CC BY
29
лены: Citrobacter diversus, Enterobacter aerogenes, Citrobacter fre-nudi. Из патматериала свиней, больных респираторными заболеваниями, на первом месте по частоте выделения находилась P.multocida - 33 %, на втором месте - M.hyopneumoniae - 31 %, далее идут Salmonella spp. - 12 %, H.parasuis - 10 %,
A.pleuropneumoniae - 8 % и по 3 % Streptococcus spp. и
B.bronhiseptica.
Выводы. Установлено, что до 80,5 % инфекционных заболеваний у свиней в Краснодарском крае протекают в ассоциации различных комбинаций, причем наибольшее количество ассоциаций установлены между бактериальными и вирусными возбудителями (76,1 %). Бактериальные ассоциации составляют 15,4 % и, меньше всего регистрируются моноинфекции - 8,5 %. В ассоциациях обычно участвуют 2, 3, 4 и реже больше четырех возбудителей. При смешанных инфекциях отсутствуют специфические клинические признаки, поэтому при постановке диагноза необходимы лабораторные методы исследований.
Список литературы
1 Веревкина, М.Н. Природные микробные ассоциации / М.Н. Веревкина, Е.В. Светлакова, С.Н. Поветкин, С.В. Пруцаков // Ветеринария Кубани. - 2010. -№4. - С. 15-17.
2. Гафаров, Х.З. Моно- и смешанные инфекционные диареи новорожденных телят и поросят / Х.З. Гаффаров, А.В. Иванов, Е.А. Непоклонов, А.З. Равилов. - Казань, 2002. - 590 с.
3. Кружнов, Н.Н. Ассоциативные желудочно-кишечные и респираторные заболевания свиней в Краснодарском крае / Н.Н. Кружнов, С.В. Пруцаков, И.А. Болоцкий, В.И.Семенцов, Е.В. Иванасова // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. -2015. -№ 2. - С. 53-54.
УДК 619:615:636.087.7
ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ НА ОСНОВЕ СОЛЕЙ ГУМИНОВЫХ КИСЛОТ IN VITRO STUDY OF THE BIOLOGICAL ACTIVITY OF A FEED
ADDITIVE ON THE BASIS OF HUMIC ACID SALTS IN VITRO
Кузьминова Елена Васильевна, д-р ветеринар. наук, Антипова Дарья Валерьевна,
Краснодарский научный центр по зоотехнии и ветеринарии,
Российская Федерация, г. Краснодар
Жолобова Инна Сергеевна, д-р ветеринар. наук
Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т.
Трубилина, Российская Федерация, г. Краснодар
Kuzminova Elena Vasilevna, Dr.Vet. Sci.
Antipova Darya Valeryevna, PhD student
Krasnodar Research Centre for Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Krasnodar, Russian Federation Zholobova Inna Sergeevna, Dr.Vet. Sci.
Kuban State Agrarian University named after I.T. Trubilin, Krasnodar, Russian Federation
Аннотация: в статье представлены данные по оценке биологической активности кормовой добавки, содержащей соли гу-миновых кислот с использованием в качестве тест-системы инфузорий Paramecium caudatum. Установлено, что гуматы обеспечивают повышение устойчивости парамеций к действию токсикантов и свидетельствуют о наличии у кормовой добавки про-тективных свойств (антиоксидантных и мембрано-стабилизирующих).
Ключевые слова: кормовая добавка; соли гуминовых кислот; фармакология; токсикология; инфузории.
Abstract: the paper presents data on the evaluation of the biological activity of a feed additive containing humic acid salts using the infusoria Paramecium caudatum as a test system. It has been established that humates provide an increase in the resistance of para-mecia to the toxicants and testify to the presence of protective properties (antioxidant and membrane stabilizing) in the feed additive.
Key words: feed additive; humic acid salts; pharmacology; toxicology; infusoria.
На современном этапе развития животноводства важными резервами увеличения продуктивности производства могут являться ветеринарные препараты и кормовые добавки природного происхождения, например, содержащие гуминовые компоненты и продукты их естественной или искусственной модификации.
Гуминовые вещества сформировались в биосфере в течение тысячелетий и являются обязательной составляющей, обеспечивающей существование современных жизненных форм. Однако непосредственно в почвах гуматы находятся в неактивной или малоактивной форме. При определенной технологической подготовке их функциональные группы становятся биоактивны и получают возможность участвовать в разнообразных химических и биологических процессах. Основным сырьем для производства гуминовых препаратов являются торф, некоторые сорта бурых углей, вермикомпост, органические отходы и др. Преимуществом этого сырья является его широкая доступность, большой объем ресурсной базы, низкая токсичность и себестоимость производства [3].
В последние годы гуматы привлекают интерес ученых различных отраслей, основными предпосылками служит то, что данный класс соединений обладает ярко выраженной биологической активностью, проявляя антиоксидантные, иммуностимулирующие, адаптогенные, дезинтоксикационные и другие полезные свойства [5].
В связи с чем, разработка кормовых добавок содержащих гуминовые вещества и их применение с целью повышения продуктивности и сохранности сельскохозяйственных животных является перспективным направлением ветеринарной науки.
Ключевую роль в создании нового лекарственного средства играют доклинические исследования, проводимые на различных моделях в условиях in vitro и in vivo. В фармакологии для биологической оценки различных веществ как модель in vitro используются одноклеточные организмы - инфузории Paramecium caudatum, что обусловлено возможностью получения быстрого и объективного результата при скрининговых доклинических исследованиях [1, 4].
Целью исследования являлась первичная оценка биологической активности кормовой добавки, содержащей соли гумино-вых кислот, с использованием в качестве тест-системы инфузорий Paramecium caudatum.
Методика. Исследования проведены в условиях отдела фармакологии Краснодарского НИВИ. Изучено влияние раствора солей гуминовых кислот в комбинации с растительным лецитином на жизнедеятельность инфузорий, в экстремальных условиях при повреждающем воздействии раствора натрия хлорида. Культура Paramecium caudatum находилась в фазе стационарного равновесия, рабочая концентрация взвеси клеток составляла 100 клеток/мл. В каждой серии опытов эксперименты проводили параллельно в контрольных пробах (культура инфузорий с добавлением дистиллированной воды в эквивалентных изучаемым веществам объемах) и опытных пробах, которые содержали раствор солей гуминовых кислот и лецитин в различных концентрациях.
Оценку изменения жизнеспособности инфузорий при действии образцов проводили визуально при помощи светового микроскопа, при этом определяли двигательную активность инфузорий, их продолжительность жизни (по остановке всех видов двигательной активности), эффективность оценивали как разницу с контролем в процентах [2].
Токсическое воздействие моделировали путем внесения в среду с парамециями раствора натрия хлорида. Повреждающая концентрация и объем раствора натрия хлорида были предварительно подобраны экспериментальным путем.
Растворы гуминовой добавки вносили в опытные пробы в различных концентрациях, для чего осуществляли серию последовательных разведений исходных 0,1 % растворов - 1:100; 1:1000; 1:10000 и 1:100000. На предметные стекла наносили 0,05 мл среды, содержащей парамеции (в поле зрения не менее 5 особей), одна капля служила контролем. Ко всем остальным добавляют тангенциально соответствующие объёмы исследуемого вещества - суспензия кормовой добавки, время экспозиции 10 минут. Выдержав указанное время, ко всем каплям добавляли 0,05 мл фармакологического индикатора - перекись водорода и
фиксировали функциональные и структурные изменения парамеций в сравнении с контролем.
Увеличение толерантности проявляется способностью клеток парамеций не изменять своих функциональных и структурных характеристик при добавлении токсикантов в сравнении с контролем (без добавления исследуемых веществ).
Результаты исследований и их обсуждение. Разработанная кормовая добавка содержит натриевые соли гуминовых кислот, получаемых из органического сырья, к которым добавлен рапсовый лецитин. Кормовая добавка представляет собой мелкодисперсный порошок коричнево-черного цвета. Содержание гуминовых веществ составляет 25-30 % от общей массы, основные физико-химические параметры кормовой добавки представлены в таблице.
Таблица - Физико-химические свойств кормовой добавки
Наименование показателя Значение показателя
мелкодисперсный по-
Внешний вид рошок коричнево-
черного цвета
Количество гуминовых веществ 25-30 %
рН водного раствора 7,5-8
Фосфолипиды, г/100 г, в том числе: 6,2
фосфатидилхолины 1,6
фосфатидилэтаноламины 1,55
фосфатидилсерины 0,95
фосфатидные кислоты 0,95
фосфатидилинозитолы 0,10
Макроэлементы, мг/100 в том числе:
калий 64
магний 40
кальций 71
фосфор 87
На основании проведенных исследований, установлено, что в контрольной пробе средняя продолжительность жизни инфузорий при повреждающем воздействии гипертонического раствора натрия хлорида составила 128,7±3,16 секунды. Комплексная кормовая добавка обеспечивала достоверное повышение устойчивости Paramecium caudatum к повреждающему воздействию раствора натрия хлорида, при этом наиболее выраженная эффективность проявилась в концентрациях 0,001 % - на 28,6 % (Р<0,05).
Выводы. Таким образом, в экспериментах на тест-системе клеточного уровня - культура инфузорий Paramecium caudatum установлено, что комбинация натриевых солей гуминовых кислот и лецитина обеспечивает повышение устойчивости парамеций к действию токсикантов и свидетельствует о наличии у кормовой добавки протективных свойств (антиоксидантных и мем-браностабилизирующих).
Список литературы
1. Березовская, И.В. Прогноз безопасности лекарственных средств в доклинических токсикологических исследованиях / И.В. Березовская // Токсикологический вестник. - 2010. - № 5 (104). - С. 17-22.
2. Методические рекомендации «Paramecium caudatum -как модель in vitro для изучения биологической активности веществ различной природы» / Н.Г. Иванова, Н.Р. Телесманич, И.Н. Андреева, Н.Г. Преферанская, Е.А. Меньшикова. - Ростов-на-Дону - 2001. - 24 с.
3. Орлов, Д.С. Гуминовые вещества в биосфере / Д.С. Орлов // Соросовский образовательный журнал. - 1997. - № 2. -С.56-63.
4. Основные принципы терапии животных при отравлениях / Е.В. Тяпкина, Л.А. Хахов, М.П. Семененко, Е.В. Кузьмино-ва, и др. // Краснодар. - 2014. - 29 с.
5. Федько, И.В. К вопросу об использовании биологически активных гуминовых веществ в медицине / И.В. Федько, М.В. Гостищева, Р.Р. Исматова // Химия растительного сырья. - 2005. - №1. - С. 49-52.
