CC BY
30
ISSN2221-7711 Национальные приоритеты России. 2016. № 4 (22)
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
УДК 575.174.4 ГРНТИ 34.25.21
ИЗУЧЕНИЕ ГЕНОТИПА ВИРУСА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА В АЛМАТИНСКОЙ ОБЛАСТИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАИ
K.C. Абдиева1, Л.Т. Ералиева3, H.A. Туребеков1' 6, А.М. Дмитровский3, Р. Егембердиева3,
2 3 3 3 4 4
И. Циннер , З. Качиева , А. Амирбеков , A. Орадова , Ж. Ж. Шапиева , Л. Зиядина , Д. Хопер5, А. Жалмагамбетова6, Ш. Фрай 2, С. Эссбауэр2
1Центр Международного Здравоохранения, Университет им. Людвига Максимилиана
Мюнхен, Германия
2Институт Микробиологии Бундесвера, Мюнхен, Германия
3Казахский национальный медицинский университет им. С.Д. Асфендиярова
Алматы, Казахстан
4
6
Научно-практический центр санитарно-эпидемиологической экспертизы и мониторинга Алматы, Казахстан
5Институт Фридриха Леффлера, Грайсвальд, Остров Римс, Германия 'Германское общество по международному сотрудничеству, Алматы, Казахстан
Приводятся данные о циркулирующем штамме вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) и процент инфициро-ванности клещей ВКЭ в эндемичных районах Алматинской области (Казахстан). Был исследован 2341 клещ. РНК вируса клещевого энцефалита была обнаружена в 354 клещах из 2341. Полученные данные позволили определить Сибирский генотип вируса клещевого энцефалита и минимальный процент инфицированности вирусом ВКЭ клещей в эндемичных районах Алматинской области.
Ключевые слова: инфицированность, вирус, клещевой энцефалит.
THE INVESTIGATION OF TBEV GENOTYPE IN ALMATY REGION OF KAZAKHSTAN
K.S. Abdieva1, L.T. Eralieva3, N.A. Turebekov1'6, A.M. Dmitrovskiy3, R. Egemberdieva3, I. Tsinner2, Z. Kachieva3, A. Amirbekov3, A. Oradova3, Zh.Zh. Shapieva4, L. Ziyadina4, D. Hoper5, A. Zhalmagambetova6, Sh. Fray2, S. Essbauer2
1 Center for International Health, Ludwig-Maximillians University, Munich, Germany 2Bundeswehr Institute of Microbiology, Munich, Germany 3Asfendiyarov Kazakh National Medical University
4Scientific and Practical Center of Sanitary-Epidemiological Expertise and Monitoring 5Leffler University, Graysval'd, Rims, Germany 6 German Society for International Cooperation, Almaty, Kazahstan
© K.C. Абдиева, Л.Т. Ералиева, H.A. Туребеков, A.M. Дмитровский, Р. Егембердиев, И. Циннер,
З. Качиева, А. Амирбеков, A. Орадова, Ж. Ж. Шапиева, Л. Зиядина, Д. Хопер, А. Жалмагамбетова,
Ш. Фрай, С. Эссбауэр, 2016
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
The article presents data regarding the TBE virus (TBEV) infection rate in ticks and circulating subtype in Almaty region. Overall, 2341 ticks were investigated during the study. The TBEV RNA was determined in 354 ticks out of 2341 ticks. The obtained data have allowed to define the Siberian genotype of TBEV and the minimum percent of contamination by TBEV virus of ticks in endemic areas of Almaty region.
Keywords: contamination, a virus, tick-borne encephalitis.
Введение. Географическое расположение Казахстана между известными природными очагами клещевого энцефалита, расположенными в Российской Федерации и Китае, разнообразие ландшафтно-климатических условий и животного мира создают благоприятные предпосылки для циркуляции переносчиков зоонозных инфекций. К сожалению, наиболее популярные туристические места на востоке и юго-востоке Казахстана являются эндемичными по клещевому энцефалиту. Согласно ежегодному отчету Научного практического центра санитарной эпидемиологической экспертизы и мониторинга (НПЦ СЭЭМ), заболеваемость клещевым энцефалитом составляет 0.16-0.32/100000. За 2006-20016 гг. было зарегистрировано 346 случаев клещевого энцефалита. Более подвержены заболеванию мужчины в возрасте 20-39 лет. Несмотря на ежегодную регистрацию случаев КЭ, нет доступной информации о циркулирующем штамме в эндемичных районах Алматинской области.
Цель исследования состояла в том, чтобы определить циркулирующий штамм и процент инфицированности клещей вирусом клещевого энцефалита в эндемичных районах Алматинской области.
Материал и методы. Был собран 2341 клещ с использованием «флага» по 32 маршрутам двух областей (Алматинская и Кызы-лординская) в 2015 г. На базе отдела паразитологии НПЦ СЭЭМ клещи были рассортированы в пулы, по пять имаго в каждом пуле согласно половому признаку, виду и фазе развития в пробирке 2 мл. Каждый пул был гомогенизирован с помощью аппарата TissueLyzerII. 140 надосадочной жидкости было использовано для экстракции РНК с помощью QiAmp Viral RNA mini Kit (Qiagen) согласно инструкции производителя. Выделенная РНК (80 ц1) была помещена на хранение в низкотемпературный морозильник (-80 оС.) Все образцы были протестированы на наличие РНК вируса КЭ с помощью ПЦР в
реальном времени обратной транскриптазы (Schwaingerand Cassionotti, 2003). Очищенный ПЦР продукт в дальнейшем был секве-нирован с помощью ABI Prism Big Dye Ter-minatorv 3.1 Cycle Sequencing Kit и 3500 xl Genetic Analyzer (Hitachi, Япония) с идентичными праймерами, использовавшимися для изначальной ПЦР амплификации.
Результаты. В общей сложности был исследован 2341 клещ, или 501 пул, из трех районов каждой области (Алматинской области и Кызылординской). Собранные клещи были определены как Ixodes persulcatus (1179 имаго и две нимфы), Dermacentor marginatus (57 имаго), Hyalomma asiaticum (78 имаго), Haemophisalis punctata (472 имаго), D. reticulatus (14 имаго), D. niveus (522 имаго), R. Turanicus (9 имаго). Клещи I. persulcatus и H. punctata превалируют в регионах Алматинской области, тогда как клещи рода D. niveus и H. asiaticum доминируют в Кызылординской области.
РНК вируса клещевого энцефалита была обнаружена в 354 клещах из 2341. В Кызылор-динской области РНК вируса клещевого энцефалита обнаружена не была. Тогда как в Ал-матинской области РНК вируса клещевого энцефалита была обнаружена в 48 пулах из 365. Минимальный процент инфицированно-сти вирусом клещевого энцефалита в Талгар-ском, Еотельдинском (г. Текели) и Енбекши-казахском районах Алматинской области составил 4,35-2,8 % и 1.1 % соответственно. Минимальный процент инфицированности клещей I. persulcatus, D. marginatus и H. punctata составил 3,5, 2 и 1,6 % соотвественно. Секвенирование и последующий филогенетический анализ 15 позитивных образцов из Те-кели и 12 позитивных образцов из Талгарского района Алматинской области позволили классифицировать данные образцы как сибирский подтип вируса клещевого энцефалита.
Дискуссия. Впервые было проведено секвенирование вируса клещевого энцефалита в Алматинской области Казахстана. Исследование показало, что необходимо дальней-
ISSN2221-7711 Национальные приоритеты России. 2016. № 4 (22)
шее продолжение исследований как по распространенности эндемичных по КЭ территорий, так и по вовлеченности в циркуляцию вируса других видов клещей, кроме I. persulcatus. Учитывая, что не все образцы РНК были секвенированы, нельзя исключить возможность циркуляции и других подтипов
вируса КЭ в природных очагах Алматинской области РК.
Заключение. Данные о распространении вируса КЭ в клещах разных видов помогут улучшить эпидемиологический надзор и профилактические мероприятия по клещевому энцефалиту.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК (REFERENCES)
1. M. Schwainger, P. Casionotti Development of Quantative real-time RT PCR assay with internal control for the laboratory detection of tick borne encephalitis virus (TBEV) RNA. Journal of Clinical Virology. 2003; 27:136-145.
Благодарность. Это исследование спонсировано Программой немецкого партнерства в целях сохранения безопасности в области здравоохранения.
Карлыгаш Абдиева является Ph. D докторантом в Центре Международного Здравоохранения, Университет Людвига-Максимилиана, программа которого финансируется за счет DAAD, Exceed и BMZ.
УДК 616.036.21:614.446.2(571.13) ГРНТИ 34.25.05
КОМПЛЕКСНОЕ ВЫЯВЛЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ПРИРОДНО-ОЧАГОВЫХ ИНФЕКЦИЙ МЕТОДОМ ПЦР В СНЯТЫХ С ЛЮДЕЙ ПЕРЕНОСЧИКАХ В ОМСКОЙ ОБЛАСТИ
12 12 12 1 1 Г.В. Березкина ' , С.В. Штрек ' , С.Ю. Зеликман ' , О.А. Боброва , Н.А. Околелова ,
А.Н. Коломеец1, И.Е. Самойленко1, С.А. Рудакова1, Ю.А. Петрова1, А.Ф. Любенко1,
Л.В. Кумпан1'2
1ФБУН «Омский НИИ природно-очаговых инфекций» Роспотребнадзора Россия, 644080, г. Омск, просп. Мира, 7
2 ФГБОУ ВО «Омский государственный медицинский университет» Минздрава России Россия, 644043, г. Омск, ул. Ленина, 12
Результаты анализа комплексного молекулярно-генетическое исследования снятых с людей иксодовых клещей на территории Омской области показали микст-инфицирование возбудителями природно-очаговых инфекций (клещевого энцефалита, иксодовых клещевых боррелиозов, клещевых риккетсиозов, туляремии, грану-лоцитарного анаплазмоза человека, моноцитарного эрлихиоза человека, бартонеллезов) в 16,5 %, что еще раз подтверждает существование и активное функционирование сочетанных природных очагов и их потенциальную опасность для человека. Генетический материал одновременно двух возбудителей выявлен в 84,5 % от всех «микстов», трех - в 14,3 %, четырех - 1,2 %. Сделаны выводы о необходимости дальнейшего изучения микст-инфицирования переносчиков, межвидовых взаимодействий патогенов в них, возможности передачи комплекса возбудителей человеку и особенностей клинических проявлений.
Ключевые слова: иксодовые клещи, снятые переносчики, микст-инфицирование, Омская область.
© G.V. Berezkina, S.V. Shtrek, S.Y. Zelikman, O.A. Bobrova, N.A. Okolelova, A.N. Kolomeets, I.E. Samoylenko, S.A. Rudakova, Y.A. Petrova, A.F. Lyubenko, L.V. Kumpan, 2016
