CC BY
24
УДК 582.542.1-57.087.1
ИЗУЧЕНИЕ 8Т1РА иСКА1МСА И 8Т1РА 1АЬЕ88Ш
(РОАСЕАЕ) ИЗ РОСТОВСКОЙ ОБЛАСТИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МОРФОЛОГИЧЕСКОГО И ^Я-АНАЛИЗОВ
Ю.О. Копылов-Гуськов, Т.Е. Крамина
В работе представлены результаты изучения ковыля украинского (Stipa ucrainica) и ковыля Залесского (Stipa zalesskii) с территории Ростовской обл. с помощью анализа морфологических признаков и 188Я-анализа. Данные, как одномерного и многомерного морфологических анализов, так и распределения 188К-фрагментов, полученные при изучении растений из трех популяций Stipa ucrainica и четырех популяций Stipa zalesskii, свидетельствуют о высокой степени различия между видами, что позволяет принять одну из двух существующих точек зрения и говорить о независимости Stipa ucrainica и Stipa zalesskii.
Ключевые слова: Stipa ucrainica, Stipa zalesskii, 188Я, морфологический анализ, многомерные методы анализа.
Ковыли (Stipa L., Poaceae) - одна из важнейших групп, формирующих степные сообщества. Обычно это дерновинные травы. В степях Восточной Европы основную роль играют перистые ковыли. Несмотря на интенсивное изучение и разработку системы перистых ковылей на протяжении всего ХХ в. (Смирнов, 1928; Рожевиц, 1934; Клоков, Осычнюк, 1976; Цвелев, 1976; Martinovsky, 1980), однако ревизии этой группы продолжают выходить до сих пор (Vázquez, Gutiérrez, 2011; Gonzalo et al., 2013).
В последние годы увеличилось число публикаций по материалам молекулярных исследований ковы-лей (Shan et al., 2006; Liu et al., 2009; Wagner et al., 2011, 2012; Hamasha et al., 2012; Durka et al. 2013). Однако у таких широко используемых методов молекулярной систематики как анализ последовательностей ядерной (ITS) и хлоропластной ДНК часто не хватает «разрешения», чтобы дать ответ на вопрос о взаимоотношении отдельных таксонов (Hamasha et al., 2012). С недавнего времени активное изучение ковылей идет на микроэволюционном уровне. Ряд таких исследований выполнен европейскими авторами. Например, генетическое разнообразие популяций S. capillata L. из Казахстана и Центральной Европы (Wagner et al., 2011), S. pennata L. из России, Украины, Румынии, Чехии и Германии (Wagner et al., 2012) и S. pulcherrima K.Koch от Центральной Европы до юго-запада России (Durka et al., 2013) изучены методом AFLP. Большинство этих работ показали высокий уровень генетического полиморфизма в центральной части ареала (европейская часть
России для S. pennata и S. pulcherrima) и снижение его к периферии, но у S. capillata полиморфизм был одинаково низким и в предполагаемом ядре ареала (Казахстане) и на его окраинах. Эти исследования, хотя и затрагивают ковыли, распространенные в границах бывшего СССР, но дают слабый охват российской территории и касаются лишь отдельных видов, ареалы которых простираются далеко за пределы России.
Ковыль украинский (S. ucrainica P.Smirn.) и ко -выль Залесского (S. zalesskii Wilensky) распространены преимущественно в России и на Украине. Оба эти вида относятся к секции Stipa и вместе с S. dasyphylla (Lindem.) Trautv., S. pontica P. Smirn. и некоторыми другими мелкими видами образуют сложный комплекс, названный J.O. Martinovsky (1980) группой родства S. dasyphylla. До сих пор молекулярно-ге-нетическое изучение S. zalesskii проводилось только по единичным образцам методом филогенетического анализа по последовательностям ITS ядерной рибо-сомальной ДНК и участка 3'trnK хлоропластной ДНК с привлечением большого числа других видов Stipa и родственных родов (Hamasha et al., 2012). Изученный хлоропластный участок ДНК, а также объединенный набор ядерной и хлоропластной последовательностей не позволяют прояснить филогенетические взаимоотношения между ковылями секции Stipa, тогда как согласно Байесовскому дереву, построенному только по ITS, S. zalesskii группируется c S. joannis Celak., S. tirsa Stev., S. rubens P.Smirn. и S. borysthenica Klok. (там же); S. ucrainica попал в одну группу с S. capillata.
Ситуация осложняется и тем, что нет единой точки зрения по независимости и морфологическим признакам этих видов. Одни авторы считают их отдельными видами (Смирнов, 1928; Martinovsky, 1980), другие (Цвелев, 1976, 2006; Буланый, 2008) включают S. ucrainica в состав S. zalesskii в качестве подвида. Для решения вопроса об их видовой самостоятельности необходим комплексный подход.
Межмикросателлитные (ISSR) маркеры высоко полиморфны и полезны для изучения генетического разнообразия, филогении и эволюционной биологии (Reddy et al. 2002). Они были использованы для выявления межвидовой гибридизации (Wolfe et al. 1998, Archibald et al. 2004; Kramina et al. 2012). ISSR-маркеры оказались удачным инструментом для изучения генетической структуры и дифференциации двух близких видов Gentiana (Zhang et al. 2007). Анализ изменчивости длин межмикросател-литных участков генома был успешно применен и для изучения генетического разнообразия у азиатских видов ковылей - S. grandis P. Smirn. (Shan et al., 2006) и S. purpurea Griseb. (Liu et al., 2009).
Цель настоящей работы - выяснение взаимоотношений Stipa ucrainica и Stipa zalesskii на юге европейской части России с привлечением как морфологических, так и молекулярных (ISSR-маркерирование) методов.
Материалы и методы
Анализ морфологических закономерностей мы проводили, опираясь на собранные нами в 20092011 гг. в 7 локалитетах Ростовской обл. 86 гербар-ных образцов изучаемых видов, включая три популяции S. zalesskii (43 образца) и четыре популяции S. ucrainica (43 образца; табл. 1). При определении растений мы старались обобщить информацию, приводимую в основных сводках по этой группе (Смирнов, 1928; Цвелев, 1976; Слюсаренко, 1977; Martinovsky, 1980).
В ходе последующей лабораторной обработки мы отобрали для изучения пять признаков, которые наиболее часто упоминаются в литературных источниках в качестве диагностических:
1) длина нижней цветковой чешуи от кончика каллуса до основания ости (мм);
2) расстояние, на которое краевая полоска волосков не доходит до основания ости (мм);
3) опушение влагалищ листьев вегетативных побегов; в баллах (от 0 до 2): 0 - влагалища голые, 1 - имеются только реснички по краям влагалища и на язычке, 2 - влагалища целиком опушенные;
4) диаметр самого длинного листа вегетативного побега (мм);
5) число волосков на единицу длины абаксиаль-ной стороны листовой пластинки (для удобства измерений за единицу длины мы выбрали величину 2,9 мм).
Помимо указанных мы также выбрали четыре дополнительных признака, которые не фигурируют в определительных ключах при различении указанных видов:
6) длина колонки (скрученного голого сегмента ости), мм;
7) длина сеты (нескрученного волосистого сегмента ости), мм;
8) отношение длины сеты к длине колонки;
9) длина язычка листьев вегетативных побегов.
Обработку данных проводили в программах STATISTICA 6.1 (Stat Soft Inc., 2003) и PAST (Hammer, 2001). Средние значения для двух изученных видов сравнивали по каждому признаку отдельно. Для признаков 1, 4-9 мы использовали t-критерий Стьюдента, для признаков 2 и 3 -U-критерий Манна-Уитни, реализованные в программе STATISTICA. Подобный выбор методов обусловлен тем, что признаки 2 и 3 имеют явно ненормальное распределение: признак 3 - балльный, а распределение признака 2 для S. ucrainica резко бимодальное. Для оценки степени разделения изучаемых видов по совокупности морфологических признаков мы применяли анализ главных координат по метрике Гауэра в программе PAST. Из-за того, что в 2011 г. на западе Ростовской обл. было очень мало цветущих ковылей, для многих растений мы смогли изучить только морфологические признаки вегетативной сферы, и они не были включены в анализ главных координат (табл. 1).
Часть гербарных образцов из каждой изученной популяции использовали для ISSR-анализа (табл. 1), выборка составила 23 образца S. zalesskii и 25 образцов S. ucrainica. Выделение ДНК проводили из высушенных листьев с помощью специализированного набора Nucleo Spin Plant II (Macherey Nagel GmbH, Германия) в соответствии с протоколом производителя.
В качестве праймеров для полимеразной цепной реакции (ПЦР) были использованы 5 олигонуклео-тидных последовательностей, комплементарных ми-кросателлитным повторам: НВ12 [(САС)^С], НВ13 [^G^GO], M2 [(AC)8(C/T)G], М4 [^)8(С/Т)С] и UBC868 [(GAA)6]. Праймеры выбирали по результатам предварительного анализа, отдавая предпочтение
Т а б л и ц а 1
Изученные образцы
Номер популяции Вид Точка сбора Число образцов для морфологического анализа [включены в анализ главных координат] Число образцов для молекулярного анализа
S02 Stipa ucrainica Ростовская обл., Мясниковский р-н, 3,5 км к северу от хутора Недвиговка (Чулекская балка), разнотравно-дерновинно-злаковая степь. N 47°18'15" Е 39°22'59" 27.У 2009 и 10.У1 2011 11 [11] 6
S10 Stipa ucrainica Ростовская обл., Заветинский р-н, 10 км на северо-восток от хутора Киселевка, типчаково-ковыльная степь на склоне северо-восточной экспозиции. N 47°22'31" Е 44°15'12" 04.У1 2010 19 [19] 9
S17 Stipa ucrainica Ростовская обл., Орловский р-н, 3,5 км к восток-северо-востоку от пос. Маныч, степной склон 3° южной экспозиции. N 46°26'40" Е 42°45'17" 17.У1 2011 7 [0] 5
S18 Stipa ucrainica Ростовская обл., Орловский р-н, 3,5 км к северо-северо-востоку от пос. Маныч, степной склон 1° южной экспозиции. N 47°27'37" Е 42°43'59" 17.У1 2011 6 [6] 5
S01 Stipa zalesskii Ростовская обл., Мясниковский р-н, 2 км к северо-востоку от хутора Недвиговка, разнотравно-дерновинно-злаковая степь. N 47°17'02" Е 39°22'54" 09.У1 2011 23 [7] 8
S11 Stipa zalesskii Ростовская обл., Куйбышевский р-н, 1,5 км к северу от пос. Лысогорка, разнотравно-типчаково-ковыльная степь на склоне восточной экспозиции. N 47°43'20" Е 39°12'33" 11.У1 2010 14 [4] 9
S14 Stipa zalesskii Ростовская обл., Родионово-Несветайский р-н, 3 км к западу от с. Персиановка, степной склон южной экспозиции 10° на правом берегу р. Тузлов. N 47°31'40" Е 39°23'19" 11.У! 2011 6 [1] 6
тем, которые давали не менее трех полос при электрофорезе продуктов ПЦР. Отжиг праймеров НВ12, НВ13 проводили при \ = 48,5°С; иВС868, М2 - при г = 50°С; М4 - при г = 52°С. Реакционная смесь (20 мкл) содержала 10-20 нг ДНК, 20 пмолей праймера и
готовый реакционный микс MaGMix (200 мкМ каждого dNTP, 1,5 мМ MgC12, 1,5 ед. Тад-полимеразы и буфер, Диалат ЛТд, Россия). ПЦР реакцию с предварительной денатурацией (95°С - 3 мин) проводили в амплификаторе М1 Research РТС-220 DNA Engine
Dyad (Bio-Rad Ltd., США) в течение 35 циклов в режиме: денатурация при 94°С - 30 с, отжиг при соответствующей температуре - 30 с, элонгация при 72°С - 40 с (прибавление 2 с на каждый цикл) (Крамина, Шанцер, 2010; Kramina et al., 2012).
Разделение продуктов ПЦР проводили с помощью электрофореза в 1,7%-м агарозном (Amresco) геле в 0,5-кратном трис-боратном буфере с окрашиванием бромидом этидия (0,5 мкг/мл) при 125 В и фотографировали цифровым фотоаппаратом. Полученные фотографии гелей анализировали в программе Cross Checker 2.91 (Buntjer, 2000). В результате анализа была получена бинарная матрица присутствия/отсутствия фрагментов одинаковой длины, которая и подвергалась дальнейшему анализу.
Мы подсчитали общее число фрагментов и проанализировали их распределение между изучаемыми видами, а кроме того, определили число полиморфных локусов как для выборки в целом, так и для каждого вида в отдельности (локус считали полиморф -ным, если его встречаемость находилась в интервале 5-95%). Выявлено также число диагностических маркеров, т.е. тех, которые встречаются у всех образцов одного вида и полностью отсутствуют у второго.
Для ординации образцов по степени их генетического родства в пространстве небольшой размерности был применен метод главных координат, реализованный в программе PAST (Hammer et al., 2001). В качестве меры генетического сходства образцов использовался коэффициент Жаккара (Крамина, Шанцер, 2010).
Анализ популяционной структуры проводили методом Байеса в программе Structure 2.3 (Pritchard, et al., 2000; Falush et al., 2007; Pritchard et al., 2009), которая оценивает вероятность разбиения выборки на К популяций на основании расчета частот аллелей в каждой из этих гипотетических популяций путем байесовского анализа методом марковских цепей Монте Карло. Анализ проводили с использованием модели генетического смешения (admixture) и скоррелированности частот аллелей в разных популяциях (Крамина, Шанцер, 2010). Предварительный выбор стартовой точки марковской цепи (burn in) проводили в течение 50 тыс. итераций, с последующим построением марковской цепи в течение 500 тыс. итераций для значения К, равного 1-7 в семи повторностях для каждой величины К. Истинную величину К оценивали как наименьшее значение, при котором график зависимости логарифма апостериорной вероятности от К достигает плато (Pritchard et al., 2009).
Результаты
Попарное сравнение показало, что по всем «основным» признакам виды достоверно различаются (р-уа1ие < 0,01). Растения & zalesskii по сравнению с & ucrainica имеют более крупные нижние цветковые чешуи, краевая полоска волосков на которых в 90,3% случаев доходит до основания ости, если же не доходит, то не более чем на 1,5 мм (табл. 2). Помимо этого у & zalesskii всегда опушены влагалища листьев вегетативных побегов, листья толще, и на них практически нет волосков с нижней (наружной) стороны. Мы также обнаружили достоверные отличия и по двум из четырех «дополнительных признаков». А именно, у & zalesskii сета оказалась короче, чем у & ucrainica, и длины сеты и колонки различаются слабее - соотношение длины сеты к длине колонки в среднем 2,56 против 3,29 у & ucrainica. По длине колонки и длине язычков достоверных отличий между видами мы не обнаружили.
По результатам анализа главных координат 12 образцов & zalesskii и 36 образцов & ucrainica на плоскости первой и второй координат они образовали три хорошо разделенные группы: точки & zalesskii образовали отдельную группу, а точки & ucrainica распались на две группы (рис. 1). Причем, «нижняя» группа точек & ucrainica образована исключительно образцами из популяции 810. Из рис. 1 видно, что точка образца 802-2 попадает в «верхнюю» группу точек & ucrainica. Первая и вторая главные координаты описывают 43 и 17% разброса данных соответственно.
Рис. 1. Результаты анализа главных координат по девяти морфологическим признакам. х - Stipa ucrainica; ■ - Stipa zalesskii
Анализ главных координат, проведенный по общей матрице присутствия/отсутствия ISSR-маркеров, также показал, что виды хорошо разделяются (рис. 2). Первая и вторая главные координаты описывают 42 и 10% разброса данных соответственно. На рис. 2 один из образцов S. ucrainica (S02-2) расположен сильно в стороне от основных двух групп. Мы сочли этот образец выбросом и не включали в последующие анализы.
В общей сложности мы получили 58 различных ISSR-фрагментов, из которых полиморфизм проявили 34 (58,6%). Для S. ucraunica обнаружили 24 полиморфных локуса, для S. zalesskii - 19. Для обоих видов найдены диагностические маркеры: 3 для S. ucraunica и 4 для S. zalesskii (табл. 3). Обнаружен также один уникальный маркер для популяции S14. Это фрагмент длиной порядка 400 п.н., амплифицирован-ный с праймера HB13.
Байесовский анализ, проведенный в программе Structure, показал, что с наибольшей вероятностью изучаемая выборка разбивается на 2, 3 и 5 групп
(рис. 3). При разбиении на две группы все образцы почти со стопроцентной апостериорной вероятностью относятся программой к двум определенным заранее видам (рис. 4). При разбиении на три группы образцы zalesskii демонстрируют генетическую однородность, а внутри ucrainica выделяются две группы, не связанные с популяционной принадлежностью. При разбиении на пять групп при различных запусках анализа были получены два варианта результатов: zalesskii либо был однороден, либо внутри него четко выделялась популяция 814. ucrainica всегда был разнородным. Истинную величину К оценивали как наименьшее значение, при котором график зависимости логарифма апостериорной вероятности от К достигает плато (РпгсЬагё ег а1., 2009).
Обсуждение
Полученные результаты по морфологическим признакам полностью соответствуют литературным данным о различиях zalesskii и ucrainica по изученным признакам на юге европейской части России
Таблица 2
Сравнение S. ucrainica и S. zalesskii по морфологическим признакам
Признак S. ucrainica S. zalesskii Сравнение видовых средних по критерию Стьюдента (p-value) Сравнение видовых средних по критерию Манна-Уитни (p-value)
Длина нижней цветковой чешуи, мм 13,9 (17,0 ± 1,2) 20,2 16,5 (19,5 ± 1,6) 22,7 0,0084 -
Краевая полоска волосков не доходит до основания ости, мм 0,0 (2,9 ± 1,6) 8,4 0 (0,1 ± 0,3) 1,5 - 0,000000
Опушение влагалищ листьев вегетативных побегов (баллы от 0 до 2)* 0 [0 : 0 : 0] 2 1 [1 : 1 : 2] 2 - 0,000000
Диаметр листовой пластинки, мм 0,36 (0,54 ± 0,10) 0,76 0,46 (0,76 ± 0,13) 1,12 0,000058 -
Число волосков на у.е. (2,9 мм) нижней стороны листа 0 (12,0 ± 6,0) 28 0 (0,1 ± 0,5) 8 0,000000 -
Длина колонки, мм 59 (76,1 ± 11,8) 97 60 (81,6 ± 10,7) 95 0,159 -
Длина сеты, мм 208 (247,7 ± 31,5) 330 161 (207,2 ± 35,6) 275 0,000523 -
Отношение длины сеты к длине колонки 2,65 (3,29 ± 0,37) 3,98 1,93 (2,56 ± 0,44) 3,57 0,000001 -
Длина язычка листьев вегетативных побегов 0,8 (1,43 ± 0,46) 3,0 0,8 (1,28 ± 0,29) 1,8 0,295 -
П р и м е ч а н и е. Формат представления результатов: минимальное значение (среднее арифметическое ± стандартное отклонение среднего) максимальное значение.
*Минимальное значение [нижняя квартиль : медиана : верхняя квартиль] максимальное значение.
ч
ч S02-2
+ +
++i+ ч □ В □ □ □ □ .........]
............'ЧР + + + □ □ jib □□
+ + □ °
-024 -0,12 0 0.12 0,24
Координата 1
Рис. 2. Результаты анализа главных координат, проведенного по присутствию/отсутствию каждого из 58 188Я-маркеров у изучаемых видов ковылей.
+ - Stipa ucrainica; □ - Stipa zalesskii
(Смирнов, 1928; Цвелев, 1976, 1986; Слюсаренко, 1977). Это демонстрируют методы как одномерного, так и многомерного анализа. Разделение & ucrainica на две группы (рис. 1) может быть связано, на наш взгляд, с тем, что популяция 810, образовавшая «нижнюю» группу и отсутствующая в «верхней», расположена на юго-западе Ергенинской возвышенности, где экологические условия более аридные.
Представляют интерес признаки, которые не используются в определительных ключах, но по которым были обнаружены достоверные отличия между видами - длина сеты и соотношение длины сеты и колонки. Несмотря на то что исследуемая выборка невелика, получена она из региона перекрывания довольно широких ареалов исследуемых видов, а в подобных районах отличия между настоящими (даже близкими) видами часто усиливаются (Воронцов, 1968). С этим отчасти связано и то, что мы не включили в работу близкий к исследуемым вид & pontica: достоверных данных о его произрастании в Ростовской обл. нет, а сравнивать X ucrainica и & zalesskii из Ростовской обл. с & pontica из других регионов нам представилось нецелесообразным для настоящей работы.
Анализ главных координат по результатам исследования 188Я-маркеров также подтвердил различия между изучаемыми видами в Ростовской обл. Значительные отличия образца 802-2 от остальной выборки & ucrainica связаны, как мы полагаем, с не-
удачным выделением ДНК из материала, так как по морфологическим признакам данный образец не выбивается из общей картины распределения (рис. 1). Таким образом, ISSR-анализ полностью подтвердил данные морфологического исследования.
Анализ распределения ISSR-фрагментов показал несколько более высокое генетическое однообразие Stipa zalesskii по сравнению с S. ucrainica для нашей выборки, что выражается в меньшем числе полиморфных маркеров и большем диагностических (табл. 3). Подобная картина может быть связана с довольно узкой территорией сбора материала (только Ростовская обл.). А так как ареал S. zalesskii доходит на востоке до юга Сибири, то распространять тезис о низкой генетической изменчивости S. zalesskii на весь вид нам представляется невозможным. Согласно методическим рекомендациям (Pritchard et al., 2009), оценкой истинного числа групп в нашей выборке следует считать К = 2, поэтому даже выделение в некоторых запусках байесовского анализа образцов из популяции S14 в отдельную группу мы полагаем проявлением большего генетического своеобразия этой популяции. С технической точки зрения это может быть связано с наличием у всех шести взятых для анализа образцов этой популяции одного уни-
-600 -800 -1000 -1200
§
^ -1400 С -I
-1600 -1800
-2000 -2200
1 2 3 4 5 6 7 К
-■-Среднее IП Среднее ±0,95 доверительный
интервал
Рис. 3. График зависимости логарифма апостериорной вероятности разбиения выборки на K групп от числа таких групп
Вероятности отнесения образцов к одной из двух групп
1,00
S 0.75
g 0,50
а
<и
m
0,25
0,00
ООООт— Т— Т— Т— Т— Т— Т— Т— Т— Т— Т— Т— Т— Т— Т— Т— Т— т— ООС\]СМС\|т— Т— Т— Т— Т— ООООт— Т- Т— Т— Т— Т— Т— Т— Т— ШЯМИОООИИЯИЯЯВЯИВИИВИИВИОООИЯИЯЯ^^^^ЯИЯЯИЯИЮЯИ
со со со со со со со со со со
Рис. 4. Вероятность отнесения каждого образца к одной из двух предполагаемых групп по
результатам байесовского анализа
Таблица 3
Распределение Т88К-фрагментов
Общее число фрагментов 58
Общее число полиморфных локусов (встречаемость > 5%) 34
Stipa ucrainica Stipa zalesskii
Число полиморфных локусов (встречаемость > 5%) 24 19
Число диагностических маркеров 3 4
кального маркера (см. Результаты). Очевидно, что результаты байесовского анализа полностью согласуются с результатами морфологического анализа и анализа распределения 188Я-фрагментов.
Таким образом, комплексный подход с использованием морфологического, байесовского анализов и анализа распределения 188Я-фрагментов однознач-
Исследование выполнено при подде
но подтвердил различия между ковылем украинским (Stipa ucrainica) и ковылем Залесского (Stipa zalesskii) для территории Ростовской обл.
Авторы выражают благодарность О.Н. Деминой, П. А. Волковой, З.В. Гершельман и Д.Ф. Лыскову за помощь на полевом этапе исследования, а также М. Нобису за рецензирование и ценные замечания.
кке гранта РФФИ № 14-04-01094 А.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Буланый Ю.И. Флористические материалы и ключ для определения ковылей (Stipa L., Poaceae) Саратовской области // Вестн. Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова. 2008. № 8. С. 8-10.
Воронцов Н.Н. Дивергенция близких видов на стыках их ареалов // Проблемы эволюции. Т. 1. Новосибирск, 1968. С. 202-207.
Клоков М.В., Осычнюк В.В. Ковыли Украины // Новости систематики высших и низших растений. Киев, 1976. С. 7-92.
Крамина Т.Е., Шанцер И.А. Анализ спонтанной гибридизации двух диплоидных видов Lotus (Fabaceae) в Волгоградской области // Бот. журн. 2010. Т. 95. № 6. С. 93-106.
Рожевиц Р.Ю. Ковыль - Stipa L. // Флора СССР. Т. 2. Л., 1934. С. 79-112.
Слюсаренко Л. П. Stipa - Ковыль // Злаки Украины. Киев, 1977. С. 405-424.
Смирнов П.А. Stipa L. - Ковыль // Флора Юго-Востока европейской части СССР. Л., 1928. Вып. 2. С. 98-118.
Цвелев Н.Н. Злаки СССР Л., 1976. 788 с.
Цвелев Н.Н. О ковылях (Stipa L., Gramineae) Украины // Бюл. МОИП. Отд. биол. 1986. Т. 91 Вып. 1. С. 116-123.
Цвелев Н.Н. Poaceae Barnhart (Gramineae Juss.) // Конспект флоры Кавказа. Т. 2. СПб., 2006. С. 248-378.
Archibald J. K., Wolfe A. D., Johnson S. D. Hybridization and gene flow between a day- and night-flowering species of Zalu-zianskya (Scrophulariaceae, tribe Manuleeae) / Amer. J. Bot. 2004. Vol. 91. N 9. P. 1333-1344.
Buntjer J. B. Cross Checker: computer assisted scoring of genetic AFLP data // Plant and animal genome, VIII Conference. San Diego, CA, January 9-12, 2000.
Durka W. et al. Extreme genetic depauperation and differentiation of both populations and species in Eurasian feather grasses (Stipa) // Plant Syst. Evol. 2013. Vol. 299. P. 259-269.
Falush D., Stephens M., Pritchard J. Inference of population structure using multilocus genotype data: dominant markers and null alleles // Mol. Ecol. Notes. 2007. Vol. 7. P. 574-578.
Gonzalo R., Aedo C., García M. A. Taxonomic revision of the Eurasian Stipa subsections Stipa and Tirsae (Poaceae) // Syst. Bot. 2013. Vol. 38, N 2. P. 344-378.
Hamasha H.R., von Hagen K.B., Roser M. Stipa (Poaceae) and allies in the Old World: molecular phylogenetics realings genus circumscription and gives evidence on the origin of American and Australian lineages // Plant Syst. Evol. 2012. Vol. 298. P. 351-367.
Hammer 0., Harper D.A.T., Ryan P. D. PAST: Paleontologi-cal Statistics Software Package for Education and Data Analysis // Palaeontologia Electronica. 2001. Vol. 4. N 1. 9 p.
Kramina T. E., Degtjareva G. V., Meschersky I. G. Analysis of hybridization between tetraploid Lotus corniculatus and diploid Lotus stepposus (Fabaceae-Loteae): morphological and molecular aspects // Plant Syst. Evol. 2012. Vol. 298. P. 629-644.
Liu, W.S., Dong, M., Song, Z.P., Wei, W. Genetic diversity pattern of Stipa purpurea populations in the hinterland of Qinghai-Tibet Plateau // Annals of Applied Biology 2009. Vol. 154. P. 57-65.
Martinovsky J.O. Stipa // Flora Europaea. Vol. 5: Alismataceae to Orchidaceae (Monocotyledones). Cambridge etc., 1980. P. 247-252.
Pritchard J. K., Stephens M., Donnelly P. Inference of population structure using multilocus genotype data // Genetics. 2000. Vol. 155. P. 945-959.
Pritchard J. K., Wen X., Falush D. Documentation for structure software: Version 2.3 [Электронный ресурс]. 2009. Режим доступа: http://pritchardlab.stanford.edu/structure.html
Reddy M. P., Sarla N., Siddiq E.A. Inter simple sequence repeat (ISSR) polymorphism and its application in plant breeding // Euphytica. 2002. Vol. 128. P. 9-17.
Shan D., Zhao M., Han B., Han G. Examining the genetic diversity of Stipa grandis under various grazing pressures // Acta Ecologica Sinica. 2006. Vol. 26, N 10. P. 3175-3183.
StatSoft, Inc. STATISTICA (data analysis software system), version 6.1. 2003. www.statsoft.com.
Vázquez F.M., Gutiérrez M. Classification of species of Stipa with awns having plumose distal segments // Telopea. 2011. Vol. 13. N 1. 2. P. 155-176.
Wagner V., Durka W., Hensen I. Increased genetic differentiation but no reduced genetic diversity in peripheral vs. central populations of a steppe grass // Amer. J. Bot. 2011. Vol. 98. N 7. P. 1173-1179.
Wagner V, Treiber J., Danihelka J., Ruprecht E., Wesche K., Hensen I. Declining genetic diversity and increasing genetic isolation toward the range periphery of Stipa pennata, a Eurasian Feather Grass // International Journal of Plant Sciences. 2012. Vol. 173. N 7. P. 802-811.
Wolfe A. D., Xiang Q.-Y., Kephart S. R. Assessing hybridization in natural populations of Penstemon (Scrophulariaceae) using hypervariable inter simple sequence repeat markers // Mol. Ecol. 1998. Vol. 7. P. 1107-1125.
ZhangX.-L., Yuan Y.-M., GeX.-J. Genetic structure and differentiation of Gentiana atuntsiensis W. W. Smith and G. striolata T. N. Ho (Gentianaceae) as revealed by ISSR markers / Bot. J. Linn. Soc. 2007. Vol. 154. P. 225-232.
Поступила в редакцию 30.12.13
MORPHOLOGICAL AND ISSR DATA FOR STIPA UCRAINICA AND STIPA ZALESSKII (POACEAE) FROM THE ROSTOV REGION
Yu.O. Kopylov-Guskov, T.E. Kramina
Results of morphological and ISSR analyses of Stipa ucrainica and Stipa zalesskii from territory of the Rostov Region are presented. The results of all analyses we conducted - unidimensional and multidimensional morphological analyses, analysis of ISSR markers distribution - suggest a high level of differences between Stipa ucrainica and Stipa zalesskii so these species should not be united.
Key words: Stipa ucrainica, Stipa zalesskii, ISSR, morphological analysis, multidimensional scaling, Bayesian analysis.
Сведения об авторах: Копылов-Гуськов Юрий Олегович - аспирант кафедры высших растений биологического факультета МГУ (yurez-kg@yandex.ru); Крамина Татьяна Евгеньевна - ст. преподаватель кафедры высших растений биологического факультета МГУ, канд. биол. наук (tkramina@yandex.ru).
