CC BY
18
№1.- с.85-87.
4. Митин, Ю.А. Иммунологические аспекты патогенеза и диагностики ВИЧ-инфекции.: Автореф. дис. доктора мед.наук / С.Петербург, 1997, - 40с.
5. Ройт, А., Бростофф Дж., Миел Д. Иммунология / Пер. с англ. - М.: Мир, 2000. - 592с.
6. Якупов, Т.Р. Динамика изменений титров «свободных» и «связанных» антител у инфицированных ВЛКРС коров // Т.Р.Якупов, Н.З.Хазипов // Ученые записки КГАВМ.-2009.- Т.197.- С.150-154.
7. Cynthia, J, Circulating Immune Complexes (Cic) As Marker For Disease Progress In Oral Cancer. Nerurkar A. V.& Karjodkar F.R. // Indian J. Clini. Biochem 2007; 22: 114 117.
8. Gillet N, Mechanism of leukemogenesis induced by bovine leukemia virus: prospects for novel anti-retroviral therapies in humans. Florins A, Boxus M, Burteau C et al (2007) // Retrovirology 2007; 4:18-49.
9. Golda, R, The presence and structure of circulating immune complexes in patients with prostate tumors. Med. Sci. Wolski Z, Wyszomirska GM, Madalinski K,
Michalkiewicz J. Monit 2004; 10: 23-7.
10. Kelley, M.C. Tumor associated antigen TA-90 immune complex assay predicts subclinical metastasis and survival for patients with early stage melanoma. Cancer 1998;83: 1355-1361.
11. Rojko, J.L., Evans MG, Price SA, Han B, Waine G, DeWitte M, Haynes J, Freimark B, Martin P, Raymond JT, Evering W, Rebelatto MC, Schenck E, Horvath C. Formation, Clearance, Deposition, Patho-genicity, and Identification of Biopharmaceu-tical-related Immune Complexes. Toxicologic Pathology (2014). 42 (4): 725.
12. Terukazu Odawara, Misao Onuma, Hiroyasu Yochikawa et.al. Circulating Immune Complexes Levels in Cows with Enzootic Bovine Leukemia // Jpn. J. Vet.Sci., 1987.-v.49.-p657-661.
13. Shmagel & cheresshnev. Molecular bases of immune complex pathology. Biochem (Moscow) 74, 469-479 (2009).
14. Ungar-Waron H. Circulating immune complexes in bovine leukemia virus (BLV)-infected cattle / H.Ungar-Waron, J.Brenner, R.Paz, Z.Trainin // Vet. Immunol. Immunopathol. 1992 Oct: 34 (1-2): 173-9; 5.
ТЕРМИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА ПРОБ СЫВОРОТКИ КРОВИ КАК СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ИФА В ДИАГНОСТИКЕ ЛЕЙКОЗА КОРОВ
Джакаит Д.А, Якупов Т.Р.
Резюме
Настоящие исследования проводились в целях определения влияния термической обработки проб сывороток крови на чувствительности теста иммуноферментного анализа при диагностике лейкоза крупного рогатого скота.
Результаты исследований доказывают, что после осаждения циркулирующих иммунных комплексов из пула сывороток крови крупного рогатого скота титры противолейкозных антител в ИФА не изменялись и были равны титрам антител в исходной пробе. Диссоциация этих компле-сков с предварительной инкубацией проб при 60оС в течение 1 часа привело к увеличению титров «свободных» анти-ВЛКРС антител в пробах.
Установлено, что термическая обработка проб сывороток крови, может быть фактором повышения чувствительности ИФА диагностики лейкоза крупного рогатого скота. Инкубирование сыворотки крови крупного рогатого скота при 60°С в течение 1 часа привело к увеличению титров свободных противолейкозных антител, что было доказано увеличением количества положительных проб в ИФА. Оптическая плотность (ОП) лунок планшета отрицательных проб после их термической обработки практически не меняются.
HEAT TREATMENT OF THE BLOOD SERUM SAMPLES AS A METHOD OF INCREASING THE SENSITIVITY OF ELISA TEST DURING THE DIAGNOSIS OF BOVINE LEUCOSIS
Jakait J.A, Yakupov T.R.
Summary
The present study was conducted with an aim of defining the effect of heat treatment of the blood serum samples on the sensitivity of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) test during the diagnosis bovine leucosis.
The research results prove that after precipitating circulating immune complexes from the pool of the blood serum samples of cattle, the titers of antileukemic antibodies in ELISA did not change and were equal to the antibody titers in original sample. Dissociation of these immune complexes with prior incubation of the samples at 60оС for 1 hour resulted to the incr ease of the «unbound» antileukemic antibody titers in the samples.
It was established that heat treatment of the blood serum samples can be considered as a factor of increasing the sensitivity of ELISA test in the diagnosis of bovine leucosis. Incubation of the blood serum samples of cattle at 60оС for 1 hour resulted to the increase of unbound antileukemic antibodies which was proved by the increase in the number of positive samples in ELISA test. The optical density (OD) of some microtiter plate wells of both negative and positive reacting samples after undergoing heat treatment practically remained intact.
УДК 619:615.272:616-092.9
ИЗУЧЕНИЕ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ДИМИКАРА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ МОДЕЛИРОВАНИИ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА У КРОЛИКОВ
Денисенко Т.С. - аспирант; Киреев И.В. - к.б.н., доцент Ставропольский государственный аграрный университет
Ключевые слова: кролики, окислительный стресс, антиоксидантная система, биохимические показатели, ферменты, продукты перекисного окисления.
Kew words: rabbits, oxidative stress, antioxidant system, biochemical parameters, enzymes, products of peroxidation.
Свободнорадикальное окисление является нормальным физиологическим процессом жизнедеятельности организма, протекающим с участием продуктов неполного восстановления молекулярного кислорода [3,4, 6].
В настоящее время свободноради-кальное окисление рассматривается как один из основных патогенетических механизмов в развитии различных заболеваний человека и животных. Усиление свободнорадикальных процессов при возникновении патологических процессов, а также нарушение баланса между анти- и прооксидантными системами приводит к развитию окислительного стресса, который в свою очередь вызывают повреждение клеток и тканей организма [4, 5].
Антиоксидантные препараты применяют при лечении заболеваний, сопровождающихся усилением перекисного окисления липидов и гипоксией. Благодаря своему широкому спектру фармакологического действия
они оказывают влияние на основные звенья патогенеза многих заболеваний, связанных со свободнорадикальнымипроцессами и кисло-родзависимыми патологическими состояниями [1, 2, 6].
Современный отечественный рынок испытывает дефицит антиоксидантных ветеринарных препаратов для сельскохозяйственных животных. В связи с этим возникает необходимость в разработке и внедрении в производство новых высокоэффективных лекарственных форм для повышения резистентности организма животных.
Целью работы явилось изучение эффективности нового антиоксидантного препарата «Димикар» в лечении экспериментально смоделированного окислительного стресса у кроликов.
Препарат «Димикар» разработан на кафедре терапии и фармакологии Ставропольского ГАУ и представляет собой водный раствор светло-коричневого цвета, без запаха,
предназначен для внутримышечного введения.
Материал и методы. Для постановки эксперимента использовали 30 кроликов в возрасте 7-9 месяцев, которых разделяли с учетом принципа аналогов на 3 группы по 10 животных в каждой. Животные из первой группы служили контролем. На кроликах второй группы проводили моделирование окислительного стресса, путем перорального введения сульфата железа (II) в дозе 0,04 мг на 1 мл воды для инъекций, один раз в сутки, на протяжении 7 дней. Применение сульфата железа (II) связано с тем, что он реагирует с целым рядом органических соединений в клетке животного, сдвигая его редокс-статус в прооксидантную сторону. Животных третьей группы подвергли аналогичной схеме воздействия сульфата железа(П), но, начиная со второго дня исследований, стали вводить препарат «Димикар» внутримышечно в дозе 3,4
мг/кг массы тела, для активизации системы антиоксидантной защиты организма.
У всех животных провели взятие крови из ушной вены до введения препаратов, через 1, 3, 5 и 7 суток после введения для последующего биохимического анализа. В крови определяли основные показатели системы антиоксидантной защиты: активность катала-зы, супероксиддисмутазы и глутатионперок-сидазы, глутатион восстановленный, а также продукты перекисного окисления липидов -диеновые конъюгаты, малоновый диальдегид, основания Шиффа. Произвели контрольное взвешивание кроликов на момент начала исследований, через 3 суток и по их завершению.
Результаты исследований. Полученные результаты исследования крови свидетельствуют об изменении активности основных ферментов системы антиоксидантной защиты организма у кроликов (табл. 1).
Таблица 1 - Показатели системы антиоксидантной защиты организма у кроликов, (п=10)
№ группы Активность каталазы, Н2О2/ сл-мин-103 Активность суперок- сиддис-мутазы, ед.акт. /мг гемоглобина Активность глутатионпе-роксида-зы, мкМО-8И/л мин 103 Глутатион восстановленный, ммоль/л
До введения препаратов
1 23,59±1,23 1,61±0,13 7,97±0,22 0,35±0,02
2 23,75±1,30 1,63±0,12 7,95±0,24 0,37±0,03
3 23,68±1,27 1,62±0,10 7,94±0,26 0,38±0,03
Через 1 сутки после введения
1 23,78±1,38 1,60±0,11 8,00±0,30 0,34±0,01
2 21,90±1,33 1,59±0,12 7,68±0,29 0,33±0,02
3 22,06±1,29 1,60±0,09 7,71±0,27 0,35±0,03
Через 3 суток после введения
1 24,09±1,31 1,62±0,09 8,01±0,26 0,35±0,02
2 20,56±1,34 1,56±0,08 7,42±0,23 0,31±0,02
3 21,89±1,32 1,59±0,10 7,73±0,27 0,33±0,01
Через 5 суток после введения
1 24,47±1,30 1,64±0,10 7,98±0,32 0,36±0,02
2 19,11±1,29* 1,52±0,07 7,29±0,26* 0,28±0,02*
3 21,73±1,26 1,58±0,09 7,75±0,29 0,32±0,03
Через 7 суток после введения
1 24,85±1,25 1,65±0,07 7,99±0,28 0,35±0,01
2 18,33±1,27* 1,45±0,06* 7,14±0,25* 0,26±0,02*
3 21,52±1,24 1,58±0,08 7,76±0,28 0,33±0,01
Примечание: *р<0,05 ной группы
разницастатистически достоверна в сравнении с данными контроль-
Активность каталазы в первой группе постепенно увеличивалась, но незначительно
- от 0,81% до 1,58%, а группах, где производили моделирование окислительного стресса
- наоборот, уменьшалась. Во второй группе
активность фермента снижалась от 4,08% до 7,79%, а третьей - от 0,77% до 6,84%. Если рассматривать динамику активности каталазы за весь период эксперимента, то можно отметить, что в контрольной группе она увеличи-
лась на 5,34%, во второй группе - уменьшилась на 22,82%, а в третьей - на 9,12%, соответственно.
Активность супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы была менее показательной, но динамика наблюдалась аналогичная. В контрольной группе активность ферментов за весь период опыта значительно не изменилась, во второй группе - уменьшилась на 11,04% и 10,19%, а в третьей - на 2,47% и 2,27%, соответственно.
Глутатион, восстановленный через 1 сутки после введения препаратов, умень-шился во всех группах, в первой - на 2,86%, во второй - на 10,81%, а в третьей - на 7,89%, соответственно. Данный показатель максимально
уменьшился через 5 суток после введения препарата и достиг достоверных отличий. За весь период эксперимента уровень глутатиона во второй группе уменьшился на 29,73%, а в третьей группе - на 13,16%, соответственно.
Концентрация продуктов перекисного окисления в крови у кроликов постепенно увеличивалась во всех группах (табл. 2). Концентрация диеновых конъюгатов в крови животных из первой группы за весь период эксперимента увеличилась на 3,23%, во второй группе - на 40,0%, а в третьей - на 15,63%, соответственно. Концентрация малонового диальдегида увеличилась в первой группе на 1,21%, во второй - на 21,47%, а в третьей - на 9,76%.
Таблица 2 - Концентрация продуктов перекисного окисления липидовв крови кроликов, (n=10)
№ группы Диеновые конъюгаты, Малоновыйдиальдегид, Основания Шиффа,
ед. опт. пл. / мг липидов мкмоль/л отн.ед / сыворотки
До введения препаратов
1 0,31±0,01 1,65±0,07 0,25±0,01
2 0,30±0,01 1,63±0,06 0,27±0,02
3 0,32±0,02 1,64±0,05 0,26±0,02
Через 1 сутки после введения
1 0,32±0,02 1,66±0,08 0,24±0,01
2 0,33±0,02 1,74±0,09 0,29±0,03
3 0,34±0,03 1,71±0,07 0,28±0,02
Через 3 суток после введения
1 0,30±0,02 1,66±0,09 0,25±0,01
2 0,36±0,02* 1,81±0,10 0,33±0,02*
3 0,34±0,02 1,74±0,08 0,29±0,02
Через 5 суток после введения
1 0,31±0,01 1,65±0,06 0,26±0,01
2 0,40±0,03* 1,90±0,09* 0,34±0,02*
3 0,35±0,02 1,79±0,09 0,30±0,01*
Через 7 суток после введения
1 0,32±0,01 1,67±0,08 0,25±0,01
2 0,42±0,03* 1,98±0,11* 0,35±0,02*
3 0,34±0,02 1,80±0,09 0,29±0,01*
Примечание: *р<0,05 - разницастатистически достоверна в сравнении с данными контрольной группы
Концентрация оснований Шиффа максимально увеличилась через 5 суток после введения препарата, в первой группе на 4,0%, во второй группе - на 25,93%, а в третьей - на 15,38% и достигла достоверных отличий. Динамика конечных продуктов окисления в контрольной группе практически не изменялась и находились в равных пределах, а во второй и третьей группах она увеличилась на 29,63% и 11,54%, соответственно.
В первой группе масса тела животных постепенно увеличивалась, а во второй и третьей группах происходило снижение массы тела кроликов, при этом максимальное уменьшение обнаружено при взвешивании через 3 дня после введения препарата (табл. 3). Во второй группе масса тела через 3 суток снизилась на 4,1%, а в третьей - на 2,9%, соответственно.
Таблица 3 - Динамика массы тела кроликов, (n=10)
№ группы Масса тела, г
До введения препарата Через 3 суток после введения Через 7 суток после введения
1 2140,8±198,3 2172,4±204,1 2208,7±179,4
2 1982,6±217,5 1901,3±230,2 1877,5±202,8
3 2228,4±239,4 2163,8±208,3 2157,1±220,6
Динамика массы тела за весь период опыта была положительной только в первой группе, где увеличение составило 1,6%, во второй группе масса тела уменьшилась на 5,3%, а в третьей - на 3,2%, соответственно.
Заключение. В результате проведенных исследований установлено, что введение сульфата железа (11)у кроликов повлекло за собой изменение антиоксидантного статуса организма, выражающееся в снижении активности основных ферментов системы антиок-сидантной защиты и увеличении концентрации продуктов перекисного окисления липи-дов. Применение препарата «Димикар» кроликам в дозе 3,4 мг/кг по действующему веществу способствует снижению уровня свободных радикалов и нормализации антиокси-дантных показателей в крови.
Таким образом, применение препарата «Димикар» сопровождается выраженным ан-тиоксидантным эффектом и может быть рекомендован для клинического испытания на продуктивных животных в качестве анти-оксидантного средства.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Бурков В.И. Применение антиокси-данта эмицидина в ветеринарии / И.С. Колес-
ниченко, В.И. Мельниченко // Ветеринария, -2003. - № 10. С. 52-53.
2. Клинико-фармакологические аспекты применения антиоксидантных лекарственных средств / О.А. Горошко, В.Г. Кукес, А.Б. Прокофьев, [и др.] // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2016. - № 4. С. 904-912.
3. Меньщикова Е.Б. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты. // М.: Слово, 2006. 556 с.
4. Московцева О.В. Влияние янтарной кислоты и ее производных на состояние сво-боднорадикальных процессов экспериментальных животных / дисс. ... канд. биол. наук : 03.00. // Нижний Новгород, 2006. 160 с.
5. 13Медведева О.А. Содержание продуктов перекисного окисления липидов при экспериментальномдисбиозе и его коррекции антиоксидантом / О.А. Медведева, А.В. Агей-ченко, Н.А. Веревкина, Ю.А. Авдеева // Электронный научный журнал «INNOVA». - 2015. - № 4 (1). С. 21-23.
6. Dasgupta A., KleinK.Antioxidants in Food, Vitamins and Supplements. Prevention and Treatment of Disease // Elsevier Inc, 2014.P. 116.
ИЗУЧЕНИЕ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ДИМИКАРА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ МОДЕЛИРОВАНИИ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА У КРОЛИКОВ
Денисенко Т.С., Киреев И.В.
Резюме
В статье представлены результаты изучения нового антиоксидантного препарата «Димикар» при экспериментальном моделировании окислительного стресса на кроликах. Установлено, что его применение в дозе 3,4 мг/кг по действующему веществу способствует нормализации процессов перекисного окисления липидов и показателей антиоксидантной системы.
STUDY OF THERAPEUTIC EFFECTIVENESS OF DIMICAR IN EXPERIMENTAL SIMULATION
OF OXIDATIVE STRESS IN RABBITS
Denisenko T.S., Kireev I.V.
Summary
The article presents the results of a study of a new antioxidant drug "Dimkar" in experimental modeling of oxidative stress in rabbits. It is established that its use at a dose of 3,4 mg/kg in the active substance promotes normalization of lipid peroxidation and indicators of antioxidant system.
