CC BY
8И. А. Зупанец, Т. С. Сахарова, Е. В. Ветрова, Е. А. Зупанец
ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ГЛЮКОЗАМИНА НА ДОКСОРУБИЦИН-ИНДУЦИРОВАННУЮ ГИБЕЛЬ КЛЕТОК В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Национальный фармацевтический университет, г. Харьков, Украина
В статье представлены результаты морфологического и иммуногистохими-ческого изучения влияния производных глюкозамина в комбинации с флавоноидом кверцетином на процесс доксорубицин-индуцированного повреждения печени крыс. Установлено, что внутрибрюшинное введение доксорубицина в дозе 20 мг/кг вызывает выраженные дегенеративно-дистрофические изменения в гистоструктуре печени, массированную гибель гепатоцитов вследствие индукции процессов некроза и апоптоза. Проапоптотическое действие доксорубицина опосредовано его возможным влиянием на экспрессию антиапоптотического белка Ь^-2, что иммуногисто-химически выявляется снижением количества bcl-2-позитивных гепатоцитов. Лечебно-профилактическое введение производных глюкозамина в комбинации с кверцетином нивелирует гепатотоксическое действие доксорубицина, способствует регрессии патологических изменений в морфоструктуре печени, стимулируя процесс регенерации и уменьшая проявления некроза и апоптоза. Показан антиапоптотиче-ский потенциал производных глюкозамина в комбинации с кверцетином в условиях доксорубицин-ассоциированной гепатотоксичности, что отражается достоверно значимым увеличением количества bcl-2-позитивных гепатоцитов по сравнению с аналогичным показателем у пораженных животных.
Ключевые слова: производные глюкозамина, кверцетин, доксорубицин, апоптоз, bcl-2-позитивные гепатоциты.
ВВЕДЕНИЕ
Долгое время в науке существовало мнение, что химически индуцированное повреждение и смерть клетки осуществляются главным образом путем некроза. Однако прогрессивное развитие молекулярной биологии и генетики позволило установить, что гибель клетки возможна и в результате другого процесса, называемого апоптозом [1]. По современным представлениям апоптозу отводится важнейшая роль как в физиологических, так и в патологических процессах, поскольку как подавление, так и неадекватная его индукция могут вызвать необратимые изменения органов и тканей. Во многих случаях апоптоз инициируется УФ- и у-излучением, тепловым шоком, окислительным стрессом, вирусной инфекцией, воздействием химических факторов, в том числе различных лекарственных средств [2].
Одной из групп лекарственных средств, индуцирующих апоптоз, являются противоопухолевые средства. Действие большинства из них приводит к индукции апоптоза в результате повреждения молекулы ДНК или других внутриклеточных
мишеней, опосредующих такое повреждение [3]. Вместе с тем, в научной литературе в настоящее время накоплены сведения о возможности регуляции апоптоза различными веществами синтетического и природного происхождения, в частности, естественными метаболитами организма [4, 5].
На кафедре клинической фармакологии и клинической фармации Национального фармацевтического университета под руководством профессора И.А. Зу-панца проводятся исследования по разностороннему фармакологическому изучению производных глюкозамина и его комбинаций с различными веществами в качестве органопротекторных средств при различной патологии [6-8]. Показано, что органопротекторное действие различных производных и комбинаций глюкозамина реализуется благодаря мембраностаби-лизирующему, антиоксидантному, имму-нотропному, противовоспалительному и другим видам действия. Исследованиями последних лет установлено, что производные глюкозамина в комбинациях с квер-цетином и парацетамолом способны оказывать регулирующее влияние на процесс апоптоза хондроцитов, индуцированный
глюкокортикостероидами на модели экспериментального стероидного остеоар-трита у крыс [4, 5].
Учитывая вышеизложенное, целью нашей работы стало изучение комбинации некоторых производных глюкозамина с кверцетином на процесс доксорубицин-индуцированного повреждения печени крыс, одним из звеньев патогенеза которого является активация апоптоза [9, 10].
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Эксперименты проведены на 30 белых беспородных лабораторных крысах массой 200-250 г. Все животные содержались в стандартных условиях вивария ЦНИЛ НФаУ (сертифицирована ГЭЦ МОЗ Украины как база исследований по экспериментальной фармакологии (свидетельство № 21 от 30.04.2009 г.) со свободным доступом к воде и пище. Животные были разделены на 5 групп по 6 животных в каждой: 1-я группа - интактная, 2-я группа - контрольные животные, получавшие однократно внутрибрюшинно доксоруби-цин (ДОКС) в дозе 20 мг/кг массы тела на 8-й день эксперимента [11]; 3 - 5-я группы - крысы, которые на фоне ДОКС в режиме лечебно-профилактического введения получали исследуемые объекты ежедневно внутрижелудочно в течение 10 суток: 3-я - глюкозамина гидрохлорид (ГА г/х) в условно-терапевтической дозе 50 мг/кг [12]; 4-я - комбинацию ами-носахаров глюкозамина гидрохлорида и №ацетилглюкозамина с флавоноидом кверцетином (КА+Кв) в соотношении 3:1 в пересчете на ГА г/х в условно-терапевтической дозе 82 мг/кг [4]; 5-я - кверце-тин (Кв) в дозе 20,5 мг/кг [4].
Через 24 часа после последнего введения всех исследуемых соединений у крыс экстирпировали печень и брали образцы ткани для дальнейшего морфологического и иммуногистохимического исследования. Все вмешательства и эвтаназию животных осуществляли с соблюдением принципов «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей» (Страсбург, 1986) и ^го Национального конгресса по биоэтике (Киев, 2013) [13].
Для морфологического исследования полученный материал фиксировали в 10%
растворе забуференного нейтрального формалина (Shandon Fixx, США) в течение 24 часов. После дегидратации материал заливали в высокоочищенный парафин с полимерными добавками (RichardAllan Scientific, США) при температуре не выше 60°С. Из парафиновых блоков на ротационном микротоме Microm HM325 (Carl Zeiss, Германия) делали срезы ткани толщиной 5 мкм. Срезы ткани помещали на предметные стекла (Menzel, Германия), затем окрашивали по стандартным методикам гематоксилином и эозином (Kaltek, Италия) и изучали с помощью традиционных методов световой микроскопии [14].
Для дальнейшего иммуногистохими-ческого исследования часть парафиновых срезов помещали на покрытые адгезивом стекла Super Frost Plus (Menzel, Германия). Исследование проводили на депарафини-рованных и регидратированных срезах. Для демаскирования антигенности ткани использовали метод тепловой обработки срезов в буфере Target Retrieval Solution High pH (DAKO, Дания) путем нагревания в проточной водяной бане в течение 40 минут при температуре 98-99°С (GFL, Германия) с учетом рекомендаций фирмы-производителя антител. После блокирования неспецифического связывания белков протеиновым блоком (Diagnostic Biosystems, США) наносили первичные антитела bcl-2 (clone 124, RTU FLEX, DAKO, Дания). Визуализацию первичных антител проводили с помощью системы детекции DAKO EnVision FLEX+ (DAKO, Дания). Для визуализации гистологической структуры исследуемой ткани обработанные иммуногистохимические препараты докрашивали гематоксилином Майера (DAKO). Далее окрашенные срезы помещали в заключающую среду Eukitt (Германия). На срезы, использовавшиеся для интактного контроля, вместо первичных антител наносили буфер для разведения антител (DAKO).
Изучение препаратов в проходящем свете проводили на исследовательском микроскопе Olympus AX70 (Япония) с цифровой видеокамерой Olympus DP50, соединенной с персональным компьютером. Микрофотографирование и мор-фометрическое изучение препаратов выполнено с использованием программы AnalySIS Pro 3.2 (фирма «Softlmaging», Германия) в соответствии с рекоменда-
циями производителя программного обеспечения. Оценку апоптоза в препаратах проводили по определению количества Ьс1-2-позитивных клеток, приходящихся на 1000 гепатоцитов, и выражали в %о. Статистическую обработку полученных данных проводили на персональном компьютере с помощью программы Statistica 6.0.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
На первом этапе исследования проводили гистоморфологическую оценку степени поражения печени крыс доксоруби-цином в сравнении с органами интактных животных. Сравнительная картина гисто-структуры печени интактых и пораженных крыс проиллюстрирована рис. 1 (а и б соответственно, см. обложку журнала). Гистологическое строение печени интактных крыс соответствовало норме: гепатоциты в различных отделах печеночных долек имели характерную форму и размер, цитоплазма была равномерно прокрашенной, оптически плотной и не содержала включений, ядра гепатоцитов были нормохромны, центрально-расположены, содержали 1, иногда 2 ядрышка. Количество двухъядерных гепатоцитов было достаточным, митозов в клетках не отмечалось (рис. 1 а, см. обложку журнала).
Под влиянием ДОКС в печени животных группы контрольной патологии происходили морфофункциональные нарушения с признаками гипопластических процессов, отмечалась массовая гибель гепатоцитов путем как некроза, так и апоптоза, что согласовывается с данными литературы [9, 15]. Морфологически это выявлялось утолщением соединительнотканной капсулы печени, разрушением внешней терминальной пластинки, под которой местами наблюдались кровоизлияния. Диффузно во всех дольках обнаруживалось отчетливое нарушение гемодинамики в виде полнокровия синусоидальных капилляров, центральных и портальных вен. Об определенной «истощенности» клеток свидетельствовало снижение пула двухъядерных гепатоцитов, а также мономорфность большинства гепатоци-тов на разных участках долек (ядра были отчетливо одного размера, с одинаковым состоянием хроматиновой субстанции, содержащие одно ядрышко). Некротические
изменения выявлялись в разных участках долек цитолизом гепатоцитов (как единичных клеток, так и мелких групп) с различной стадией лизиса ядер и цитоплазмы, а в части гепатоцитов была четко видна мелкокапельная инфильтрация цитоплазмы. Часть гепатоцитов находилась в стадии, предшествующей некрозу (ацидофильной дегенерации) - объем клетки уменьшался, цитоплазма была плотной, интенсивно эозинофильной, ядро пикно-тичным, и в стадии «мумификации» - выталкивание ацидофильной, сморщенной клетки в просвет синусоида. Наблюдались также апоптотически измененные гепатоциты - фрагменты клеток, окруженные клеточной мембраной (рис. 1 б, см. обложку журнала), которые в литературных источниках называют тельцами Каунсильмена [16]. Свидетельством апоптоза гепатоцитов служили дальнейшие результаты иммуногистохимическо-го исследования по определению количества Ьс1-2-позитивных гепатоцитов.
Выбранные для исследования объекты в разной степени уменьшали выраженность дегенеративных изменений, вызванных действием ДОКС. В печени большинства животных, получавших комбинацию КА+Кв на фоне ДОКС, заметно уменьшались цитолитические изменения гепатоцитов и гемодинамиче-ские расстройства, отсутствовали признаки моноцелюлярного некроза (рис. 2, см. обложку журнала). Заметно возрастала выраженность анизонуклеоза и численность двухъядерных клеток, а в ядрах часто увеличивалось количество ядрышек до 2-3. Такие морфологические признаки свидетельствовали об активации регенераторных процессов в печени животных.
На фоне введения монокомпонентов ГА г/х и Кв также уменьшалась выраженность морфологических изменений, возникающих в печени крыс после введения ДОКС, однако в меньшей степени, чем при введении комбинации КА+Кв. В печени крыс этих групп отмечались признаки лизиса ядер, мелкокапельной вакуолизации цитоплазмы гепатоцитов, моноцелю-лярного некроза клеток. У большинства крыс наблюдались нарушения гемодинамики. Меньшей была выраженность ани-зонуклеоза, содержание двухъядерных клеток. Изредка обнаруживались тельца Каунсильмена.
Таким образом, введение комбинации аминосахаров глюкозамина гидрохлорида и N-ацетилглюкозамина с кверцети-ном на фоне ДОКС снижало активность гипопластических процессов в печени, способствовало обновлению клеточной популяции гепатоцитов, оказывая более существенные позитивные изменения в гистоструктуре органа, нежели ее отдельные компоненты.
На следующем этапе нашего исследования проводили иммуногистохимическое определение количества bcl-2-позитивных клеток в микропрепаратах печени, что косвенно отражает активность процесса апоп-тоза. Как известно, белки семейства bcl-2 являются одними из регуляторов процесса запрограммированной смерти клеток. Они находятся в постоянном динамическом равновесии, образуя гомо- и гетеро-димеры. К настоящему времени известно, что белки семейства bcl-2 относятся либо к индукторам (bad, bax и др.), либо к ингибиторам апоптоза (bcl-2, bcl-X). Белок bcl-2 ингибирует р53-зависимый и независимый апоптозные метаболические пути, способствует образованию в митохондриях ионных каналов, стабилизируя этим митохондриальную цитохром-оксидазу С, и связывает белки, участвующие в апопто-зе (цитохром-оксидаза С способна инициировать активацию каскада каспаз и, как следствие, деградацию ДНК и апоптоз). Белок bcl-2 выполняет функцию негативного регулятора апоптоза: уменьшение его концентрации приводит к апоптотической гибели клеток, тогда как сверхэкспрессия защищает клетки от смерти [2, 17].
Использованная методика позволяет выявить в препаратах печени клетки, содержащие антиапоптотический белок bcl-2, которые определяются как клетки с ко-ричневоокрашенной цитоплазмой (рис. 3, см. обложку журнала).
Результаты подсчета bcl-2-позитивных клеток в микропрепаратах печени крыс всех исследуемых групп представлены в таблице.
Как следует из данных таблицы, в печени интактных крыс количество bcl-2-позитивных гепатоцитов составляло 1,49%о и достоверно уменьшалось в 2,7 раза в группе контрольной патологии, достигая значения 0,55% (таблица). Про-апоптотическое действие ДОКС прогнозируемо, так как данный агент нарушает
синтез ДНК и РНК в ядрах клеток, ингибирует фермент топоизомеразу II, что приводит к образованию цитотоксиче-ских активных форм кислорода, других свободных радикалов и в совокупности индуцирует апоптоз путем инициации ка-спазного каскада [18].
Таблица - Количество Ьс1-2-позитивных гепатоцитов в микропрепаратах печени крыс с доксорубицин-индуцированным повреждением на фоне
Условия опыта bcl-2 -позитивные клетки, %
Интактная группа 1,49 ± 0,20
ДОКС (контрольная патология) 0,55 ± 0,11*
ДОКС + ГА г/х 3,87 ± 0,28*/**
ДОКС + (КА+Кв) 5,41 ± 0,33*/**
ДОКС + Кв 3,44 ± 0,25*/**
Примечания: * - отклонение достоверное относительно интактных животных, р < 0,05; ** - отклонение достоверное относительно группы контрольной патологии, р < 0,05.
Лечебно-профилактическое введение животным комбинации КА+Кв на фоне ДОКС способствовало достоверному повышению количества Ьс1-2-позитивных гепатоцитов почти в 10 раз относительно группы контрольной патологии (количество Ьс1-2-позитивных клеток находилось на уровне 5,41 %) (таблица). Такие изменения могут свидетельствовать о повышенной экспрессии белка Ьс1-2 и, следовательно, угнетении апоптоза, индуцированного ДОКС.
Введение ГА г/х и Кв на фоне повреждения ДОКС приводило к достоверному увеличению количества Ьс1-2-позитивных гепатоцитов соответственно в 7 и 6,3 раза относительно аналогичного показателя в группе контрольной патологии (количество Ьс1-2-позитивных клеток составляло соответственно 3,87 и 3,44%) (таблица). Количество Ьс1-2-позитивных гепатоци-тов в группах животных, которые на фоне ДОКС получали ГА г/х и Кв, уменьшалось соответственно в 1,4 и 1,6 раза по отношению к группе крыс, получавших комбинацию КА+Кв. Вместе с тем, во всех группах, получавших исследуемые объекты в лечебно-профилактическом режиме, количество Ьс1-2-позитивных гепа-тоцитов достоверно отличалось и от показателя интактной группы крыс.
Таким образом, результаты имму-ногистохимического исследования подтвердили индуцирующее влияние док-сорубицина на апоптоз гепатоцитов, что может обусловливаться уменьшением экспрессии антиапоптотического белка Ьс1-2. Исследуемые объекты в разной степени выраженности снижали проапопто-тические воздействия в условиях ДОКС-индуцированного апоптоза. Наиболее эффективным оказалось использование комбинации КА+Кв, при введении которой количество Ьс1-2-позитивных гепатоци-тов, как маркеров экспрессии антиапоп-тотического белка Ьс1-2, увеличивалось в большей степени, чем при введении ее монокомпонентов.
ВЫВОДЫ
1. Внутрибрюшинное введение доксо-рубицина в дозе 20 мг/кг вызывает в печени крыс морфофункциональные нарушения с признаками гипоплазии, обусловленной массовой гибелью гепатоцитов в результате индукции процессов некроза и апоптоза. Проапоптотические свойства доксорубицина отражаются достоверным снижением количества Ьс1-2-позитивных гепатоцитов, что свидетельствует об угнетении экспрессии антиапоптотического белка Ьс1-2.
2. Лечебно-профилактическое введение отдельных производных глюкозамина и их комбинации с кверцетином нивелирует гепатотоксическое действие доксоруби-цина, способствует регрессии патологических изменений в морфоструктуре печени, стимулируя процесс регенерации и уменьшая проявления некроза и апоптоза.
3. Показан антиапоптотический потенциал производных глюкозамина в комбинации с кверцетином в условиях доксорубицин-ассоциированной гепато-токсичности, что отражается достоверно значимым увеличением количества Ьс1-2-позитивных гепатоцитов по сравнению с аналогичным показателем у пораженных животных и свидетельствует об усилении экспрессии антиапоптотического белка Ьс1-2.
4. Наиболее выраженный цитопро-текторный эффект в условиях доксоруби-цин-ассоциированной гепатотоксичности установлен для комбинации глюкозамина гидрохлорида, №ацетилглюкозамина с
кверцетином, что может обусловливаться фармакодинамическим синергизмом ее компонентов.
5. Полученные данные позволяют детализировать представление о механизме действия производных глюкозамина, обусловленном наличием регулирующего влияния на процесс апоптоза в условиях ДОКС-индуцированной гибели клеток.
SUMMARY
I. A. Zupanets, T. S. Sakharova, K. V. Vetrova, K. A. Zupanets STUDY OF THE GLUCOSAMINE DERIVATIVES INFLUENCE ON DOXORUBICIN-INDUCED CELL DEATH IN THE EXPERIMENT The article presents the results of morphological and immunohistochemical study of glucosamine derivatives influence in combination with flavonoid quercetin on the process of doxorubicin-induced liver damage in rats. It was established that the application of intraperitoneal doxorubicin 20 mg/ kg caused a marked degenerative-dystrophic changes in the liver morphostructure, massive death of hepatocytes due to induction of necrosis and apoptosis processes. Proa-poptotic effect of doxorubicin includes its possible influence on the expression of anti-apoptotic bcl-2 protein, which is detected by immunohistochemical decrease of the number of bcl-2-positive hepatocytes. Preventive administration of glucosamine derivatives in combination with quercetin decreases the hepatotoxic effects of doxorubicin, promotes regression of these pathological changes in the liver morphostructure, stimulates the regeneration process and reduces the appearance of necrosis and apoptosis. It was shown the anti-apoptotic potential of glucosamine derivatives in combination with quercetin at the conditions of doxorubicin-associated hepatotoxicity, as reflected by a significant increase of significantly amount of bcl-2-positive hepatocytes compared to the same period in the control animals.
Keywords: glucosamine derivatives, quercetin, doxorubicin, apoptosis, bcl-2-positive hepatocytes.
ЛИТЕРАТУРА
1. Elmore, S. Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death / S. Elmore //
Toxicologic Pathology. - 2007. - Vol.35, № 4. - P. 495-516.
2. Вересов, В. Г. Структурная биология апоптоза / В. Г. Вересов. - Минск: Белорус. наука, 2008. - 398 с.
3. Кондрашева, И. Г. Изучение механизмов резистентности клеток меланомы человека к противоопухолевой терапии: автореф. дис. ... канд. биол. наук: спец. 03.00.04 «Биохимия» / И. Г. Кондрашева. - Москва, 2008. - 22 с.
4. Зупанець, К. О. Дослщження впли-ву композицп на основi кверцетину та похщних глюкозамшу на процеси апопто-зу хондроцш^в в умовах розвитку експе-риментального остеоартриту / К. О. Зупанець, С. К. Шебеко, I. А. Отршко // Л1ки Украши плюс. - 2010. - № 3. - С. 47-50.
5. Зупанец, И. А. Влияние комбинации глюкозамина гидрохлорида с парацетамолом на апоптоз хондроцитов в условиях развития системного стероидного артроза у крыс / И. А. Зупанец, В. А. Туляков, С. К.Шебеко // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2012. - Т. 75, №4. - С. 34-37.
6. Корекщя доксорубщин-шдукова-но! гепатотоксичносп похщними глюкозамшу та !х комбшащями з кверцетином в експеримент на щурах / I. А. Зупанець [та шш.] // Кшшчна фармащя. - 2014. - № 2. - С. 4-9.
7. Ель Аараж, Ахмад. Порiвняльне дослщження кардюпротекторних власти-востей комбшацш кверцетину з похщними глюкозамшу в експеримент / Ахмад Ель Аараж, I. А. Зупанець, С. К. Шебеко // Лки Украши плюс. - 2012. - № 3/4. - С. 23-25.
8. Зупанець, I. А. Вивчення фармако-лопчних властивостей амшоцу^в та !х комбшацш з диклофенаком натрш в умовах моделювання мембраннозно! нефро-патп у лабораторних тварин / I. А. Зупанець, С. К. Шебеко // Фармацевтичний журнал. - 2006. - №1. - С. 92-99.
9. Silymarin modulates doxorubicin-induced oxidative stress, Bcl-xL and p53 expression while preventing apoptotic and necrotic cell death in the liver / N. Patel [et al.] // Toxicology and Applied Pharmacology. - 2010. - Vol. 24. - P. 143-152.
10.Cardioprotective Effects of Glycyr-rhiza uralensis Extract Against Doxorubicin
- induced Toxicity / L. Zhang [et al.] // International Journal of Toxicology. - 2011. -Vol. 30, № 2. - P. 181-189.
11. Семенов, А. Н. Изучение карди-опротекторных свойств нестероидных противовоспалительных средств в ряду производных D-(+)-глюкозамина: дис. ... канд. мед. наук / А. Н. Семенов. - Купавна, 2001. - 198 с.
12. Зупанец, И. А. Экспериментальное обоснование использования глюкозамина и его производных в медицине: дис. ... д-ра мед. наук (в форме научного доклада) / И. А. Зупанец. - Купавна, 1993. - 90 с.
13. European Convention for the Protection of Vertebrate Animals used for Experimental and Other Scientific Purposes
- Strasbourg, 18.Ш.1986.
14. Меркулов, Г. А. Курс патологоги-стологической техники / А. Г. Меркулов.
- М.: Медицина, Ленингр. отд-ние, 1969.
- 424 с.
15. Protective effects of silymarin against doxorubicin-induced toxicity / E. Cecen [et al.] // Asian. Pac. J. Canc. Prev. - 2011. -12(10). - P. 2697 - 2704.
16.Буеверов, А. О. Апоптоз гепатоци-тов и лейкоцитов периферической крови при хронических гепатитах В и С: дис. ... д-ра мед. наук : спец. 14.00.47 «Гастроэнтерология» / А. О. Буеверов. - Москва, 2009. - 126 с.
17. Bcl-2 upregulation after 3-ni-tropropionic acid preconditioning in warm rat liver ischemia / F. Dünschede [et al.] // Shock. - 2008. - doi: 10.1097/ SHK.0b013e31816f6562.
18. Yurtcu, E. Genotoxic and cytotoxic effects of doxorubicin and silymarin on human hepatocellular carcinoma cells / E. Yurtcu, ÖD. i§eri, FI. Sahin // Human & Experimental Toxicology. - 2014. -doi:10.1177/0960327114529453.
Адрес для корреспонденции:
61057, Украина, г. Харьков, ул. Пушкинская, 27, Национальный фармацевтический университет,
кафедра клинической фармакологии и клинической фармации, тел. + 38 (057) 706-30-59, эл. почта: vkv-katya@rambler.ru; Ветрова Е.В.
Поступила 03.11.2014 г.
Рисунки к статье И. А. Зупанец, Т. С. Сахарова, £. В. Ветрова, £. А. Зупанец «Изучение влияния производных глюкозамина на доксорубицин-индуцированную гибель
клеток в эксперименте» (С. 3-88)
а б
Рисунок 1 — Гистологическое строение печени: а - интактных крыс: нормальное состояние паренхимы (х250); б — крыс после введения ДОКС: гепатоциты с разной стадией лизиса ядер, тельце Каунсильмена (стрелка) (х400).
Гематоксилин-эозин
Рисунок 2 - Гистологическое строение печени крыс.
получавших на фоне Д( комбинацию КА+Кв: нормальная структура печеночных балок, отсутствие гемо-динамических расстройств (х200). Гематоксилин-эозин
Рисунок 3 - Вс1-2-позитивные клетки в микропрепаратах
печени. Иммуногистохимия (х150)
Рисунки к статье В. М. Ёршик «Противовирусная активность извлечений лимонника
китайского» (С. 96-100)
а б
Рисунок 2 — Микрофотографии пораженного (а) и нормального (б) монослоя клеток
Рисунки к статье Я. А. Бутко, С. М. Дроговоз, Г. И. Губина-Вакулик, Т. В. Горбач «Динамика уровня провоспалительных цитокинов при ожоговой травме у крыс под влиянием керамидов и их комбинации с декспантенолом» (С. 101-106)
где Группа 1Ь-1а положительных клеток в грануляционной ткани, которая формируется: в группе контрольной патологии (а, б); при лечении кремом «Керамиды» (в); кремом «Декспантенол с керамидами» (г, д); кремом «Бепантен» (е). Иммуногистохимическая реакция с антителами к ТЬ- 1а. Люминесцентная микроскопия х 100 (а, д) или х 600 (б-г, е). Рисунок 3 - Микропрепараты кожи крыс на 9-й день исследования ожоговой травмы
