CC BY
26
Химия растительного сырья. 2016. №1. С. 85-91. DOI: 10.14258/j cprm.201601924
УДК 582.539:581.192
К ВОПРОСУ О СОДЕРЖАНИИ АМИНОКИСЛОТ И ВОДОРАСТВОРИМЫХ ВИТАМИНОВ У НЕКОТОРЫХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ СЕМЕЙСТВА HYDROCHARITACEAE
© А.Н. Ефремов1 *, Е.А. Алехина1, Д.Е. Иминова2, Н.К. Омаргалиева2
10мский государственный педагогический университет, наб. Тухачевского, 14, Омск, 644099 (Россия), e-mail: [email protected] 2Научный центр радиоэкологических исследований государственного университета им. Шакарима, ул. Физкультурная, 4А, Семей, 071412 (Республика Казахстан)
Выполнено исследование содержания аминокислот (валина, аргинина, триптофана, метионина, лизина, гисти-дина, фенилаланина, изолейцина) и водорастворимых витаминов (В!, В2, В6, С) у видов семейства Hydrocharitaceae, произрастающих на территории Западной Сибири (Elodea canadensis, Stratiotes aloides, Hydrocharis morsus-ranae, Hydrilla verticillata).
У исследуемых представителей семейства обнаружены пять незаменимых (валин, изолейцин, лизин, триптофан, фенилаланин) и две заменимых (аргинин, гистидин) аминокислоты. У всех исследуемых Hydrocharitaceae наблюдается сравнительно высокое содержание валина (максимальное у H. morsus-ranae (420 ± 30) х 10-7 г/100 г). Характерным является высокое содержание витамина С (максимальное у S. aloides - (770 ± 30) х 10-7 и H. morsus-ranae - (750 ± 30) х 10-7 г/100 г) и одинаково низкое у всех исследуемых видов витамина В6 (на уровне (19 ± 2) х10-7 г/100 г).
Ключевые слова: Hydrocharitaceae, Stratiotes aloides, Elodea canadensis, Hydrocharis morsus-ranae, Hydrilla verticillata, аминокислоты, водорастворимыевитамины, Западная Сибирь.
Введение
Семейство Hydrocharitaceae на территории Западной Сибири представлено пятью видами, один из которых (элодея канадская Elodea canadensis Michx.) является широко распространенным инвазивным [1]. Все представители семейства обладают высокой парциальной активностью, нередко выступают в роли эдификатора в пресноводных фитоценозах. Сообщества с участием E. canadensis, телореза алоэвидного Stratiotes aloides L. и водокраса обыкновенного Hydrocharis morsus-ranae L. отличаются также и высокой продуктивностью. Гидрилла мутовчатая Hydrilla verticillata (L. f.) Royle - редкий в регионе вид [2-5].
Для представителей семейства характерным является наличие флавонов, флавоновых С-гликозидов, флавоновых сульфатов, фенольных гликозидов, цианидина, цианиновых и полифенольных гликозидов, хлорогеновой кислоты, высших жирных кислот. Для семейства Hydrocharitaceae показано отсутствие алкалоидов, иридоидов, сапонинов, сапогенинов и эллаговой кислоты [6-8]. Отдельные представители имеют
— свои видоспецифичные особенности. Так, у
Ефремов Андрей Николаевич - научный сотрудник, кандидат биологических наук,
H. morsus-ranae есть проантоцианидины (цианидин),
e-mail: [email protected] которые отсутствуют у других представителей се-
Алехина Елена Анатольевна - доцент кафедрыхимии и мейства [7, 8]. Для S. aloides характерно наличие
методики преподавания химии, кандидат ТТ л. г
v ... " .. хромонов, для H. verticillata - фенолкарбоновых педагогических наук, e-mail: [email protected]
Иминова Дилраба Етахуновна - консультант, кислот, а для К canadensis - дитерпеноидов [9]. Си-
e-mail: [email protected] стематика Hydrocharitaceae разработана недостаточ-
Омаргалиева Назым Кабдулмухитовна - специалист н0 и продолжает оставаться предметом дискуссий
высшего уровня, e-mail: [email protected]
[8]. Привлечение биохимических таксонспецифич-
* Автор, с которым следует вести переписку.
ных признаков может быть использовано для решения спорных вопросов систематики при установлении родства [10, 11].
Аминокислоты и витамины являются важными биологически активными соединениями. Поиск и получение биологически актив ных соединений из альтернативных природных источников - одна из приоритетных задач [12]. Поэтому сравнительное исследование содержания аминокислот и водорастворимых витаминов у представителей Ну^осИаг^сеае, обитающих на территории Западной Сибири, представляет практический и научный интерес.
Ранее состав и содержание аминокислот и витаминов у представителей семейства Ну^осИап1асеае частично рассматривались исследователями (табл. 1).
Таблица 1. Содержание аминокислот, витаминов и витаминоподобных веществ у некоторых
представителей Hydrocharitaceae
Вид Аминокислоты Витамины и витаминоподобные вещества
Elodea canadensis Аргинин - 7,35 %, гистидин - 4,42 %, лизин - 11,12 %, цистин -0,46 % абсолютно-сухого сырья [13] С - 2,4 х 10-3, каротин - 16,7 х 10-3 г/100г воздушно-сухого сырья, В, К, Е [13]
Hydrocharis morsus-ranae Каротин 1295 х 10-3 г/100 г абсолютно-сухого сырья [13]
Hydrilla verticillata Лизин [14], аспарагин, аланин, аргинин [15] В12 [14]
Stratiotes aloides Аспарагиновая кислота - 0,4 ± 0,1, глутаминовая кислота - 0,46 ± 0,09, серии - 0,12 ± 0,03, гистидин- 0,18±0,04, глицин - 0,19 ± 0,04, треонин- 0,11 ± 0,02, аргинин - 0,38 ± 0,09, аланин-0,32 ± 0,08, метионин - 0,10 ± 0,02, тирозин - 0,16±0,04, валин - 0,56 ± 0,09, фенилаланин - 0,5±0,1, изолейцин- 0,45 ± 0,09, лейцин - 0,6 ± 0,1, лизин - 0,20 ± 0,05, цистин - 0,17 ± 0,04, триптофан- 0,10 ± 0,02 % воздушно-сухого сырья [16] В2 - (11 ± 2) х 10-3, Е - (5,9 ± 0,9) х 10-3, А - (1,3 ± 0,2) х 10-3 г/100г воздушно-сухого сырья, С - (3,8 ± 0,8) х 10-3 г/100 г сырого сырья [16]
Экспериментальная часть
Материал для исследования был собран в 2014 г. в пойменных водоемах бассейна Иртыша в пределах лесостепной подзоны (табл. 2). Для исследования компонентного состава отбор проб растений проводили в фазу цветения - начала плодоношения/вегетации после цветения (в июле - августе).
Отобранные рандомизированным путем средние пробы фитомассы после первичной пробоподго-товки хранили в морозильной камере при температуре минус 18-20 °C, перед проведением испытаний пробы высушивали до воздушно-сухого состояния. Исследования выполнены на базе лаборатории органической химии Омского государственного педагогического университета (Россия) и испытательной региональной лаборатории инженерного профиля «Научный центр радиоэкологических исследований» Государственного университета им. Шакарима г. Семей (Казахстан).
Физико-химический анализ содержания витаминов выполнен с использованием ГОСТ 55482-2013 [17], аминокислот - ГОСТ 13496.21-87 [18] и ГОСТ 32195-2013 [19]. Всего исследовано 3 средних пробы каждого вида.
Исследования выполнялись на жидкостном хроматографе LC-20 Prominence (Shimadzu, Япония): с градиентным элюированием при определении аминокислот, с флуориметрическим и спектрофотометриче-ским детекторами при определении витаминов. Для разделения компонентов использовали хроматографи-ческую колонку 250 х 4,6 мм «Supelco C18,5 мкм» с предколонкой.
Таблица 2. Места сбора объектов исследования
Объект исследования Местонахождение Местообитание
Stratiotes aloides (побеги), Hydrocharis morsus-ranae (побеги) 55°13' 35" с. ш., 73°00' 23" в. д., Омская область, Любинский район, окрестности с. Лю-бино-Малороссы, долина Иртыша, протока Глубина 0,0-1,8, грунт черный грубо-детригный ил, фитоценоз Stratiotes aloides aquiherbosa
Hydrilla verticillata (побеги), Elodea canadensis (побеги) 55°13' 14" с. ш., 72°59' 24" в. д., Омская область, Любинский район, окрестности с. Лю-бино-Малороссы, долина Иртыша, особо охраняемая природная территория «Пойма Любинская», протока Глубина 0,1-2,5, грунт глинистый с грубо детритным наилком, фигоцено-зы Elodea canadensis purum и Elodea canadensis + Hydrilla verticillata
В работе применяли стандартные растворы витаминов (Sigma-Aldrich, США), фосфорной кислоты 85% (Sigma-Aldrich, США), ацетонитрил особой чистоты (HLPC, Германия). Пробоподготовка включала измельчение сырья на роторной мельнице до однородного состояния, экстракцию 0,001 М раствором хлористоводородной кислоты при температуре 70-80 °С с использованием ультразвуковой ванны «Сапфир РМД» (Россия) и центрифугирование на центрифуге 0Пн-3.02 «Дастан» (Кыргызстан) при скорости 7000-8000 об./мин. Центрифугат отфильтровывали через мембранный фильтр для очистки от механических примесей. Фильтрат переносили в виалки и анализировали, используя обращенно-фазовый вариант, градиентное элюирование (температура колонки - 20 °С, скорость элюирования потока - 0,8 мл/мин.). Полученные растворы подвергали хроматографическому анализу. Концентрацию витаминов в пробах вычисляли согласно формуле 1
Cs, -V„ ■ Sx -10~3
X -, (1)
Ss • m
где CS - концентрация витамина в рабочем стандартном растворе, мг/мл; Vp - объем экстракта пробы, мл; Sx,Ss - площади пиков витаминов на хроматограмме пробы и стандарта; m - масса навески пробы, г; X -концентрация витаминов в пробах, г/100 г сухого вещества.
Подготовку образцов для определения аминокислот проводили следующим образом. Для гидролиза к 100 мг образца добавляли 10 мл 6 М раствора хлористоводородной кислоты. Смесь тщательно перемешивали и обдували током азота в течение 2 мин. Стеклянные ампулы запаивали и помещали в термостат. Гидролиз проводили при температуре 110 °С в течение 24 ч. Аликвоты высушивали при 65 °С в токе воздуха, добавляли 0,15 М раствор гидроксида натрия и раствор фенилизотиоционата в изопропиловом спирте, далее фильтровали через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Полученные растворы подвергали хроматографическому анализу.
Определения проводили при расходе элюента 1,2 мл/мин. и температуре колонки термостата 40 °С. Измерения выполняли при длинах волн 246 и 260 нм с использованием кислотного гидролиза и модификации аминокислот раствором фенилизотиоционата в изопропиловом спирте с получением фенилтиогидантоинов. В качестве подвижной фазы использовали смесь 6,0 М раствора ацетата натрия с рН 5,5, 1% раствор изопро-пилового спирта в ацетонитриле и 6,0 М раствора ацетата натрия с рН 4,05. Применяли стандартные образцы аминокислот (Sigma Aldrich), ацетонитрила, изопропилового спирта, фенилизотиоционата (Sigma Aldrich), ацетат натрия, хлористоводородную кислоту и гидроксид натрия особой чистоты.
Концентрацию аминокислот вычисляли по формуле 2:
X = C V • -10'3 , (2)
Scm 'm
где Cr - концентрация аминокислоты в рабочем стандартном растворе, мг/мл; V - конечный объем гидро-лизата, мл; Sr - площадь пика аминокислоты в исследуемой пробе; SCT - площадь пика аминокислоты стандартного рабочего раствора; m - масса навески пробы, взятой на гидролиз, мг; X - концентрация витаминов в пробах, г/100 г сухого вещества.
Статистическая обработка результатов выполнена средствами пакета Statistica 6.1 (описательная статистика, проверка на нормальность распределения) и PAleontological STatistics 3.08 (кластерный анализ методом парного сравнения) [20].
Обсуждениерезультатов
Результаты определения содержания аминокислот и витаминов в фитомассе E. canadensis, S. aloides, H. morsus-ranae и H. verticillata приведены в таблицах 3-4 и на рисунке 1.
У всех исследованных представителей семейства Hydrocharitaceae не обнаружен метионин, содержание валина сравнительно высокое. У H. verticillata и S. aloides наблюдается высокое содержание фенил-аланина, а у E. canadensis и H. morsus-ranae - изолейцина (табл. 3). При кластерном анализе по содержанию аминокислот на уровне 200-300 выделяются две группы видов: H. verticillata + S. aloides и E. canadensis + H. morsus-ranae (рис. 2A).
Таблица 3. Содержание аминокислот в фитомассе растений семейства Hydrocharitaceae
Содержание аминокислот, 10"' г/100 г сухого cbipM
Аминокислота Elodea canadensis Hydrocharis morsus-ranae Hydrilla verticillata Stratiotes aloides
(n = 3) (n = 3) (n = 3) (n = 3)
Валин 390 ± 20 420 ± 30 109 ± 6 250 ± 10
Аргинин - - 250 ± 10 185 ± 10
Триптофан 250 ± 10 138 ± 7 - -
Метионин - - - -
Лизин 80 ± 5 14 ± 1 74 ± 4 94 ± 6
Гистидин 13 ± 1 - 20 ± 1 15 ± 1
Фенилаланин - 240 ± 10 680 ± 20 840 ± 30
Изолейцин 720 ± 10 840 ± 20 - -
Примечание: «-»- не обнаружен, ниже предела обнаружения 5 х 10"9 г/100 г
Таблица 4. Содержание водорастворимых витаминов в фитомассе растений Hydrocharitaceae
Содержание витаминов, 10"7 г/100 г сухого сырья
Витамин Hydrocharis morsus-ranae (n = 3) Elodea Canadensis (n = 3) Stratiotes aloides (n = 3) Hydrilla verticillata (n = 3)
В1 380 ± 30 280 ± 20 390 ± 10 190 ± 20
В2 170 ± 10 120 ± 10 190 ± 10 89 ± 5
В6 19 ± 1 17 ± 1 21 ± 1 20 ± 1
С 750 ± 30 540 ± 30 770 ± 30 390 ± 20
1 f W Detector В Channel 2 292nm В
-
Рис. 1. Хроматограммы определения аминокислот (А, Б), витаминов Вь В2, В6 (Б) и витамина С (Г) в фитомассе растений семейства Ну^осИаг^сеае
Для исследованных растений семейства Hydrocharitaceae свойственно высокое содержание витамина С и низкое В6 (с равными значениям у всех представителей) (табл. 4). В результате кластерного анализа по содержанию водорастворимых витаминов выделяются группы погруженных в воду растений (E. canadensis + H. verticillata) и растений, частично экспонирующих ассимиляционную поверхность в воздушную среду (S. aloides + H. morsus-ranae) (рис. 2Б).
Евклидово растояние
Евклидово растояние
s §
ч
"V
Рис. 2. Сходство исследуемых представителей Hydrocharitaceae по содержанию аминокислот (Л), витаминов (£).
Выводы
У четырех представителей семейства Hydrocharitaceae: E. canadensis, S. aloides, H. morsus-ranae и H. verticillata, произрастающих на территории Западной Сибири, исследовано содержание восьми аминокислот (валина, аргинина, триптофана, метионина, лизина, гистидина, фенилаланина, изолейцина) и четырех водорастворимых витаминов (Вь В2, В6 и С).
У исследуемых растений наблюдается высокое содержание валина, максимальное у H.morsus-ranae (420 ± 30) х ю-7 г/100 г), метионин не обнаружен. Для представителей семейства характерно сравнительно высокое содержание витамина С (максимальное у S. aloides (770 ± 30) х 10-7 и H. morsus-ranae (750 ± 30) х 10-7 г/100 г) и низкое В6, у всех исследуемых видов на уровне (19 ± 2) х 10-7 г/100 г. Это позволяет рассматривать представителей семейства Hydrocharitaceae как потенциальный источник витамина С.
Дальнейшее изучение компонентного состава и поиск биохимических таксонспецифичных признаков могут быть использованы для решения спорных вопросов при установлении внутрисемейственного родства Hydrocharitaceae.
Список литературы
1. Гребенюк А.В. Семейство Hydrocharitaceae Juss. // Конспект флоры Азиатской России: сосудистые растения. Новосибирск, 2012. С. 431-432.
2. Свириденко Б.Ф. Флора и растительность водоемов Северного Казахстана. Омск, 2000. 196 с.
3. Токарь О.Е. Флора, растительность и фитоиндикация водных экотопов реки Ишим и пойменных озер в пределах Тюменской области. Ишим, 2006. 208 с.
4. Ефремов А.Н., Свириденко Б.Ф. Ресурсы Stratiotes aloides (Hydrocharitaceae) в долинах рек бассейна Среднего Иртыша // Растительные ресурсы. 2012. Т. 8, вып. 2. С. 202-207.
5. Свириденко Б.Ф., Свириденко Т.В., Ефремов А.Н., Токарь О.Е., Евженко К.С. Элодея канадская Elodea canadensis (Hydrocharitaceae) на Западно-Сибирской равнине // Вестник Томского государственного университета. Биология. 2013. №3 (23). С. 46-55.
6. Алехина Е.А., Ефремов А.Н., Егошина А.Е. Фенолгликозиды некоторых представителей семейства водокра-совые (Hydrochariteae) // Фундаментальные и прикладные исследования по приоритетным направлениям биоэкологи и биотехнологии : материалы I Международной научно-практической конференции. Ульяновск, 2014. С. 33-36.
7. Watson L., Dallwitz M.J. Hydrocharitaceae // The families of flowering plants. [Electronic resourse]. URL: http://deltaintkey.com/angio/ www/hydrocha.htm.
8. Johansson J.T. Hydrocharitaceae Juss. // The Phylogeny of Angiosperms. Published online. 2013. URL: http://angio.bergianska.se/monocots/Alismatales/Alismatales.html#Hydrocharitaceae (01.10.2015).
9. Повыдыш M.B., Петрова H.B., Бобылева H.C. Семейство Hydrocharitaceae Juss. - Водокрасовые // Растительные ресурсы России. СПб. ; М., 2014. Т. 6. С. 11-14.
10. Сорокопудова О.А., Дейнека В.И., Сорокопудов В.Н. Хемосистематика: основные положения и особенности // Научные ведомости. 2006. №3 (23). С. 75-83.
11. Smith P.M. The chemotaxonomy of plants. London: Edward Arnold, 1976. 265 p.
12. Муравьев Д.А. Самылиа И.А., Яковлев Г.В. Фармакогнозия. М., 2007. 656 с.
13. Дубына Д.В., Стойко С.М., Сытник К.М. и др. Макрофиты - индикаторы изменений природной среды. Киев, 1993. 434 с.
14. Santhanam R., Rajabalaya R., Santhanam R. Freshwater Phytopharmaceutical Compounds. New-York; London, 2013. 250 p.
15. Ryan F.J. Nitrogen and carbon concentrations, soluble proteins and free amino acids in subterranean turions of Hy-drilla during overwintering // Journal Aquatic Plant Manage. 1994. Vol. 32. Pp. 67-70.
16. Ефремов A.H., Алехина E.A., Филимонова M.B., Свириденко Б.Ф., Шалыгин С.П., Русак С.Н. Компонентный состав Stratiotes aloides (Hydrocharitaceae) водоемах бассейна Среднего Иртыша // Химия растительного сырья. 2012. №4. С. 161-166.
17. ГОСТ 55482-2013. Мясо и мясные продукты. Метод определения содержания водорастворимых витаминов. М., 2014. 12 с.
18. ГОСТ 13496.21-87 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения лизина и триптофана. М., 2011. 12 с.
19. ГОСТ 32195-2013 Корма, комбикорма. Метод определения содержания аминокислот. М., 2014. 19 с.
20. Hammer 0., Harper D.A.T., Ryan P.D. PAST: Paleontological Statistics Software Package for Education and Data Analysis // Palaeontologia Electronica. 2001. N4 (1). 9 p.
Поступило в редакцию 3 декабря 2015 г.
После переработки 29 января 2016 г.
Efremov A.N. 1*, Alehina E.A.1, Iminova D.E.2, Omargalieva N.K.2 ON THE QUESTION OF THE AMINO ACIDS AND WATER-SOLUBLE VITAMINS CONTENT IN SOME SPECIES OF THE FAMILY HYDROCHARITACEAE
1Omsk State Pedagogical University, nab. Tukhachevsky, 14, Omsk, 644099 (Russia), e-mail: [email protected] 2Research Center, State University of radio-ecological Studies named after Shakarim. ul. Fizkulturnaya, 4A, Semey, 071412 (Republic of Kazakhstan)
The research on the amino acids (valine, arginine, tryptophan, methionine, lysine, histidine, phenylalanine, isoleucine) and water-soluble vitamins (Bi, B2, B6, C) content in species of the family Hydrocharitaceae, growing in Western Siberia (Elodea canadensis, Stratiotes aloides Hydrocharis morsus-ranae, Hydrilla verticillata), has been executed.
Five indispensable (valine, isoleucine, lysine, tryptophan, phenylalanine) and two dispensable (arginine, histidine) ami-no acids have been discovered at examined species of family. It has been found that all examined Hydrocharitaceae have a comparatively high content of valine (H. morsus-ranae has a maximum valine content ((420 ± 30) x 10-7 g / 100 g)). The high content of vitamin C (S. aloides ((770 ± 30) x 10-7) and H. morsus-ranae ((750 ± 30) x 10-7 g / 100 g) have a maximum content) and the equally low content in all examined species of vitamin B6 (at a rate of ((19 ± 2) x 10-7 g / 100 g) are typical.
Keywords: Hydrocharitaceae, Stratiotes aloides, Elodea canadensis, Hydrocharis morsus-ranae, Hydrilla verticillata, amino acids, water-soluble vitamins, Western Siberia.
References
1. Grebenyuk A.V. Konspekt floryAziatskojRossii: sosudistye rasteniya, Novosibirsk, 2012, pp. 431-432. (in Russ.).
2. Sviridenko B.F. Flora i rastitel'nost' vodoemov Severnogo Kazahstana. [Flora and vegetation of water bodies in Northern Kazakhstan]. Omsk, 2000, 196 p. (in Russ.).
3. Tokar' O. E. Flora, rastitel'nost' i fitoindikaciya vodnyh ehkotopov reki Ishim i pojmennyh ozer vpredelah Tyumenskoj oblasti. [Flora, vegetation and aquatic habitat bioindication Ishim River and floodplain lakes within the Chu-Tyumen region]. Ishim, 2006, 208 p. (in Russ).
4. Efremov A.N., Sviridenko B.F. Rastitel'nye resursy, 2012, vol. 8, no. 2, pp. 202-207. (in Russ.).
5. Sviridenko B.F., Sviridenko T.V., Efremov A.N., Tokar' O.E., Evzhenko K.S. Vestnik Tomskogo gosudarstvennogo universiteta. Biologija, 2013, no. 3 (23), pp. 46-55. (in Russ.).
6. Alehina E.A., Efremov A.N., Egoshina A.E. Fundamental'nye i prikladnye issledovanija po prioritetnym napravlenijam bio-jekologi i biotehnologii: materialy I Mezhdunarodnoj nauchno-prakticheskoj konferencii. [Basic and applied research in priority areas of biotechnology and bio-ecology: Proceedings of the I International Scientific and Practical Conference]. Ul'janovsk, 2014, pp. 33-36. (in Russ.).
7. Watson L., Dallwitz M.J. The families of flowering plants. [Electronic resourse]. URL: http://deltaintkey.com/angio/www/hydrocha.htm.
8. Johansson J.T. The Phylogeny of Angiosperms. Published online, 2013, URL: http://angio.bergianska.se/monocots/Alismatales/Alismatales.html#Hydrocharitaceae.
9. Povydysh M.V., Petrova N.V., Bobyleva N.S. Rastitel'-nye resursy Rossii, 2014, vol. 6, pp. 11-14. (in Russ.).
10. Sorokopudova O.A., Dejneka V.I., Sorokopudov V.N. Nauchnye vedomosti, 2006, no. 3 (23), pp. 75-83. (in Russ.).
11. Smith P.M. The chemotaxonomy of plants. London: Edward Arnold, 1976, 265 p.
12. Murav'ev D.A. Samylia I.A., Jakovlev G.V. Farmakognozija. [Pharmacognosy]. Moscow, 2007, 656 p. (in Russ.).
13. Dubyna D.V., Stojko S.M., Sytnik K.M. i dr. Makrofity - indikatory izmenenij prirodnoj sredy. [Macrophytes -indicators of environmental changes]. Kiev, 1993, 434 p. (in Russ.).
14. Santhanam R., Rajabalaya R., Santhanam R. Freshwater Phytopharmaceutical Compounds. New-York; London: CRC Press, 2013, 250 p.
15. Ryan F.J. Journal Aquatic Plant Manage. 1994, vol. 32, pp. 67-70.
16. Efremov A.N., Alehina E.A., Filimonova M.V., Sviridenko B.F., Shalygin S.P., Rusak S.N. Himija rastitel'nogo sy-r'ja, 2012, no. 4, pp. 161-166. (in Russ.).
17. GOST 55482-2013. Mjaso i mjasnye produkty. Metod opredelenija soderzhanija vodorastvorimyh vitaminov. [GOST 55482-2013. Meat and meat products. Method for determination of water-soluble vitamins]. Moscow, 2014, 12 p. (in Russ.).
18. GOST 13496.21-87 Korma, kombikorma, kombikormovoe syr'e. Metody opredelenija lizina i triptofana. [GOST 13496.21-87 Fodder, mixed fodder, feed raw materials. Methods for the determination of lysine and tryptophan] Moscow, 2011, 12 p. (in Russ.).
19. GOST 32195-2013 Korma, kombikorma. Metod opredelenija soderzhanija aminokislot. [GOST 32195-2013 Forage, feed. Method determination of amino acids]. Moscow, 2014, 19 p. (in Russ.).
20. Hammer 0., Harper D.A.T., Ryan P.D. Palaeontologia Electronica, 2001, no. 4 (1), 9 p.
Received December 3, 2015 Revised January 29, 2016
* Corresponding author.
