CC BY
91
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ИЗУЧЕНИЕ ЗНАЧИМОСТИ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ РСвКЗА И П-10 ПРИ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКЕ В РУССКОЙ ПОПУЛЯЦИИ
И. А. Гусева, Е.Ю. Самаркина, Е.Л. Лучихина, М.М. Иванова, В.А.Мякоткин ГУ Институт ревматологии РАМН, Москва
Резюме
Цель. Изучить распределение аллельных вариантов гена РС013А-158Р/У и промо-торной области -627 С/А гена И-10 в выборках больных системной красной вол-чанкой(СКВ) и здорового контроля русской национальности и определить роль вышеперечисленных генов в формировании чувствительности к заболеванию и/или клинического полиморфизма СКВ (наличие или отсутствие нефрита). Материал и методы. Геномная ДНК была выделена из крови 80 больных с СКВ (из них 43 пациента с волчаночным нефритом, 37- без) и 100 женщин, не имеющих ревматических заболеваний, жителей г. Москвы и Московской области. Все исследованные лица были русской национальности. Детекция двух аллельных вариантов гена РсуШа проводилась методом аллель-специфической полимеразной цепной реакции (ПЦР).Биаллельный полиморфизм промоторной области -627С/А гена 1Ь-10 изучали методом полиморфизма длин рестриктированных фрагментов (ПДРФ) с использованием рестриктазы КБа1.
Результаты. Не обнаружено достоверных различий в распределении частот аллелей и генотипов генов РсуШПА и 1Ь-10 в группе больных СКВ и в контрольной группе. Выявлена тенденция к сниженнию частоты генотипа РсуШНА-158У/У в группе больных с волчаночным нефритом по сравнению с больными без нефрита и в контроле (4,7% , 16,2% и 11,0% соответственно). Обнаружено достоверно значимое повышение частоты встречаемости сочетанного генотипа ¥/¥+С/С в группе больных СКВ по сравнению с контрольной группой ( 28,9% и 16,0% соответственно, р <0,05, (Ж=2,12). Еще более выраженная ассоциативная связь выявлена между генотипом ¥/¥+С/С и поражением почек (наличие нефрита - 37,2 %, контроль - 16,0 %, р <0,01, 011=3,1), хотя при сравнении между собой подгрупп больных с нефритом и без нефрита различия были статистически недостоверными (37,2 % и 18,9% соответственно, р=0,07), что, возможно, связано с небольшими выборками больных.
Заключение. В проведенном исследовании выявлено значимое синергичное действие генов РсуЫПА и 1Ь-10 при СКВ и волчаночном нефрите в русской популяции. Сочетанный генотип ГССЯЗА -158Р/Р/ И- 10-627С/С повышает риск развития нефрита у пациентов русской популяции с СКВ.
Ключевые слова: системная красная волчанка, люпус-нефрит, ген РСвИЗА, ген 1Ь-10, полиморфизм
Системная красная волчанка (СКВ) - заболевание из группы системных поражений соединительной ткани, характеризующееся образованием множества антител к собственным клеткам и их компонентам, нарушением выведения иммунных комп-
Адрес: 115522, Москва, Каширское ш., д.34 А. Тел.114-44-78, 115-93-07
лексов антиген-антитело и отложением их в тканях с развитием иммунокомплексного воспаления, следствием которого является повреждение многих органов и систем организма.
Эпидемиологические исследования последних лет показали, что СКВ встречается во всех климатогеографических зонах земного шара, однако отмечаются возрастные и расовые различия в частоте
заболевания. В среднем в странах Европы и Америки заболеваемость СКВ колеблется от 1,8 до 7, 6 случаев в год на 100 ООО населения [26]. По данным Минсоцздрава РФ за 2002 г, количество зарегистрированных больных с системными поражениями соединительной ткани (СПСТ) составило 45000, из которых 80% - больные СКВ. За 2002 гдиагноз СКВ впервые в жизни был установлен у 6900 чел., следовательно, первичная заболеваемость СКВ в России составила 4,6 случаев в год на 100 000 населения [7].
Хотя по распространенности СКВ значительно уступает ревматическим порокам сердца, ревматоидному артриту, артрозу и некоторым другим ревматическим заболеваниям (РЗ), сохраняющийся интерес к ней определяется преимущественным поражением женщин детородного и наиболее трудоспособного возраста, высокой смертностью в ранние сроки болезни [3]. Несмотря на прогресс в области диагностики и лечения СКВ, во многих случаях заболевание сохраняет весьма тяжёлое течение, что определяется полисиндромностью, большой частотой поражения почек и ЦНС, нередким ещё летальным исходом. Показано, что продолжительность жизни больных СКВ снижена приблизительно в 2 раза по сравнению со средней продолжительностью жизни жителей России [5].
Значительные экономические затраты, требующиеся для лечения больных СКВ, а также высокий процент их инвалидизации обусловливают необходимость разработки принципов первичной профилактики заболевания и возможности прогнозирования и, следовательно, предупреждения его осложнений. Разработка методов первичной профилактики не может быть осуществлена без знания причин возникновения и развития заболевания.
По данным отечественных и иностранных исследований, СКВ является мультифакторным заболеванием со вкладом генетических факторов в формирование подверженности порядка 80% [24, 33]. Значимость генетических факторов в детерминации СКВ показана многими семейными, близнецовыми, эпидемиологическими и популяционными исследованиями (2, 4, 9, 16, 18].
Одним из подходов к изучению генетических факторов предрасположенности к СКВ является анализ ассоциаций аллельного полиморфизма генов - кандидатов с заболеванием у неродственных пациентов и здорового контроля. Одной из предпосылок для предметного изучения такого рода ассоциаций являются предварительные гипотезы об участии кандидатных генов в формировании предрасположенности к заболеванию.
Исследования последних лет по геномному анализу минисателлитных ДНК - маркёров семей больных СКВ показали, что в хромосоме 1 имеется наибольшее число участков, сцепленных с СКВ (lod scores > 2) [24, 34].
Для изучения нами были выбраны два кандидатных гена: ген РСвЯЗА, кодирующий рецептор Яс -фрагмента молекулы 1§0 (в частности- РсуШПА), и ген интерлейкина-10 (1Ь-10). Немаловажную роль в нашем выборе сыграл тот факт, что эти гены расположены на длинном плече хромосомы 1 (сегменты 1я31-32 и 1я23-24 соответственно).
Далее в тексте будут встречаться следующие обозначения:
1. РСОМА, 1Ь-10 - название гена
2. РсуШПА, 1Ь-10 - продукт гена (белок)
3. ген РсуШПА - ген РСвЯЗА, кодирующий рецептор РсуШПА
4. ген 11,-10 - ген 1Ь-10, кодирующий синтез интерлейкина -10
5. генотип ЯСС/Ш-¥/¥, -У/У, -Р/У - фенотипическое проявление генотипов РСвЯЗА-Т/Т, -Т/в, -С/О.
Интерес к изучению полиморфизма РсуШПА при аутоиммунных заболеваниях и, в частности, при СКВ вызван, по крайней мере, ещё тремя факторами:
1) эффективность мононуклеарной фагоцитарной системы в отношении выведения иммунных комплексов зависит от функционирования РсуЯ;
2) аутоантитела большинства иммунных комплексов представлены изотипами 1§С1 и 1£03, рецепторы к которым кодируются геном РССЯЗА; 3) показано, что различия функциональных свойств рецепторов (низко- или высокоаффинное взаимодействие с лигандом) обусловлены аллельным полиморфизмом гена РССЛЗА [ 15, 20, 38 ].
В независимо проведённых исследованиях Д. Ши с соавт. [ 38 ] и Н.Я. Коепе с соавт. [ 20 ] было показано, что полиморфизм гена РСОЛЗЛ детерминирует различную функциональную способность кодируемого им рецептора. Точковая мутация в положении 559 (замена нуклеотида Т на О обусловливает замену фенилаланина (Р) на валин (V) в положении 158 аминокислотной последовательности (по другой номенклатуре, в положении 176), что приводит к изменению способности РсуШПА рецептора связывать иммунные комплексы (Р-низ-коаффинный, У-высокоаффинный рецептор). Также было выявлено, что больные СКВ, особенно с люпус-нефритом, характеризовались повышенной частотой генотипа РСОКЗА-¥/¥ по сравнению со здоровыми тест-донорами.
Интерес к изучению полиморфизма гена 11-10 вызван тем, что он является иммунорегуляторным цитокином, который подавляет синтез провоспа-лительных цитокинов, усиливает пролиферацию В-лимфоцитов и синтез иммуноглобулинов, ингибирует антиген-специфическую клеточную пролиферацию и экспрессию антигенов НЬА класса II, а также увеличивает выживаемость В-лимфоцитов, индуцируя транскрипцию гена ВСЬ-
2, предохраняющего клетки от апоптоза [ 17 ]. Показано, что у модельных линий мышей инак-
Таблица 1
КЛИНИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ СКВ (п = 80)
Клинические и лабораторные признаки Частота, п (%)
Лихорадка 44 (55,0 %)
Эритема
• бабочка 29 (36,3 %)
- диссеминированная эритема 28 (35, 0 %)
- дискоидиые очаги 14(17,5%)
Артрит 60 (75,0 %)
Артралгії и 63 (78,8 %)
Серозиты
- плеврит выпотной/адгезивный 14 (17,5%) /33 (41,3%)
- перикардит выпотной/адгезивный 13 (16,3%)/32 (40,0%)
Нефрит/нефротический синдром 43 (53,3%)/9 (11,3%)
Хроническая почечная недостаточность 9(11,3%)
Вовлечение центральной нервной системы 41 (513%)
Анемия (НЬ - 10,0 г/л и < ) 22 (27,5 %)
Лейкопения (< 4000 х 10 9) 27 (33,8 %)
Антитела к нативной ДНК (> 20 ед/мл ) 46 (57,5 %)
АНФ(+) 62 (77,5 %)
тивация 1Ь-10 замедляет развитие аутоиммунного процесса, тогда как введение этого цитокина ускоряет его развитие. Установлено, что вклад генетического компонента в межиндивидуальную изменчивость секреции 1Ь-10 превышает 70% [ 37 ], и что эта вариабельность коррелирует с различиями в структуре промоторной области гена 1Ь-10 [ 13 ]
Имеющиеся публикации по изучению полиморфизмов генов РсуШПА и промоторной области гена 1Ь-10 при СКВ, проведенному в различных этнических и популяционных группах, носят противоречивый характер.
В ряде работ генотип К^ЯЗА/Т был определен как фактор предрасположенности к СКВ [23, 40], в других же исследованиях полиморфизм гена РсуШПА был связан с развитием отдельных клинических симптомов заболевания [10, 25]. В работах же ГНаиа с соавт. [14 ] и М. ОЬ с соавт. [29 ] взаимосвязь РсуШИа с развитием СКВ или клиническим полиморфизмом заболевания не была выявлена.
Генетическая предрасположенность к развитию СКВ, связанная с полиморфизмом промоторной области гена 1Ь-10, была исследована в нескольких популяциях. У американских и европейских кавказоидов и у китайских пациентов развитие СКВ, люпус-нефрита и/или повышенная продукция аутоантител были ассоциированы с полиморфизмом нескольких сайтов промоторной области 1Ь-10, в том числе нуклеотида в положении -627 [8, 12, 22,28].
Результаты исследования, проведённого на базе Института ревматологии РАМН в 1999-2001 гг, по изучению значимости аллельного полиморфизма генов РсуШПА и 1Ь-10 в однородной по национальности казахской выборке пациентов с СКВ и здоровых тест-доноров согласовались с данными других исследований, в которых была выявлена ассоциативная связь генотипа РСОЛЗА-¥/¥ с развитием заболевания и подтверждена значимость полиморфизма промоторной области гена 1Ь-10 при этом заболевании. Сочетание в генотипе больных СКВ аллеля Р гена РсуШПА и аллеля А гена 1Ь-10 в двойной дозе (Р/Т + А/А) повышало риск развития СКВ в 8 раз, а волчаночного нефрита - в 12 раз [1].
Подобные исследования среди пациентов русской национальности не проводились, что определяет актуальность работы по изучению роли генов РсуШПА и П,-10 в развитии СКВ и/ или люпус-нефрита у русских.
Целью настоящего исследования явилось изучение характера распределения аллельных вариантов генов РсуШПА и 1Ь - 10 в выборках больных СКВ и контрольной группы здоровых индивидов русской национальности, проживающих в г. Москве и Московской области, определение роли вышеперечисленных генов в формировании чувствительности к заболеванию и клинического полиморфизма СКВ (наличие или отсутствие нефрита).
Материт и методы
Основную группу исследования составили 80 больных СКВ (из них 43 пациента с волчаночным
нефритом, 37- без нефрита), которые прошли курс обследования и лечения в Институте ревматологии РАМН г. Москвы. Набор материала проводился за период 2003-2004 гг.
Верификация диагноза СКВ основывалась на критериях Американской Ревматологической Ассоциации [ 32 ]. Вариант течения и степень активности СКВ определялись согласно классификации В.АНасоновой [ 6]. В исследование вошли 4 муж. и 76 жен., средний возраст которых на момент исследования составил 38,9 ± 12,5 лет (от 13 до 63), с длительностью заболевания от 3 мес. до 22 лет. Больные имели преимущественно хроническое (55,0 %) и подострое (35,0 %) течение СКВ, 2 и 3 степени активности заболевания.
Клиническая характеристика больных представлена в табл. 1 (лабораторные показатели даны на момент исследования).
Контрольной группой служили 100 практически здоровых жительниц г. Москвы в возрасте от 16 до 75 лет, не имеющих в анамнезе РЗ. Все исследованные лица были русской национальности.
Материалом для молекулярно-генетических исследований служили мононуклеарные клетки (МК) периферической крови пациентов и тест - доноров. ДНК была выделена из МК всех обследованных лиц стандартным методом высаливания.
Детекция двух аллельных вариантов гена РсуШНА, обусловленных точковой мутацией в положении 559 (замена Т на в), что приводило к замене фенилаланина (Р) на валин (V), проводилась методом аллель-специфической полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием одного прямого и двух обратных аллель-специфических праймеров. Аллель-специфические амплифициро-ванные продукты (ампликоны) визуализировали в 3% агарозном геле. На основании выявленных ампликонов генотип индивидуумов относили к одному из перечисленных: Т/Т, ТДЗ или ОД}. Мы
использовали фенотипические выражения генотипов ( F/F, F/V, V/V соответственно), так как данное обозначение нагляднее отражает функциональное свойство рецепторов - высокую или низкую аффинность к лиганду.
Полиморфизм промоторной области гена IL-10, обусловленный точковой мутацией в положении -627 (аллели А и С), изучали методом полиморфизма длин рестриктазных фрагментов (ПДРФ) с использованием рестриктазы Rsal. Электрофоретическое разделение продуктов рестрикции проводили в 2% агарозном геле. Возможные варианты генотипов: А/А, А/С, С/С. В ранее опубликованной статье [ 1 ] мы использовали обозначения 1/1, 1/2, 2/2 соответственно. Более подробное описание методов со ссылками на использованные литературные источники приведено в той же статье.
Статистическую обработку результатов осуществляли с использованием критерия х2, точного критерия Фишера и показателя отношения шансов (OR) с вычислением 95% доверительных интервалов (ДИ). В нашем случае показатель отношения шансов равнозначен величине относительного риска (RR), так как частота заболевания СКВ в популяции низкая.
Результаты
Был изучен ДНК-полиморфизм гена, кодирующего рецепторы 111а к Fc фрагменту иммуноглобулина G (FcyRIIIa) и промоторной области (положение -627) гена IL-10. Получены данные о распределении частот генотипов этих генов в двух группах: больных СКВ (п = 80) и в контроле (п = 100). Также проведена оценка значимости аллельного полиморфизма в выборке больных с наиболее часто встречающимся клиническим вариантом заболевания - люпус-нефритом (табл.2), из которой видно, что достоверно значимых различий в частоте распределения генотипов гена IL-10 в двух ис-
Таблица 2
РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ЧАСТОТ ГЕНОТИПОВ ГЕНОВ И-10 И КвЯЗА В ГРУППЕ БОЛЬНЫХ СКВ,
В ПОДГРУППАХ БОЛЬНЫХ С ВОЛЧАНОЧНЫМ НЕФРИТОМ (+), БЕЗ НЕФРИТА (-) И В КОНТРОЛЬНОЙ ГРУППЕ
Исследуемые группы Генотипы ' СКВ п = 80 Волчаночный нефрит + п = 43 Волчаночный нефрит п = 37 Контроль п =100
IL-10
А/А 3 (3,8 %) 0 2 (5,4 %) 3 (3,0 %)
С/А 24 (30,0 %) 13(30,2 %) 12 (32,4 %) 38 (38,0 %)
С/С 53 (66,2 %) 30 (69,8 %) 23 (62,2 %) 59 (59,0 %)
FCGR3A
V/V 7 (8,8 %) 2(4,7%) 6(16,2%) 11 (11,0 %)
F/V 40 (50,0 %) 23 (53,5 %) 18 (48,6 %) 57 (57,0 %)
F/F 33(41,2 %) 18(41,8 %) 13(35,2%) 32 (32,0%)
следуемых группах не выявлено, однако имеется незначительная тенденция к увеличению частоты встречаемости генотипа С/С в группе больных СКВ по сравнению с контрольной группой.
В табл. 2 также представлено распределение генотипов гена IL-10 в группах больных СКВ в зависимости от наличия или отсутствия люпус-нефрита. Выявлено, что у больных с нефритом наблюдается отсутствие генотипа А/А и незначительное повышение частоты встречаемости генотипа С/С по сравнению с больными СКВ без нефрита и с контрольной группой, однако различия статистически недостоверны.
Распределение частот генотипов гена FcyRIIIA в группе больных СКВ в целом , а также в стратифицированных по наличию или отсутствию люпус-нефрита группах больных СКВ в сравнении с данными контрольной группы также представлено в табл.2.
Достоверно значимых различий в частоте распределения генотипов FCGR3A-F/F, -F/V, -V/V в группе больных СКВ и контрольной выборке не выявлено, однако заметна тенденция к накоплению у больных СКВ, особенно с люпус - нефритом, генотипа F/F и снижению частоты генотипа V/V по сравнению с контрольной выборкой.
Также был проведён анализ распределения частот сочетанных генотипов гена FcyRIIIa и гена IL-10 у больных СКВ и в контрольной группе (табл.З). Выявлено достоверно значимое повышение частоты встречаемости сочетанного генотипа F/F+C/C в группе больных СКВ по сравнению с контролем (28,9% и 16,0% соответственно, р<0,05, OR=2,12).
Анализ распределения частот всех генотипов в группе больных СКВ, стратифицированных по наличию или отсутствию волчаночного нефрита, выявил еще более выраженную ассоциативную связь генотипа F/F+C/C с поражением почек (наличие нефрита - 37,2 %, контроль - 16,0 %, р<0,01, OR=3,l; ДИ = 1,27 - 7,63 ), хотя при сравнении между собой подгрупп с нефритом и без нефрита различия были статистически недостоверными (37,2 % и 18,9 %, соответственно, р=0,07).
В дальнейшем предполагается провести более детальный анализ корреляционных связей исследованных генотипов и лабораторных показателей, в частности, уровней аутоантител.
Обсуждение
СКВ, являющаяся, с одной стороны, заболеванием с ярко выраженным аутоиммунным компонентом, а с другой - мультифакторным заболеванием со значительным вкладом генетического компонента в подверженность к болезни, представляет собой адекватную модель для изучения генетических факторов, детерминирующих развитие некоторых иммунных механизмов патогененеза заболевания.
Обобщенные литературные данные о возможных иммунопатологических механизмах развития СКВ и их генетической детерминации, а также проведенное нами исследование у казахов позволили выбрать гены IL-10 и FCGR3A в качестве канди-дитных на роль генов-маркеров СКВ.
Одним из основных требований нашей работы было проведение исследования на выборке пациентов, однородной по национальному составу и относящихся к русской этнической группе, т.к. известно, что межэтнические и межпопуляционные различия вносят существенный вклад в вариабельность силы ассоциации генетических маркеров с заболеванием.
В нашем исследовании не была выявлена статистически достоверная ассоциативная связь полиморфизма -627С/А гена IL-10 и гена FcyRIIIA (158 F/V) с развитием СКВ и/или с почечной патологией у русских, хотя наблюдалась слабая тенденция к повышению генотипов С/С и F/F в группе больных СКВ как в целом, так и в подгруппе с волча-ночным нефритом. В то же время предрасположенность к развитию СКВ, а также люпус-нефрита, выраженная через показатель относительного риска, увеличивалась в 2-3 раза у лиц, несущих в своем генотипе двойные дозы аллелей F и С ( F/F+C/C), что свидетельствовало о синергичном действии исследованных генов. Проведенный в процессе обработки полученных результатов анализ возможного феномена неравновесия по сцеплению генов FCGR3A и IL-10, картированных на хромосоме 1, показал, что эти гены не находятся в неравновесном сцеплении. Поэтому можно предположить, что мы имеем дело с явлением действительного меж-генного взаимодействия, приводящего, наряду с другими эндогенными и экзогенными факторами, к нарушению аутоиммунитета и развитию СКВ и/или волчаночного нефрита.
При сопоставлении полученных нами результатов с данными зарубежных авторов [28, 36], а также с результатами аналогичного исследования, проведенного на выборке казахов в 1999-2001 гг [1], наше внимание привлек факт межэтнических генетических различий, связанный с полиморфизмом -627С/А гена IL-10. В китайской [28 ] и казахской популяциях, относящихся к монголоидам, генотип А/А встречался достоверно чаще, чем у англичан [36 ] и русских, относящихся к европеоидам. Аллель А как в китайской, так и в казахской популяциях детерминировал развитие люпус-нефрита. Кроме того, у казахов генотип А/А был ассоциирован с развитием СКВ как таковой. В выборке русских, также как и в выборке английских пациентов, ассоциативная связь изученного полиморфизма гена IL-10 с развитием СКВ и/или люпус-нефрита обнаружена не была. У английских пациентов аллель С был ассоциирован с повышенной продукцией Ro-антител и почечными осложнениями [22].
Возможно, что в русской этнической группе полиморфизм 1Ь-10 также ассоциирован с различными уровнями продукции 1Ь-10 и/или его экспрессии, равно как и с наличием различных аутоиммунных антител, однако в России такие исследования не проводились.
Результаты нашего исследования о значимости полиморфизма гена РсуШПА в формировании предрасположенности к развитию СКВ и/или вол-чаночного нефрита , проведенного на выборке больных и здоровых лиц, принадлежащих к русской этнической группе, свидетельствуют скорее о вкладе этого гена в клинический полиморфизм СКВ и, в частности, в развитие люпус-нефрита. В русской популяции фенотип У/У кодируемый РССЛЗА-в/в, является протектором развития нефрита, а фенотип Р/р кодируемый РСвЯЗА-Т/Т, -предрасполагающим фактором развития данного синдрома. Данный вывод носит характер предположительного, т.к. полученные данные не являются статистически достоверными, что, в свою очередь, может быть связано с небольшими по численности выборками больных СКВ с нефритом и без нефрита. Наши данные частично согласуются с результатами зарубежных авторов, проводивших подобные исследования в различных этнических и популяционных группах и выявивших ассоциативную связь полиморфизма РсуШПа с развитием СКВ и/или клиническим полиморфизмом заболевания. Самое первое исследование, посвященное изучению полиморфизма гена Рсу1Ш1А и его значимости в развитии СКВ и ее клинических проявлений, было выполнено на материале смешанной (неоднородной по этнической принадлежности) выборке больных СКВ и здорового контроля афроамериканцев и белых - выходцев из Европы [ 38 ]. Предрасположенность к развитию СКВ и нефрита в этом исследовании была ассоциирована с гомозиготным генотипом Р/Р, а протективным являлся генотип У/У. Практически одновременно сходные данные были получены при исследовании голландских пациентов [ 20 ].
Впоследствии аналогичные исследования были проведены уже с учетом однородности по этнической или популяционной принадлежности выборок пациентов СКВ и контрольной группы. В немецкой популяции больных [25] аллель Р был ассоциирован с развитием нефрита, протеинурией, наличием антикардиолипиновых антител, а также с более ранним возрастом начала заболевания. У японцев [21] генотип Р/Р был связан с предрасположенностью к развитию СКВ, а также с наличием аутоантител к скОЫА. Генотип Р/Р в корейской [39] и голландской популяциях больных [10 ] был ассоциирован с развитием серозитов и артритов. В американском исследовании, выполненном на значительно большем материале (235 больных и 352 здоровых лиц), из которых 49% были европеои-
Таблица 3.
ЧАСТОТЫ СОЧЕТАННЫХ ГЕНОТИПОВ ГЕНОВ РСвЯЗА и 11-10 У БОЛЬНЫХ СКВ И В КОНТРОЛЬНОЙ ГРУППЕ
~'~~~^__Исследуемые Генотипы ' ' СКВ п=80 Контроль п=100
(И/Ю + (А/А) 1 (1,2 %) 2 (2,0 %)
(Р/П + (С/А) 9(11,2 %) 14(14,0%)
(Р/П + (С/С) 23 (28,9 %)* 16(16,0%)*
(Р/\0 + (А/А) 2 (2,5 %) I (1,0 %)
(Р/У) + (С/А) 14(17,5 %) 21 (21,0 %)
(Р/У) + (С/С) 24 (30,0 %) 35 (35,0 %)
(У/У) + (А/А) 0 0
(У/У) + (С/А) 1 (1,2 %) 3 (3,0 %)
(У/У) + (С/С) 6 (7,5 %) 8 (8,0 %)
* - р<0,05 (ОЯ=2,12; ДИ = 0,97 - 4,64).
дами, 20% - мексиканцами, 17% - выходцами с островов Тихого океана, 12% - афроамериканцами, показано, что развитие люпус-нефрита ассоциировано с генотипом '?/'? только у белых американцев, выходцев из Европы [ 30 ]. Проспективное трехлетнее исследование в испанской популяции показало, что развитие нефрита у больных СКВ бьито ассоциировано с аллелем р особенно в гомозиготном состоянии, а протективным в отношении развития данного осложнения был генотип У/У [40]. В то же время необходимо отметить, что ассоциативная связь полиморфизма РсуШПА с развитием СКВ или ее клиническими синдромами была выявлена не всеми исследователями [ 14, 29 ]. Данные всех выполненных до 2002 г исследований по изучению роли гена РсуШПА при СКВ и/или люпус-нефрите были подвергнуты мета-анализу [19], который подтвердил значимую роль этого гена в патогенезе СКВ в различных популяционных группах.
Проведенное нами ранее исследование у казахов, принадлежащих к монголоидной расе, выявило достоверную положительную ассоциативную связь генотипа ¥/¥ с развитием СКВ (СЖ= 2,44), а также нефрита (011= 3,16 ).
Таким образом, в результате проведенного изучения значимости полиморфизма генов РсуШПА и 1Ь-10 в развитии СКВ и анализа данных литературы мы пришли к заключению, что точковая мутация в позиции 559 гена РсуШПА, детерминирующая синтез различных по функциональной связывающей активности белков ( рецепторов), является значимой практически во всех популяционных и этнических группах и ассоциируется либо с предрасположенностью к развитию СКВ, либо с ее клиническим полиморфизмом. Сила ассоциативной связи зависит от особенностей распределения частот аллелей и генотипов в популяциях. В то же вре-
мя ассоциативная связь полиморфного участка промоторной области гена IL-10 (-627 С/А) имеет различную направленность в разных популяциях и этнических группах. Так, у монголоидов предрасположенность к развитию СКВ и к ряду клинических проявлений болезни ассоциирована с генотипом А/А, а у европеоидов (англичан, русских) - с генотипом С/С.
Мы не исключаем, что ассоциированные с развитием СКВ гены и их аллельные варианты могут находиться в неравновесии по сцеплению с какими-либо другими генами, которые "первично" сцеплены с заболеванием, причем ими могут быть гены на других хромосомах. Так, в исследовании B.Tsao с соавт. [35 ] на 145 пораженных СКВ парах сибсов было выявлено сцепление маркера D1S2675 участка q23 хромосомы 1 и маркеров D16S753 и D16S757 области ql2 хромосомы 16. Также показа-
ЛИТЕРАТУРА
1. Гусева И.А., Омарбекова Ж.Е., Мякоткин В.А. Полиморфизм гена FcyRIIIA-158 F/V и промоторной области гена IL-10 при системной красной волчанке у казахов. Тер. архив, 2003, 5, 3641.
2. Ермакова Т.М. Семейные исследования при системной красной волчанке у детей. Дисс.дмн, М., 1988.
3. Иванова М.М. Системная красная волчанка. В кн.: Сигидин Я.А., Гусева Н.Г., Иванова М.М. Диффузные болезни соединительной ткани. Рук. для врачей. М., Медицина, 2004, 253-340.
4. Лесняк О.М. Изучение наследственности, антигенов гистосовместимости и некоторых иммунологических параметров в семьях больных системной красной волчанкой. Дис. кмн, М., 1987.
5. Лучихина Е. Л. Анализ летальных исходов при СКВ. Дисс. кмн. М., 1998.
6. Насонова В.А. Системная красная волчанка. М. Медицина, 1972.
7. Отчет Минздрава РФ за 2002г по заболеваемости населения России. Форма 12
8. DAlfonso S., Rampi М., Bocchio D. et.al. Systemic lupus erythematosus candidate genes in the Italian population: evidence for a significant association with interleukin-10. Arthr. Rheum., 2000, 43, 120-128.
9. Deapen D., Escalanta A.,Weinrib L. et al. A revised estimate of twin concordance in systemic lupus erythematosus. Arthr. Rheum., 1992, 35, 311-317.
10. Dijstelbloem H.M., Bijl М., Fijnheer R. et al. Fcgamma receptor polymorphisms in systemic lupus erythematosus: association with disease and in vivo clearance of immune complexes. Arthr. Rheum., 2000, 43, 2793-2800.
но, что сочетание в генотипе больных определенного набора "неблагоприятных" аллелей может предрасполагать к развитию СКВ, как было по-демонстрировано в исследовании К.БиШуап с соавт. [31 ], изучавших полиморфизмы генов, кодирующих белки, предположительно участвующие в нарушении клиренса иммунных комплексов (компоненты комплемента С2 и С4, белки, связывающие маннозу, рецепторы к комплементу СЯ1, а также Рсу1Ша и FcyRПIa). Представляют интерес данные зарубежных исследователей, полученные при изучении у больных СКВ аллельного полиморфизма гена Л-10 и гена ВСЬ2. Авторы показали, что носительство аллеля 193 гена ВСП и аллеля 127 гена 1Ь-10 в отдельности умеренно повышает риск развития СКВ, в то время как их совместное наследование в 40 раз повышает этот риск [27].
11. Edberg J.C., Langefeld C.D., Wu J. et al. Genetic linkage and association of Fcgamma receptor IIIA (CD16A) on chromosome lq23 with human systemic lupus erythematosus. Arthr. Rheum., 2002, 46, 2132-2140.
12. Eskdale J., Wordsworth P., Bowman S. et al. Association between polymorphisms at the human IL-10 locus and systemic lupus erythematosus. Tissue Antigens, 1997, 49, 635-639.
13. Eskdale J., Gallagher G., Verweij C.L. et al. Interleukin 10 secretion in relation to human IL-10 locus haplotypes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA,
1998, 95, 9465-9470.
14. Hatta Y., Tsuchiya N., Ohashi J. et al. Association of Fc gamma receptor IIIB, but not of Fc gamma receptor ILA and IIA polymorphisms with systemic lupus erythematosus in Japanese. Genes Immun.,
1999, 1, 53-60.
15. Hibbs M.L., Tolvanen M., Carpen O. Membrane-proximal Ig-like domain of Fc RHIa (CD16) contains residues critical for ligand binding. J. Immunol., 1994, 152, 4466-4474.
16. Hochberg M.C. The application of genetic epidemiology to systemic lupus erythematosus. J. Rheumatol., 1987, 14, 867-869.
17. Itoh K., Hirohata S. The role of IL-10 in human B cell activation, proliferation and differentiation. J. Immunol., 1995, 154, 4341-4350.
18. Jarvinen P., Karpo J., Makitalo R. et al. Systemic lupus erythematosus and related systemic diseases in a nationwide twin cohort: an increased prevalence of disease in MZ twins and concordance of disease features. J. Intern. Med., 1992, 231, 67-72.
19. Karassa F.B., Trikalinos T.A., Ioannidis J.P. The Fc gamma RIIIA-F158 allele is a risk factor for the
development of lupus nephritis: a meta-analysis. Kidney Int., 2003, 63, 1475-1482.
20. Koene H.R., Kleijer V., Sullivan K.E. et al. The Fc RIIIA-153 F allele is a risk factor for systemic lupus erythematosus. Arthr.Rheum., 1998,41, 1813-1818.
21. Kyogoku C., Dijstelbloem H.M., Tsuchiya N. Fcgamma receptor gene polymorphisms in Japanese patients with systemic lupus erythematosus: contribution of FCGR2B to genetic susceptibility. Arthr. Rheum., 2002 46, 1242-1254.
22. Lazarus M., Hajeer A.H., Turner D. et al. Genetic
variation in the interleukin 10 gene promoter and systemic lupus erythematosus. J. Rheumatol., 1997, 24, 2314-2317. _
23. Lehmbecher T., Foster C.B., Zhu S. et al. \&riant genotypes of the low-affinity Fcgamma receptors in two control populations and a review of low-affinity Fcgamma receptor polymorphisms in control and disease populations. Blood, 1999, 94, 4220-4232.
24. Lindqvist A.K., Alarcon-Riquelme M.E. The genetic of systemic lupus erythematosus. Scand. J. Rheumatol., 1999, 50, 562-571.
25. Manger K., Repp R., Jansen M. et al. Fcgamma receptor Ha, Ilia, and Illb polymorphisms in German patients with systemic lupus erythematosus: association with clinical symptoms. Ann. Rheum. Dis., 2002, 61, 786-792.
26. Manzi S.M., Stark V.E., Ramsey-Goldman R. Epidemiology and classification of systemic lupus erythematosus. In: Ed.Hochberg M.C. et al., Rheumatology, 2003, 1291-1296.
27. Mehrian R., Quismorio F.R J., Strassmann G.et al. Synergistic effect between IL-10 and bcl-2 genotypes in determining susceptibility to systemic lupus erythematosus. Arthr. Rheum., 1998, 41, 596-602.
28. Mok C.C., Lanchbury J.S., Chan D.W., Lau C.S. Interleukin-10 promoter polymorphisms in Southern Chinese patients with systemic lupus erythematosus. Arthr. Rheum., 1998,41, 1090-1095.
29. Oh M„ Petri M.A., Kim N.A., Sullivan K.E. Frequency of the Fc gamma RIIIA-158F allele in African American patients with systemic lupus erythematosus. J. Rheumatol., 1999, 26, 1486-1489.
30. Seligman V.A., Suarez C., Lum R. et al. The
Fcgamma receptor IILA-158F allele is a major risk factor for the development of lupus nephritis among Caucasians but not non-Caucasians. Arthr. Rheum., 2001,44, 618-625.
31. Sullivan KE, Jawad AF, Piliero LM. Et al. Analysis
of polymorphisms affecting immune complex handling in systemic lupus erythematosus.
Rheumatology (Oxford), 2003, 42, p.446-452.
32. Tan E.M., Cohen A.S.,J.F.Fries. et al.The 1982 revised criteria for the classification of the systemic lupus erythematosus. Arthr. Rheum., 1982, 25, 1271-1277.
33. Ten F.K., Arnett F.C. The genetic of lupus. Curr. Op. Rheumatol., 1998, 10, 399-408
34. Tsao B.P., Cantor R.M., Kalunian K.C. et al. Evidence for linkaqe of a candidate chromosome 1 region to human systemic lupus erythematosus. J. Clin. Invest., 1997, 99, 725-731.
35. Tsao B.P., Cantor R.M., Grossman J.M. et al. Linkage and interaction of loci on lq23 and 16q 12 may contribute to susceptibility to systemic lupus erythematosus. Arthr. Rheum., 2002, 46, 29282936.
36. Turner D.M., Williams D.M., Sankaran D. et al. An investigation of polymorphism in the interleukin-10 gene promoter. Europ. J. Immunogenet., 1997, 24, 1-8.
37. Westendorp R.G.J., Langermans J.A.M., Huizinga T.W.J. et al. Genetic influence on cytokine production and fatal meningococcal disease. Lancet, 1997, 349, 170-173
38. Wu J., Edberg J.C., Redecha P.B.et al. A novel polymorphism of Fc?RIIIa (CD16) alter receptor function and predisposes to autoimmune disease. J.Clin. Invest., 1997, 100, 1059-1070.
39. Yun H.R., Koh H.K., Kim S.S. et al. FcgammaRIIa/IIIa polymorphism and its association with clinical manifestations in Korean lupus patients. Lupus, 2001, 10, 466-472.
40. Zuniga R., Ng S., Peterson M.G. et al. Low-binding alleles of Fcgamma receptor types I1A and IIIA are inherited independently and are associated with systemic lupus erythematosus in Hispanic patients. Arthr. Rheum., 2001, 44, 361-367.
Поступила 15.03.06
Abstract
I.A. Guseva, E.Y. Samarkina, E.L. Luchihina, M.M. Ivanova, V.A. Myakotkin S.E.
Study of FCGR3A and IL-10 gene polymorphisms significance in systemic lupus erythematosus in Russian population.
Objective. To investigate the role of FCGR3a- 158F/Vand 11-10 gene promoter -627 C/A polymorphisms in susceptibility to SLE and/or lupus nephritis in Russian population. Material and methods. Genomic DNA was isolated from 80 Russian patients with SLE (43 nephritis and 37 non-nephritis pts) and 100 disease-free control subjects. FcyRIIIa genotypes were determined using allele-specific polymerase chain reaction. The biallelic polymorphism of 11-10 gene promoter -627 C/A was detected by restriction-enzyme method using Rsal.
Results. No significant skewing in the distribution of both FcyRIIIa and 11-10 alleles and genotypes was seen between the SLE patients and controls. Wfe foud a trend toward decreasing of the homozygous FcyRIIIA- V/V genotype in patiens with lupus nephritis as compared with patients without nephritis and controls
( 4.7 % vs 16,2 %, vs 11.0 %, respectively). The anaysis of distributin of FcyRIIIA and II-10 genotype combinations revealed a significant increasing of combinatorial genotype FcyRIIIA-l58F/F / IL-10-627C/C in SLE patients compared with control (28.9% vs 16.0%, OR=2.12, p<0.05). Similarly, this combined genotype was significantly increased in SLE patients with nephritis as compared to the control group (37,2 % vs 16,0%, OR=3,I, p<0.01), but the difference of distribution of this genotype was not significant when we compared the nephritis and non-nephritis groups ( 37.2% vs 18.9%, p>0.05) due probably to the small simple size of investigated groups.
Conclusion. Our association study confirm the contribution of genes FcyRIIIA and 11-10 in susceptibility to development of SLE in Russian population. The combined genotype FCGR3A-158F/F / IL-10-627C/C enhance the risk of lupus nephritis among Russian SLE patients.
Key words: SLE, lupus nephritis, gene FCGR3A, IL-10
