CC BY
14ФАРМАКОГНОЗИЯ И БОТАНИКА
А.А. Карусевич, Д.В. Моисеев, Г.Н. Бузук
ИЗУЧЕНИЕ ДИНАМИКИ НАКОПЛЕНИЯ 20-ГИДРОКСИЭКДИЗОНА И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВРЕМЕНИ ЗАГОТОВКИ ЛИСТЬЕВ ЛЕВЗЕИ САФЛОРОВИДНОЙ
Витебский государственный медицинский университет
Изучена динамика накопления 20-гидроксиэкдизона в листьях левзеи сафлоровидной (Rhaponticum carthamoides) по фазам вегетации. Оценка количественного содержания фитоэкдистероида в водно-спиртовом экстракте листьев Rhaponticum carthamoides проводили методом ВЭЖХ (колонка Waters Spherisorb ODS-2 250x4,6 мм, 5 мкм) с изократиче-ским режимом элюирования подвижной фазы (ПФ). Оптимальный период заготовки листьев левзеи сафлоровидной -первая и вторая декады июня.
ВВЕДЕНИЕ
В настоящее время большой интерес с научной точки зрения представляют полиоксигидроксилированные стерины,
выделенные из различных объектов животного и растительного происхождения -так называемые экдистероиды [1,2]. Структурно идентичные гормонам линьки и метаморфоза насекомых, они обладают выраженными фармакологическими свойствами, наиболее значимые из которых -повышение физической работоспособности и выносливости, стимулирующее действие на центральную нервную систему (ЦНС), анаболический эффект [3]. Изучение этого класса соединений открывает новые перспективы в фармакологии.
Соединения класса экдистероидов широко распространены в природе. В растительном мире они найдены более чем в
80 семействах [4]. Основное содержание при этом приходится на а-экдизон и в-экдизон (так называемый 20-
гидроксиэкдизон, встречающийся в литературе под аббревиатурой 20Е).
Содержание 20Е может служить критерием оценки доброкачественности лекарственного растительного сырья [5]. Количество 20Е может опосредованно служить оценкой фармакологической активности любого лекарственного средства, содержащего экдистероиды [4], поскольку основная масса экдистероидов приходится именно на него [6]. Хотя 20Е и не является самым активным фитоэкдистероидом [3], но стандартизация многих растений проводится именно по его количественному содержанию [7-10].
Целью настоящего исследования являлась оптимизация времени заготовки листьев левзеи с учетом динамики накопления 20Е и прироста сырьевой массы в разные периоды вегетации.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Сбор образцов: Растения культивировали, как было описано ранее [11]. Сбор образцов производился только с растений второго года вегетации и старше [11]. Образцы собирали в течение всего вегетационного периода растения, последние образцы были собраны 26 сентября. Дальнейший сбор не представлялся целесообразным, поскольку терялся товарный вид сырья. Сырье подвергали сушке в тени, в естественных условиях (1суш = 23-27 ОС).
Количественное определение 20Е проводили методом ВЭЖХ по разработанной нами методике. Вещество считали идентифицированным при совпадении времени удерживания и спектра поглощения со стандартом [10].
Приготовление раствора рабочего стандартного образца (РСО): около
0,0100 г (точная навеска) 20-
гидроксиэкзидона (производства Б1§ша-АЫпсЬ) взвешивали в мерной колбе вместимостью 100,0 мл, затем доводили до метки 70% этанолом, фильтровали через
фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и инжектировали в хроматограф.
Подготовка образцов: Около 10 г порошка сухих листьев (точная навеска) левзеи сафлоровидной помещали в коническую колбу вместимостью 200 мл, прибавляли 100 мл 70% этанола и настаивали при периодическом перемешивании в течение суток. Затем содержимое колбы отфильтровывали через хлопчатобумажную ткань в мерную колбу вместимостью 200 мл, фильтровали через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и инжектировали в хроматограф.
Для анализируемого раствора и РСО получали не менее пяти хроматограмм, площадь пиков и другие параметры рассчитывали как среднее значение пяти определений.
Содержание 20Е в листьях левзеи сафлоровидной вычисляли по следующей формуле:
С % = Suссл хА^станд х Ш0%,
Sстанд хMиссл
где
С,% - количественное содержание
20Е,
время сбора сырья
Рис. 1. Динамика накопления 20Е по фазам вегетации (%, в пересчете на сухое сырье)
Б - площади пиков РСО и исследуемого образца,
М - массы навесок РСО и исследуемого образца в граммах.
РЕЗУЛЬТАТЫИ ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
На рисунке 1 представлены полученные экспериментальные данные о динамике накопления 20Е в листьях левзеи сафлоровидной в зависимости от фазы вегетации.
Как видно из диаграммы, наибольшая концентрация 20Е наблюдается в самом начале вегетации и составляет более 0,8%. Однако заготовка ЛРС в этот период нежелательна, поскольку масса сухих листьев левзеи, полученных из одного растения, минимальна и составляет всего 8-10 грамм.
Динамика развития листьев растения Rhaponticum carthamoides представлена на рисунке 2. Левзея наиболее интенсивно развивается в первые два месяца вегетации, до начала цветения. Затем количество фитомассы уменьшается за счет замедления темпа роста. Старые листья отмирают, формирование новых и их развитие происходит медленно.
Май Июнь Июль Август Сентябрь
время сбора сырья
Рис. 2. Динамика развития листьев растения Rhaponticum carthamoides (масса листьев с одного растения, среднее значение)
При благоприятных условиях с начала июля до конца августа левзея может цвести второй раз. Активация физиологических процессов в это время влияет и на количество фитомассы, что приводит к ее некоторому увеличению. Однако в целом, тенденция к сокращению темпов роста сохраняется; к середине сентября левзея теряет половину своей фитомассы.
Постепенная потеря товарного вида сырья левзеи, имеющая место во второй декаде августа - конце сентября, в основном связана с увеличением количества
старых листьев и, следовательно, снижением общего количества сырья. Такие листья, имея в длину до 80 см, опускаются до почвы (или даже ложатся на нее) и загнивают. Сухой вес такого листа достигает 12 грамм, и это значительно влияет на количество фитомассы растения.
При расчете общего выхода 20Е (в зависимости от массы ЛРС), и его количественного содержания (в зависимости от фазы вегетации), получили следующий график (рисунок 3):
400.0 п
350.0
Ь| 300,0 -
о 250,0 сч
200.0
150.0 -
100.0 -50,0 -
0,0 -
Май Июнь Июль Август Сентябрь
время сбора сырья
Рис. 3. Средняя масса 20Е, получаемая из одного растения, мг
Как видно из графика, наибольшую массу 20Е можно получить из растений собранных в первую декаду июня и июля. Второй максимум связан с тем, что к концу июня происходит отмирание старых листьев (не годных для сбора) и появление молодых, которые достигают максимальной массы к середине июля. Поэтому оптимальное время заготовки сырья - с первой декады июня по первую декаду июля, причем предпочтительнее первая-вторая декады июня, так как не нужно обрывать старые листья. Это время определено нами как оптимальное по количеству накапливаемого 20Е и динамики развития левзеи.
ВЫВОДЫ
Содержание 20Е в листьях левзеи сафлоровидной, определенное методом ВЭЖХ, составляло от 0,13% до 0,82% от общей массы сухого сырья, в зависимости от времени сбора. Оптимальное время сбора - первая и вторая декады июня.
ЛИТЕРАТУРА
1. Алексеева, Л.И. Фитоэкдистероиды / Л.И. Алексеева [и др.]; под общ. ред. В.В. Володина. - СПб.: Наука, 2003. - 293 с.
2. Володин, В. В. Фитоэкдистероиды -растительные аналоги гормонов линьки насекомых / В.В. Володин [и др.] // Растительные ресурсы. - 2004. - Вып. 2. - С. 118.
3. Тимофеев, Н.П. Накопление и сохранность 20-гидроксиэкдизона в лекарственном сырье левзеи / Н.П. Тимофеев // Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными растительными ресурсами. Создание функциональных продуктов. Мат. докл. 1-ой Рос. научно-практ. конф. [Электронный ресурс]. - 2006. - Режим доступа: Ийр/^’^^е^еа.т/левзея сафлоровидная новейший экдистероид содержащий продукт - Leuzea-Rhaponticum carthamoides New ecdysteroid containing product.htm. - Дата доступа:16.07.2006.
4. Вересковский, В.В. Левзея-
перспективное лекарственное, пищевое и кормовое растение / В.В. Вересковский -Минск: Наука и техника, 1992. - 64 с.
5. Рапонтикум сафлоровидный - Rha-ponticum carthamoides // Лекарственные растения Государственной фармакопеи. Лекарственные растения, разрешенные для производства ГЛС. - М. - 2001. - С. 369373.
6. Пчеленко, Л.Д. Адаптогенный эффект экдистероидсодержащей фракции Se-ratulla Coronata L. / Л.Д. Пчеленко, Л.Г. Метелкина, С.О. Володина // Химия растительного сырья. - 2002. - №1. - С. 69-80.
7. Зарембо, Е.В. Содержание 20-гидроксиэкдизона в видах родов Raponti-cum Ludw. и Serratula L. флоры Дальнего Востока России / Е.В. Зарембо, Л.И. Соколова, П.Г. Горовой // Растительные ресурсы. - 2001. - №3. - С. 59-64.
8. Алексеева, Л.И. Метод концентрирования минорных гидрофобных экдисте-роидов с использованием фронтальной хроматографии / Л.И. Алексеева, В.В. Володин, В.Г. Лукша // Растительные ресурсы. - 2000. - №4. - С. 122-127.
9. Филиппова, В.Н. Экдистероиды в культурах клеток Serrtulla coronata и Ajuga reptans / В.Н. Филиппова [и др.] // Химия растительного сырья. - 2002. - №1. - С. 57-62.
10. Карусевич, А.А. Идентификация и количественное определение 20-гидроксиэкдизона в листьях левзеи сафлоровидной методом ВЭЖХ / А.А. Карусе-вич, Д.В. Моисеев, Г.Н. Бузук // Вестник фармации. - 2007. - №3(37). - С. 55-59.
11. Карусевич, А. А. Культивирование левзеи сафлоровидной с целью получения надземной фитомассы / А. А. Карусевич // Вестник фармации. - 2005. - №3(29). - С. 20-26.
SUMMARY A.A. Karusevich, D.V. Moiseev, G.N. Buzuk
STUDYING OF DYNAMICS OF ACCUMULATION 20-HYDROXYECDYZONE AND DEFINITION OF PERIOD OF COLLECTION OF LEAVES RHAPONTICUM CARTHAMOIDES Dynamics of accumulation 20-hydroxyeсdyzone in leaves Rhaponticum carthamoides from vegetation phases is studied.
An estimation of the quantitative maintenance phytoecdysteroids in an water-alcoholic extracts of leaves Rhaponticum carthamoides are provided by isocratic HPLC (column Waters Spherisorb ODS-2 250x4,6 mm, 5 microns). The optimum period of collection of leaves Rhaponticum carthamoides the first and second decades of June.
Поступила 11.03.2008 г.
