CC BY
14
© Коллектив авторов, 2023
Авербах М.М., Панова Л.В., Овсянкина Е.С., Эргешов А.Э., Смирнова Т.Г., Киселева Е.А., Хохлова Ю.Ю., Стерликова С.С.
Клеточный и гуморальный ответ на SARS-CoV-2 (штамм омикрон) у детей и подростков с туберкулезом органов дыхания
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза» Министерства науки и высшего образования Российской Федерации, 107564, г. Москва, Российская Федерация
Резюме
Введение. Коронавирусная инфекция, вызванная первыми разновидностями вируса SARS-CoV-2, не приводила к обострению туберкулеза у детей. В научной литературе нам не встретилось исследований, характеризующих Т- и В-клеточный специфический иммунный ответ к SARS-CoV-2 у детей и подростков, больных туберкулезом.
Цель исследования - изучение выраженности и длительности клеточного и гуморального иммунного ответа на SARS-CoV-2 у детей и подростков, больных туберкулезом органов дыхания, переболевших или имевших контакт с больными коронавирусной инфекцией, вызванной штаммом омикрон.
Материал и методы. Проведено когортное проспективное исследование с участием 34 пациентов в возрасте от 2 до 17 лет с различными формами туберкулеза органов дыхания, находившихся на лечении в детско-подростковом отделе ФГБНУ «ЦНИИТ» Мин-обрнауки России, переболевших или имевших контакт с больными новой коронавирусной инфекцией (штамм омикрон). Лабораторная диагностика коронавирусной инфекции у пациентов с клиническими проявлениями острой респираторной вирусной инфекции (ОРВИ) проводилась по положительному результату исследования мазков из носо-и ротоглотки на РНК SARS-CoV-2 (штамм омикрон). Состояние клеточного иммунитета оценивали при помощи теста T-SPOT.COVID (Oxford Immunotec, Великобритания) на панели А (COV-A) (Spike antigens) и панели В (COV-B) (Nucleocapsid antigens). Определяли специфические IgM- и IgG-антитела к нуклеокапсидному белку (ARCHITECT, Abbott, США) с оценкой коэффициента позитивности (КП). Результаты качественных признаков выражены в абсолютных числах с указанием долей (%), расчет статистической значимости проведен с помощью критерия х2 Пирсона. Сопоставление показателей Т-клеточного и гуморального ответов через 1 и 3 мес проводили с использованием Г-критерия Вилкоксона.
Результаты. Коронавирусная инфекция во всех случаях протекала в легкой форме, клиническая картина ОРВИ наблюдалась в 67,6 % (23/34) случаев, а РНК SARS-CoV-2 обнаружена лишь у 74 % пациентов с клиническими проявлениями заболевания. IgM-антитела отсутствовали у всех обследованных пациентов уже через 1 мес от начала заболевания/нахождения в контакте, IgG-антитела выявлены у 76,5 % через 1 мес и у 53 % пациентов через 3 мес (р < 0,01). Положительные результаты оценки специфического Т-клеточного ответа получены у 97,1 % через 1 мес и у 79,4 % пациентов через 3 мес. При этом показатели специфического Т-клеточного иммунитета (панель А и панель В) статистически значимо снижались к 3 мес исследования (р < 0,01). Тенденции изменения показателей Т-клеточного иммунитета (панель А и панель В) в группах пациентов с клиническими проявлениями заболевания и без таковых были различные. Если в группе с клиническими проявлениями количество спотов статистически значимо не менялось при сравнении результатов через 1 и 3 мес наблюдения, то в группе без клинических признаков отмечено их статистически значимое снижение к 3-му месяцу по панели В при отсутствии значимой динамики по панели А.
Заключение. В проведенном исследовании коронавирусная инфекция у больных туберкулезом детей и подростков во всех случаях протекала в легкой форме, характеризовалась наличием выраженного специфического Т-клеточного ответа у 97,1 % и про-
Для корреспонденции
Авербах Михаил Михайлович -доктор медицинских наук, профессор, главный научный сотрудник отдела иммунологии, ФГБНУ «ЦНИИТ» Минобрнауки России, Москва, Российская Федерация E-mail: amm50@mail.ru https//orcid.org/ 0000-0001-7706-3841
дукцией специфических ^в-антител у 76,5 % пациентов через 1 мес исследования с последующим статистически значимым снижением показателей к 3 мес наблюдения - 79,4 и 53 % соответственно.
Ключевые слова: 8ЛЯ8-Со¥-2; коронавирусная инфекция; антитела; Т-клетки; туберкулез; дети и подростки
Статья получена 20.03.2023. Принята в печать 28.04.2023.
Для цитирования: Авербах М.М., Панова Л.В., Овсянкина Е.С., Эргешов А.Э., Смирнова Т.Г., Киселева Е.А., Хохлова Ю.Ю., Стерликова С.С. Клеточный и гуморальный ответ на 8ЛЯ8-СоУ-2 (штамм омикрон) у детей и подростков с туберкулезом органов дыхания. Иммунология. 2023; 44 (3): 317-325. Б01: Шр8:/Моь о^/10.33029/0206-4952-2023-44-3-317-325
Финансирование. Работа выполнена на бюджетной основе в рамках НИР ФГБНУ «ЦНИИТ» Минобрнауки России № 122041100210-4 «Комплексный подход к диагностике и лечению туберкулеза органов дыхания у детей и подростков».
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Вклад авторов. Концепция и дизайн исследования - Авербах М.М., Панова Л.В., Эргешов А.Э.; сбор и обработка материала - Смирнова Т.Г., Киселева Е. А., Хохлова Ю.Ю., Стерликова С.С.; статистическая обработка -Авербах М.М., Панова Л.В.; написание текста - Авербах М.М., Панова Л.В.; редактирование - Овсянкина Е.С.
Averbakh M.M., Panova L.V., Ovsyankina E.S., Ergeshov A.E., Smirnova T.G., Kiseleva E.A., Khokhlova Yu.Yu., Sterlikova S.S.
Cellular and humoral responses to SARS-CoV-2 (omicron variant) in children and adolescents with pulmonary tuberculosis
Central Tuberculosis Research Institute of the Ministry of Science and Higher Education of the Russian Federation, 107564, Moscow, Russian Federation.
Abstract
Introduction. The consequences of COVID-19 infection in TB patients remain unclear. Coronavirus infection caused by primary variants of SARS-CoV-2 burdened the course of TB in elderly patients but did not exacerbate TB in children. The review of scientific literature did not reveal any studies describing T- and B-cell specific immune responses to SARS-CoV-2 in children and adolescents with TB.
Aim - to study expressiveness and duration of cellular and humoral immune responses to SARS-CoV-2 in children and adolescents with pulmonary TB after coronavirus disease or exposure to coronavirus infection caused by omicron strain.
Material and methods. We carried out a cohort prospective study including 34 patients aged 2-17 years with different forms of pulmonary TB, received treatment in the Children and Adolescents' Department of the Central TB Research Institute. The children had a history of either coronavirus disease or exposure to coronavirus infection (omicron strain). Laboratory diagnosis of coronavirus infection in patients with clinical signs of acute respiratory viral infection (ARVI) was based on detection of SARS-CoV-2 RNA in nasopharyngeal swabs (omicron strain). Cellular immunity was assessed using T-SPOT.COVID (Oxford Immunotec, Great Britain) on panel A (COV-A) (Spike antigens) and panel B (COV-B) (Nucleocapsid antigens). IgM and IgG antibodies against nucleocapsid protein were determined (ARCHITECT, Abbott, USA) with assessment of positivity ratio (PR). The results of qualitative signs were expressed in absolute numbers with indication of proportions (%), the calculation of statistical significance used Pearson's x2 criterion. The comparison of T cell and humoral immunity parameters after one and three months used Wilcoxon ^-criterion.
Results. In all cases coronavirus infection had a mild course, the clinical picture of ARVI was observed in 67.6 % (23/34) of cases, and SARS-CoV-2 RNA was only determined in 74 % of cases. IgM antibodies were absent in all cases one month after the disease initiation/exposure. IgG antibodies were detected in 76.5 % of cases one month after the disease/exposure and 53 % of cases 3 months after the disease/exposure (p < 0.01). Positive results of specific T-cell immunity were observed in 97.1 % of cases after one month and 79.4 % after 3 months.
For correspondence
Mikhail M. Averbakh -MD, PhD, Professor, Principal Researcher of Immunology Dept., CTRI of MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: amm50@mail.ru https//orcid.org/ 0000-0001-7706-3841
At the same time specific T-cell immunity (panel A and panel B) significantly decreased by the 3rd month of our study (p < 0.01). Trends in changes in T-cell immunity parameters (panels A and panels B) in groups of patients with and without clinical manifestations of the disease were different. If in the group with clinical manifestations, the number of spots did not change significantly when comparing the results after 1 and 3 months observation, in the group without clinical signs, a statistically significant decrease was noted by the 3rd month in panel B, in the absence of significant dynamics in panel A.
Conclusion. In our study, coronavirus infection in children and adolescents with tuberculosis in all cases proceeded in a mild form and was characterized by the presence of a pronounced specific T cell response in 97.1 % and the production of specific IgG-antibodies in 76.5 % of patients after 1 month of the study with subsequent statistically significant decrease in indicators by the 3rd month of observation - 79.4 and 53 %, respectively.
Keywords: SARS-CoV-2; coronavirus infection; antibodies; T-cells; tuberculosis; children and adolescents
Received 20.03.2023. Accepted 28.04.2023.
For citation: Averbakh M.M., Panova L.V., Ovsyankina E.S., Ergeshov A.E., Smirnova T.G., Kiseleva E.A., Khokh-lova Yu.Yu., Sterlikova S.S. Cellular and humoral responses to SARS-CoV-2 (omicron variant) in children and adolescents with pulmonary tuberculosis. Immunologiya. 2023; 44 (3): 317-25. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2023-44-3-317-325 (in Russian)
Funding. The study supported by CTRI of MSHE of Russia Scientific Research No. 122041100210-4 «An integrated approach to the diagnosis and treatment of respiratory tuberculosis in children and adolescents. Personalized Approaches to the Treatment of Respiratory Tuberculosis in Children and Adolescents».
Conflict of interests. The authors declare no conflict of interests.
Authors' contribution. The concept and design of the study - Averbakh M.M., and processing of material - Smirnova T. G., Kiseleva E.A., Khokhlova Yu.Yu., Averbakh M.M., Panova L.V.; writing the text - Averbakh M.M., Panova L.V.;
Введение
Многочисленные наблюдения за течением новой ко-ронавирусной инфекции (COVID-19) у детей свидетельствуют о том, что заболевание в этой возрастной группе протекает значительно легче, чем у взрослых [1]. В начале пандемии COVID-19 за первое полугодие 2020 г. в РФ было зарегистрировано 47 712 случаев COVID-19 у детей, что составило 8,4 % от общего числа заболевших. Как удалось установить, воздействию SARS-CoV-2 подвержены дети всех возрастов. Гендерных различий не выявлено, но мальчики болели несколько чаще, чем девочки (52,2 против 47,8 %, р > 0,05). У подавляющего большинства детей (82,2 %) новая коронавирусная инфекция протекала нетяжело - легкую форму регистрировали у 49,9 % детей, у трети пациентов подтверждено бессимптомное течение [2]. По данным Роспотребнад-зора, в Российской Федерации на конец 2021 г. доля детей, заболевших COVID-19, колебалась на уровне 10-11 % от всех заболевших [3].
Появление COVID-19 вызвало озабоченность врачей прогнозом течения туберкулеза. Последствия заражения SARS-CoV-2 у больных туберкулезом до конца неясны. Имеются научные публикации о том, что наличие туберкулезной инфекции утяжеляет течение COVID-19 [4]. Высокая трансмиссивность штамма SARS-CoV-2 омикрон, по данным секвенирования его генома, обусловлена прежде всего наличием более 30 мутаций в S-белке, что увеличивает аффинность связывания с рецептором ACE2 и расщепление белка шипа [5].
Panova L.V., Ergeshov A.E.; collection Sterlikova S.S.; statistical processing -editing - Ovsyankina E.S.
Однако тропизм вариантов SARS-CoV-2 к легочной ткани и высокая трансмиссивность его различных видов не приводят к обострению течения туберкулезного процесса у детей и подростков. Так, по нашим данным, коронавирусная инфекция, вызванная ранними вариантами вируса SARS-CoV-2, не повлияла на течение туберкулезного процесса. Ни в одном случае не отмечено обострение туберкулеза и не было оснований для продления основного курса лечения. В исследовании с участием 53 детей и подростков, больных туберкулезом, в 89,1 % наблюдалось бессимптомное или легкое течение коронавирусной инфекции, которая была подтверждена исследованием мазков на РНК SARS-CoV-2 в 45,7 % случаев, а у остальных пациентов (54,3 %) подтверждена после выявления в крови специфических IgG к SARS-CoV-2. Случаи среднетяжелого течения заболевания (10,9 %) диагностированы при обнаружении характерных для вирусного поражения изменений в легких на компьютерной томографии (КТ) органов грудной клетки (ОГК); они и не сопровождались клинической картиной вирусной инфекции или были отмечены ее минимальные проявления без нарушения общего состояния пациентов. Ни в одном случае не отмечено прогресси-рования туберкулеза, не было оснований для продления основного курса лечения [6]. По данным О.И. Гурьевой и соавт. (2022), у 15 пациентов (10 из них с латентной туберкулезной инфекцией) с лабораторно подтвержденной SARS-CoV-2-инфекцией не выявлено обострения туберкулезного процесса. Бессимптомное течение ко-ронавирусной инфекции выявлено у 6 из 10 детей [7].
Таблица 1. Структура клинических форм туберкулеза органов дыхания у детей и подростков в период наблюдения (Клинические рекомендации «Туберкулез у детей», 2022 г)
Клиническая форма Фаза туберкулезного процесса в период заболевания СОУГО-19 Фаза туберкулезного процесса при завершении лечения Число больных
Первичный туберкулезный комплекс Инфильтрации Уплотнения 1
Экссудативный плеврит * Рассасывания 1
Казеозная пневмония * ** 1
Фиброзно-кавернозный туберкулез Инфильтрации ** 1
Кавернозный Инфильтрации ** 1
Эмпиема плевры * ** 2
Множественные туберкулемы Инфильтрации и распада ** 2
Диссеминированный туберкулез Инфильтрации Уплотнения 3
Очаговый туберкулез Инфильтрации Уплотнения 3
Инфильтративный туберкулез Распада, обсеменения Уплотнения 10
Туберкулез внутригрудных лимфатических узлов (>3 групп) Инфильтрации Уплотнения, кацинации 9
Всего 34
Примечание. * - форма туберкулеза, свидетельствующая об активности процесса без указания фазы; ** - формы туберкулеза, требующие хирургического вмешательства, в результате в легочной ткани не остается остаточных посттуберкулезных изменений.
Известно, что Т- и В-клеточный иммунный ответ на SARS-CoV-2 определяется примерно через 1 нед после появления симптомов COVID-19. СБ8+-Т-лимфоциты осуществляют цитотоксическое действие на клетки, инфицированные вирусом, тогда как CD4+-T-лимфо-циты через выработку цитокинов активируют как CD8+-лимфоциты, так и B-лимфоциты. У пациентов с SARS-CoV-2-инфекцией B-клеточный ответ обычно возникает в первую очередь против белка нуклеокапсида (N). В течение 4-8 дней после появления первых симптомов обнаруживается повышение титра антител к белку шипа [8].
По результатам исследования Т. Sekine и соавт. (2020) и Cañete Р. и соавт. (2020), специфический Т-клеточный ответ выявлен у 93 % обследованных (27/28), которые встречались с SARS-CoV-2, IgG-антитела определялись только в 60 % (17/28) случаев. Особого внимания заслуживает факт обнаружения Т-клеток, специфичных для SARS-CoV-2, у серонегативных по антителам людей из контактирующих с больными и выздоравливающих лиц с бессимптомным и легким COVID-19 в анамнезе [9, 10].
В научной литературе нам не встретилось исследований, характеризующих Т- и В-клеточный специфический иммунный ответ к SARS-CoV-2 у детей и подростков, больных туберкулезом.
Цель настоящего исследования - изучение выраженности и длительности клеточного и гуморального иммунного ответа на SARS-CoV-2 у детей и подростков, больных туберкулезом органов дыхания, переболевших или имевших контакт с больными COVID-19, вызванной штаммом омикрон.
Материал и методы
Участники исследования. Проведено когортное проспективное исследование с февраля по июнь 2022 г.
В исследование включено 34 пациента с различными формами туберкулеза органов дыхания, находившихся на лечении в детско-подростковом отделе ФГБНУ «ЦНИИТ» Минобрнауки России, переболевших или имевших контакт с больными COVID-19 (штамм омикрон). Возраст пациентов от 2 до 17 лет (Ме - 13 [11-16]), девочек - 19, мальчиков - 15.
План исследования не требовал согласования с этическим комитетом, так как при поступлении в клинику родители/законные представители дали информированное согласие на использование результатов обследования в медицинских, научных и образовательных целях с соблюдением правил врачебной тайны. Исследование проведено в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» (WMA Declaration of Helsinki -Ethical Principles for Medical Research Involving Human Subjects, 2013).
Структура клинических форм туберкулеза органов дыхания у детей и подростков, находившихся на лечении, представлена в табл. 1.
Диагностированные при проведении рентгенологического исследования (КТ ОГК) фазы туберкулезного процесса: инфильтрации, распада и обсеменения, свидетельствуют об активности заболевания, а фазы рассасывания, уплотнения и кальцинации - об отсутствии активности.
В период наблюдения проводился опрос всех пациентов о наличии жалоб, характерных для острой респираторной вирусной инфекции (ОРВИ): слабость, головная боль, озноб, боль в горле, кашель, насморк. Клинический осмотр включал термометрию, оценку катаральных явлений в ротоглотке, аускультацию легких. Все результаты оценивали в динамике. Характер течения и степень тяжести COVID-19 оценивали в соот-
ветствии с методическими рекомендациями Минздрава России от 03.07.2020 «Особенности клинических проявлений и лечения заболевания, вызванного новой коро-навирусной инфекцией (COVID-19) у детей».
Лабораторные исследования. Лабораторная диагностика COVID-19 у пациентов с клиническими проявлениями ОРВИ проводилась по положительному результату исследования мазка из носо- и ротоглотки на РНК SARS-CoV-2 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ). Выделение РНК коронавируса проводили с использованием набора реагентов «М-сорб-ООМ» для выделения ДНК и РНК на магнитных частицах из клинических образцов и объектов окружающей среды (НПФ «Синтол», Россия). Обратную транскрипцию РНК и амплификацию ДНК проводили с использованием тест-системы для выявления РНК коронавируса SARS-CoV-2 методом ПЦР-РВ «^^^^B^ARS-CoV^» (НПФ «Синтол», Россия). Определение штаммовых вариантов SARS-CoV-2 проводили с использованием набора для выявления генетических линий Omicron и Delta «Ам-плиТест SARS-CoV-2 VOC v.3» (ФГБУ «ЦСП» ФМБА России). Исследование клеточного и гуморального ответа на вирус SARS-CoV-2 проводили всем пациентам, находившимся в отделении (вне зависимости от клинических проявлений заболевания) через 1 и 3 мес после диагностирования или контакта с коронавирус-ной инфекцией. Состояние клеточного иммунитета к SARS-CoV-2 оценивали при помощи теста T-SPOT. COVID (Oxford Immunotec, Великобритания) в лаборатории «АБТ» по количеству спотов (специфически сенсибилизированных Т-лимфоцитов) за вычетом отрицательного контроля.
Интерпретация результатов в панели А (COV-A) (Spike antigens) и панели В (COV-B) (Nucleocapsid antigens): отрицательный - если каждый из антигенов < 4; пограничный - если каждый из антигенов 5-7; положительный - если один из антигенов > 8; неопределенный - в положительном контроле < 20 спотов (результат исследования невалиден в связи с недостаточной функциональностью Т-лимфоцитов).
Специфические IgM- и IgG-антитела к нуклеокап-сидному белку (ARCHITECT, Abbott, США) определяли с оценкой коэффициента позитивности (КП). КП - индекс, который отражает соотношение хемилюминсцент-ного сигнала в пробе пациента и калибровочной пробе (> 1,4 - положительно).
Статистическая обработка. Сбор данных, их последующую коррекцию, систематизацию исходной информации и статистическую обработку полученных результатов проводили в электронных таблицах Microsoft Office Excel (2016). Результаты качественных признаков (пациенты с положительным результатом на T-SPOT.COVID и специфические IgG) выражены в абсолютных числах с указанием долей (%), расчет статистической значимости проведен с помощью критерия X2 Пирсона.
Таблица 2. Динамика показателей гуморального иммунитета к SARS-CoV-2 омикрон (n = 34)
Специфические антитела Через 1 мес Через 3 мес Р
IgG к N-белку КП 7 [4-52,5] 3 [0-22,5] 0,01*
Примечание. * - статистическая значимость рассчитана с помощью Т-критерия Вилкоксона [ТЭп = 13. Критические значения Т при n = 34: Ткр = 162 (0,01), Ткр = 200 (0,05)]; полученное эмпирическое значение ТЭп находится в зоне значимости.
Количественные показатели оценивали на соответствие нормальному распределению с использованием критерия Шапиро-Уилка. Проверка показала, что данные в исследовании не имеют нормального распределения, поэтому в дальнейшем расчеты выполняли методами непараметрической статистики.
При описании количественных признаков в качестве центра распределения была посчитана медиана, а в качестве показателей вариации - квартили (Me [Q1-Q3]). Сопоставление показателей Т-клеточного и гуморального ответов через 1 и 3 мес проводили с использованием Т-критерия Вилкоксона для связанных выборок. Статистически значимыми считались различия приp < 0,05.
Результаты
Из 34 пациентов клиническая картина ОРВИ наблюдалась у 23 (67,6 %), коронавирусная инфекция во всех случаях протекала в легкой форме. Из 23 пациентов РНК SARS-CoV-2 обнаружена у 17 (74 %).
Исследование специфических IgM- и IgG-антител показало, что IgM-антитела отсутствовали у всех обследованных пациентов уже через 1 мес от начала заболевания/нахождения в контакте, тогда как IgG-антитела определялись у 76,5 %, а через 3 мес - у 53 % пациентов. Медиана уровня продукции специфических IgG-антител через 1 и 3 мес после начала заболевания и статистическая значимость представлены в табл. 2.
При исследовании показателей специфического Т-клеточного ответа через 1 мес положительный ре-
Таблица 3. Динамика показателей клеточного иммунитета к SARS-CoV-2 омикрон (n = 34)
Специфически сенсибилизированные Т-лимфоциты Через 1 мес Через 3 мес Р
T-SPOT.COVID панель А Spike antigens, количество спотов 11,5 [6-19] 6 [3-11] 0,01*
T-SPOT.COVID панель B Nucleocapsid antigens, количество спотов 13 [8-40] 6,5 [4-10] 0,01**
Примечание. * - ТЭмп = 145,5, полученное эмпирическое значение Т_ находится в зоне значимости; ** - Т_ = 125,5,
Эмп ' Эмп ' '
полученное эмпирическое значение ТЭмп находится в зоне значимости.
Таблица 4. Динамика показателей гуморального иммунитета к 8ЛЯ8-СоУ-2 омикрон в группах с клиническими проявлениями и без них
Срок наблюдения Уровень IgG к N-белку (КП) в группах наблюдения
с клиническими проявлениями п = 23 без клинических проявлений п = 11
Через 1 мес 6,41 [3,38-7,91] 4,95 [0-7,79]
Через 3 мес 2,09 [0-3,24] 1,68 [0-3,62]
Р 0,01* 0,01**
Примечание. Статистическая значимость рассчитана с помощью Т-критерия Вилкоксона; * - ТЭмп = 10 [критические значения Тпри п =23: Ткр = 62 (0,01), Ткр = 83 (0,05)]; полученное эмпирическое значение ТЭмп находится в зоне значимости; ** - ТЭмп = 5 [критические значения Тпри п = 11: Ткр = 7 (0,01), Ткр = 13 (0,05)]; полученное эмпирическое значение ТЭмп находится в зоне значимости.
зультат получен у 97,1 % пациентов, а продукция специфических ^в-антител выявлена у 76,5 % (х2 - 6,275, р = 0,013). Аналогичные показатели через 3 мес составляли 79,4 и 53 % соответственно (х2 - 5,322, р = 0,022).
Показатели специфического Т-клеточного иммунитета (панель А и панель В) в группе обследованных пациентов статистически значимо снижались к 3 мес исследования (табл. 3).
Представляло интерес сравнение выраженности и длительности иммунного ответа у больных с клиническими проявлениями СОУЮ-19 - 23 (1-я группа) из 34 случаев и без клинических проявлений - 11 (2-я группа) случаев. Показатели продукции специфических ^в-антител достоверно снижались к 3-му месяцу исследования в обеих группах (табл. 4).
Тенденции изменения показателей Т-клеточного иммунитета (панель А и панель В) в группах пациентов 1-й и 2-й групп были различные. Если в группе пациентов с клиническими проявлениями количество спотов статистически значимо не менялось, то во 2-й группе отмечено их статистически значимое снижение к 3-му месяцу по панели В при отсутствии значимой динамики по панели А (табл. 5).
Обсуждение
Проведенное нами исследование в целом подтвердило полученные ранее данные об отсутствии обострения туберкулезного процесса у детей и подростков при сочетании с СОУГО-19, вызванной различными штаммами 8ЛЯ8-СоУ-2, и динамику развития специфического гуморального иммунитета у пациентов [6].
Данные о выраженности специфического Т-клеточного иммунитета к 8ЛЯ8-СоУ-2 (панель А и панель В) у пациентов, больных туберкулезом, получены впервые. Вызывает интерес тот факт, что показатели специфического Т-клеточного иммунитета (панель А и панель В) в группе исследованных пациентов в целом статистически значимо снижались к 3 мес исследования, однако имелись некоторые отличия в группах пациентов с клиническими проявлениями новой коронавирусной инфекции (1-я группа) и без таковых (2-я группа). Если в 1-й группе количество спотов статистически значимо не менялось при сравнении результатов через 1 и 3 мес наблюдения, то во 2-й группе отмечено их статистически значимое снижение к 3-му месяцу по панели В при отсутствии значимой динамики по панели А.
Причины этого явления не ясны. Можно предположить, что это связано с генетически обусловленными особенностями распознавания пептидов 8ЛЯ8-СоУ-2, которые связываются с общими аллелями ИЬЛ-1 и ИЬЛ-П [11]. Также показано, что у ряда индивидуумов специфичные СБ4+-и СБ8+-клоны быстро появляются после инфицирования. После кратковременной пролиферации у многих клонов появляется фенотип клеток памяти, и такие клетки сохраняются по крайней мере до 3 мес наблюдения [12].
Кроме того, при исследовании репертуара рецепторов Т-клеток было показано наличие СБ4+-и СБ8+-Т-клеток, узнающих белок шипа, у пациентов, не сталкивавшихся с вирусом. Авторы объяснили это возможным узнаванием данными клонами мотивов белков других, сезонных, коронавирусов [13]. Исследований по изучению динамики показателей специфического клеточного иммунитета (панель А и панель В) и гуморального иммунитета (^в-антитела) против 8ЛЯ8-СоУ-2 у детей без туберкулеза нами не найдено.
Таблица 5. Динамика показателей клеточного иммунитета к 8ЛЯ8-СоУ-2 омикрон в группах с клиническими проявлениями и без них
Результат T-SPOT.COVID (количество спотов) в группах наблюдения
Срок с клиническими проявлениями, n = 23 без клинических проявлений, п = 11
наблюдения панель А панель B панель А панель B
Spike antigens Nucleocapsid antigens Spike antigens Nucleocapsid antigens
Через 1 мес 7 [5-17] 12 [6-17] 17 [8-17] 46 [12-58]
Через 3 мес 8 [4-14] 8 [5-15] 4 [2-8] 4 [2-4]
Р > 0,05* > 0,05** 0,05*** 0 01****
Примечание. Статистическая значимость рассчитана с помощью Т-критерия Вилкоксона; * - ТЭмп =103,5, полученное эмпирическое значение Т_ находится в зоне незначимости; ** - Т_ = 91, полученное эмпирическое значение Т находится в зоне
г Эмп ' Эмп ' у г эмп
незначимости; *** - Т_ = 9, полученное эмпирическое значение Т_ находится в зоне неопределенности; **** - Т = 6, полу' Эмп ' у г Эмп г ' Эмп '
ченное эмпирическое значение ТЭмп находится в зоне значимости.
Имеются лишь данные о том, что уровень специфического клеточного и гуморального ответа у взрослых выше, чем у детей [11].
Исследования роли неспецифического иммунитета в защите от 8ЛЯ8-СоУ-2 отсутствуют, но можно предположить, что активизация различных компонентов му-козального иммунитета верхних и нижних дыхательных путей будет являться сдерживающим фактором в развитии этой патологии. Это относится к клеткам врожденного иммунитета, прежде всего к воспалительным макрофагам, субпопуляции В1-лимфоцитов, секретирующих естественные антитела, независимо от характера попадающих патогенов, а также Т-лимфоцитам, характерным для слизистых оболочек (у5Т-клетки и СБ8+-ааТ-клетки, естественные регуляторные Т- и НКТ-клетки), регуля-торная активность которых направлена на сдерживание слишком интенсивного воспаления [14].
Еще в исследованиях конца прошлого столетия было показано, что у больных активными формами туберкулеза количество нейтрофилов и лимфоцитов в бронхо-альвеолярном лаваже (БАЛ) значительно превышало таковое по сравнению со здоровыми людьми. Абсолютное количество лимфоцитов, СБ3+-лимфоцитов и СБ3+-у5Т-лимфоцитов также было достоверно выше в БАЛ, чем в крови больных туберкулезом [15]. Также была показана более активная продукция ключевых цитоки-нов ИНФ-у и ИЛ-4 СБ4+- и СБ8+-Т-лимфоцитами БАЛ у пациентов с активными формами туберкулеза по сравнению с лимфоцитами периферической крови этих же пациентов [16].
Важную роль во врожденном иммунитете играет продукция антимикробных пептидов эпителиальными клетками верхних отделов респираторного тракта. Анти-
микробные пептиды (гранулизин, дефензины а, в и кателицидины) - ключевые эффекторы врожденного иммунитета, которые обеспечивают быстрый ответ макроорганизма на инфекцию [17, 18]. Исследования продукции цитолитических молекул клетками БАЛ больных туберкулезом отсутствуют. Однако нами была проанализирована продукция этих молекул клетками периферической крови больных различными формами туберкулеза. Наиболее высокие показатели выработки гранулизина и кателицидина были у группы инфицированных МБТ детей и подростков [19]. Вероятно, механизмы неспецифического иммунитета, активированные в процессе течения туберкулеза, также влияют на характер течения коронавирусной инфекции у этой категории пациентов.
Заключение
СОУГО-19 у детей и подростков, больных различными формами туберкулеза, во всех изученных нами случаях протекала в легкой форме, РНК 8ЛЯ8-СоУ-2 обнаружена лишь у 74 % пациентов, имевших клинические проявления заболевания. Продукция IgМ-антител к нуклеокапсидному белку отсутствовала уже через 1 мес от начала заболевания/нахождения в контакте, тогда как ^в-антитела определялись через 1 мес у 76,5 %, а через 3 мес - у 53 % пациентов. Положительный результат по показателям специфического Т-кле-точного ответа получен у 97,1 % пациентов через 1 мес и у 79,4 % через 3 мес наблюдения. При этом в группе пациентов с клиническими проявлениями заболевания количество спотов статистически значимо не менялось к 3 мес наблюдения, а в группе без клинических проявлений отмечено их статистически значимое снижение.
■ Литература
1. Ludvigsson J.F. Systematic review of COVID-19 in children shows milder cases and a better prognosis than adults. Acta Paediatrica. 2020; 109: 1088-95. DOI: https://doi.org/10.1111/apa.15270
2. Горелов А.В., Николаева С.В., Акимкин В.Г. Коронавирусная инфекция COVID-19 у детей в Российской Федерации. Инфекционные болезни. 2020; 18 (3): 15-20. DOI: https://doi.org/10.20953/1729-9225-2020-3-15-20
3. В Роспотребнадзоре назвали долю детей среди заболевших коронавирусом. URL: https://www.m24.ru/news/obshchestvo/21102021/ 188598?utm_source=CopyBuf (дата обращения: 24.12.2022)
4. Aggarwal A.N., Agarwal R., Dhooria S., Prasad K.T. et al. Active pulmonary tuberculosis and coronavirus disease 2019: a systematic review and meta-analysis. PLoS One. 2021; 16 (10): e0259006. DOI: https://doi. org/10.1371/journal.pone.0259006. eCollection 2021.
5. Araf Y., Akter F., Tang Y., Fatemi R. et al. Omicron variant of SARS-CoV-2: Genomics, transmissibility, and responses to current COVID-19 vaccines. J Med Virol. 2022; 94: 1825-32. DOI: https://doi. org/10.1002/jmv.27588
6. Эргешов А.Э., Овсянкина Е.С., Губкина М.Ф., Петракова И.Ю., Панова Л.В., Хитева А.Ю., Крушинская Е.А. Особенности диагностики и течения новой коронавирусной инфекции у детей и подростков с туберкулезом органов дыхания. Вестник ЦНИИТ. 2020; 4 (13): 43-9. DOI: https://doi.org/10.7868/S2587667820040056
7. Гурьева О. И., Лугинова Е.Ф., Прокопьев Е.С., Николаева Д.А. Течение новой коронавирусной инфекции у детей с различными проявлениями туберкулезной инфекции. Туберкулез и социально значимые заболевания. 2022; 10 (1): 1-6.
8. Tay M.Z., Poh C.M., Rénia, L., MacAry P.A. et al. The trinity of COVID-19: immunity, inflammation and intervention. Nat Rev Immunol. 2020; 20: 363-74. DOI: https://doi.org/10.1038/s41577-020-0311-8
9. Sekine Т., Perez-Potti A., Rivera-Ballesteros O., Stralin A. et al. Robust T cell immunity in convalescent individuals with asymptomatic or mild COVID-19. Cell. 2020; 183 (1): 158-68.e14. DOI: https://doi. org/10.1038/s41577-020-0311-8
10. Cañete Р., Vinuesa С. COVID-19 Makes B cells forget, but T cells remember. Cell. 2020; 183 (1): 13-5. DOI: https://doi.org/10.1016/j. cell.2020.09.013
11. Cohen C.A., Li A.P.Y., Hachim A., Hui D.S.C. et al. SARS-CoV-2 specific T cell responses are lower in children and increase with age and time after infection. Nature communications. 2021; 12: 4678. DOI: https:// doi.org/10.1038/s41467-021-24938-4
12. Minervina A.A., Komech E.A., Titov A., Koraichi M.B. et al. Longitudinal high-throughput TCR repertoire profiling reveals the dynamics of T-cell memory formation after mild COVID-19 infection. Elife. 2021; 10: e63502. DOI: https://doi.org/10.7554/eLife.63502
13. Shomuradova A.S., Vagida M.S., Sheetikov S.A., Zornikova K.V. et al. SARSCoV-2 epitopes are recognized by a public and diverse repertoire of human T cell receptors. Immunity. 2020; 53 (6): 1245-57.e1245. DOI: https://doi.org/10.1016/j.immuni.2020.11.004
14. Щубелко Р.В., Зуйкова И.Н., Шульженко А.Е. Мукозальный иммунитет верхних дыхательных путей. Иммунология. 2018; 39 (1): 81-8. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2018-39-1-81-88
15. Ганковская Л.В., Зинина Е.В., Ганковский В.А., Семуш-кин А.Р. Изменение экспрессии Toll-подобных рецепторов, цитоки-
нов и хемокинов в клетках слизистой оболочки ротоглотки у детей при COVID-19. Иммунология. 2021; 42 (3): 222-31. DOI: https://doi. org/10.33029/0206-4952-2021-42-3-222-231
16. Tsao T.C., Tsao K.C., Lin M.C., Huang C.C. et al. Increased absolute number but not proportion of gamma/delta T-lymphocytes in the bronchoalveolar lavage fluid of patients with active pulmonary tuberculosis. Tuber Lung Dis. 1999; 79 (4): 215-20. DOI: https://doi.org/10.1054/ tuld.1999.0209
17. Boras Z., Juretic A., Gagro A., Pavelic Lj. Cytokine profile of T lymphocytes from peripheral blood and bronchoalveolar lavage fluid in patients with active pulmonary tuberculosis. Scandinavian Journal of
Immunology. 2007; 65: 257-64. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1365-3083.2006.01890.x
18. Будихина А.С. Роль антимикробных пептидов в патологии заболеваний верхних дыхательных путей. Иммунология. 2017; 38 (4): 234-8. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2017-38-4-234-238
19. Авербах М.М. (мл.), Панова Л.В., Губкина М.Ф., Евсеева Н.И. Динамические изменения гранулизина и кателицидина у детей и подростков, больных различными формами туберкулеза органов дыхания. Медицинская иммунология. 2018; 20 (5): 747-52. DOI: https://doi.org/10.15789/1563-0625-2018-5-747-752
■ References
1. Ludvigsson J.F. Systematic review of COVID-19 in children shows milder cases and a better prognosis than adults. Acta Paediatrica. 2020; 109: 1088-95. DOI: https://doi.org/10.1111/apa.15270
2. Gorelov A.V., Nikolaeva S.V., Akimkin V.G. Coronavirus infection COVID-19 in children in the Russian Federation. Infekc. bolezni (Infectious diseases). 2020; 18 (3): 15-20. DOI: https://doi.org/10.20953/1729-9225-2020-3-15-20 (in Russian)
3. Rospotrebnadzor named the proportion of children among those infected with coronavirus. URL: https://www.m24.ru/news/obshchestvo/ 21102021/188598?utm_source=CopyBuf (date of access: 24.12.2022)
4. Aggarwal A.N., Agarwal R., Dhooria S., Prasad K.T., et al. Active pulmonary tuberculosis and coronavirus disease 2019: a systematic review and meta-analysis. PLoS One. 2021; 16 (10): e0259006. DOI: https://doi. org/10.1371/journal.pone.0259006. eCollection 2021.
5. Araf Y., Akter F., Tang Y., Fatemi R., et al. Omicron variant of SARS-CoV-2: Genomics, transmissibility, and responses to current COVID-19 vaccines. J Med Virol. 2022; 94: 1825-32. DOI: https://doi. org/10.1002/jmv.27588
6. Ergeshov A.E., Ovsyankina E.S., Gubkina M.F., Petrakova I.Yu., Panova L.V., Hiteva A.Yu., Krushinskaya E.A. Features of the diagnosis and course of a new coronavirus infection in children and adolescents with respiratory tuberculosis. Bulletin of the Central Research Institute [Vestnik CNIIT]. 2020; 4 (13): 43-9. DOI: https://doi.org/10.7868/ S2587667820040056 (in Russian)
7. Gur'eva O.I., Luginova E.F., Prokop'ev E.S., Nikolaeva D.A. The course of a new coronavirus infection in children with various manifestations of tuberculosis infection. Tuberculosis and socially significant diseases. 2022; 10 (1): 1-6. (in Russian)
8. Tay M.Z., Poh C.M., Rénia, L., MacAry P.A., et al. The trinity of COVID-19: immunity, inflammation and intervention. Nat Rev Immunol. 2020; 20: 363-74. DOI: https://doi.org/10.1038/s41577-020-0311-8
9. Sekine T., Perez-Potti A., Rivera-Ballesteros O., Stralin A., et al. Robust T cell immunity in convalescent individuals with asymptomatic or mild COVID-19. Cell. 2020; 183 (1): 158-68.e14. DOI: https://doi. org/10.1038/s41577-020-0311-8
10. Cañete R., Vinuesa S. COVID-19 makes B cells forget, but T cells remember. Cell. 2020; 183 (1): 13-5. DOI: https://doi.org/10.1016/ j.cell.2020.09.013
11. Bastos M.L., Tavaziva G., Abidi S.K., Campbell J.R., et al. Diagnostic accuracy of serological tests for COVID-19: systematic review and meta-analysis. BMJ. 2020; 370: m2516. DOI: https://doi.org/10.1136/ bmj.m2516. 2
12. Minervina A.A., Komech E.A., Titov A., Koraichi M.B., et al. Longitudinal high-throughput TCR repertoire profiling reveals the dynamics of T-cell memory formation after mild COVID-19 infection. Elife. 2021; 10: e63502. DOI: https://doi.org/10.7554/eLife.63502
13. Shomuradova A.S., Vagida M.S., Sheetikov S.A., Zornikova K.V. et al. SARSCoV-2 epitopes are recognized by a public and diverse repertoire of human T cell receptors. Immunity. 2020; 53 (6): 1245-57.e1245. DOI: https://doi.org/10.1016/j.immuni.2020.11.004
14. Shchubelko R.V., Zuikova I.N., Shulzhenko A.E. Mucosal immunity of the upper respiratory tract. Immunologiya. 2018; 39 (1): 81-8. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2018-39-1-81-88 (in Russian)
15. Gankovskaya L.V., Zinina E.V., Gankovskiy V.A., Semush-kin A.R. Changes in the expression of Toll-like receptors, cytokines and chemokines in cells of the oropharyngeal mucosa in children with COVID-19. Immunologiya. 2021; 42 (3): 222-231. DOI: https://doi. org/10.33029/0206-4952-2021-42-3-222-231 (in Russian)
16. Tsao T.C., Tsao K.C., Lin M.C., Huang C.C., et al. Increased absolute number but not proportion of gamma/delta T-lymphocytes in the bronchoalveolar lavage fluid of patients with active pulmonary tuberculosis. Tuber Lung Dis. 1999;79(4):215-20. DOI: 10.1054/tuld.1999.0209.
17. Boras Z., Juretic A., Gagro A., Pavelic Lj. Cytokine profile of T lymphocytes from peripheral blood and bronchoalveolar lavage fluid in patients with active pulmonary tuberculosis. Scandinavian Journal of Immunology. 2007; 65: 257-64. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1365-3083.2006.01890.x
18. Budikhina A.S. The role of antimicrobial peptides in the pathology of diseases of the upper respiratory tract. Immunologiya. 2017; 38 (4): 234-8. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2017-38-4-234-238 (in Russian)
19. Averbakh M.M., Panova L.V., Gubkina M.F., Evseeva N.I. Dynamic changes of granulysin and cathelicidin in children and adolescents with different forms of pulmonary tuberculosis. Medical Immunology (Russia). 2018; 20 (5): 747-52. DOI: https://doi.org/10.15789/1563-0625-2018-5-747-752 (in Russian)
Сведения об авторах
Авербах Михаил Михайлович - д-р мед. наук, проф., глав. науч. сотр. отдела иммунологии, ФГБНУ «ЦНИИТ» Минобрнауки России, Москва, Российская Федерация
E-mail: amm50@mail.ru http://orcid.org/0000-0001-7706-3841
Эргешов Атаджан Эргешович - член-корр. РАН, д-р мед. наук, проф., директор ФГБНУ «ЦНИИТ» Минобр-науки России, Москва, Российская Федерация E-mail: cniit@ctri.ru http://orcid.org/0000-0002-2494-9275
Authors' information
Mikhail M. Averbakh - MD, PhD, Professor, Principal Researcher of the Immunology Dept., CTRI of the MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: amm50@mail.ru http://orcid.org/0000-0001-7706-3841
Atadzhan E. Ergeshov - Corresponding Member of RAS, MD, PhD, Professor, Director, CTRI of the MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: cniit@ctriru http://orcid.org/0000-0002-2494-9275
Панова Людмила Владимировна - д-р мед. наук, вед. науч. сотр. детско-подросткового отдела ФГБНУ «ЦНИИТ» Минобрнауки России, Москва, Российская Федерация
E-mail: detstvocniit@mail.ru http://orcid.org/0000-0003-2417-8295
Овсянкина Елена Сергеевна - д-р мед. наук, проф., рук. детско-подросткового отдела ФГБНУ «ЦНИИТ» Минобрнауки России, Москва, Российская Федерация E-mail: detstvocniit@mail.ru http://orcid.org/0000-0002-0460-7585
Смирнова Татьяна Геннадьевна - канд. мед. наук, рук. отдела микробиологии ФГБНУ «ЦНИИТ» Мин-обрнауки России, Москва, Российская Федерация E-mail: s_tatka@mail.ru https://orcid.org/0000-0003-2886-1745
Киселева Екатерина Андреевна - лаборант-исследователь отд. микробиологии ФГБНУ «ЦНИИТ» Минобр-науки России, Москва, Российская Федерация E-mail: ekaterinka_kiseleva@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-3296-407X
Хохлова Юлия Юрьевна - канд. мед. наук, врач детского отделения детско-подросткового отд. ФГБНУ «ЦНИИТ» Минобрнауки России, Российская Федерация E-mail: yuyuhh97@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-8877-2261
Стерликова Светлана Сергеевна - врач детского отделения детско-подросткового отдела ФГБНУ «ЦНИИТ» Минобрнауки России, Москва, Российская Федерация E-mail:s.sterlikova@mail.ru https://orcid.org/0000-0001-9885-4108
Ludmila V. Panova - MD, PhD, Leader Researcher, Child and Adolescent Dept., CTRI of the MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: detstvocniit@mail.ru http://orcid.org/0000-0003-2417-8295
Elena S. Ovsyankina - MD, PhD, Professor, Principal Researcher, Head of Child and Adolescent Dept., CTRI of the MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: detstvocniit@mail.ru http://orcid.org/ORCID id: 0000-0002-0460-7585
Tatiana G. Smirnova - PhD, Head of Microbiology Dept., CTRI of the MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: s_tatka@mail.ru https://orcid.org/0000-0003-2886-1745
Ekaterina A. Kiseleva - Assistant Researcher, Microbiology Dept., CTRI of the MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation
E-mail: ekaterinka_kiseleva@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-3296-407X
Yulia Yu. Khokhlova - PhD, Physician of Junior Children Dept., CTRI of the MSHE of Russia, Russian Federation E-mail: yuyuhh97@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-8877-2261
Svetlana S. Sterlikova - Physician of Junior Children Dept., CTRI of the MSHE of Russia, Moscow, Russian Federation
E-mail: s.sterlikova@mail.ru https://orcid.org/0000-0001-9885-4108
