CC BY
2КИШЛОК ХУЖАЛИГИ ФАНЛАРИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ НАУКИ AGRICULTURAL SCIENCES
ft
Я
UDK: 636.082.638.24 (575.3)
ИЗУЧЕНИЕ ДЕЙСТВИЯ КОМБИНАЦИИ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ НА СЛАБОЗАРАЖЕННУЮ ПЕБРИНОЙ ГРЕНУ
ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА
Исматуллаева Дилорам Адиловна,
доктор сельскохозяйственных наук, заведующая лабораторией, e-mail: ismatullayeva1972@mail.ru;
ORCID: 0000-0002-5607-4784
Зияева Якут Мардоновна, старший научный сотрудник;
ORCID: 0000-0001-9840-6612
Бегматов Тоир Мухторович,
докторант;
e-mail: begmatovtoir1@gmail.com;
ORCID: 0000-0002-8127-8703
Ачилов Шавкат Икрамович, ведущий специалист,
ORCID: 0000-0002-7348-0346
Научно-исследовательский институт шелководства
Аннотация. Из всех инфекционных болезней, существующих у тутового шелкопряда, пебрина является особо опасной. Опасность заключается в трансовариальной передаче возбудителя. Болезнь поражает все фазы развития тутового шелкопряда и передается следующему поколению через яйцо (грену). Целью данного исследования является изучение действия комбинации фармацевтических препаратов на слабозараженную пебриной грену тутового шелкопряда. В результате проведенных исследований показатели зараженности в опытных вариантах выразились в 8,0-14,7 %. При обработке грены обычной водой без воздействия на них химическим фактором зараженность в контрольном варианте составила 27,6 %. Наилучший эффективный результат определяется в вариантах Метро-нидазол 500 мг + Ципрофлоксацин 500 мг - зараженность 8,0 % и Метронидазол 500 мг + анолит - зараженность составила 9,5 %. Это свидетельствует о том, что испытанные комбинации препаратов в значительной степени оказали пагубное действие на возбудителя нозематоза, что выразилось в снижении зараженности пебриной подопытного материала.
Ключевые слова: тутовый шелкопряд, гусеницы-оживленцы, пебрина, спора, грена (яйца), оживление.
ПЕБРИНА БИЛАН ЗАРАРЛАНИШ ДАРАЖАСИ КАМ БУЛГАН ТУТ ИПАК ЦУРТИ УРУГЛАРИГА ФАРМАЦЕВТИК ПРЕПАРАТЛАР КОМБИНАЦИЯЛАРИ
ТАЪСИРИНИ УРГАНИШ
Исматуллаева Дилорам Адиловна,
кишлок хужалиги фанлари доктори, лаборатория мудири;
Зияева Якут Мардановна,
катта илмий ходим;
Бегматов Тоир Мухторович,
таянч докторант;
Ачилов Шавкат Икрамович,
етакчи мутахассис
Ипакчилик илмий-тадкикот институти
Аннотация. Тут ипак цуртининг энг хавфли касалликларидан бири пебрина уисобла-нади. Унинг хавфлилиги касаллик цузгатувчисининг трансовариал йул билан зарарланиши-да. Касаллик цуртнинг цамма усиш даврида юцади ва кейинги авлодга уруг орцали утади. Бу тадцицотнинг мацсади зарарланиш даражаси кам булган тут ипак цуртининг уругига фармацевтик препаратлар комбинациялари таъсириниурганиш. Утказилган тадцицотлар натижасига кура, тажриба вариантларидазарарланиш курсаткичи 8,0-14,7 %ни ташкил цилди. Тут ипак цуртининг уругига оддий сув билан ишлов берилган вариантида (назорат варианти) зарарланиш даражаси 27,6 %ни ташкил этди. Энг яхши курсаткич Метрони-дазол 500 мл + Ципрофлаксацин 500 мг да зарарланиш - 8,0 % ва Метронидазол 500 мг + анолитда зарарланиш 9,5 %ни ташкил этди. Бу комбинациядаги препаратларни цуллаш натижасида нозематоз касаллигини келтириб чицарувчига таъсири кучлироц булгани ва пебрина билан касалланиш анча камайгани аницланди.
Калит сузлар: тут ипак цурти, жонланган цурт, пебрина, спора, уруг (тухум), жонланиш.
EXPLORING THE EFFECTS THE COMBINATION OF PHARMACEUTICAL PREPARATIONS HAVE ON THE SILKWORM GRENA SLIGHTLY AFFECTED WITH PEBRINE
Ismatullaeva Diloram Adilovna,
Doctor of Agricultural Sciences, Head of Laboratory;
Ziayeva Yakut Mardanovna,
Senior Researcher;
Begmatov Toir Mukhtarovich,
Doctoral Student;
Achilov Shavkat Ikramovich,
Leading Specialist
Research Institute of Sericulture
Abstract. Of all the infectious diseases that exist in the silkworm, pebrine is especially dangerous. Its particular danger lies in the transovarian transmission of the pathogen. The disease affects all phases of the silkworm development and is transmitted to the next generation through eggs (grena). The aim of this research is to study the impacts combinations ofpharmaceutical preparations may have on the silkworm eggs' house that has been slightly infected with the pebrine. As a result of the implemented research, the infection rates in the test cases were expressed in 8,0-14,7 %. Treatment of grena with normal water containing no chemical factor, resulted in 27,6% of contamination in the test case. The best effective result is determined in the options of Metronidazole 500 mg + Ciprofloxacin 500 mg - contamination 8,0 % and Metronidazole 500 mg + anolyte - with 9.5% of
contamination. This indicates that tested combinations of drugs have largely affected the causative agent of nosematosis, which is reflected in a reduced contamination of the test material with the pebrine.
Keywords: silkworm, caterpillars, pebrine, spore, grena (eggs), revival.
Введение
Из всех инфекционных болезней, существующих у тутового шелкопряда, пебрина является особо опасной. Особая опасность заключается в трансовариальной передаче
возбудителя. Болезнь поражает все фазы развития тутового шелкопряда и передается следующему поколению через яйцо (грену) [1, с. 91].
Рис. 1. Трансовариальное инфицирование тутового шелкопряда пебриной
При анализе литературы по использованию фармацевтических средств выяснилось, что делались попытки использовать различные средства против разных болезней полезных насекомых [2, с. 421-425; 3, с. 1-2; 4, с. 104-108].
Р. Мадатов, В. Мерщиев [5, с. 26-29] испытали ряд лекарственных средств и нашли, что наиболее эффективны против нозематоза пчел сульфапиридазин, мономицин и комбинации сульфапиридазина с мономицином или хлортетрациклином. При обнаружении признаков нозематоза пчел перегоняют из грязных ульев в чистые. Грязные ульи промывают 2%-м раствором зольного щелока или 2%-м горячим раствором бельевой соды до полной их очистки от загрязнения.
Эффективным методом лечения нозематоза является кормление пчел сиропом с антибиотиком фумагиллин. Антибиотик
смешивают с сахарным сиропом, соблюдая пропорции указанные в инструкции к препарату [6, с. 43-44].
Для дезинфекции стенок и дна улья используют прожигание огнем паяльной лампы. Инвентарь и оборудование (кроме сотов с пергой и медом) дезинфицируют газом. Споры теряют жизнеспособность при обработке окисью этилена (1000 мг/л, экспозиция 48 часов при температуре 43 0С) или смесью оксида этилена и бромида метила (ОКБЭМ) в соотношении 1 : 25 (1500-2000 г/м3, экспозиция 72 часа при тем-пературе10-20 0Сиотносительнойвлажности 36-89 %) [7, с. 356-365].
Определенный эффект при нозематозе пчел получен при применении азоловых препаратов (метронидазол, толтразурил и др.) эметина, формицина Б., настойки полыни горькой [8, с. 52-53].
Использование селеновых препаратов «Триовит» или «Витрум» в качестве подкормки медоносных пчел весной и летом повышают их воспроизводство, жизнеспособность, их активность, следовательно, производство меда на 17 %. Авторы считают, что аналогичный опыт можно провести с шелкопрядами. Если гусеницы будут получать селен, то больше будет яйцекладка у бабочек шелкопряда, следовательно, гусеницы будут более энергичными, жизнеспособными, коконы по массе будут больше [9, с. 288-290; 10, с. 36].
Работ по использованию фармацевтических средств с целью повышения качества грены тутового шелкопряда неоправданно мало, и появились они в основном в конце прошлого столетия [11, с. 56-61; 12, р. 1-9; 13, с. 73-79; 14, 296 с.].
Несмотря на огромный материальный ущерб, который наносит шелководству пеб-рина, исследования по данному очень нужному вопросу скудны и отрывочны.
Одной из наиболее весомых работ в этом направлении явилась работа сотрудников института микробиологии Армении [15, с. 3; 16, с. 166-177]. Указанными авторами испытано на зараженной грене более 28 антибиотиков. Испытание препаратов проводилось на зараженной грене в период начала зимовки - в декабре и показало, что ни один из препаратов не обладает противопебринозным действием. Причина полученного отрицательного вывода в исследованиях армянских микробиологов заключается в недостаточном знании биологии развития тутового шелкопряда и его облигатного паразита - возбудителя пебрины. В период начала зимовки грены зародыш и вместе с ним возбудитель пеб-рины находятся в стадии покоя. А стадия покоя для возбудителя пебрины представляет споровую форму, трудно уязвимую для всякого рода воздействий. Исследованиями с помощью микробиологических методов доказано, что препараты проникали в грену и в частности в ее зародыш, в дальнейшем обнаружились и в гусеницах. Поэтому предполагать о том, что препараты не проникали
в грену, не было оснований. Следовательно, причины неудачного испытания кроются в недостаточном знании хозяино-паразитных взаимоотношений тутового шелкопряда с возбудителем пебрины.
Азербайджанские ученые, на фоне естественного заражения пебриной, для лечения данной болезни использовали препараты Фумагиллин ДЦГ 0,25 %, Ампролиум, Кок-цидиовит и Байнокс в 1,5 % концентрациях [17, с. 41-44].
Испытание различных групп лекарственных средств (фармацевтических, полимерных с пролонгированным действием, антибиоти-ков-ионофоров и др.) на фазе грены тутового шелкопряда проведены Л.Ф. Кашкаровой, А.И. Хахановым, Л.Т. Андоскиной и др. [18, с. 66-71; 19, с. 58-60]. Указанными авторами было установлено, что из фармацевтических средств наиболее эффективными в повышении качества грены являются препараты нитрофу-ранового ряда и сульфаниламиды, а также их сочетания. На их основе созданы комплексные препараты с условным названиями «Нозема-тол-4», «Нозематол-5» [20, с. 1]. Они использовались в течение 10 лет в производстве для обработки грены с низкой степенью заражения
(3 %).
Обработка грены указанными фармацевтическими средствами представляет собой качественно новый этап в шелководстве, так как позволяет сохранить и реализовать грену, забракованную Госконтролем.
Проведенные исследования внесли определенный вклад в решение проблемы, связанной с пебриной. Однако они не исчерпывают всех задач этой сложной проблемы. В частности, существует необходимость совершенствования методов диагностики. Также перспективными направлениями исследований является изучение резистентности пород тутового шелкопряда к нозематозу (с использованием традиционных методов) и генетических аспектов устойчивости тутового шелкопряда к пе-брине.
Материалы и методы исследования
Материалом для исследований служила зараженная пебриной грена (яйца) тутово-
КИШЛОК ХУЖАЛИГИ ФАНЛАРИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ НАУКИ AGRICULTURAL SCIENCES
ft
Я
го шелкопряда породы Ипакчи 3. Весной за 10 дней до начала инкубации грену вынули из холодильника, выдержали ее в течение 2 дней на подготовке (при ^ = +15 +16 0С) и после этого подвергли обработке в водных растворах испытуемых препаратов.
Обработка проводилась путем погружения грены в приготовленные растворы препаратов на 2 часа. Грену тщательно перетерли руками, чтобы она равномерно смачивалась и не содержала комочков. Затем растворы препаратов сливались, грена раскладывалась на фильтровальную бумагу для просушивания. После просушивания грену из каждого варианта отсчитывали по 100 шт. в 3-х повторностях. Каждую пов-торность помещали в бумажный мешочек, на котором указывали номер варианта и повтор-ность. Контролем к опыту служил вариант, в котором грену выдерживали в течение 2-х часов в обычной воде. Затем мешочки с греной
помещали на инкубацию в термостат при температуре 25 0С и относительной влажности 75-80 %. Спустя 7-9 дней начали регистрацию выхода гусениц из грены. С этой целью подсчитывали в каждом мешочке количество грены, из которой не вышли гусеницы. Показатель выхода гусениц из грены оценивали в процентах. Затем вышедших гусениц не кормили и спустя 7-10 дней подвергли микроскопическому анализу на определение остаточной зараженности. В каждом препарате просматривали не менее 50 полей зрения.
Результаты исследования и их обсуждение
После оживления гусениц провели просчет процента оживления, спустя 3-4 дня начали микроскопический анализ гусе-ниц-оживленцев каждую в отдельности. В таблице приводятся результаты по проценту оживления.
Таблица
Оживляемость грены, зараженной нозематозом и обработанной препаратами (2019-2020 гг.)
№ Название препарата и концентрация или доза (мг; млн ед.) Оживляемость грены, (среднее из 3-х повторнстей), % Разница в сравнении с контролем, % (d) Достоверность разницы Pd
X ± Sx Cv
1 Синурол 1,2 млн.ед. + Метрони-дазол 500 мг 91,3 ± 3,7 7,0 12,3 0,999
2 Метронидазол 500 мг + Ципро-флоксицин 500 мг 92,0 ± 1,2 2,3 13,0 0,999
3 Ципрофлоксицин 500 мг + живая вода (католит) 93,2 ± 10,5 9,8 14,2 0,999
4 Ципрофлоксицин 500 мг + мертвая вода (анолит) 75,0 ± 12,8 3,6 -4,0 0,890
5 Метронидазол 500 мг + живая вода (католит) 95,4 ± 10,9 1,9 16,4 0,999
6 Метронидазол 500 мг + мертвая вода (анолит) 79,0 ± 15,1 10,2 0,0 0,788
7 Контроль (вода) 79,0 ± 2,9 6,2 - -
Как видно по данным таблицы, в опытных вариантах оживляемость грены составила 75,0-95,4 %. А в контрольном варианте она выразилась в 79,0 %. При сравнении опытных вариантов с контролем во всех вариантах наблюдается значительное повышение оживляемости грены на
16,4-12,3 %, кроме вариантов 4 и 6, где антибиотики Ципрофлоксацин 500 мг и Метро-нидазол 500 мг были растворены в анолите (мертвая вода), что угнетающе подействовало на зародыш, находящийся внутри яйца.
Наилучший показатель определяется при обработке грены препаратами Метро-
нидазол в дозе 500 мг и Ципрофлоксацин - 500 мг, растворенными в католите (живая вода), где оживляемость грены составила 93,2-95,4 %.
Таким образом, обработка грены в растворах антибиотиков благодаря антибактериальным, противомикробным, проти-вопротозойным свойствам способствовала
снижению жизнеспособности спор, одновременно потере вирулентности возбудителя пебрины.
После определения процента оживления грены, гусеницы подверглись мик роскопическому анализу для определения остаточной зараженности ноземато зом.
Рис. 2. Зараженность гусениц-оживленцев пебриной (2019-2020 гг.)
На рисунке 2 ясно видно, как зараженность пебриной снижается в зависимости от дозы препарата и их комбинаций, то есть эффективность действия двух препаратов повышается за счет дополнения друг друга, тем самым снижается экстенсивность заражения.
Как свидетельствует показатели зараженности подопытного материала, в опытных вариантах она выразилась в 8,0-14,7 %. При обработке грены обычной водой без воздействия на них химическим фактором зараженность в контрольном варианте составила 27,6 %. Соответственно, наблюдается значительное снижение зараженности пебриной во всех опытных вариантах в сравнении с контролем, которое варьирует в пределах от 11,7 до 19,6 %. Это свидетельствует о том, что все испытанные фармацевтичес-
кие препараты в какой-то степени оказали пагубное действие на возбудителя нозематоза, что выразилось в снижении зараженности пебриной подопытного материала.
Выводы
Установлено, что наилучший эффективный результат определяется в вариантах 2 (Метронидазол 500 мг + Ципрофлоксацин 500 мг) - зараженность 8,0 % и в 5 варианте (Метронидазол 500 мг + анолит) - зараженность составила 9,5 %.
Учитывая то, что нозематоз - это прото-зойное заболевание, эффективность препарата Метронидазол и его комбинаций с Цип-рофлоксацином и электроактивированной водой (анолитом), в отличие от остальных испытанных антибиотиков, выразилась благодаря наличию в них широкого спектра проти-вомикробных, антибактериальных свойств.
КИШЛОК ХУЖАЛИГИ ФАНЛАРИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ НАУКИ AGRICULTURAL SCIENCES
REFERENCES
1. Karataj V.N. Promyshlennoe razvedenie shelkopryadov: Tekhnika inkubacii. Vykormka. s'em i sortirovka kokonov. Bolezni i vrediteli tutovogo shelkopryada. Monografiya. [Commercial breeding of silkworms: Incubation technique. Feeding, picking and sorting of cocoons. Diseases and pests of the silkworm]. Doneck: AST Stalner, 2004, 91 p. (In Russ.).
2. Patil C.S., Geethabai. Studies on the susceptibility of silkworm races to pebrine spore Nosema bombycis N. [J. Appl. Entomol. 108]. 1989, pp. 421-425.
3. Orbic D., Tomas E. Novi preparation u Surbijanju nosemic Fled. [New drug at Surbidzhanu Nosemic Fled] 1985, no. 104, pp. 1-2.
4. Manchev M. Prouchvane na nyakoi dezinfektanti protiv yaderna poliedriya po koprinenata piperuda (Bombyx mori L.) [Zhivotnovod. Nauki], 1976, vol. 13, no 3, pp. 104-108. (In Russ.).
5. Madatov R.I., Mershchiev V.M. Ob effektivnosti himiopreparatov protiv nozematoza pchyol Vestnik s/h nauki Kazahstana. [On the effectiveness of chemotherapy against nosematosis in bees]. Vestnik of agricultural science of Kazakhstan, Alma-ata: 1973, no 11, pp. 26-29. (In Russ.).
6. Mukminov M.N., Ugryumova V.S., Ravilov A.Z. Jodhlorin pri mikozah pchel. Pchelovodstvo. [Yodnliorin for mycosis of bees]. Beekeeping, Tashkent, 2017, no. 1, pp. 43-44. (In Russ.).
7. Rusu J., Popa A. Experiment area fumidiluli B sea nosemaki lui in combaterea nosemozei la viermil de matase, Zuerari stunt. [Stat. Centr. Apicult is sericiculte]. 1965, no. 6, pp. 356-365.
8. Sohlikov A.B., Kadilina O.A. Lechenie i profilaktika nozematoza pchel. Pchelovodstvo [Treatment and prevention of nosema disease in bees]. Beekeeping, Tashkent, 2013, no. 3, pp. 52-53. (In Russ.).
9. Mahamadiyorov O.A., Turaev O.S., Bezverhov A.P., Rahmanov D.O. Ezhednevnaya podkormka pchel selenovymi preparatami polozhitel'no vliyaet na rost pchelinyh semej. Aktual'nye problemy proizvodstva kachestvennogo i konkurentosposobnogo kokonnogo syr'ya: Sbornik materialov Respublikanskoj nauchno-tekhnicheskoj konferencii. [Daily feeding of bees with selenium preparations has a positive effect on the growth of bee colonies]. Actual problems of the production of high-quality and competitive cocoon raw materials: Collection of materials of the Republican scientific and technical conference. 24.10.2017. pp. 288-290. (In Russ.).
10. Xu J., Liu M., Huang D. Comparative transcripome analysis of Bombyx mori (Lepidoptera) larval midget response to bmnpv in susceptible and near-isogonics resistant strains [Climate changes and chemicals - the new sericulture challenges: Intern. Conference (BASCA) Abstracts]. Sheki. Azerbaijan, 2017, 36 p.
11. Hahanov A.I., Verbickaya G.A., Atabekova K.S. Lechebno-profilakticheskaya obrabotka greny biopreparatami dlya bor'by s pebrinoj tutovogo shelkopryada. Trudy SANIISH - Nauchnye osnovy razvitiya shelkovodstva. [Therapeutic and prophylactic treatment of Grena with biological products to combat silkworm pebrin]. Works of SANIISH - Scientific basis for the development of silkworm breeding. Tashkent,1979, vol. 13, pp. 56-61. (In Russ.).
12. Singh T., Saratchandra B. Microsporidian disease of the silkworm, Bombyx mori L. [Int. J. Industry Entomology]. 2003, no. 6, pp. 1-9.
13. Ismatullaeva D., Kashkarova L.F. O vozmozhnosti ispol'zovaniya farmacevticheskih sredstv na raznyh etapah razvitiya greny. Sbornik nauchno-prakticheskoj konferencii Nauchnye osnovy razvitiya shelkovodstva Uzbekistana. [On the possibility of using pharmaceuticals at different stages of the development of genitalia]. Collection of scientific and practical conference Scientific bases for the development of sericulture in Uzbekistan. Tashkent, 2001, pp. 73-79. (In Russ.).
14. Mihajlov E.N. Infekcionnye bolezni tutovogo shelkopryada. [Silkworm infectious diseases]. Tashkent, 1984, 296 p. (In Russ.).
15. Chil-Akopyan L.A., Bobikyan R.A., Afrikyan E.K. Primenenie antibiotikov kak sredstva dlya obezzarazhivaniya greny tutovogo shelkopryada. Nauchno-tekhnicheskij sbornik: GKK NIR. [The use of antibiotics as a means for the disinfection of silkworm grena]. Scientific and technical collection: GKK NIR. Erevan, 1962, no. 4 (8), p. 3. (In Russ.).
16. Chil-Akopyan L.A., Puchinyan L.G. Opyt primeneniya antibiotikov v bor'be s pebrinoj tutovogo shelkopryada. Voprosy mikrobiologii. [The experience of using antibiotics in the fight against silkworm kobrin]. Microbiology issues Erevan, 1966, vol. 111 (H111), pp. 166-177. (In Russ.).
17. Ahmedov E.A. Ob ispol'zovanii lekarstvennyh preparatov protiv pebriny (nozematoza) tutovogo shelkopryada v Azerbajdzhane. Agrarnaya Rossiya. [On the use of drugs against pebrine (nosematosis) of the silkworm in Azerbaijan. Agrarian Russia, Moscow, Publishing house: LLC «Folium» 2009, no. 4, pp. 41-44. (In Russ.).
18. Kashkarova L.F., Hahanov A.I. Sovremennye metody bor'by s pebrinoj tutovogo shelkopryada. Trudy SANIISH. [Modern methods of fighting silkworm pebrin]. Works of SANIISH. Tashkent, 1987, vol. 21, 66 p. (In Russ.).
19. Kashkarova L.F., Ivanickaya L.P., Korobkova T.P. Rezul'taty predvaritel'nogo ispytaniya aminoglikozidnyh antibiotikov protiv nozematoza tutovogo shelkopryada. Tr. Sredneaziat. NII shelkovodstva. [Results of a preliminary test of aminoglycoside antibiotics against silkworm nosematosis YTr. Central Asia. Research Institute of Sericulture 1988, vol. 22, pp. 58-60. (In Russ.).
20. Kashkarova L.F., Andoskina L.T., Tadzhiev E.H., Holmatov H.H, Garafutdinova E.A. Preparat dlya bor'by s pebrinoj tutovogo shelkopryada. [Silkworm Pebrin Preparation]. Patent RUz , no 3878, Tashkent, 1996, p. 1. (In Russ.).
