CC BY
5ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ПРЕПАРАТА йОДВЫСОКОПОЛИМЕРА НА ТКАНИ ПОЧЕК ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ
Бегалиев Ш.С.
Казахский НИИ кардиологии и внутренних болезней, Алматы
MoflBbicoKono^MMep npenapaTbiHbrn SKcnepMMeHTa^flbiK waHbi6ap^ap,qbiH 6eupeK TKaHflapbma
KbmraH TaacupuH M3M^flee
BeranweB IH.C.
lod-high-polymer influence on the renal tissues of experimental animals study
Begaliev Sh.S.
Kazakh scientific-research institute of Cardiology and Internal Diseases
Abstract. lod-high-polymer influence on the renal tissues of experimental animals study is in this article. The research was realization on he-rats. The results discover lack of experimental and control animals kidneys histological structure for sure statistical differences, consequently preparation under test non show toxic influence on kidneys.
йодвысокополимер - препарат, основным действующим веществом которого является органическая форма йода в виде йоддекстрина, как показали экспериментальные исследования, обладающего выраженным противовирусным действием.
Активной субстанцией препарата является йодно-полимерные комплексы, выполняющим роль матрицы, из которой постепенно выделяется активная молекула - йод. Препарат представляет собой непрозрачный и вязкий раствор темно-синего цвета с запахом йода. [1]
Из множества известных йодсодержащих лекарственных средств для парентерального применения предназначены только хиниофон (подкожно и внутримышечно), йодантипирин, раствор Люголя в большом разведении, натрия йодид и ЙДУР (внутривенно). В связи с довольно высокой токсичностью и небольшой эффективностью все эти средства в настоящее время практически не применяют.
В связи с вышеизложенным, мы поставили перед собой цель изучить влияние препарата йо-дополимера на почки.
Материал и методы исследования
Исследования были проведены на белых беспородных крысах-самцах трёхмесячного возраста с исходной массой тела 200 + 20 г. Выбор самцов для исследования был обусловлен тем, что у самок в различные сроки эстрального цикла чувсвитель-ность к различным факторам может меняться, а также возможно попадание в опыт беременных самок.
Животные, отобранные для опыта, отвечали требованиям, предъявляемым к постановке эксперимента (Good Laboratory practice -GLP) [2].
Животные были подобраны по полу, возрасту, массе, получены из одного питомника. При подборе дозы руководствовались рекомендациями о максимально допустимых количествах жидкости для введения в брюшную полость [3], которая для крыс составляет 5 мл.
Выбор дозы препарата для инъекций был определен согласно классификации токсичности химических веществ в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 [4]. Использованные в эксперименте дозы (от минимальной до максимальной) относятся к классу малотоксичных, поскольку при внутрибрюшинном введении препарата ДL 50 (средне смертельная доза) должна быть по расчету более 1250 мг/кг тогда как в нашем исследовании даже максимальная доза в объеме 5 мл на средний вес крысы в 200 г в пересчете 1 кг веса животного значительно ниже указанного значения
Пути введения лекарственных средств, дозы. Препарат вводился животным внутрибрюшинно в различных дозах с разведением в физиологическом растворе, а также в чистом виде:
• животным первой серии опытов ежедневно внутрибрюшинно вводились по 0,06 мл препарата + 3,0 мл физиологического раствора, что превышает, рекомендуемую лечебную дозу в 1,7 раза. Крысы забивались через 5, 10 и 15 дней после начала эксперимента;
• животным второй серии опытов однократно вводили по 0,66 мл препарата + 3,0 мл физиологического раствора, что превышает, рекомендуемую лечебную дозу в 11 раз и забивали через 5 дней после начала введения;
• животным третьей серии опытов однократно вводили по 2 мл препарата + 3,0 мл физиологического раствора, что превышает, рекомендуемую
МЕДИЦИНА
Кыргызстана
лечебную дозу в 33 раза и забили через 10 дней после начала эксперимента;
• животным четвертый серии однократно вводили однократно 5 мл чистого препарата без разведения, что превышает, рекомендуемую лечебную дозу в 83 раза и забили через 15 суток после начала эксперимента
Способ гуманного умерщвления животных после проведения исследований. Декапитацию крыс производили в строго фиксированное время между 9-10 часами утра. Объектом исследования были почки. Кусочки органов фиксировались 10%-ным формалином; обработка полученного материала проводилась по общепринятой методике [3]. Препараты окрашивались гематоксилин - эозином. Изучение и фотосъёмку проводили с помощью микроскопа МБИ- 6.
Параллельно с каждой группой животных забивались контрольные крысы. Контрольные животные делились на 2 группы: интактные животные и животные, которым вводился физиологический раствор в тех же объемах, что и лекарственные препараты согласно методическим рекомендациям Фармакологического государственного комитета [2].
Результаты исследования.
Общее состояние животных в группе чистого контроля до вскрытия было удовлетворительное. Вес не увеличился, шёрстный покров не изменился, особых отклонений в поведении не наблюдалось.
Гистологически корковое вещество почки представлено сосудистыми клубочками и извитыми канальцами, которые выстланы цилиндрическими эпителиальными клетками с розовой цитоплазмой и округлым ядром. Ядра в канальцах располагаются на одном уровне. Клубочки представлены сосудистыми капиллярами. Эндотелиальные клетки уплощены, их границы четкие, базальная мембрана тонкая. Мезангиальные клетки треугольного строения. Внутренний листок капсулы тонкий. Наружный листок капсулы Шумлянского - Боумена выстлан призматическим, кубическим эпителием. Эпителий канальцев мозгового слоя однослойный кубический. Сосуды различного калибра большей частью находятся в спавшемся состоянии. Основу коркового вещества на срезе представляют, расположенные в различных направлениях проксимальные извитые канальцы. Они характеризуются небольшим диаметром, оксифильно окрашенной цитоплазмой и наличием щеточной каемки на апикальном полюсе клеток. Дистальные канальцы, выстланы кубическим эпителием с прозрачной цитоплазмой, щеточная каемка у них отсутствует. В мозговом веществе почки хорошо видно расположение многослойного переходного эпителия лоханки.
Общее состояние крыс первой серии, которым в течение 5, 10,15 дней ежедневно вводили по 0,06 мл препарата + 3,0 мл физиологического раствора,
ежемесячный научно-практическии медицинским журнал
было хорошее, шерстный покров ровный, мест облысения не видно.
При изучениии ткани почек на 5 день структура органа сохранена, в корковом слое клубочки и извитые канальцы имеют обычное строение (рис. 1).. Однако в отдельных участках нарушается компактность расположения проксимальных и дистальных извитых канальцев.
Рисунок 1. Корковый слой почки на 5 день введения препарата. Ув. х 100
У крыс исследованных на 10 день введения препарата структура паренхимы почек сохраняется. В отдельных участках, в зоне выраженного коркового слоя наблюдается (рис. 2) дискомплек-сация строения.
Рис. 2. Сосудистые петли клубочков почки на 10 день ведения препарата в повышенной лечебной дозе. Ув.х 100
Эпителий извитых канальцев местами с явлениями зернистой дистрофии. Гидропической дистрофии не отмечается. Клубочки с четко кон-турированными сосудистыми петлями.
При гистологическом исследовании почек у первой группы крыс на 15 сутки в целом изменения также незначительные. Выраженной дистрофии паренхимы почки не отмечено. Границы клеток эпителия извитых канальцев плохо различимы. Клубочки полнокровны.
В мозговом слое происходит расширение
просвета прямых канальцев, эпителий уплощается (рис. 3). Инфильтративная реакция в строме отсутствует.
У животных третьей серии, получивших однократно повышенную в 33 раза дозу препарата физиологических отклонений не обнаружено. Все подопытные крысы остались живы. На 10 день исследования в проксимальных и дистальных канальцах почки обнаружена картина гидропи-ческой дистрофии эпителия. Они представлены аморфными розовыми массами, местами лишены ядер (рис. 5).
Рис. 3. Гистоструктура почки на 15 день введения препарата в повышенной лечебной дозе.
Ув. х 200
Следовательно, у крыс первой серии в течение 5, 10, 15 дней, получавших повышенную в 1,7 раза рекомендуемую лечебную дозу препарата, при патоморфологическом изучении почек не показало особых изменений. Физиологические отклонения не отмечены. Слабость, недомогание в поведении крыс не обнаружены, общее состояние удовлетворительное, вес не уменьшился, ели хорошо, зрачки и шёрстный покров в норме.
У второй серии экспериментальных животных, получавших однократно повышенную в 11 раз дозу препарата общее состояние оставалось нормальным, внешне крысы выглядели здоровыми. На микропрепаратах почек крыс исследованных на 5 день наблюдалось увеличение по сравнению с первой серией явлений гидропической дистрофии, расширения просвета прямых канальцев и собирательных трубочек, нарушений структуры микроциркуляторного русла (рис. 4), однако изменения носили локальный характер и не были резко выраженными. Морфологическое изучение других органов на гистологических препаратах также не показало существенных деструктивных изменений.
Рис. 5. Отёчность эпителия канальцев коркого слоя у крыс 3 серии на 10 день опыта. Ув. х 200
У животных четвертой серии, получивших однократно повышенную в 83 раза дозу препарата в чистом виде падёжа не отмечено. Животные были вялыми, шерсть потускнела, аппетит уменьшился. Гистологически обнаружено резкое полнокровие сосудов микроциркуляции, местами гиалиново-капельная, местами гидропическая дистрофия и фокусный некроз эпителия. Строма отечная, инфильтрированная лимфоцитами (рис. 6).
Рис. 4. Расширенние канальцев мозгового слоя почки у крыс 2 серии опытов на 5 сутки. Ув. х 100
Рис. 6 Дистрофия эпителия канальцев, лимфо-лейкоцитарная инфильтрация стромы у крыс 4 серии опытов. Ув. х 180
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В результате проведения комплексного макро- и микроскопического исследования почек крыс при введении различных доз препарата обнаружены
МЕДИЦИНА
Кыргызстана
различные гистологические изменения в зависимости от дозы и срока воздействия препарата. Введение препарата крысам, ежедневно в течение 5, 10 и 15 дней внутрибрюшинно в дозе 0,06 мл +3,0 мл физиологического раствора, превышающей рекомендуемую лечебную дозу в 1,7 раза физиологические и морфологические показатели не отличались от нормы. В почках наблюдалась гиперемия сосудов, которая приводила к стимуляции кровообращения. В почках особых изменений не отмечено. Слабости, недомогания, изменения поведения у крыс не отмечено, общее состояние нормальное, общий вес, зрачки и шёрстный покров в норме, физиологических отклонений не наблюдалось. Таким образом, у животных 1 серии все физиологические и морфологические показатели были сохранены, изменений нет.
Проведенное гистологическое исследование внутренних органов 2 серии экспериментальных животных, которым в течение 5 дней, однократно вводили по 0,66 мл препарата + 3,0 мл физиологического раствора, превышающий лечебную рекомендуемую дозу в 11 раз, в почках особых изменений не выявило. у крыс второй группы, несмотря на повышенную дозу, физиологических отклонений не обнаружено. Общее состояние нормальное, внешне крысы выглядели здоровыми.
Крысы 3 серии, однократно получавшие препарат 2 мл + 3,0 мл физиологического раствора и забитые на 10 день, несмотря на превышение рекомендуемой дозы препарата в 33 раза, тяжёлых патологических и физиологических отклонений не имели. Морфологический анализ почек показал лишь незначительные изменения.
Гистологическое исследование крыс 4 серии позволило сделать заключение, что использован-
ежемесячныи научно-практическии медицинским журнал
ная дозировка чистого препарата без разведения, превышающая лечебную рекомендуемую дозу препарата в 83 раза вызывает в почках очаговый некроз эпителиальных клеток.
Несмотря, на повышенную дозу препарата, введённого в чистом виде, падёжа не обнаружено, тем не менее, отмечалось тусклость шерстного покрова и понижение двигательной активности.
По литературным данным [4] согласно ГОСТ 12.1.007-76 токсичность химических веществ, при внуртибрюшнном введении определяется по следующей шкале:
- чрезвычайно токсичные - DL50 = 4 мг/кг
- высокотоксичные - DL50 = 4-40 мг/кг
- умеренно токсичные - DL50 = 40-1250 мг/кг
- малотоксичные - DL50 более 1250 мг/кг
В нашем опыте при введении 5 мл чистого препарата крысам массой 200 г, что превышает малотоксичную дозу в 20 раз , ни одна крыса не пала.
Таким образом, проведённые морфологические исследования показали, что данный препарат является нетоксичным.
Литература:
1. Свирская Е. Йодсодержащие препараты // Журнал «9 месяцев».-2008, № 2, с. 11-14
2. Доклинические испытания лекарственных средств (методические рекомендации). Фармакологический государственный комитет. Алматы, 1997. - 38 с.
3. Барышников И.И., Колесников С.И. Токсикологическаяя оценка новых химических веществ. Изд. Иркут. уни-вер.1992. 1 часть - 154 с., 2 часть - 137с.
4. Березовская И.В. Классификация химических веществ по параметрам острой токсичности при парентеральных способах введения //Химико-фармацевтический журнал. 2003, №3, с.32-34.
