CC BY
40
синтез IFN-y составил соответственно 47,9(39,8;59,9) и 62,3(54,5;70,1) пг/мл (p>0,05).
При анализе результатов обращает на себя внимание реципрокный характер концентрации изученных цитокинов у больных I и II групп. В крови лиц из группы с благоприятным течением заболевания (I) концентрация IFN-y достоверно выше, а концентрация IL-4 соответственно, ниже, чем в крови больных II группы. Учитывая функциональный антагонизм данных цитокинов, проявляющийся во взаимном торможении их физиологических эффектов, а также то, что они сдвигают диф-ференцировку наивных Th0 в направлении Th1 (IFN-y) и Th2 (IL-4), можно говорить о том, что во II группе больных наблюдается развитие аллергического воспаления [3]. Известно, что IL-4 является одним из главных регуляторов аллергических реакций и аллергического воспаления в тканях, так как помимо индукции синтеза IgE он является ростовым фактором для базофилов, тучных клеток и эозинофилов, попутно активируя их рецепторный аппарат. Это заключение подтверждается тем наблюдением, что при отсутствии достоверных различий между обследованными группами по величине Ig E in vivo в результате проведенного лечения в I группе больных концентрация его достоверно снизилась (p<0,05), а во II группе - возросла (p<0,05).
Изучение культур мононуклеаров, выделенных из крови больных обеих групп, показало, что в отсутствие стимуляции концентрации изученных цитокинов различаются недостоверно (p>0,05). В то же время при стимуляции ФГА in vitro концентрация IL-4 у больных I группы достоверно ниже (p<0,05), чем у больных с неблагоприятным течением заболевания, тогда как различия в концентрации IFN-y недостоверны (p>0,05). Возможно, объяснение этого факта кроется в особенностях механизмов стабильности клонов Th1 и Th2. Известно, что действие индукторов дифференцировки наивных Th0 в направлении Th2 доминирует над действием индукторов в направлении Th1 [3]. Кроме того, дифференцировка наивных Th0 в клон Th2 является необратимой, тогда как клон Th1 может регрессировать в Th2. Вероятно, такой результат исследований in vitro связан с отсутствием в культуральной среде дендритных клеток, являющихся основным продуцентом IL-12, запускающего каскад стимуляции синтеза клона Th1.
Таким образом, результаты проведенного исследования убедительно показали у больных с неблагоприятными результатами стандартной терапии острого нефрита наличие в патогенезе заболевания компонентов аллергического воспаления, что может оказать существенное воздействие на разработку новых, более эффективных схем терапии данного заболевания.
ЛИТЕРАТУРА
1. Алиев Р. А. Роль этиологических и других факторов в развитии хронической почечной недостаточности // Нефрол. и диализ. - 2001. - № 3.- С. 358-364.
2. Калюжина Е. В., Гейниц О. А, Калюжин В. В., ПакЮ. Д. Состояние иммунного гемостаза у больных хронической почечной недостаточностью // Клиническая медицина. - 2006.- № 11. - С. 60-63.
3. Кетлинский С. А, Симбирцев А. С. Цитокины. - СПб: «Фолиант», 2008. - 552 с.
4. МанжосА. П., Панкратов К. Д., Бабков В. А. Динамика изменений показателей иммунного статуса у больных с хроническими нарушениями уродинамики и хронической почечной недостаточностью // Сборник трудов VIII Ежегодного Санкт-Петербургского нефрологического семинара. - СПб, 2000. - С. 183-184.
5. Фрейдлин И. С. Паракринные и аутокринные механизмы ци-токиновой иммунорегуляции // Иммунология. - 2001. - № 5. - С. 4-7.
6. Чупрасов В. Б. Программный гемодиализ. - СПб, 2001. - 268 с.
7. Atta A. M., Sousa C. P., Carvalho E. M. and Sousa-Atta M. L. B. Immunoglobulin E and systemic lupus erythematosus // Braz J Med Biol Res. - October 2004. - Vol. 37 (10). - P. 1497-1501.
8. Biagini R. E, Smith J. P., Sammons D. L., Mackenzie B. A. and Parks C. G. Elevated serum Ig E concentrations in systemic lupus erythematosus are related to history of childhood allergy, asthma, and hives // Journal of Allergy and Clinical Immunology. - February 2008. -Vol. 121, Issue 2, Supplement 1. - P. 228.
9. Rambert J., Mamani-Matsuda M., Moynet D., et al. Molecular blocking of CD23 supports its role in the pathogenesis of arthritis // PLoS ONE. - 2009. - № 1. - P. 4834.
10. Robertson M. R., Potter E. V., Roberts M. L., Patterson R. Immunoglobulin E in renal disease // Nephron. - 1999. - № 16. -P. 256-271.
11. Rutkowski B. Changing patient of end-stage renal disease in Central and Eastern Europe // Nephrol. Dial. Transplant. - 2000. -№ 15. - P. 156-160.
Поступила 15.05.2009
М. Н. ФУФЛЫГИНА
ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ЭЛЕКТРОАКТИВИРОВАННЫХ ВОДНЫХ РАСТВОРОВ НА СИСТЕМУ ГЕМОСТАЗА
Кафедра фармакологии ГОУ ВПО Воронежской государственной медицинской академии им. Н. Н. Бурденко Росздрава, ЦНИЛ ВГМА, Россия, 394000, г. Воронеж, ул. Студенческая, 10. E-mail: maria6996@rambler.ru
В работе исследовано влияние электроактивированных водных растворов на различные звенья системы гемостаза. Прием внутрь католита и анолита вызывает повышение свертываемости крови, что особенно выражено при дозированном их назначении. При моделировании коагулопатий антикоагулянтами прямого и непрямого действия эффекты ЭАВР имеют тенденцию к повышению свертывающей активности, более выраженной при варфарининдуцированной гипокоагуляции.
Ключевые слова: электроактивированные водные растворы, система гемостаза.
M. N. FUFLIGINA
STUDY OF ELECTROACTIVATED WATER SOLUTIONS INFLUENCE ON THE SYSTEM OF HEMOSTASIS
Voronezh N. N. Byrdenko state medical academy, chair of pharmacology, Russia, 394006, Voronezh, Studencheskay st., 10. E-mail: maria6996@rambler.ru
The influence of electroactivated water solutions on different sections of hemostasis system was investigated in the article. It was determined that taking catolyte and anolyte orally caused the increase of blood coagulability which was clearly marked in their dosed administration. In designing of coagulopathies by the anticoagulants of direct and indirect action the effects of EAWS had the tendency to increase the coagulating activity which was more evident in varfarininduced hypocoagulation. After the study of external hemostasis it was revealed that anolyte and catolyte possessed hemostatic actions.
Key words: electroactivated water solutions, system of hemostasis.
Введение
Исследование системы гемостаза имеет первостепенное значение для диагностики различных видов кровоточивости, тромбофилических состояний и процессов дис-семинированного внутрисосудистого свертывания крови, в том числе при критических состояниях. Динамический контроль за гемостазом необходим также при проведении антитромботической терапии в процессе консервативного и хирургического лечения сердечно-сосудистых заболеваний, ишемий и инфарктов органов, большого числа акушерских осложнений и болезней новорожденных. Уже этот далеко не полный перечень ситуаций, при которых очень важен контроль за состоянием системы гемостаза, с полной очевидностью свидетельствует о том, что в современных условиях не могут считаться сколько-нибудь полноценными обследование и лечение больных без контроля за состоянием системы гемостаза [2].
В лаборатории кафедры фармакологии ГОУ ВПО ВГМА им. Н. Н. Бурденко Росздрава (заведующий кафедрой - з. д. н. РФ, д. м. н. проф. К. М. Резников) в течение ряда лет ведутся исследования фармакологических свойств электроактивированных растворов (ЭАВР). Электрохимическая активация воды - совокупность электрохимического и электрофизического воздействия на воду в двойном электрическом слое (ДЭС) электрода электрохимической системы при неравномерном переносе заряда через ДЭС электронами и в условиях интенсивного диспергирования в жидкости образующихся газообразных продуктов электрохимических реакций [3].
Поручением Правительства РФ от 15 января 1998 г. даны рекомендации использовать указанные технологии в медицине, сельском хозяйстве, промышленности. Католит (рН 8,2-9,3, окислительно-восстановительный потенциал (ОВП) минус 480-520 МВ) ускоряет биопроцессы в организме, способствует усвоению пищи, обмену веществ, улучшает аппетит, ускоряет прохождение пищи, придает энергию, бодрость [10]. Анолит (рН 6,6-7,2 и ОВП плюс 700-750 МВ) обладает бактерицидным, дезинфицирующим действием [10]. Спектр противомикробного действия представлен в работах Г. П. Беликова [4], Д. С. Гительмана [6] и др. Он замедляет биопроцессы в организмах человека и животных, снижает боли в суставах рук и ног, т. к. обладает растворяющим действием [10]. Анолит используется для дезинфицирования белья, бинтов, одежды, обуви, различной тары [10].
Отсутствие сведений о влиянии ЭАВР на процессы гемостаза обосновало цель нашего исследования: ус-
тановление возможности влияния католита и анолита на систему гемостаза.
Методика исследования
Исследования проводили на 148 кроликах-самцах породы шиншилла массой 2,5-3,5 кг. Содержание животных соответствует положениям Приказа МЗ РФ от 19.06.2003 года № 267 «Об утверждении правил лабораторной практики». При проведении экспериментов учитывались требования Комиссии по проблеме этики отношения к животным Российского национального комитета по биоэтике при Российской академии наук и этические нормы, признанные мировым сообществом, изложенные в «Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с использованием животных»,опубликованных в 1985 году Советом международных медицинских организаций. На первом этапе были исследованы показатели гемостаза при приеме ЭАВР внутрь в свободном доступе, а также при дозированном введении анолита и католита 3 раза в день per os из расчета 1 мл/кг массы тела. Все животные были распределены на 2 группы: группа анолита и группа католита. Оценку проводили по следующим показателям: активированное частичное (парциальное) тромбопластиновое время (АЧТВ), тромбиновое время (ТВ), протромбиновое время, международное нормализованное отношение (МНО), протромбин по Квику, фибриноген [2], время кровотечения по Дьюку [2, 9], время свертывания крови (методика Lee, White) [1]. У интактных животных забор крови осуществляли из краевой вены уха кроликов методом свободного падения капель [5] и затем на 7-е и 14-е сутки. Кровь смешивают с 3,8%-ным раствором цитрата натрия в соотношении 9:1. Стабилизированную кровь центрифугируют при 1000 об./мин (140-160 g) в течение 5-7 мин для получения плазмы, богатой тромбоцитами. Богатую тромбоцитами плазму центрифугируют при 3000-4000 об./мин (1200-1400 g) в течение 15 мин для получения бедной тромбоцитами плазмы. Тест проводили на коагулометре Merlin MC-1 (Германия). На втором этапе изучалось влияние ЭАВР при моделированной коагулопатии на кроликах. У интактных кроликов проводили забор крови. Далее животные были распределены на 3 группы: первая получала питьевую воду, вторая - католит, третья - анолит без ограничения доступа. При моделировании варфарининдуцированной коагуло-патии кроликам в течение 5 дней перорально вводили растворенный в физиологическом растворе порошок
в дозе 0,06 мг/кг массы тела [8]. На 6-е сутки проводили забор крови. При моделировании гепарининдуцирован-ной коагулопатии животные в течение 7 суток получали ЭАВР без ограничения доступа. На 8-е сутки кроликам вводили внутривенно гепарин 100 МЕ/кг массы тела и через 60 минут производили забор крови. При моделировании викасолиндуцированной коагулопатии животным на 4-е, 5-е и 6-е сутки приема ЭАВР вводили внутримышечно викасол из расчета 1,5 мг/кг массы тела. Забор крови проводили на 7-е и 14-е сутки от начала приема анолита и католита. Полученные данные обрабатывались статистически с применением непараметрического критерия Т-Уилкоксона и Манна-Уитни [7].
Результаты исследования
На первом этапе работы было изучено влияние ЭАВР при введении внутрь на показатели гемостаза лабораторных животных. На 7-е сутки приема ЭАВР без ограничения доступа к ним происходит повышение показателя АЧТВ на 40% (р<0,05) при приеме анолита и на 56% (р<0,05) при приеме католита и увеличение количества фибриногена в крови на 38,5% (р<0,05) и на 31% (р<0,05) соответственно. Через 14 дней приема анолита выявлено достоверное увеличение показателя АЧТВ на 30% (р<0,05), при приеме католита - на 28% (р<0,05), а количество фибриногена повысилось соответственно на 38,5% (р<0,05), и на 18% (р<0,05). Время свертывания крови достоверно не меняется. Время кровотечения при свободном доступе животных к ЭАВР на 7-е сутки уменьшается на 41% (р<0,01) при введении анолита и на 22% (р<0,01) при введении католита. Объем крово-потери уменьшился на 54% (р<0,01) и на 45% (р<0,01) соответственно. На 14-е сутки в группе, принимающей анолит, время кровотечения снижается на 67% (р<0,01) и в группе, принимающей католит, - на 59% (р<0,01), также объем кровопотери снизился на 72% (р<0,01) и 73% (р<0,01) соответственно.
При дозированном приеме кроликами ЭАВР на 7-е сутки снизились показатели тромбинового времени на 39% (р<0,05) и МНО на 29% (р<0,05) при введении ано-лита, а при введении католита уменьшились показатели тромбинового времени и МНО на 41% (р<0,05) и на 26% (р<0,05) соответственно. Повысились показатель АЧТВ при приеме анолита на 62% (р<0,05) и количество фибриногена на 94% (р<0,05). На 14-е сутки при введении анолита повышается показатель АЧТВ на 75% (р<0,05) и на 56% (р<0,05) при введении католита, при этом показатель тромбинового времени снижается на 49% (р<0,05) и на 42% (р<0,05) соответственно. Количество фибриногена повышается в 1,5 раза (р<0,05) при приеме анолита и на 68% (р<0,05) при приеме католита.
Далее проводили моделирование гипо- и гиперкоа-гуляционных состояний. При моделировании варфари-ниндуцированной коагулопатии было установлено, что при приеме ЭАВР внутрь без ограничения доступа снижается показатель протромбинового времени на 31,5% (р<0,05) в группе, принимающей анолит, и на 59% (р<0,05) в группе, принимающей католит, МНО также снижается на 37% (р<0,05) и на 47% (р<0,05) соответственно. Показатель «тромбиновое время» при приеме анолита уменьшился на 28% (р<0,05) и католита - на 21% (р<0,05), количество фибриногена соответственно снизилось на 21% (р<0,05) и на 35% (р<0,05). Показатель «протромбин по Квику» увеличился при приеме католита в 5 раз (р<0,05). При введении анолита увеличился показатель АЧТВ на 41% (р<0,05).
При моделировании гепарининдуцированной коагулопатии у кроликов, принимавших ЭАВР, были выявлены следующие изменения: показатель АЧТВ уменьшился на 29% (р<0,05) при введении анолита и на 25% (р<0,05) при введении католита. Показатель «тромбиновое время» возрос в 16 раз (р<0,05) и в 20 раз (р<0,05) соответственно.
В опытах с викасолиндуцированной коагулопатией на фоне приема католита на 7-е сутки после прекращения введения викасола выявлено уменьшение МНО на 13% (р<0,01). В группе, принимающей анолит, на 4-е сутки введения викасола установлено, что повысились МНО на 31% (р<0,01) и показатель АЧТВ на 22% (р<0,01). К 7-м суткам кровь при заборе свернулась у 83% кроликов.
Обсуждение
Результаты проведенных исследований позволили заключить, что прием внутрь ЭАВР вызывает повышение свертываемости крови, что особенно выражено при дозированном их назначении из расчета 1 мл/кг массы тела. При моделировании коагулопатий антикоагулянтами прямого и непрямого действия эффекты анолита и католита имеют тенденцию к повышению свертывающей активности, более выраженной при варфаринин-дуцированной гипокоагуляции. При моделировании коагулянтом непрямого типа действия коагулопатии под влиянием анолита происходят некоторое снижение свертываемости крови сразу после введения викасола и резкое ее повышение на 7-е сутки. Католит же, по-видимому, пролонгирует викасолиндуцированную гиперкоагуляцию.
ЛИТЕРАТУРА
1. Баркаган З. С. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза / З. С. Баркаган, А. П. Момот. - М.: Ньюдиамед. -2001.
2. Баркаган З. С. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза / З. С. Баркаган, А. П. Момот. Издание 3-е. -М.: Ньюдиамед. - 2008. - 292 с.
3. Бахир В. М. Некоторые аспекты получения и применения электрохимически активированного раствора - анолита АНК /
B. М. Бахир, В. И. Вторенко, Ю. Г. Задорожный, Б. И. Леонов и др. // Электрохимическая активация в медицине, сельском хозяйстве, промышленности. III Международный симпозиум. - М., 2001. - С. 3-25.
4. Беликов Г. П. Электрохимическая активация - медицинская технология будущего / Г. П. Беликов, Н. В. Локтионова, В. М. Мельникова и др. // Кремлевская медицина. Клинический вестник. -2000. - № 2. - С. 1-5.
5. Васильева Т. М. Влияние дофаминамидов полиненасыщенных жирных кислот на свертывающую систему крови и мозговое кровообращение / Т. М. Васильева, Г. Н. Петрухина, В. А. Макаров // Экспер. и клин. фармакол. - 2002. - Т. 65, № 6. - С. 41-45.
6. Гительман Д. С. Антимикробные свойства электроактивированного раствора анолита // «МИС-РТ». - Сборник № 6. - 1998. -
C.118-120.
7. Гублер Е. В. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях / Е. В. Гублер, А. А. Генкин. - Л.: «Медицина», 1973. - 144 с.
8. Дональд К. Пламб Фармакологические препараты в ветеринарной медицине. Пособие. - М.: Акваризм, 2002. - 857 с.
9. Кассирский И. А.Клиническая гематология / И. А. Кассир-ский, Г. А. Алексеев. Издание 4-е. - М.: Медицина, 1970. - 802 с.
10. Прилуцкий В. И. Электрохимически активированная вода: аномальные свойства, механизм биологического действия / В. И. Прилуцкий, В. М. Бахир. - М.: ВНИИМТ. - 1995. - 228 с.
Поступила 22.05.2009
