CC BY
54
B. V. BALACHEVSKIY, A. N.KURZANOV, A. A. SLAVINSKIY
INFLUENCE DALARGIN ON IS FUNCTIONAL-METABOLIC ACTIVITY NEUTROPHILS OF BLOOD AT THE ACUTE EXPERIMENTAL PANCREATITIS
Hyperactivity neutrophil leukocytes can promote to additional damage of a pancreas at a acute pancreatitis. By us it is established, that dalargin normalizing an effect has on activity neutrophils, reduces damage, and strengthens reparation of pancreas.
А. Д. БРЕЗДЫНЮК, К. М. РЕЗНИКОВ
ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ЭЛЕКТРОАКТИВИРОВАННЫХ ВОДНЫХ РАСТВОРОВ НА ЭМБРИОН И ПЛОД
Кафедра фармакологии ГОУ ВПО ВГМА им. Н. Н. Бурденко Росздрава
Введение
В настоящее время среди различных факторов внешней среды, способных вызывать отклонения в развитии плода, важная роль принадлежит лекарственным веществам. В отечественной литературе содержится обширный список лекарственных веществ для лечения в неонатальном периоде детей [10]. В то же время в литературе отсутствуют публикации о результатах рандомизированных многоцентровых испытаний, в которых была бы доказаны клиническая эффективность, полезность и, главное, безопасность такой терапии у новорожденных [8].
В лаборатории кафедры фармакологии ГОУ ВПО ВГМА им. Н. Н. Бурденко Росздрава (заведующий кафедрой - проф. К. М. Резников) в течение ряда лет ведутся исследования фармакологических свойств электроактивированных растворов (ЭАВР), в частности, католита с pH =8,8-9,2 и ОВП от -450 до -600 мВ, обладающего электродонорными свойствами и способностью восстанавливать клеточные мембраны, и анолита с pH =6,45-7,35, ОВП от +500 до +1100 мВ, обладающего сильно выраженными бактерицидными свойствами за счет наличия в нем сильных окислителей и свободных радикалов [7]. Из литературных данных известно широкое применение ЭАВР в медицине [1, 6]. Однако практическое использование анолитов и католитов значительно опережает их научное изучение, особенно с фармакологических позиций. Особое значение для их дальнейшего внедрения в практическую медицину имеют знания о действии этих растворов на эмбрион, плод и последующее развитие новорожденного. Нами было проведено такое исследование.
Методика исследования
Исследования выполнены на 18 самках-кроликах массой 2500 г, которым в течение 6 дней внутривенно вводили ЭАВР, и 473 белых беспородных крысах массой 180-200 г, которые ежедневно получали ЭАВР в течение 3 половых циклов без ограничения доступа (283 самки и 190 самцов). Все животные были отобраны по массе и возрасту и перед экспериментами проходили карантинный период продолжительностью 21 день, после этого животных распределяли на 3 равные группы: 1-я (К) - получавшие католит в течение
3 половых циклов при свободном доступе, 2-я (А) -получавшие анолит, 3-я (В) - контрольные животные, получавшие питьевую воду. Содержание и кормление животных проводились в соответствии с «Санитарными правилами по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев)» (ГОСТ Р 50258-92). При проведении эксперимента на животных были соблюдены все этические правила и нормы по отношению к ним [5]. Процесс декапитации крыс проводили под общим ингаляционным наркозом, убедившись, что у животного отсутствует болевая чувствительность и утрачено сознание.
В своей работе мы использовали методы определения острой токсичности [2]. Изучение влияния электроактивированных водных растворов на репродуктивную систему определяли на основе морфологического и функционального анализа состояния яичников, цитологического исследования вагинального содержимого, иммунофлюоресцентного метода определения уровня ЛГ и эстрадиола в плазме крови самок-кроли-ков. Проводились оценка способности к оплодотворению и зачатию, наблюдение за беременностью и родоразрешением у крыс, за физическим и нервнопсихическим развитием детенышей, висцеральное исследование органов по Стейплсу [9].
Достоверность изменений внутри групп устанавливали с использованием критерия Стьюдента между группами с применением непараметрического критерия Т-Вилькоксона. Для оценки взаимосвязи между некоторыми качественными признаками пользовались четырехпольной таблицей и критерием X2 [3].
Результаты исследования
При исследовании острой токсичности католита и анолита при различных способах введения (подкожном, внутрибрюшинном, пероральном при свободном доступе в качестве растворов, замещающих питье) показано, что они не обладают токсическими свойствами при однократном введении, то есть не было гибели даже при введении больших доз ЭАВР. В дальнейших экспериментах, где ЭАВР использовали внутрь у самок длительностью до 30 суток, у самцов до 70 суток, также не отмечалось никаких токсических проявлений их действия.
При анализе полового цикла и его отдельных фаз
УДК 618-055.2:541.135.001.6
Репродуктивная способность крыс при ежедневном введении внутрь электроактивированных растворов (количество животных)
Показатели Группы
Самки Самцы
Вода Католит Анолит Вода Католит Анолит
Всего самок 28 28 29 18 22 21
Обсемененных 23 19 19 12 22* 21*
Беременных 9 11 15* 6 13 17*
Индекс плодовитости 82,1% 67,9% 65,5% 66,7% 100%* 100%*
Индекс беременности 39,1% 57,9% 78,9%* 50% 59,1% 81% *
* — р<0,05 по отношению к контролю.
у самок крыс из групп К и А цитологическая картина влагалищного эпителия на разных стадиях полового цикла не отличалась от самок контрольной группы; у животных из группы К продолжительность эстрального цикла увеличилась на 8,8%, у животных из группы А -на 19,4%.
Морфологическое исследование яичников крыс показало, что во всех 3 группах имеет место нормальный рост фолликулов. Паренхима яичника состоит из фолликулов и желтых тел, находящихся на разных стадиях развития. Строма - из рыхлой волокнистой соединительной ткани, в корковом слое преобладали фибробласты и фиброциты. Различий на гистологическом уровне в яичниках крыс между группой К, группой А и контрольной группой не установлено. Более полное представление о действии католита и анолита на генеративную функцию дает определение уровня эстрадиола и лютеинизирующего гормона (ЛГ) в плазме крови половозрелых небеременных самок кроликов, так как, по данным литературы, наиболее распространенной формой женского бесплодия является ановуляторная (эндокринная) форма: 18-27% [4]. У животных в группе анолита отмечалось повышение уровня ЛГ на 67%, в группе католита - снижение уровня ЛГ на 26% по сравнению с контрольными животными. Изменения уровня эстрадиола у животных в обеих опытных группах не превышает 10% по сравнению с контрольными животными.
Результаты исследования плодовитости крыс представлены в таблице 1.
Материалы таблицы характеризуют высокую способность самцов крыс к оплодотворению и зачатию при приеме ЭАВР, о чем свидетельствует достоверное повышение индекса плодовитости - на 33,3% - у животных из группы К и группы А и индекса беременности - на 9% и 31% соответственно - по сравнению с животными из контрольной группы. У самок крыс отмечается только повышение способности к зачатию, т. е. увеличение индекса беременности соответственно на 18% и 40% по сравнению с контролем.
Важное значение для характеристики эмбриоток-сического действия лекарственных средств могут иметь данные о гибели крысят в начале постнаталь-ного периода жизни. Выживаемость крысят во всех исследуемых группах на 7-е сутки при получении ЭАВР родителями в течение 3 половых циклов перед оплодотворением, а самками еще и во время беременности и грудного вскармливания составляет 100%.
Во всех экспериментах при приеме ЭАВР в течение длительного времени во время до и после беременности нами выявлено, что у самок всех групп беременность протекала благополучно, заканчивалась
родами в срок. Численность потомства, масса тела и краниокаудальные размеры новорожденных крысят из групп К и А достоверно не отличались от размеров детенышей из контрольной группы.
На 30-е сутки постнатального периода у детенышей из всех экспериментальных групп достоверных изменений в абсолютной массе вилочковой железы, сердца, почек и яичек не отмечалось. На вскрытии при визуальном осмотре у крысят не выявлено внешних аномалий. Не обнаружено видимых признаков нарушений функций внутренних органов.
Обсуждение
Руководство по экспериментальному изучению новых фармакологических веществ требует проведения исследований по изучению повреждающего действия всех новых фармакологических веществ на генеративную функцию, изучения у них эмбрио- и фетотоксического действия, регистрируемого в антенатальном периоде развития [9]. Нами доказано, что ЭАВР при различных способах введения экспериментальным животным не оказывают токсического действия.
В эксперименте нами установлено, что потребление католита и анолита в течение 21 дня при свободном доступе самками крыс не нарушает структуру и продолжительность эстрального цикла крыс, не вызывает структурно-функциональных и гормональных изменений яичников животных.
Из данных литературы известно, что подавление репродуктивной функции при длительном введении некоторых фармакологических веществ может быть обусловлено угнетением формирования половой мотивации и полового влечения, поэтому в эксперименте была исследована способность к оплодотворению и зачатию. Показатели плодовитости и беременности крыс свидетельствуют об отсутствии токсического эффекта ЭАВР на репродуктивную систему.
Известны случаи негативных последствий приема препаратов во время беременности, которые могут служить причиной фетальной и антенатальной патологии [10]. Нами установлено, что потребление ЭАВР самками ежедневно при свободном доступе в течение 3 эстральных циклов, всего периода течения беременности и в период грудного вскармливания не оказывает эмбрио- и фетотоксического действия на плод.
Следовательно, католит с рН=8,8-9,2 и ОВП от -450 до -600 мВ и анолит с pH =6,45-7,35, ОВП от +500 до + 1100 мВ не опасны при беременности, что дает возможность их безопасного применения у беременных животных с целью дальнейшего изучения и оптимизации лечебного процесса.
Поступила 10.11.2006
ЛИТЕРАТУРА
1. Бабушкин О. С. Стратегия использования ЭХА растворов в многопрофильной больнице // Бабушкин О. С., Назин В. А. Доклады и краткие сообщения. Третий международный симпозиум «Электрохимическая активация». М., 2001. С. 46-50.
2. Беленький М. Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. Л., 1963. 152 с.
3. Гублер Е. В. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. Л.: Медицина, 1973. 144 с.
4. Кулаков В. И. Бесплодный брак. М., 2005. С. 10-21.
5. Матюшин А. И. Деонтология медико-биологического эксперимента. М., 1987. 75 с.
6. О лечебном применении электрохимически активированных растворов в медицине // Мельникова В. М., Локтионова Н. В., Беликов Г. П., Мальгинов С. В. Докл. и краткие сообщ. Третий междунар. симп. «Электрохимическая активация». М., 2001. С. 92-95.
7. Резников К. М. Свойства воды и информационные аспекты формирования эффектов действия электроактивированных водных растворов // Прикладные информационные аспекты медицины. 2006. Т. 2, № 1. С. 46 - 49.
8. Кулаков B. И., Серов B. Н., Барашнев Ю. И. и др. Pуковод-ство по безопасному материнству. М.: Триада-X, 1998. 531 с.
9. Pуководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. B. П. Фисенко. М., 2GGG. 398 с.
1G. Шабалов Н. П. Современная терапия в неонатологии. СПб, 2GGG. 6 с.
A. D. BREZDYNJK, K. M. REZNIKOV
THE INFLUENCE OF ELECTROACTIVE WATER SOLUTIONS ON EMBRYO AND FOETUS
The article provides information on influence electroactivated water solutions on reproductive function. On during investigation with katolite and anolite on experimental animals we find wear no embryotoxically and fetotoxically effects.
Key words: electroactivated water solutions, reproductive, toxically.
В. Н. БУБЕНЧИКОВА, Ю. А. КОНДРАТОВА
РАЗРАБОТКА МЕТОДИК КАЧЕСТВЕННОГО И КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЛАВОНОИДОВ В СЫРЬЕ РОМАШКИ АПТЕЧНОЙ
Курский государственный медицинский университет
Pомашка аптечная (Matricaria recutita L.) - однолетнее травянистое растение семейства астровых (Asteraceae). B научной медицине цветки ромашки аптечной широко применяются в качестве противовоспалительного, спазмолитического, антиаллергическо-го средства. Фармакологическое действие препаратов ромашки обусловлено присутствием в ней эфирного масла, основным компонентом которого является хамазулен, флавоноидов, производных апигенина, лю-теолина, кверцетина, кумаринов [3, 5].
До настоящего времени качество сырья ромашки аптечной оценивают только по содержанию эфирного масла, что обусловливает и срок хранения сырья -1 год. Стандартизация сырья по содержанию флавонои-дов даст возможность увеличить срок хранения сырья и использовать его в течение нескольких лет.
Целью настоящего исследования является разработка методик качественного и количественного определения флавоноидных соединений ромашки аптечной.
Объектом исследования служили различные образцы цветков ромашки аптечной, заготовленные в 2GG2-2GG6 годах в период цветения растений.
Методы и результаты исследования
Качественное определение флавоноидов проводили методом хроматографии в тонком слое сорбента на пластинки «Sorbfil» в системе растворителей: этилаце-тат - муравьиная кислота - вода (7G:15:15) [1]. Для этого на стартовую линию наносили G,G4 мл извлечения (смотри раздел «Количественное определение»), пластинку с нанесенными пробами высушивали на воздухе в течение 5 минут и хроматографировали. После хроматографирования пластинку вынимали из камеры,
высушивали в вытяжном шкафу в течение нескольких минут и просматривали в УФ-свете при длине волны 360 нм. На хроматограмме должны быть видны 8 основных зон с Rf около 0,32, Rf около 0,4, Rf около 0,55, около 0,62, Rf около 0,72, Rf около 0,79, Rf около 0,84, Rf около 0,89, имеющих темно-коричневую флуоресценцию. Система для хроматографирования со смесью растворителей: этилацетат - муравьиная кислота - вода (70:15:15) должна быть свежеприготовленная.
Количественное определение флавоноидов в цветках ромашки аптечной проводили спектрофотометрическим методом. В основе метода анализа нами выбрана реакция взаимодействия флавоноидов с алюминия хлоридом в среде 70%-ного спирта этилового [2].
Определение оптимальных условий экстракции суммы флавоноидов из цветков ромашки аптечной проводили на одном образце сырья. Проведенные нами исследования по изучению степени измельченности сырья на экстракцию флавоноидов показали, что максимальное извлечение флавоноидов из цветков ромашки аптечной достигается при степени измельчения 1 мм (таблица).
Для экстрагирования суммы флавоноидов из растительного сырья в литературе описано применение спиртов и спиртово-водных растворов. Нами проведено изучение оптимальной концентрации этилового спирта для извлечения суммы флавоноидов. Максимальное извлечение суммы флавоноидов достигается 70%-ным этиловым спиртом (таблица).
Для извлечения суммы флавоноидов нами использована экстракция с нагреванием на кипящей водяной бане до наступления равновесия [2], которое в данном случае наступает через 45 минут (таблица).
УДК 615.32:582.998.2].G7:547.814.5
