CC BY
17
С. JI. Петрович и Л. Н. Шустова
К вопросу о микрофлоре арбузов
Из лаборатории санитарно-эпидемиологической станции (Москва)
В 1948 г. появилсЯсь сообщение О. Н. Сиротининой и А. И. Поповой 1 о случаях отравления среди сотрудников опытной станции по бахчеводству свежесорванными арбузами за период 1937—1945 гг. Заболевание, как правило, наступало через '/2 —1 час после употребления в пищу арбузов, сопровождалось тошнотой, рвотой, головной болью и длилось (несколько часов. Арбузы, явившиеся причиной заболеваний, относились к сорту «мелитопольский», отличались хорошей органолептикой, но на коре плодов имелись небольшие темные пятна диаметром 2—3 мм и небольшие очаги размягчения в мякоти плодов. О. Н. Сироти-нина и А. И. Попова выделили культуру грамотрицательной палочки (см. таблицу). Вид микроба точно не определен, авторы предполагают, что он является возбудителем бактериоза арбузов.
Употребление экспериментаторами в пищу 100—¡¿0 г арбуза, искусственно зараженного этой культурой, вызвало у отоетх заболевание, аналогичное вышеописанному.
Осенью 1948 г., по данным госсанинспекции, в Москве наблюдалось несколько случаев заболеваний, связанных с употреблением в пищу арбузов, поступивших из Камышина Сталинградской области. Одновременно поступившая партия из Краснодарского края заболеваний не вызвала.
Через 15—20 минут после употребления арбузов появлялась тошнота и рвота, других болезненных явлений не отмечено. Нормальное самочувствие восстанавливалось через 2—3 часа.
На исследование в лабораторию поступили остатки одного арбуза, вызвавшего заболевание, и два целых арбуза, изъятых из той же ка-мышинской партии. Посевы из одного целого арбуза остались стерильными. Из остатков арбуза, из другого целого арбуза, а также из арбуза, купленного на улице, выделены культуры, изучение которых и составляет предмет настоящей работы. Сорт арбузов не установлен, признаков каких-либо поражений не имелось. Всего было выделено 14 культур, которые нами изучались в течение 9 месяцев. Их основные свойства сведены в таблицу.
По протеолитической способности культуры разделены на две группы: культуры первой группы не разжижали желатины (срок наблюдения 30 дней), культуры второй группы диффузно разжижали желатину между 7-м и 14-м днем.
В обоих случаях выделена полиморфная аспорогенная грамотрицательная аэробная (факультативно анаэробная) подвижная палочка, дающая на бульоне равномерную муть с образованием нежной пленки на 2—3-й день. На агаре свеже-выделенные культуры растут в виде прозрачных выпуклых гладких колоний с ровным краем, величиной 1—1,5 мм в диаметре, пигмента не образуют. На среде .Эндо колонии бледнорозового цвета с несколько 5олее темным центром. По мере хранения культур колонии приобретали на агаре Эндо красный цвет с металлическим оттенком и ничем не отличались от колоний группы кишечной пал'очкн. Свежевыде-ленные штаммы слабо кислили лакмусовое молоко с последующим обесцвечиванием. Свертывание молока наступало на 10—-12-й день. По истечении 8—9 месяцев хранения в лаборатории культуры стали ясно кислить молоко, свертывание наступало при 37° на 2—3-й день. Все штаммы независимо от их протеолитической способности замедленно сбраживали лактозу (на 5—25-й день). Через 8—9 месяцев все культуры стали сбраживать лактозу с образованием кислоты и газа на 1—3-й день. Бродильная проба с глюкозой при 43° была положительной только с некоторыми штаммами (№ 9853/9 и 9857/7). Все штаммы редуцировали нитраты. На
1 Труды Саратовского санитарно-гигиенического института «К вопросу о возможности отравления некоторыми бахчевыми (арбузы)», т. IV, 1948.
а 3 I Я и а Откуда выделена культура и X Б О К О •& а о £ Спорообразование Подвижность Окраска по Граму Аэробный рост Образование пигмемта Разжижение желатины Образование индола Образование сероводорода Молоко 03 со 1 со * Глюкоза Мальтоза Маннит Сахароза Реакция с метилротом| Реакция на ацетил-иетилкарбинол Рост на цитратной среде
изменение окраски свертывание • г-со 0
Культура микробов , не разжижающих желатину
9853/1 Целый арбуз Полиморф- — + — + — — -/+ -/+ К + -/+ КГ к КГ кг — + сл. +
ная палочка
9857/3 Остатки арбуза То же - + - + - — + /+ -/+ К + -/+ кг/к к КГ кг - -1± — —
Культура микробов, разжижающих желатину
9353/3 Целый арбуз Полиморф- — + — + — + -/+ к — -/+ к/к Г к КГ кг К + СЛ. + СЛ . +
ная палочка
9853/9 ■ » То же — + — + — + -/-1 -/+ к + -/+ КГ КГ КГ КГ — -1± + -/ +
9857/7 Остатки арбуза я « - + - + - + +сл. к + -/+ к КГ кг кг кг - + -/+
б/№ Арбуз (по данным ра- Ясный + _ + + ' + 2 _ _ к + п _3 КГ 0 кг кг к 0 0 ¡1
боты Сиротиннной и поли-
Поповой) морфизм
1 Розовато-оранжевый оттенок колоний на чашках с мясо-пептонным агаром. 1 Срок разжижения не указан. 8 Срок наблюдения не указан.
Обозначения: к—кислота, г— газообразование,—/+сначала отрицательная, затем положительная реакция, ± сомнительная реакция, О—нет указаний, п— пептонизация, сл.—следы.
цитратных средах первые 4—6 месяцев штаммы не росли, кроме № 9853/3; в дальнейшем большинство штаммов стало цитратположительными. Реакции с метилротом и на ацетилметилкарбинол давали различные результаты. Соотношение С02 и Н2 в среде с глюкозой приближалось к типу В. coli commune. Ни один из штаммов не вызывал гемолиза на кровяном агаре.
По морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам нам кажется возможным отнести микробов первой группы (см. таблицу), т. е. не разжижающих желатины и замедленно сбраживающих лактозу, к палочкам типа параколи, а микробов второй группы, вызывающих медленное разжижение желатины и медленное сбраживание лактозы, к параклоачным палочкам, согласно схеме классификации группы кишечной палочки, предложенной Минкевичем
Вместе с тем «арбузные» штаммы по своим экологическим, морфологическим и биохимическим признакам близки к некоторым фитопато-генным видам, в частности, к В. carotovorum, возбудителю бактериоза моркови, дыни и др. Это обстоятельство побудило нас провести р'яд испытаний, до известной степени показательных для микробов фито-патогенной группы.
Проверялся температурный оптимум, теплоустойчивость, способность роста на средах с повышенным содержанием хлористого натрия и способность вызывать патологические изменения в растительных тканях.
В. carotovorum2 из группы фитопатогенных давала оптимальный рост при 25°, погибала при 55° после прогрева в течение 15 минут и не росла на бульоне с содержанием 2% хлористого натрия. При посеве на сырой картофель и морковь давала характерный слизистый бактериоз.
Температурный оптимум роста изучаемых («арбузных») штаммов соответствовал 37°, по теплоустойчивости они были близки к кишечной палочке, выдерживая прогрев при 59° в течение 15 минут, и хорошо росли на бульоне с содержанием 5% хлористого натрия. При посеве на сырой картофель и морковь не давали роста. Отождествление их с В. carotovorum безусловно исключается.
Способность наших штаммов вызывать бактериоз арбузов испыты-валась путем искусственного заражения арбузов чистыми культурами. Арбузы предварительно проверялись на стерильность. Заражение производилось путем введения в мякоть плода 1—1,5 мл микробной взвеси, полученной при смыве суточной культуры с косого агара 3 мл воды. По истечении 8—9 дней арбузы вскрывались. В месте введения микробной взвеси участок арбуза отличался некоторой прозрачностью и более мягкой консистенцией, причем размеры видимого изменения мякоти примерно соответствовали объему введенной взвеси. В пределах измененного участка улавливался посторонний запах с неприятным оттенком. При просмотре остальной мякоти арбуза изменений ткани не наблюдалось и запаха не улавливалось. Картины, характерной для бактериозов, ни в одном случае не наблюдалось.
Результаты испытаний не говорят в пользу принадлежности «арбузных» штаммов к группе фитопатогенных.
За время работы были исследованы также семь арбузов, приобретенных. в торговой сети Москвы. Из мякоти трех арбузов были выделены палочки, однотипные с вышеописанными. По литературным данным 3, внутренние ткани растений и плодов при нормальных условиях стерильны. Однако не исключена возможность проникновения микро-
1 И. Е. М и н к е в и ч, Бактерии группы кишечной палочки как санитарно-по-казательные микроорганизмы, изд. 2-е, Медгиз, Л., 1949.
2 Культура была предоставлена М. В. Горленко (Московский филиал Всесоюзного института зашиты растений).
3 А. А. Я ч е в с к и й, Бактериоз растений, Огиз, М. — Л., 1935.
бов внутрь тканей через устьица, семена и т. д., а также при каких-либо повреждениях. В наших случаях видимых повреждений коры и патологических изменений мякоти отмечено не было. Выделенные штаммы с большой долей вероятности можно рассматривать как постороннюю микрофлору, случайно проникшую в арбузы и близкую по совокупности признаков к группе кишечной'палочки.
Реакция агглютинации с сыворотками тифозно-паратифозной и дизентерийной группы, а также с монорецепторными сыворотками (рецепторы I, II, IV, V, VI, VII, VIII, IX и комплексный Vi) дала отрицательный результат со всеми выделенными штаммами.
Мы располагали также двумя сыворотками № 365/2 и № 4 (титр 1280), любезно предоставленными нам О. Н. Сиротининой. Сыворотки были приготовлены путем иммунизации кроликов культурами, выделенными из арбузов, вызвавших заболевание. Сыворотка № 365/2 дала отрицательный результат со всеми нашими культурами.
Сыворотка № 4 слабо (от -j- до -j—\~) агглютинировала на стекле все 12 штаммов в разведении 1 : 10; при развернутой агглютинация 3 штамма агглютинировались до титра на + + и 3 штамма на +. Агглютинации на + "Ы—Н не получено ни в одном случае. Все штаммы были испытаны на реакцию с трипафлавином, давшую во всех случаях положительный результат.
Для постановки биопроб 4 арбуза, проверенные на стерильность, были заражены четырьмя разными штаммами (№ 9853/1, 9853/9, 9857/3, 9857/7). После хранения в течение 8—9 дней при комнатной температуре арбузы употреблялись в пищу научными сотрудниками-добровольцами в количекггве 200—300 г. Арбуз, зараженный штаммом № 9857/7, вызвал у одного испытуемого через 15 минут ощущение дурноты, слабость в ногах, головокружение, похолодание и цианоз пальцев рук, поташнивание и головную боль. У двух лиц через 20 минут появилась слабость в ногах, головокружение, повышенное слюноотделение. Арбуз, зараженный штаммом № 9853/9, вызвал у двух лиц через 15—20 минут слюноотделение и тошноту. Все описанные симптомы держались 10—15 минут, постепенно ослабевая; примерно через час v всех восстанавливалось нормальное самочувствие. Результаты биопроб говорят о некоторой токсичности отдельных шта-ммов. Наиболее выражена она у штамма № 9857/7, выделенного из остатков арбуза, вызвавшего заболевание осенью 1948 г. Сопоставление наших данных с данными Сиротининой и Поповой показывает, что заболевания в обоих случаях сходны по сроку инкубации, общим симптомам и кратковременности течения; основные признаки выделенных штаммов также совпадают (см. таблицу). Различия в биохимических свойствах штаммов, (отсутствие сбраживания лактозы и наличие пигментообразования у саратовских штаммов) несущественны с точки зрения общей характеристики группы, тем более что авторы не указывают срока наблюдения над сбраживанием лактозы и не останавливаются на отдельных разновидностях, ими выделенных. Серологические реакции также говорят о некоторой общности антигенной структуры тех и других штаммов.
Выводы
1. Выделенные нами из арбузов штаммы не могут с достаточным основанием быть отнесены к группе фитопатогенных бактерий.
2. По совокупности морфологических, биохимических и биологических признаков выделенные штаммы с наибольшей вероятностью следует отнести к группе кишечной палочки в широком ее понимании.
3. Поставленные биологические испытания говорят о некоторой токсичности отдельных штаммов.
«¡X -Íí
