CC BY
270
УДК 635.743 Кубанский научный медицинский вестник № 7 (121) 2010
В. Н. БУБЕНЧИКОВА, Ю. А. КОНДРАТОВА
ч* __
ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ активности ШАЛФЕЯ БЛЕСТЯЩЕГО
Кафедра фармакогнозии и ботаники ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет»,
Россия, 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3. E-mail: [email protected]
В статье приведены данные о фармакологических исследованиях настоя, полученного из травы шалфея блестящего Salvia splendens Sellow ex roem. et Schultes. Экспериментальная работа выполнена на беспородных белых мышах и кроли-ках-альбиносах породы Шиншилла. В ходе исследований было установлено, что данная лекарственная форма относится к классу практически нетоксичных. Установлено противовоспалительное действие настоя шалфея блестящего, проявляющееся в угнетении стадии экссудации, влиянии на проницаемость капилляров и сочетающееся с наличием у него антимикробной активности.
Ключевые слова: шалфей блестящий, антиэкссудативная активность, антифлогистическая активность, антимикробная активность.
V. N. BUBENCHICOVA, Yu. A. KONDRATOVA
STUDY OF PHARMACOLOGICAL ACTIVITY OF SALVIA SPLENDENS SELLOW EX ROEM. ET SCHULTES
Department of pharmacognosy and botany Kursk state medical university,
Russia, 305041, Kursk, steet K. Marksa, 3. E-mail: [email protected]
Infusion of herb Salvia splendens Sellow ex Roem. et Schultes was found to have anti-inflammatory activity du to inhibition of phase of exudation and effect on capillary permeability combined with antimicrobial activity. Also found that infusion refers to the class practically nontoxic.
Key words: Salvia splendens Sellow ex Roem. et Schultes, anti-inflammatory activity.
Введение
Шалфей (L. Salvia) - самый крупный род в семействе яснотковые (губоцветных) - Lamiaceae (Labiatae). Он насчитывает около 700 видов, широко распространенных в областях с умеренным, субтропическим и тропическим климатом, однако наибольшее число его представителей сосредоточено в теплоумеренной и субтропической климатических зонах [2, 7].
В народной медицине растения рода шалфей нашли свое применение как антибактериальные, ранозаживляющие, противовоспалительные средства. В медицинской практике используются лишь два культивируемых вида рода шалфей: шалфей лекарственный, шалфей мускатный. Листья шалфея лекарственного применяются в виде настоя для полоскания горла, рта при катарактах верхних дыхательных путей и стоматитах. Листья являются составной частью грудного сбора № 3, сбора «Элекасол», из них производят эфирное масло, сальвин, фитолизин, сальвиатимол, саль-висат. Свежие соцветия шалфея мускатного идут на получения эфирного масла, концентрат используется для получения препарата «салмус» [4, 5, 8].
Разностороннее применение данных видов в медицинской практике дает предпосылки для изучения новых культивируемых видов рода шалфей. Одним из таких растений, широко культивируемых во всей европейской части России, является шалфей блестящий (Salvia splendens Sellow ex Roem. et Schultes). В фармакологическом плане данное растение не изучено. Поэтому целью нашей работы явилось изучение острой токсичности, противовоспалительной и антибактериальной активности травы шалфея блестящего.
Объектом исследования служила измельченная воздушно-сухая трава шалфея блестящего, заготовленная в 2009 году в ботаническом саду КГМУ в период массового цветения растения.
Методика исследования
Для фармакологических исследований использовали настой, полученный из травы шалфея блестящего. Эффективность фармакологической активности лекарственной формы сравнивали с настоем официналь-ного вида, полученным из листьев шалфея лекарственного. Лекарственные формы готовили по методике ГФ XI издания [3].
Эксперименты проводили в соответствии с установленными документами «Об утверждении правил лабораторной практики» (МЗ РФ, приказ № 267 от 19 июня 2003 г.), Good Laboratory Practice for Nonclinical Laboratory Studies (FDA, 21 CFR Part 58, 22.12.1978), OECD Principles on Good Laboratory Practice (OECD, ENV/ MC/ CHEM (98) 17, 1977).
Для определения острой токсичности использовали методику Б. М. Штабского [11]. Исследования проводили на беспородных белых мышах обоего пола массой 18,0-20,0 г. Настой травы шалфея блестящего вводили однократно внутрибрюшинно в дозах от 1 до 5 г/кг (в пересчете на сухое сырье) в объемах от 0,2 до 1 мл. После введения изучаемых веществ каждую группу животных (не менее 6 животных) помещали в изолированную клетку при стандартном температурном и пищевом режиме и вели наблюдение в течение 24 часов [9].
Оценку противовоспалительного действия настоев проводили в соответствии с методическими рекомен-
дациями по исследованию противовоспалительных препаратов [9, 10], влияющих на разные стадии процесса воспаления. Настои вводили в дозе 1 г/кг (в пересчете на сухое сырье) массы тела.
Антиэкссудативные свойства оценивали на модели острого воспалительного отека, вызванного суб-плантарным введением в заднюю лапу мыши 0,05 мл 2,5%-ного водного раствора формалина [9].
Одним группам мышей в течение недели, а затем за 2 часа до введения формалина, через 5 часов и 18 часов после него вводили внутрижелудочно настой травы шалфея блестящего, настой листьев шалфея лекарственного. Мышам контрольной группы в те же сроки вводили воду очищенную. Воспаление вызывали путем впрыскивания в толщу бедра одной из задних лапок 0,05 мл 2,5%-ного раствора формалина. Через 24 часа после введения формалина мышей забивали и отрезали у них воспаленные и невоспаленные задние лапки на уровне тазобедренного сустава. О выраженности воспалительного отека судили по приросту веса воспаленных лапок, который определяли по разнице в весе между воспаленными и невоспаленными лапками; о противовоспалительном действии изучаемых препаратов - по разнице между величиной отека лапы, вызванного формалином, у контрольных животных и мышей, получавших изучаемый препарат.
Антифлогистическую активность настоя определяли при моделировании локальной воспалительной реакции с помощью ксилола [6] на кроликах-альбиносах.
У кроликов предварительно выстригали шерсть на коже живота (участок 13 см). Препараты вводили внутримышечно за час до введения индикатора проницаемости, роль которого выполнял раствор трипановой сини. Трипановую синь вводили в краевую вену уха в виде 1%-ного раствора на 0,9%-ном растворе натрия хлорида из расчета 2 мл на 1 кг массы животного. Длительная циркуляция краски в кровеносном русле позволяет изучить нарушение проницаемости капилляров в течение нескольких часов после ее введения. Показателем проницаемости капилляров служили время появления на коже сине-окрашенных пятен и их диаметр. По разнице во времени появления пятен и их диаметру до и после введения препарата судили о его действии на проницаемость капилляров.
Изучение антибактериальной активности определяли in vitro на референтных штаммах тест-культур: Pseudomonas aeruginosa, Escherichia Coli, Proteus vulgaris, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Candida [1].
Для этого из настоя травы шалфея блестящего, настоя листьев шалфея лекарственного готовили различные разведения в стерильном расплавленном и осту-
женном до 50° С питательном агаре. Содержимое после перемешивания заливали в стерильные чашки Петри и оставляли при комнатной температуре. После застывания агара чашки делили на сектора. Каждый сектор засевали штриховым методом взвесью суточных культур, содержащей 100 млн. микробных тел в 1 мл, в количестве одной бактериологической петли. Контролем являлись посевы тех же бактерий на питательные среды, не содержащие испытуемых препаратов. Посевы инкубировали в термостате при температуре +37° С. Результаты эксперимента учитывали через 24 и 48 часов (для грибов рода Candida). При этом регистрировали интенсивность роста колоний микроорганизмов (сильный рост, слабый рост) или его отсутствие.
Результаты исследования
Исследование острой токсичности настоя травы шалфея блестящего показало, что в процессе эксперимента наблюдали угнетение двигательной активности животных, вялость, заторможенность, причем эти явления увеличивались с увеличением дозировки вводимого препарата. Однако к концу суток поведение животных не отличалось от интактных. LD в опытах
50
не установлено, поскольку при введении максимально допустимой по объему вводимого извлечения дозы гибели животных не наблюдали. Исходя из имеющихся данных, можно говорить, что исследуемый препарат, по классификации К. К. Сидорова, относится к классу практически нетоксичных.
При изучении антиэкссудативной активности на модели формалинового отека установлено, что максимальная величина отека лапы в контроле составляет 58,27±2,65 мг (100%) (таблица). Под действием настоя шалфея блестящего происходило снижение величины отека (41,88±1,23 мг) лапы мыши. При введении настоя шалфея лекарственного величина отека составила 38,07±2,18 мг. Противовоспалительный эффект данных препаратов составил 28,13% (шалфей блестящий) и 34,67% (шалфей лекарственный). Таким образом, антиэкссудативная активность настоя шалфея блестящего близка по действию к настою шалфея лекарственного.
При изучении влияния настоя, полученного из травы шалфея блестящего, на проницаемость капилляров у кроликов установлено (рис. 1, 2), что при его введении увеличивается латентный период проявления пятен окрашивания (6,55±0,21 мин) по сравнению с контролем (3,96±0,18 мин), а также уменьшается их диаметр (до 1,12±0,04 см) по сравнению с контролем (1,74±0,03 см), что является свидетельством наличия капилляроукрепляющего действия как одного из механизмов противовоспалительной активности исследуемого
Влияние изучаемых препаратов на отек лапы, вызванный у мышей формалином
Растение, препарат Вес лапок, мг Величина отека Противовоспалительный эффект, %
правой левой ^±m) мг %
Контроль 126,51 184,78 58,27±2,65 100,00
Настой листьев шалфея лекарственного 134,53 172,60 38,07±2,18* 69,33 34,67
Настой травы шалфея блестящего 123,95 165,83 41,88±1,23* 71,87 28,13
Примечание: * - различия по сравнению с контролем статистически достоверны при Р<0,05;
п=6 - количество мышей в группе.
Кубанский научный медицинский вестник № 7 (121) 2010
Кубанский научный медицинский вестник № 7 (121) 2010
И контроль
□ настой из шалфея лекарственного Н настой из шалфея блестящего
Н контроль
□ настой из шалфея лекарственного Н настой из шалфея блестящего
Рис. 1. Латентный период появления пятен окрашивания, мин
фитопрепарата. По своей фармакологической активности настой, полученный из травы шалфея блестящего, близок к действию настоя, полученного из листьев шалфея лекарственного, латентный период проявления пятен окрашивания которого составляет 7,08±0,24 мин, а диаметр пятен - 1,14±0,02 см.
Исследование антибактериальной активности показало, что настой травы шалфея блестящего, настой листьев шалфея лекарственного проявили выраженную антимикробную активность в отношении культуры Proteus vulgaris в концентрации 1:2, 1:4, 1:10, где наблюдалось отсутствие роста данной культуры. Отсутствие роста культуры Staphylococcus aureus наблюдалось на питательной среде, составной частью которой являлся настой из листьев шалфея лекарственного в концентрации 1:2, 1:4, 1:10, слабый рост был отмечен на питательной среде, где составной частью являлся настой травы шалфея блестящего в тех же концентрациях. В отношении культуры Bacillus cereus настой шалфея блестящего проявил бактерицидную активность в концентрации 1:2, настой шалфея лекарственного - в концентрации 1:2, 1:4. Относительно Candida, Pseudomonas aeruginosa настой шалфея лекарственного не проявил антибактериальной активности. Исследования настоя шалфея блестящего в отношении культуры Candida показало отсутствие роста данной культуры в концентрации 1:2, 1:4 и слабый рост в концентрации 1:10; в отношении культуры Pseudomonas aeruginosa - слабый рост в концентрации 1:2, 1:4 и рост в концентрации 1:10. Отсутствие роста культуры Escherichia Colli было отмечено на питательной среде, составной частью которой являлся настой травы шалфея блестящего (1:2, 1:4), настой листьев шалфея лекарственного (1:2). Таким образом, было доказано наличие антибактериальной активности настоя шалфея блестящего, который по своей активности не уступал официнальному виду - шалфею лекарственному, а иногда и проявлял более выраженное действие.
Обсуждение
Установлено, что настой травы шалфея блестящего относится к классу практически нетоксичных.
Рис. 2. Диаметр пятен окрашивания, см
Противовоспалительное действие настоя шалфея блестящего проявляется в угнетении стадии экссудации, влиянии на проницаемость капилляров и сочетается с наличием у него антимикробной активности.
По силе своей фармакологической активности настой, полученный из культивируемого вида шалфея блестящего, близок по действию к настою шалфея лекарственного, что позволит в дальнейшем внедрить данный вид сырья в медицинскую практику.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бандюкова В. А., Андреева О. А., Богаевская Н. И. и др. Антибактериальная активность извлечений из некоторых видов цветковых растений // Раст. ресурсы. - 1990. - Т. 26, вып. 2. -С. 169-178.
2. Байкова Е. В. Род шалфей: морфология, эволюция, перспективы интродукции. - Новосибирск: Наука, 2006. - 248 с.
3. Государственная фармакопея СССР: Вып. 1. Общие методы анализа // МЗ СССР. - 11-е изд. - М., 1987. - 336 с.
4. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье // МЗ СССР. -11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. - 400 с.
5. Государственный реестр лекарственных средств. - М.: МЗ РФ, 2000. - 1204 с.
6. Ойвин И. А, Ойвин В. И., Балуда В. П. О роли фибрина в механизме сосудистой проницаемости // Бюл. эксперим. биологии. -1962. - Т. 54. № 10. - С. 45-47.
7. Полуянов А. В., Прудников Н. А. Сосудистые растения Курской области. - Курск: КГУ, 2005. - 80 с.
8. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейства Н1ррипСасеае -ЬоЬеИасеае. - СПб, 1991. - 200 с.
9. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М.: изд-во ЗАО «ИИА Ремедиум», 2000. - 398 с.
10. Сернов Л. М., Гацура В. В. Элементы экспериментальной фармакологии. - М., 2000. - 352 с.
11. Штабский Б. М. К методике определения среднесмертельных доз и концентраций химических веществ // Гигиена и санитария. - 1980. - № 10. - С. 49-61.
Поступила 30.07.2010
