CC BY
42
УДК 619:616.98:578.826.1:616-073
Ключевые слова: аденовирус птиц, синдром гепатита-гидроперикардита, клеточный и гуморальный иммунитет
Key words: avian adenovirus, hepatitis-hydropericardium syndrome, cell-mediated and humoral immunity
Волкова М.А., Осипова О. С., Сосипаторова В. Ю., Чвала И. А.
ИЗУЧЕНИЕ ПАРАМЕТРОВ ИММУННОГО ОТВЕТА ЦЫПЛЯТ-БРОйЛЕРОВ ПОСЛЕ ЗАРАЖЕНИЯ АДЕНОВИРУСОМ ПТИЦ
STUDY OF PARAMETERS OF BROILER CHICKEN IMMUNE RESPONSE AFTER AVIAN ADENOVIRUS INFECTION
ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных», лаборатория вирусных болезней птиц Адрес: 600901, Россия, г. Владимир, мкр. Юрьевец
Federal Centre for Animal Health, Laboratory for Avian Diseases Address: 600901, Russia, Vladimir, Yurevets, FGBIARRIAH
Волкова Марина Алексеевна, к. б. н., вед. научн. сотрудник
Volkova Marina A., PhD in Biological Sciences, Leading Research Scientist Осипова Ольга Сергеевна, ветврач Osipova Olga S., Veterinarian Сосипаторова Виктория Юрьевна, вед. биолог Sosipatorova Victorya Yu., Leading Biologist Чвала Илья Александрович, к. в. н., зав. лабораторией Chvala Ilya A., PhD in Veterinary Science, Laboratory Chief
Аннотация. Представлены данные по изучению параметров клеточного и гуморального иммунного ответа 7-сут. цыплят-бройлеров после орального заражения изолятом аденовируса птиц вида C. Экспериментальное заражение аденовирусом птиц приводило к развитию синдрома гепатита-гидроперикардита. Отмечены патологические изменения лимфоидных органов (селезенки, бурсы). В 3-9 сут. после заражения у инфицированных цыплят регистрировали значительное снижение объема CD4+ Т-клеток и увеличение процента цитотоксических клеток в крови по сравнению с неинфицированным контролем. Через 20 сут. после инфицирования объем субпопуляций CD4+ и CD8+ Т-клеток в крови зараженных цыплят приблизился к контролю. Гуморальный ответ характеризовался выработкой специфических антител через 9-24 сут. после заражения.
Summary. In this study, we presented data of study of cell-mediated and humoral immune responses of seven-day-old broiler chickens infected with avian adenovirus species C isolate. Experimental avian adenovirus infection led to the development of hepatitis-hydropericardium syndrome. Pathological changes in lymphoid organs (spleen, bursa) were detected. In 3-9 days after infection, significant decrease in volume of CD4+ T cells and increase in the percentage of cytotoxic cells in blood, compared to the uninfected control group, was recorded. 20 days after infection, the amount of subpopulations of CD4+ and CD8+ T cells in blood of infected chickens reached the control value. Humoral response was characterized by generation of specific antibodies in 9-24 days after infection.
Введение
В последние годы в птицехозяйствах Российской Федерации участились случаи возникновения болезней, в этиологии которых принимают участие аденовирусы птиц [1, 2]. Аденовирусы птиц (FAdV) -безоболочечные ДНК-содержащие вирусы, относящиеся к роду Aviadenovirus семейства Adenoviridae [3]. По генетическим свойствам аденовирусы птиц разделяют на 5 видов (A-E), а по перекрестной активности в реакции нейтрализации -на 12 серотипов [3, 9]. Различные штаммы и изоляты FAdV отличаются по сво-
им патогенным свойствам. Возбудителем синдрома гидроперикардита (СГПК) чаще являлись изоляты FAdV-4 (вид С) [7]. Синдром гидроперикардита зарегистрирован главным образом у цыплят-бройлеров 3-5-недельного возраста, но может поражать птиц старшего возраста. Заболевание характеризуется высокой контагиозностью и смертностью (до 70-80 %). Среди основных признаков заболевания выделяют скопление прозрачного, соломенно-окрашенного экссудата в перикарде, отек легких, а также поражение печени (увеличена в размере, измененная окраска) и почек
(увеличены в размере, с контурированными канальцами и мочеточниками) [5, 6].
Ряд авторов сообщал о негативном влиянии вирулентных аденовирусов птиц на лимфоидные органы кур [4, 5, 8]. Так, Saifuddin and Wilks (1992) регистрировали снижение количества лимфоцитов в бурсе, тимусе и селезенке СПФ-цыплят, зараженных FAdV-8; Singh et al. (2006) отметили снижение ми-тогенного ответа лимфоцитов периферической крови цыплят, зараженных FAdV-1, после стимуляции фитогемагглютинином; Schonewille et all. (2008) наблюдали супрессию клеточного и гуморального иммунного ответа цыплят, инфицированных вирулентным FAdV-4; Hussain et al. (2012) регистрировали морфологические изменения в лим-фоидных органах, клеточную и гуморальную иммуносупрессию у цыплят-бройлеров, зараженных вирулентным FAdV-4. Поскольку вопросы взаимодействия иммунной системы кур с вирулентными аденовирусами птиц изучены недостаточно, целью нашей работы являлось исследование иммунного ответа цыплят-бройлеров после экспериментального заражения аденовирусом птиц, вызывающим синдром гепатита-гидроперикардита.
Материалы и методы
Вирус. Изолят аденовируса птиц вида С, выделенный от кур из птицефабрики Краснодарского края РФ в 2009 г., в виде куль-туральной жидкости 2 пассажа на культуре клеток гепатомы петуха леггорн (LMH).
Полимеразно-цепная реакция в режиме реального времени (ПЦР-РВ). Двухцепо-чечную ДНК аденовируса выделяли коммерческим набором NucleoS™ (Биоком, Россия) согласно инструкции производителя. Реакцию проводили с использованием прибора Rotor-Gene 6000 (Corbett Research, Австралия). Для выявления аденовируса с помощью ПЦР использовались прайме-ры и зонды, специфические для вида С, FAdV4-433F: CCC-TAC-TGC-GGC-ACG-GCT-TA, FAdV4-608R: CCT-GGT-TGG-GAT-TGG-GGA-AGA, ДНК-зонд FAdV4-FAM: AC-CTC-CAA-AGA-CAC-GAC-GGC-GG.
Лабораторные животные. В опыте использовали 7-суточных цыплят-бройлеров, не имеющих антител к аденовирусу птиц.
Эксперимент на животных. В опыте цыплята были разделены на две группы. Цыплятам из первой (опытной) группы (32 головы) перорально вводили культураль-ную жидкость, содержащую изолят аденовируса птиц, в дозе 5,0 lg ТЦД50/мл. Второй группе (26 голов) вводили по 1,0 мл культу-ральной жидкости (LMH), не содержащей вирус. Группы содержались в отдельных изолирующих боксах. На 1, 3, 6, 9, 14, 20 и 26 сутки после инфицирования проводили убой трех цыплят из контрольной группы и трех цыплят из опытной группы для пато-логоанатомического исследования и отбора проб биоматериала.
ИФА. Выявление антител к аденовирусу птиц проводили в непрямом варианте ИФА с использованием коммерческого набора производства ФГБУ «ВНИИЗЖ» по инструкции производителя. Результат реакции считали положительным при величине титра антител 450 и выше (за титр принимали величину, обратную разведению сыворотки).
Количественный анализ субпопуляций лимфоцитов. Выделение лимфоцитов из периферической крови и лимфоидных органов кур проводили по стандартной методике с использованием Ficoll-PaqueTM PLUS (Amersham Biosciences, Швеция). Подготовку проб для выявления поверхностных маркеров лимфоцитов осуществляли с использованием меченых моноклональных антител CD45-FITC, CD4-PE, CD8a-PE, CD3-FITC и Bu1a-PE (Serotec, Англия). Количественный анализ клеток проводили на проточном ци-тофлуориметре BD FACS Calibur (Becton, Dickinson, США). Измерение и обработку полученных результатов осуществляли с использованием программного обеспечения Cell Quest Pro 1.0.
Определение продукции цитокинов. Суспензию лимфоцитов селезенки в концентрации 1х107 клеток/мл активировали кон-кавалином А (ConA) (Sigma-Aldrich, США) (0,1 мг/мл) и инкубировали в CO2-инкубаторе при температуре 37 °С в течение 48 ч. В качестве отрицательного контроля
использовали лимфоциты, инкубированные со средой RPMI 1650. Продукция интерферона-у (IFN-y) и интерлейкинов (IL) была оценена в ИФА с использованием наборов Chicken IFN-y CytoSet (Biosource, США), Chicken Interleukin 4 ELISA kit (Genorise Scientific, США) и Chicken Interleukin 6 ELISA kit (Cusabio Biotech, Китай).
Гистологическое исследование. Кусочки органов, размером 0,5*0,5*0,5 см фиксировали 4 % раствором формалина в 80 % растворе этилового спирта в течение 48 часов и заключали в парафин. С парафиновых блоков получали срезы толщиной 5-7 мкм (микротом Microm HM340E, Германия). Готовые препараты окрашивали гематоксилином и эозином для обзорной окраски. Микроскопическое исследование препаратов производили на инвертированном конфокальном микроскопе Nikon Eclipse Ti-E C2+ (Япония).
Статистический анализ результатов. Для статистической обработки данных использовали программу Statistica 10.0 (Stat Soft. Inc., США). Существенность различий результатов определения продукции цито-кинов в ИФА и цитофлуориметрических исследований проб от цыплят из инфицированной и контрольной групп определяли с использованием непараметрического критерия Манна - Уитни. Различия считали статистически значимыми при р < 0,05.
Результаты исследований
В течение периода наблюдения у экспериментально зараженных цыплят отмечали угнетенное состояние, вялость, потерю аппетита, истощение, взъерошенность перьевого покрова, затрудненное дыхание, диарею.
Специфический падеж цыплят в опытной группе был отмечен через 4, 7, 9, 14 и 20 суток после заражения (всего пало 6 птиц).
Начиная с 4-6 суток после заражения и до окончания эксперимента при патологоа-натомическом исследовании убитых птиц из опытной группы регистрировали изменения, характерные для синдрома гидроперикардита: скопление серозной жидкости в перикарде, печень была увеличена, ткань печени имела рыхлую консистенцию, светло-коричневый цвет либо неравномерную окраску с разлитыми кровоизлияниями под капсулой органа. Почки были увеличены, поджелудочная железа была с точечными кровоизлияниями, легкие уплотнены и отечны, в мышечной ткани наблюдали кровоизлияния. При гистологическом исследовании в печени отмечали дистрофические изменения гепатоцитов, очаговые некрозы. В гепатоцитах обнаруживались тельца-включения. В почках отмечали дистрофическое изменение эпителия канальцев, заполнение слизистым секретом просветов дистальных, проксимальных канальцев и собирательных трубочек.
Наличие ДНК аденовируса в органах инфицированных цыплят было подтверждено методом ПЦР-РВ (табл. 1).
При исследовании проб внутренних органов от убитых птиц ДНК аденовируса была обнаружена в печени (3, 6, 14, 24 сут.), почках (6 сут.), кишечнике (3, 6, 9, 24 сут.), бурсе (6 и 20 сут.) и селезенке (6 и 24 сут.) зараженных цыплят (табл. 1).
Исследование внутренних органов от павших цыплят в различные сроки после заражения (4, 7, 9, 14 и 20 сутки) показало наличие генома аденовируса птиц во всех
Таблица 1.
Результаты выявления генома аденовируса птиц вида С в органах зараженных цыплят
Пробы* Период после заражения, сут.
3 6 9 14 20 24
печень + + - + - +
почки - + - - - -
кишечник + + + - - +
бурса - + н/и н/и + -
селезенка н/и + н/и н/и - +
Примечание: «+» - положительный результат, «-» - отрицательный результат, «*» - исследовали общую пробу от трех цыплят, «н/и» - не исследовали.
Рис. 1. Селезенка. А - здоровая ткань (контрольная группа), В - пораженная ткань (инфицированная группа) -11 сут. после заражения. Парафиновый срез. Окр. гематоксилин и эозин, об. х10, ок. х10. Стрелками отмечены: 1 - лимфатический фолликул, 2 - красная пульпа.
исследованных органах (печень, почки, кишечник, бурса, селезенка).
В контрольной группе птицы были клинически здоровы. Патологических изменений органов у убитых птиц контрольной группы и случаев выявления генома аденовируса птиц в органах цыплят в течение периода наблюдения не регистрировали.
Заражение цыплят аденовирусом вызывало патологические изменения лимфоидных органов: тимус был уменьшен в размере, в некоторых случаях селезенка была увеличена, с кровоизлияниями, фабрициева сумка у некоторых цыплят была атрофирована.
При гистологическом исследовании в селезенке наблюдали уменьшение количества лимфатических фолликулов в поле зрения,
границы фолликулов выражены не четко, синусоиды красной пульпы кровенаполне-ны, по сравнению с контролем (рис. 1).
В фабрициевой сумке (бурсе) было отмечено уменьшение размера фолликулов и некробиотические изменения мозговой зоны (рис. 2).
Динамику изменения количественного соотношения двух популяций Т-лимфоцитов (CD4+ и CD8+) в крови и лимфоидных органах цыплят, инфицированных аденовирусом птиц, по сравнению с птицами, получившими неинфицированную культуру клеток, изучали методом проточной цитофлуориме-трии.
Через 1 сутки после заражения наблюдали кратковременную активацию иммунного
Рис. 2. Бурса. А - здоровая ткань (контрольная группа), В - пораженная ткань (инфицированная группа) -20 сут. после заражения. Парафиновый срез. Окр. гематоксилин и эозин. об. х10, ок. х10. Стрелками отмечены: 1 - фолликул, 2 - мозговой слой.
ответа у инфицированных птиц, которая выражалась в более высоком, по сравнению с контрольными птицами, уровне Т-хелперов в крови и селезенке, процент В-лимфоцитов
70
10
0
в бурсе зараженных цыплят был на 8 % больше, чем у контрольных птиц (рис. 3).
Через 3-9 суток после инфицирования регистрировали значительное снижение
40 30
+
со а
V 20
ч»
3 ю
о
Г 3* 6 9* 14 20 Сутки после заражения кровь
£ а
о
А
т а о
100 80 60 40 20 0
13 6 9 Сутки после заражения
тимус
14
3 6 9
Сутки после заражения
тимус
3 6 9
Сутки после заражения
бурса
14
3 6 9
Сутки после заражения
бурса
Рис. 3. Динамика относительного количества субпопуляций лимфоцитов цыплят в различные сроки после заражения изолятом аденовируса птиц вида С.
Примечания. Отдельные символы представляют процентное количество клеток для индивидуальной птицы: ромб - из контрольной группы, квадрат - из инфицированной группы. Линии представляют среднее арифметическое значение по группе: сплошная линия - инфицированная группа, пунктирная линия - контрольная группа. «*» - показывает процентное содержание субпопуляций лимфоцитов опытной группы, которые существенно отличались от таковых контрольной группы, p < 0,05; Mann-Whitney U-test.
процента CD4+ Т-клеток и увеличение процента CD8a+ клеток в крови инфицированных птиц. Относительное количество обеих популяций у инфицированных цыплят отличалось в 1,5 раза от уровня контрольных птиц. Нормализацию объема обеих субпопуляций у зараженных цыплят регистрировали с 14 суток после заражения.
Анализ фенотипа клеток селезенки не показал таких существенных изменений, как в крови. Можно отметить несущественное увеличение процента CD4+ клеток через 6 суток после заражения у инфицированных цыплят и дальнейшее снижение объема этой субпопуляции клеток до конца срока наблюдения. При этом наблюдали скачкообразное (вверх-вниз) изменение процента цитотокси-ческих клеток с общей тенденцией в сторону увеличения как у зараженных, так и у контрольных цыплят.
В тимусе с 1 по 9 сутки после заражения процент CD4+ Т-клеток в обеих группах существенно не менялся, через 14 суток после заражения у инфицированных цыплят он снизился и был в среднем на 11 % меньше, чем у контрольных птиц. Процент CD8+ тимоцитов увеличился с 1 по 3 сутки после заражения в обеих группах, с 6 по 14 сутки существенно не изменялся в контрольной группе, а у инфицированных цыплят снижался к 14 суткам после заражения и был в среднем на 10 % меньше, чем у контрольных птиц. В одной пробе от зараженных цыплят было отмечено значительное уменьшение процента CD4+ и CD8+ Т-клеток до 47,28 и 59,07 %, соответственно, через 14 суток после заражения (для сравнения: у контроля - 79 и 83 %, соответственно).
Через 3-14 сут. после заражения объем В-лимфоцитов в бурсе цыплят обеих групп составлял 96-97 %. Содержание Т-лимфоцитов в бурсе зараженных цыплят увеличилось с 1,82 % через 1 сутки до 4,88 % через 14 суток после инфицирования.
При определении продукции интерлейки-нов в супернатанте активированных СопА лимфоцитов селезенки увеличение продукции ^N-7 регистрировали у зараженных цыплят через 1 сутки и 14-20 сут. после инфицирования. В группе неинфицированных цыплят был определен более низкий уровень продукции ГР№у в эти сроки (рис. 4А).
Через 3-9 суток после заражения стимулированные лимфоциты селезенки инфицированных цыплят не вырабатывали
Экспрессию противовоспалительного ин-терлейкина ГЬ-6 у инфицированных цыплят отмечали в течение всего периода наблюдения, за исключением 9 сут., а у контрольных птиц - через 1-3 и 14-20 суток после заражения (рис. 4В). При этом у зараженных цыплят ГЬ-6 вырабатывался в большей степени, чем у контрольных через 3, 6 и 20 суток после заражения.
А
В
3 6* 9 14 20 Сутки после заражения
о контроль El опыт
С
Рис. 4. Экспрессия IFN-y и интерлейкинов 4 и 6 спле-ноцитами цыплят, стимулированными ConA, в различные сроки после заражения изолятом аденовируса птиц вида С (горизонтальной линией указан позитивно-негативный порог).
Примечания: «*» - показывает среднее количество ци-токинов, продуцируемых лимфоцитами птиц опытной группы, которые существенно отличались от таковых контрольной группы, p < 0,05; Mann-Whitney U-test. Числовые значения над столбцами показывают количество положительных проб из общего количества исследованных проб.
В течение всего периода наблюдения активированные спленоциты цыплят обеих групп вырабатывали ГЬ-4 (рис. 4С). В 1-14 сут. после заражения уровень продукции ГЬ-4 был низким в обеих группах, а затем вырос к 20 суткам более чем в 2 раза. При этом продукция ГЬ-4 у неинфицированных цыплят была существенно выше, чем у зараженных.
При исследовании сывороток крови в ИФА у зараженных цыплят были обнаружены специфические антитела к аденовирусу птиц (табл. 2).
Через 9 сут. после заражения антитела были выявлены у 3 цыплят из 9, а через 24 сут. - у 5 из 8 зараженных цыплят. Средний титр антител в ИФА через 24 сут. после заражения составил 957±320.
У контрольных цыплят в течение всего эксперимента специфические антитела не выявляли.
Обсуждение результатов
До настоящего времени имеется ограниченное количество данных о взаимодействии вирулентных аденовирусов птиц с клетками иммунной системы цыплят. Для изучения действия вируса на популяционный состав и функциональную активность лимфоцитов цыплят использовали метод проточной цитофлуориметрии и ИФА для определения уровня секретируемых цитокинов. Гистологический метод был использован для оценки морфологических изменений в структуре лимфоидных органов.
Патогенность изолята аденовируса птиц для цыплят-бройлеров была подтверждена наличием клинических признаков и патоло-гоанатомических изменений, характерных
для синдрома гепатита-гидроперикардита, и специфической гибелью птиц. Наличие вируса в органах зараженных птиц было подтверждено методом ПЦР.
Было показано, что аденовирус птиц реплицировался в лимфоидных органах и оказывал на них цитопатическое действие, что подтверждено данными других авторов
[5, 8, 10].
При гистологическом исследовании бурсы регистрировали некробиотические изменения в мозговой зоне лимфоидных фолликулов, в некоторых случаях отмечали атрофию бурсы.
При цитофлуориметрическом исследовании ткани бурсы наблюдали увеличение процента Т-лимфоцитов с 1 по 14 сутки после заражения у инфицированных цыплят (до 5,6 % у отдельных особей), что также характерно при развитии инфекционного процесса в тканях бурсы. В норме в бурсе содержится небольшое количество Т-лимфоцитов, о чем свидетельствовали данные Jeurissen et all., 1994. Динамика изменения относительного количества В-лимфоцитов в бурсе зараженных цыплят существенно не отличалась от цыплят контрольной группы. Schonewille et all. (2008) также не регистрировали изменения количества В-лимфоцитов при ци-тофлуориметрическом исследовании клеток бурсы цыплят, зараженных вирулентным аденовирусом птиц.
Цитофлуометрическое исследование тимуса показало уменьшение процента Т-хелперов и цитотоксических Т-клеток у зараженных цыплят по мере развития инфекционного процесса, что подтверждено данными Schonewille et all. (2008) и Hussain et al. (2012).
Таблица 2.
Результаты выявления антител к аденовирусу птиц в ИФА
Группа Сутки после заражения
0 9 20 24
Контроль 199±58a 268±97 0/10 46±46 0/10 2±1 0/8
Опыт 0/8c 302±154 697±188 957±320
3/9 6/10 5/8
Примечание: а - средний титр антител по группе, с - отношение количества положительных проб к общему количеству проб в группе.
При исследовании селезенки отмечали нарушение структуры, выраженное в виде уменьшения количества лимфатических фолликулов, по сравнению с контролем. Деструкция и атрофия селезенки была обнаружена Hussain et al. (2012) при экспериментальном заражении цыплят-бройлеров вирулентным аденовирусом птиц 4 серотипа.
Исследование иммунного фенотипа клеток селезенки не выявило существенной разницы между динамикой изменения CD4+ и CD8+ субпопуляций Т-лимфоцитов в опытной группе по сравнению с контрольной. Исключение: увеличение процента CD8+ Т-лимфоцитов у двух цыплят на 3 и 9 сутки после заражения. Напротив, в работе Schonewille et all. (2008) было показано, что экспериментальное заражение СПФ-цыплят вирулентным FAdV-4 приводило к значительному снижению CD4+ и CD8+ субпопуляций Т-лимфоцитов в селезенке цыплят на 4 сутки после заражения, а репопуляция селезенки Т-лимфоцитами была отмечена на 11 сутки после заражения. Различия в динамике могли быть связаны с разной дозой вводимого вируса и способом введения (Schonewille et all. использовали внутримышечный способ введения и большую дозу вводимого вирусного материала 0,1 мл 108,5 ТЦД50).
Для исследования функциональной активности спленоцитов проводили их активацию ex vivo митогеном ConA и определяли уровень продукции IFN-y, IL-4 и IL-6. IFN-y ингибирует размножение вируса в клетках, усиливает специфический иммунный ответ, стимулируя повышенную экспрессию молекул антигенов MHC класса II и MHC класса I, а также способствует более эффективному уничтожению макрофагами внутриклеточных микроорганизмов (Wigley P., 2003). Интерлейкин-4 является регулятором роста и дифференциации В-лимфоцитов, а также процесса биосинтеза ими антител. Продуцируется активированными CD4+ Т-лимфоцитами (Th2), эозинофилами. IL-6 синтезируется активированными макрофагами и Т-клетками и является показателем иммунного ответа при заболеваниях, сопровождающихся воспалением. Основное действие IL-6 связано с участием в диффе-
ренцировке В-лимфоцитов, их созревании и преобразовании в плазматические клетки, секретирующие иммуноглобулины, а также в стимуляции пролиферации Т-лимфоцитов. Заражение цыплят изолятом аденовируса птиц индуцировало оба типа иммунного ответа ТЫ (клеточно-опосредованный) и ^2 (гуморальный), что было определено по продукции цитокинов ГРЭД-у (ТЫ), ГЬ-4 и ГЬ-6 (^2) стимулированными клетками селезенки. Развитие гуморального иммунного ответа было подтверждено также выработкой специфических антител.
Наиболее выраженные изменения иммунного фенотипа клеток были выявлены при цитофлуориметрическом исследовании лимфоцитов крови. Заражение цыплят аденовирусом птиц вызывало существенное изменение субпопуляционного состава Т-лимфоцитов с 3 по 9 сутки после инфицирования в сторону уменьшения процента CD4+ клеток и увеличения процента CD8+ клеток. В указанный промежуток времени регистрировали клинические признаки болезни и первые случаи падежа птиц. Поскольку заболевших цыплят выявляли до конца срока наблюдения, отклонение от уровня контроля у отдельных птиц регистрировали также на 14 и 20 сутки после заражения.
Таким образом, развитие инфекционного процесса у цыплят после перорального заражения аденовирусом птиц вызывало снижение уровня экспрессии CD4+ клеток в крови, CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов в тимусе через 3-9 и 14 суток после заражения, соответственно. Активированные СопА спленоциты инфицированных цыплят в период через 3-9 суток после заражения не вырабатывали ГРЭД-у и экспрессировали низкий уровень ГЬ-4. Увеличение продукции ГРЭД-у и ГЬ-4 активированными лимфоцитами селезенки регистрировали только через 20 сут. после экспериментального заражения цыплят.
Заключение
При экспериментальном пероральном заражении цыплят аденовирус птиц вида С вызывал характерные для аденовирусной
инфекции макро- и гистопатологические изменения тканей внутренних органов (печени, почек, селезенки, поджелудочной железы, сердца, бурсы). Наличие аденовирусной ДНК в органах зараженных птиц было подтверждено методом ПЦР-РВ. Вирус индуцировал супрессию клеточного иммунного ответа у зараженных птиц. Выработка специфических антител была отмечена с 9 по 24 сутки после инфицирования.
Список литературы
1. Ельникова, Е. В. Изучение патогенных свойств полевых изолятов аденовирусов кур, выделенных на территории РФ / Е. В. Ельникова, В. В. Борисов // Ветеринарная патология. - 2006. - № 4. - С. 126-131.
2. Серологический мониторинг аденовирусной инфекции птиц и выявление вируса на территории Российской Федерации в 2008-2010 годах / М. А. Волкова, А. В. Ирза, М. И. Шульпин // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. - 2011. - Т. 9. - С. 192-201.
3. Classification of fowl adenoviruses by use of phylogenetic analysis and high-resolution melting-curve analysis of the hexon Li gene region / A. Marek, A. Gunes, E. Schulz, M. Hess //Journal of Virological Methods. -2010. - Vol. 170. - P. 147-154.
4. Effect of fowl adenovirus-1 (IBH isolate) on humoral and cellular immune competency of broiler chicks /
A. Singh, G. S. Grewal, N. K. Maiti [et all.] //Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. - 2006. - Vol. 29. -P. 315-321.
5. Fowl adenovirus (FAdV) serotype 4 causes depletion of B and T cells in lymphoid organs in specific pathogen-free chickens following experimental infection / E. Schonewille, A. Singh, T. Gobel [et al.] // Veterinary Immunology and Immunopathology. - 2008. - Vol. 121. -P. 130-139.
6. Hafez, H. M. Avian adenoviruses infections with special attention to inclusion body hepatitis/ hydropericardium syndrome and egg drop syndrome / H. M. Hafez // Pakistan Veterinary Journal. - 2011. -Vol. 31. - N 2. - P. 85-92.
7. Hess, M. Detection and differentiation of avian adenoviruses: a review / M. Hess // Avian Pathology. -2000. - Vol. 29. - P. 195-206.
8. Immune system dysfunction in broiler chickens experimentally inoculated with fowl adenovirus serotype-4 associated with inclusion body hepatitis hydropericardium syndrome / I. Hussain, M. Mahmood, M. Arshad [et al.] // Turk. J. Vet. Anim. Sci. - 2012. -Vol. 36 (3). - P. 223-230.
9. Polymerase chain reaction combined with restriction enzyme analysis for detection and differentiation of fowl adenoviruses / G. Meulemans, M. Boschmans, T. P. van den Berg, M. Decaesstecker // Avian Pathology. - 2001. -Vol. 30. - P. 655-660.
10. Saifuddin, M. Effects of fowl adenovirus infection on the immune system of chickens / M. Saifuddin, C. R. Wilks // J. Comp. Pathol. - 1992. - Vol. 107. -P. 285-294.
НОУ ДО «ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРНОМ БИОЛОГИИ» г. Санкт-Петербург
Курсы повышения квалификации
Основы ультразвуковой диагностики в ветеринарии Частная ультразвуковая диагностика в ветеринарии Рентгенодиагностика в ветеринарии Лабораторная диагностика в ветеринарии Основы ветеринарной кардиологии Основы эхокардиографии в ветеринарии Частная ветеринарная кардиология
Предварительная регистрация обязательна! Справки по тел. +7 921 095-89-27 График проведения и информация на сайте: www.invetbio.spb.ru/seminars.html
Лицензия Комитета по образованию Санкт-Петербурга на осуществление образовательной деятельности по образовательным программам дополнительного профессионального образования № 1093 от 04.08.2014 г.
