CC BY
34
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
Иммунологические методы Immunological methods
ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ИММОБИЛИЗАЦИИ НА БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ФЕРМЕНТОВ АНТИОКСИДАНТНОЙ СИСТЕМЫ И ПУРИНОВОГО МЕТАБОЛИЗМА
Александров А.В., Шилова Л.Н., Алехина И.Ю., Александрова Н.В., Емельянов Н.Н., Бенедицкая Е.В., Емельянова О.И.
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной ревматологии», Волгоград, Россия
Введение. Изучение воспалительных ревматических заболеваний (РЗ) привело к раскрытию важной роли ферментов антиоксидантной системы (АОС) и пуринового метаболизма (ПМ) в патогенезе системной красной волчанки (СКВ) и ревматоидного артрита (РА). Образование аутоантител (Ат) к аутоантигенным структурам, в том числе и ферментам, в результате свободнорадикальных реакций может являться одной из возможных причин развития функциональной недостаточности энзимов при данных патологиях. Расширение спектра Ат при РЗ возможно при переводе растворимых ферментов в нерастворимую форму с сохранением их биологических свойств.
Цель и задачи. Изучение влияния метода эмульсионной полимеризации на растворимые биополимеры (ферменты АОС и ПМ) для использования их в качестве антигенной матрицы при создании антигенных наносистем (АНС).
Материалы и методы. В качестве антигенов использовали коммерческие препараты (Sigma, США) основных ферментов АОС и ПМ: супероксиддисмутаза (СОД, Cat. № S 9636), глутатионредуктаза (ГР, Cat. № G 3664), каталаза (Кат, Cat. № C 3556), ксантиноксидаза (КО, Cat. № Х 2252), а также аденозиндезаминаза (АДА, Cat. № А 5043), 5'-нуклеотидаза (5-НТ, Cat. № N 5880), пурин-нуклеозидфосфорилаза (ПНФ, Cat. № N 3514), гуанин-дезаминаза (ГДА, Cat. № G 5752). АНС с иммобилизиро-
ванным в их структуру антигеном (ферментом) получали методом эмульсионной полимеризации в потоке газообразного азота (Гонтарь И.П. и соавт., 2002 г.).
Результаты. Получены АНС, представляющие собой двойные полиакриламидные гранулы правильной сферической формы с размером частиц от 10 до 100 мкм и средним диаметром гранул 55±6,8 мкм (при соотношении полимерный носитель: железо 2:1, в пересчете на сухую массу). Процедура иммобилизации ферментов не вызывала изменения их биологических свойств (различия во всех случаях недостоверны, р < 0,05) (см. табл.).
Следует отметить, что включение фермента в пространственную решетку полиакриламидного геля, составляющего основу АНС, (иммобилизированная форма) придает антигену (ферменту) новые свойства, благодаря которым он приобретает определенные преимущества перед растворимой формой. Такой метод приводит к возникновению незначительных конформационных изменений, сохраняющих активность фермента, но, в то же время, способствующих, например, экспрессии гидрофобных участков молекулы энзима, содержащих «скрытые эпитопы». Данное обстоятельство способно оказать существенное влияние на повышение чувствительности иммуноферментного метода при определении антител к ферментам в сыворотке крови больных РЗ. Кроме того, полученные нерастворимые формы антигенов (энзимов) возможно адаптировать для определения антител к растворимым энзимам с помощью метода непрямой имму-нофлюоресции с использованием коммерческих люми-несцирующих сывороток.
Заключение. Перевод растворимых биополимеров (энзимов АОС и ПМ) в нерастворимую форму методом эмульсионной полимеризации позволяет сохранить их биологические свойства и делает АНС универсальными для использования в различных иммунологических методах диагностики РЗ.
ТАБЛИЦА. ВЛИЯНИЕ ИММОБИЛИЗАЦИИ НА БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ФЕРМЕНТОВ (К ТЕЗИСАМ АЛЕКСАНДРОВА А.В. И ДР.)
Фермент Ферментативная активность
Иммобилизированная форма Растворимая форма
СОД, Ед 37,64±0,12 38,06±0,72
ГР, Ед 120,1 ±0,83 122,4±0,79
КАТ, мКАТ/л 25,15±3,97 24,42±4,06
КО, мкмоль/л/мин 4,06±2,65 3,92±2,74
АДА, Ед/мл 58,19±5,22 59,47±4,91
5'-НТ, ЕД/л 38,69±4,12 41,85±5,44
ПНФ, мкмоль/л/мин 20,99±2,82 22,14±2,71
ГДА, МЕ/л 27,55±3,67 28,17±3,46
