CC BY
24
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
Инфекция и иммунитет
СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ
С.К. Сайфуллина
ГБОУ ВПО Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова МЗ РФ
Цель исследования: оценить эффективность лабораторных методов диагностики верификации возбудителей инфекционных диарей.
Материалы и методы: обследовали 62 больных острыми кишечными инфекциями, находившихся на лечении в КИБ им. С.П. Боткина, с февраля 2013 г. по январь 2014 г. Диагноз заболевания устанавливали на основании клинико-эпидемиологических данных и результатов верификации возбудителя: ОКИ бактериальной этиологии — бактериологический и молекулярно-генетический методы; ОКИ вирусной этиологии — серологический и молекулярно-генетический методы.
Результаты. Средний возраст больных составил 26,4±7,2 лет (от 18 до 65 лет), из них 66% мужчины (41 человек). Больным, поступавшим в стационар на 2,6± 1,1 день болезни, был установлен диагноз «острая кишечная инфекция, средняя степень тяжести».
У 17 больных (27%) не удалось определить возбудитель заболевания ни одним из используемых лабораторных методов. В этиологической структуре у обследованных больных сальмонеллез составил 51% (32 человека), при этом у 30 диагноз установлен с применением метода ПЦР, из них у 17 пациентов подтвержден бактериологически, 2 больным диагноз поставлен на основании положительного бактериологического исследования. Лишь проведение ПЦР-исследования позволило идентифицировать эшерихиоз у 5 больных, дизентерию — у 2, вирусные диареи (как моноинфекцию) — у 2 человек, и кампилобактериоз — у 4 пациентов; вирусные диареи и кампилобактериоз (как микст-инфекцию) — у 12 и 10 пациентов соответственно. Обращало на себя внимание частое выявление молекулярно-генетическим методом ассоциаций возбудителей ОКИ. Так, у больных сальмонеллезом бактериально-бактериальные ассоциации регистрировались у 8 человек и бактериально-вирусные у 10, из них у 5 пациентов одновременно выявляли 3 возбудителей ОКИ. Таким образом, для улучшения качества диагностики острых кишечных инфекций может быть рекомендовано использование метода ПЦР-исследования фекалий в сочетании с бактериологическим и серологическим методами обследования. Быстрое получение результатов молекулярно-генетического и серологического методов позволяет назначать оптимальную этиотроп-ную терапию в кратчайшие сроки. Определенные клинические трудности представляет формулирование диагноза при выявлении ассоциаций возбудителей ОКИ.
ОСОБЕННОСТИ ПРОДУКЦИИ IL-2 ПРИ HELICOBACTER PYLORI-ИНФЕКЦИИ
Ю.В. Саранчина, Е.С. Агеева
ФГБОУ ВПО Хакасский государственный университет им. Н.Ф. Катанова, г. Абакан
Основную роль в реализации адаптивного иммунного ответа против Н. pylori играет IL-2. Цитокин продуцируется преимущественно Th1-лимфоцитами. IL-2 является ключевым регулятором,
поддерживающим баланс ТЫ/^2-путей иммунного ответа. Известно, что при Н. pylori-инфекции основным звеном патогенеза является нарушение механизмов ТЫ/^2-пути, которые обуславливают клинический полиморфизм и исход заболевания. В связи с чем, целью данного исследования является определение спонтанного и ФГА-индуцированного уровня IL-2 у больных с Н. pylori-ассоциированным хроническим гастритом.
Материалом для исследования являлись лейкоциты венозной крови 44 больных H. pylori-ассоции-рованным поверхностным хроническим гастритом (ПХГ) и 28 больных атрофическим хроническим гастритом (АХГ). Мононуклеарные лейкоциты выделяли из крови путем центрифугирования на слое фиколл-верографина. Культивировали без митогена и с добавлением фитогемагглютинина (ФГА). Оценку содержания IL-2 определяли методом ИФА-анализа. Отличия между группами считали статистически значимыми при р < 0,05.
В результате определения уровня IL-2 было установлено, что в группе пациентов с ПХГ спонтанный уровень данного цитокина был достоверно ниже относительно группы контроля и составил 6,6 (2,1-14,4) пг/мл (р = 0,018) и 17,6 (8,0-69,9) пг/ мл соответственно. В группе больных с АХГ базаль-ный уровень IL-2 также был статистически значимо ниже по сравнению с группой контроля (р = 0,0001), а также с больными ПХГ и достигал значения 1,9 (0-8,1) пг/мл (р = 0,008). ФГА-индуцированная продукция IL-2 была статистически значимо ниже по сравнению с группой контроля (35,7 (9,8293,7) пг/мл, как в группе больных с ПХГ (12,9 (2,7-39,3) пг/мл, р = 0,043), так в группе больных с АХГ (22,6 (5,7-43,4) пг/мл, р = 0,048). При оценке индекса стимуляции продукции IL-2 было выявлено, что в группе больных с ПХГ данный показатель составил 2,8 (1,1-7,0), в группе больных с АХГ — 3,1 (2,3-23,2), в контроле — 2,4 (0,8-4,6). Определение индекса стимуляции показало, что во всех обследуемых группах сохраняются резервные возможности к продукции данного цитокина. Таким образом, при Н. pylori-инфекции происходит снижение продукции IL-2, что, вероятно, свидетельствует о Н. pylori-индуцированном функциональном нарушении популяции Т-хелперов.
ИЗУЧЕНИЕ ЦИТОКИНОВОГО ПРОФИЛЯ У ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ ПРИ ВАКЦИНАЦИИ B. ABORTUS
Н.С. Саркисян, М.В. Костюченко, Т.В. Бердникова
ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора
Важная роль в процессе формирования иммунного ответа принадлежит цитокинам, которые осуществляют короткодистанционную регуляцию межклеточных, межсистемных и сетевых взаимодействий.
Целью исследования явилось изучение цитоки-нового профиля в процессе формирования иммунного ответа у лабораторных животных на введение вакцинного штамма В. abortus 19 BA. Исследовали кровь 60 белых мышей, иммунизированных подкожно вакцинным штаммом B. abortus 19 BA в дозе 0,1 мл, содержащей 105 микробных клеток. Контролем служили 30 интактных животных, которым
2014, Т. 4, № 1
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
вводили стерильный физиологический раствор в том же объеме. Забор крови осуществляли на 3, 5, 7, 14 и 21 сутки после иммунизации, по 6 животных опытной и контрольной группы в каждый период исследования. Методом ИФА в сыворотке крови определяли интерлейкин-1а (IL-1a), интер-лейкин-4 (IL-4), фактор некроза опухоли (TNFa). Для определения IL использовали наборы фирмы «eBioscience» Австрия. Результаты измеряли на спектрофотометре при длине волны 480 нм. При попадании вакцинного штамма против бруцеллеза в организм лабораторных животных незначительное повышение цитокина отмечается уже с первых суток развития вакцинного процесса. К 7 суткам этот показатель повышался до 7,24+1,50 пг/мл по сравнению с контрольными значениями 4,97+0,49 пг/ мл. Наиболее высоких величин достигал к 14 суткам 44,60+5,02 пг/мл. На 21 сутки уровень IL-1a снижался до 29,34+3,22 пг/мл, однако статистически оставался еще значительно выше нормы 4,23+0,36 пг/мл (p < 0,05). При развитии иммунного ответа у мышей на вакцинный штамм B. abortus 19 BA отмечается незначительное повышение уровня IL-4 на 7 сутки 6,10+0,96 пг/мл по сравнению с контролем 2,17+0,06 пг/мл, к 14 суткам снижался до 3,44+0,82 пг/мл, а к 21 суткам уровень IL-4 достигал контрольных величин 2,73+0,25 пг/мл. Также изучение динамики синтеза TNFa выявило увеличение этого цитокина на 3 и 5 сутки после иммунизации белых мышей противобруцеллез-ной вакциной до 15,83+2,43 пг/мл и 16,78+2,76 пг/ мл соответственно по сравнению с контролем (12,98+0,82 пг/мл). К 14 суткам уровень TNFa составлял 21,00+3,24 пг/мл, а к 21 суткам соответствовал контрольным значениям 12,93+0,81 пг/мл. Таким образом, исследование выявило наибольшее увеличение IL-1 и TNFa на 14 сутки, повышение уровня IL-4 на 7 сутки.
G/[P]-ТИПЫ РОТАВИРУСА А В г. НИЖНЕМ НОВГОРОДЕ: 2012-2014 гг.
Т.А. Сашина1,2, О.В. Морозова1,2, Н.А. Новикова1,2
1ФБУН Нижегородский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. акад. И.Н. Блохиной Роспотребнадзора 2 ФГБОУ ВПО Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского
К пяти годам ротавирусы (род Rotavirus, семейство Reoviridae) поражают 95% всех невакциниро-ванных детей во всем мире и являются ведущей причиной острого гастроэнтерита (ОГЭ) в этой возрастной группе. В 2012—2014 гг. на территории Нижнего Новгорода сохраняется высокий уровень заболеваемости РВГЭ, что определило необходимость объяснения сложившейся ситуации. На основе различий в нуклеотидной последовательности генов, кодирующих белки наружного капсида VP7 и VP4, определяют G-и Р-генотипы ротавируса. У человека и животных различают не менее 27 G-и 37 Р-генотипов.
Целью данной работы явилось определение G-и P-типа ротавирусов, выявленных в г. Н. Новгороде в 2012—2014 гг., и анализ их распределения. Типирование проводили методами РНК-ПААГ и ОТ-ПЦР с использованием наборов специфичных праймеров, описанных в работах Das B.K. et al. (1994),
Gentsch J.R. et al. (1992), Новикова Н.А. и др. (2007). При исследовании 1342 образцов фекалий детей, госпитализированных с первичным диагнозом ОКИ, ротавирусы были обнаружены в 263 случаях (19,6%). Доступными для молекулярно-генетической характеристики были 213 изолятов. Выявлены штаммы пяти G-генотипов (G1, G2, G4, G3 и G9) и четырех Р-генотипов (P[4], P[6], P[8] и P[9]), которые определялись в комбинациях G4P[8] (75,1%, 4 гено-варианта), G1P[8] (12,1%, 5 геновариантов), G2P[4] (4,7%, 4 геноварианта), G3P[8] (0,5%, 1 геновариант), G9P[8] (1,9%, 1 геновариант), относящихся к наиболее распространенным в мире, и редких G3P[6] (1,9%, 1 геновариант) и G3P[9] (3,8%, 1 геновариант). Среди геновариантов с преобладающей комбинацией G4P[8], в сезон 2012—2013 гг. доминирующее положение занимали штаммы с 85-м ЭФ-типом РНК (76%), в начале эпидсезона 2013—2014 гг. выявлялись преимущественно штаммы с 52-м ЭФ-типом РНК (74%). Следовательно, активная циркуляция ротавируса типа G4P[8] в изучаемый период времени поддерживалась сменой генетического варианта.
Таким образом, в период 2012—2014 гг. в Нижнем Новгороде циркулировали ротавирусы семи G/[P]-типов, доминирующее положение занимали штаммы с комбинацией G4P[8]. Полученные результаты имеют значение для разработки стратегии вакцино-профилактики РВГЭ в Нижнем Новгороде.
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭНТЕРОВИРУСОВ, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ НА ТЕРРИТОРИИ ИРКУТСКОЙ ОБЛАСТИ
А.В. Севостьянова1, Т.А. Гаврилова2, Т.И. Борисова1, Р.В. Адельшин1, Е.И. Андаев1
1 Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора
2 Управление Роспотребнадзора по Иркутской области, г. Иркутск
В Иркутской области сезонный подъем заболеваемости энтеровирусными инфекциями (ЭВИ) обусловлен циркуляцией разных серотипов эн-теровирусов. Молекулярно-генетическим методом изучены 10 штаммов энтеровирусов, выделенных из клинического материала от больных, проживающих на территории области, и два штамма, изолированных из проб сточных вод очистных сооружений г. Иркутска. Расшифрована и проанализирована нуклеотидная последовательность фрагмента гена VP-1 энтеровирусов длиной 766 п.н. Филогенетический анализ показал, что штаммы, выделенные в Иркутской области, образуют отдельный кластер в группе энтеровирусов ECHO 6 и имеют существенное сходство (92,4—94,7%) со штаммом E-6 26035 E-burg (Екатеринбург, 2006 г.). Вирус ECHO 6 является эндемичным для региона и с 1977 г. ежегодно выделяется из объектов окружающей среды и периодически из клинического материала.
Нуклеотидные последовательности двух штаммов Коксаки В4 (КВ4), выделенные от больных в 2011 г. в г. Иркутске, оказались в одном кластере с изолятами из Белоруссии, Франции и Финляндии (2001—2005 гг.). Вирусологический мониторинг энтеровирусов показал, что циркуляция вируса КВ4 на территории Иркутской области продолжается с 2006 г.
