.
[6] Dondero F., Lenzi A., Gandini L., Lombardo F. Immunological infertility in humans // Exp. Clin. Immunogenet. — 1993. — 10. — P. 65—72.
[7] Itsekson A.M., Seidman D.S., Zolti M., Lasarov A., Carp H.J. Recurrent pregnancy loss and inappropriate local immune response to sex hormones // Am. J. Reprod. Immunol. — 2007. — 57(2). — P. 160—5.
CLINICAL AND DIAGNOSTIC VALVE OF ANTIBODIES TO ADENOSINE DEAMINASE DETERMINATION IN WOMEN WITH HABITUAL NONCARRYING OF PREGNANCY
N.V. Alexandrova1, L.V. Tkachenko2, I.Y. Alechina1, A.V. Alexandrov1, M.A. Makhachev1, I.A. Zborovskaya3
1 Research Institute for clinical and experimental rheumatology
Zemlyachki str., 76, Volgograd, Russia, 400138
2 Chair of obstetrics and gynecology
3 Chair of hospital therapy Volgograd State medical university
Fallen fighters square, 1, Volgograd, Russia, 400131
Last years the autoimmune aspects of habitual noncarrying of pregnancy attract attention of researchers. Autoantibodies to various enzymes are often found out in serum of patients with autoimmune diseases, but clinical and diagnostic importance of these antibodies is not clearly. Adenosine Deaminase — key enzyme of purine metabolism which activity are closely correlated with immune processes in an organism. The purpose of the study was to investigate the antibodies to ADA generation in women with habitual noncarrying of pregnancy and revealing of correlations between investigated antibodies and clinical and laboratory features of autoimmune pathologies.
