Клеточные технологии в коррекции нарушений адаптивного и врожденного иммунитета при экспериментальной острой ишемии печени Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017

Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya

КЛЕТОЧНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В КОРРЕКЦИИ НАРУШЕНИЙ АДАПТИВНОГО И ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ОСТРОЙ ИШЕМИИ ПЕЧЕНИ

Литвинова Е.С., Конопля А.И., Быстрова Н.А., Харченко А.В., Конопля Н.А.

Курский государственный медицинский университет, Курск, Россия

Введение. Для более широкого внедрения заместительной клеточной терапии в клиническую практику необходимы дальнейшие экспериментальные исследования, направленные на определение иммунометаболи-ческих эффектов различных вариантов регенеративной клеточной терапии (использование аллогенных гепато-цитов и их культуральной жидкости), а также сочетанное применение аллогенных гепатоцитов и фармакологических препаратов при патологии печени.

Цель и задачи. Установить эффективность коррекции иммунных нарушений в условиях острой ишемии печени путем использования аллогенных гепатоцитов (АГ) и их культуральной жидкости (КЖАГ).

Материалы и методы. Исследования проведены на 88 здоровых крысах-самцах Вистар массой 150-200 г. Острую ишемию печени (ОИП) вызывалась оперативным методом под внутрибрюшинным гексеналовым наркозом путем пережатия гепатодуоденальной в течение 10 минут. Выделение АГ от животных через 5-6 дней после рождения производилась по методике M.N. Berry, D.S. Friend. Полученный пул суспензии клеток от 3 крыс в концентрации 2 х 106/кг сразу же вводили внутрибрюшинно, десятикратно, через 24 часа, в объеме 0,5 мл в среде 199. С целью получения КЖАГ АГ культивировали в среде 199 (5 х 107 клеток на 3 мл среды), содержащей 5% телячьей эмбриональной сыворотки, в течение 4 ч. После чего клетки осаждали центрифугированием, а КЖАГ десятикратно (с 24-часовым интервалом) внутрибрюшинно вводили реципиентам из расчета 5 мг/кг белка. АГ и КЖАГ готовили ежедневно и вводили сразу же после приготовления. Экспериментальных животных делили на 4 группы по 11-12 особей в каждой: 1-я группа (контрольная) — здоровые крысы; 2-я группа — ОИП; 3-я группа — ОИП и введение АГ; 4-я группа — ОИП и введение КЖАГ. Смертность экспериментальных животных во 2-4 группах в течение 5 дней после моделирования ОИП соответственно составила 34%, 21% и 17%. В циркулирующей крови определяли функционально-метаболическую активность нейтрофилов, в селезенке число иммунных антите-лообразующих клеток (АОК) на эритроциты барана. О выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) на эритроциты барана судили по разнице масс (РМ) регионарного и контрлатерального лимфатических узлов и по разнице количества в них кариоцитов (РК).

Результаты. В условиях ОИП у животных установлена супрессия формирования гуморального иммунного ответа (снижение количества иммунных АОК в селезенке) и ГЗТ (снижение разницы РМ и РК регионарных и контрлатеральных лимфатических узлов), снижение метаболической и фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови (снижение ФИ, ФЧ, НСТ-сп., НСТ-ст.). Введение АГ реципиентам с ОИП нормализует ФЧ нейтрофилов периферической крови и их кислород-зависимую активность по НСТ-ст., корригирует, но не до уровня контрольной группы животных, ФИ полиморфно-ядерных лейкоцитов периферической крови и повышает более значительно, по сравнению с контролем,

формирование ГЗТ. Введение КЖАГ крысам с гипоксией печени нормализует формирование клеточной формы иммунного ответа и ФИ нейтрофилов периферической крови, частично нормализует развитие гуморального звена иммунитета, ФЧ и кислород-зависимую функциональную активность полиморфно-ядерных лейкоцитов.

Заключение. Для бескровных манипуляций на печени в клинической практике нередко используется пережатие печеночно-дуоденальной связки. Однако, возникающая при этом ишемия печени может быть причиной не только резких нарушений функции этого органа, но и оказывает отрицательное влияние на весь организм в целом, в первую очередь через возникающее иммунодефицитное состояние. Применение в этих условиях трансплантации гепатоцитов и их культуральной жидкости корригирует в экспериментальных условиях нарушения иммунитета. По-видимому, трансплантированные изолированные гепатоциты не только изменяют гуморальные и молекулярные механизмы, отвечающие за активацию функции поврежденных гепатоцитов реципиента и регенерацию, но и активируют функцию иммунокомпетентных клеток путем выработки гуморальных соединений.

КРАТКОСРОЧНОЕ КУЛЬТИВИРОВАНИЕ МОНОНУКЛЕАРНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ С РЕЛЬЕФНЫМ КАЛЬЦИЙ-ФОСФАТНЫМ ПОКРЫТИЕМ НА ТИТАНЕ

Литвинова Л.С.1, Юрова К.А.1, Шуплецова В.В.1, Мелащенко Е.С.1, Хазиахматова О.Г.1, Шаркеев Ю.П. 22 4, Хлусов И.А.1 22 3

1 Балтийский федеральный университет им. И. Канта, Калининград, Россия

2 Томский политехнический университет, Томск, Россия

3 Сибирский государственный медицинский университет, Томск, Россия

4 Институт физики прочности и материаловедения СО РАН, Томск, Россия

Введение. Известно, что стандартная тест-система в двумерной (2D) стационарной культуре клеток на пластиковой поверхности культуральных планшетов не соответствует условиям реального функционирования клеточных систем, отличаясь многими параметрами, в том числе активацией рецепторов и внутриклеточных сигнальных путей, от естественного микроокружения клеток in vivo. Использование искусственных трехмерных (3D) матриц, способных биомиметически воспроизводить клеточное и тканевое микроокружение, позволяет формировать условия, приближенные к in vivo и проводить эскпериментальные работы на межфазной границе раздела живой и неживой материи.

Цель. Изучение влияния 3D-матриксов, имитирующих минеральное вещество регенерирующей костной ткани, на состояние мононуклеарных лейкоцитов (МНК) в краткосрочной культуре in vitro.

Материалы и методы. Материалом исследования служили МНК, выделенные из лейковзвеси здоровых доноров методом центрифугирования в градиенте плотности фиколл-урографин (1,077 г/см3) (Pharmacia, Швеция) и культивировали (3 х 106 кл/лунку) в полной питательной среде в течение 48 часов при 37 °С, во влажной атмосфере, содержащей 5% CO2. Состояние трехмерной (3D) культуры клеток имитировали при помощи добавления в клеточную культуру подложек (10 х 10 х 1 мм3) из коммерчески чистого титана, несущих рельефное кальций-