CC BY
11
DOI - 10.32743/UniChem.2022.102.12.14676
ИЗУЧЕНИЕ БЕЛКОВОГО И АМИНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ Tamarix ramosissima ПРОИЗРАСТАЮЩЕГО В УЗБЕКИСТАНЕ
Валижонова Лобархон Низомжон цизи
докторант (PhD)
кафедры химии Кокандского государственного института,
Республика Узбекистан, г. Коканд E-mail: ilyachemist92@gmail. com
Куконбоев Икромжон Иброх(имович
канд. техн. наук, доц. Кокандского государственного педагогического института,
Республика Узбекистан, г Коканд
Ишимов Учцун Жомуратович
канд. хим. наук, докторант (DcS), Институт биоорганической химии АНРУз им. О.С. Содикова,
Республика Узбекистан, г. Ташкент
STUDYING THE PROTEIN AND AMINO ACID COMPOSITION OF THE ABOVEGROUND PART OF Tamarix ramosissima GROWING IN UZBEKISTAN
Lobarxon Valijonova
Doctoral student (PhD) of the Department of Chemistry, Kokand State Institute, Republic of Uzbekistan, Kokand
Ikromjon Qo'qonboyev
Candidate of Technical Sciences, Associate Professor of the Kokand State Pedagogical Institute, Republic of Uzbekistan, Kokand
Uchqun Ishimov
Cand. chem. Sci., Doctoral Candidate (DcS), Institute of Bioorganic Chemistry, Academy of Sciences of the Republic of Uzbekistan named after. O.S. Sodikov, Republic of Uzbekistan, Tashkent
АННОТАЦИЯ
В статье впервые изучено количество аминокислот, общих белков и растворимых белков в надземной части Tamarix ramosissima, произрастающей в Узбекистане. Идентификацию производных аминокислотот проводили методом ВЭЖХ. Общий белок определяли по методу Кьельдаля, растворимые белки определяли по методу Лоури.
ABSTRACT
The article first studied the amount of amino acids, total proteins and soluble proteins in the aerial part of Tamarix ramosissima growing in Uzbekistan. Identification of amino acid derivatives was carried out by HPLC. Total protein was determined by the Kjeldahl method, soluble proteins were determined by the Lowry method.
Ключевые слова: Tamarix ramosissima, аминокислоты, Глутамин, Глицин, Аспарагин, общий белок, растворимые белки.
Keywords: Tamarix ramosissima, amino acids, Glutamine, Glycine, Asparagine, total protein, soluble proteins.
Растения являются отличными источниками вторичных метаболитов, включая алкалоиды, терпеноиды, дубильные вещества, полифенолы и фла-воноиды. Благодаря этим вторичным метаболитам
лекарственные растения имеют большое значение в современном мире. Более 30% лекарств в современном мире получают из растительного источника или получают из растительных продуктов [1].
Библиографическое описание: Валижонова Л.Н., Куконбоев И.И., Ишимов У.Ж. ИЗУЧЕНИЕ БЕЛКОВОГО И АМИНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ Tamarix ramosissima ПРОИЗРАСТАЮЩЕГО В УЗБЕКИСТАНЕ // Universum: химия и биология : электрон. научн. журн. 2022. 12(102). URL:
https://7universum. com/ru/nature/archive/item/14676
Цель работы: изучение аминокислотного и белкового состава надземной частей растения Tamarix ramosissima, произрастающего в Узбекистане.
О растении: Гребенщик ветвистый, или Гребенщик многоветвистый (лат. Tamarix ramosissima) -вид деревянистых растений рода Гребенщик (Tamarix семейства Гребенщиковые (Tamaricaceae). Также выращивается в садах под названием Бисерник ветвистый. Кустарник или дерево, 1-3(6) м высотой. Цветки пятимерные, собраны в верхушечные метелки; цветоножки 0,5-0,7 мм длиной. Плод -трёхгранная пирамидальная коробочка, 3-5 мм длиной, 0,7-1 мм шириной, содержит в среднем 17 семян. Цветение от мая до сентября [2, 6].
Химический состав и биологическая активность различных частей T. Ramosissima, произрастающих в Узбекистане, комплексно не анализировались. Поэтому данное исследование было проведено для сравнения химического состава различных экстрактов T. Ramosissima (стебля, цветка).
Материалы и методы
Исследуемый материал (Tamarix ramosissima) был собран в территории Дангаринского районного отдела природных памятников Ферганского государственного лесного хозяйства в июле 2022 года в период цветения растения. Собранное растение было
Содержание аминокислотного состава в
очищено и разделено на цветочную часть, надземный стебель.
Исследование аминокислотного состава: Выделение свободных аминокислот. Осаждение белков и пептидов водного экстракта образов проводили в центрифужных стаканах. Для этого к 1 мл исследуемому образцу добавляли по 1 мл (точный объем) 20% ТХУК. Через 10 мин осадок отделяли центрифугированием при 8000 об/мин в течение 15 минут. Отделив 0,1 мл надосадочной жидкости, лиофильно высушивали. Гидролизат упаривали, сухой остаток растворяли в смеси триэтиламин-ацетонитрил-вода (1:7:1) и высушивали. Эту операцию повторяли дважды для нейтрализации кислоты. Реакцией с фенилтиоизоцианатом получали фенилтиокарба-мил-производные (ФТК) аминокислот по методу Steven A., Cohen Daviel [3]. Идентификацию производных аминокислотот проводили методом ВЭЖХ. Условия ВЭЖХ: хроматограф Agilent Technologies 1200 с DAD детектором, колонке 75 x4.6 mm Discovery HS C18. Раствор А: 0,14М CftCOONa + 0,05% ТЭА рН 6,4, B:CH3CN. Скорость потока 1,2 мл/мин, поглощение 269нм. Градиент %B/мин: 1-6%/0-2.5мин; 6-30%/2.51 -40мин; 30-60%/40,1-45 мин; 60-60%/45,1-50 мин; 60-0%/50,1-55 мин.
Полученные результаты представлены в табл. 1.
Таблица 1.
и цветках растения Tamarix ramosissima
Название аминокислот Стебель T. ramosissima Цветок T. ramosissima
Концентрация мг/гр
Аспарагиновая к-та 1,006585 1,065381
Глутаминовая к-та 0,574559 1,067938
Серин 0,804369 4,139031
Глицин 0,534624 1,334351
Аспарагин 1,456459 2,703246
Глутамин 0,933765 6,379482
Цистеин 1,254098 5,021858
Треонин 1,063864 1,154285
Аргенин 1,275294 1,742676
Аланин 0,620432 0,177655
Пролин 1,411077 0,475508
Тирозин 1,713316 6,600933
Валин 1,129523 6,346154
Метионин 0,975773 2,128419
Гистидин 1,200434 6,225217
Изолейцин 1,044719 1,516962
Лейцин 0,568511 3,668382
Триптофан 2,241748 0,834352
Фенилаланин 0,451557 1,315231
Лизин 0,133267 0,287575
Общего 20,39397 54,18463
Исследование общего белкового состава.
Одним из методов определения количества общих белков является метод Кьельдаля [4]. В соответствии с этим количество общего белка рассчитывают, определяя количество азота. Суть метода
Содержание общего белкового состава в
заключается в гидролизе органических веществ пробы с помощью концентрированной серной кислоты (аминогруппы в белке) с образованием солей сульфата аммония.
Полученные результаты представлены в табл. 2.
Таблица 2.
и цветках растения Tamarix ramosissima
№ Намуна Содержание азота (%) Сумма общих белков %
1 Цветок T. ramosissima 1,54 9,63
2 Стебель T. ramosissima 0,91 5,69
Исследование растворимого белкового состава: Для определения водорастворимых белков в растении T. ramosissima использовали метод Лоури, принятый как общий [5]. Для каждого образца готовили отдельную пробирку, добавляли в них разное количество dH2O и 2,5 мл реактива С- из центрифугированных образцов (А+В=С; реактив-А: CuSO4 NaOH; реактив-В: 20 г Na2CO3, 4 г NaOH, 1 л dH2O) и образцы оставляли при комнатной температуре на 10 мин. Затем к каждой пробе добавляли по 0,25 мл реактива Фолина. Его оставляли при комнатной
температуре на 20 минут (когда образцы в пробирке приобретают синюю окраску, что указывает на присутствие в образце белка). Оптическую плотность измеряли при длине волны 750 нм на спектрофотометре (spectrophotometr Specol-1300, Analytic Jena, Germaniya) с использованием приготовленных реагентов. Строили калибровочный график с использованием стандартного образца (альбумина) для определения количества белка по методу Лоури (рисунок-1).
ОД ОД 5 ОД ОД 5 ОД Количество белка (мкг)
Рисунок 1. Калибровочный график
Полученные результаты представлены в табл. 3.
Таблица 3.
Содержание растворимого белкового состава в стебле и цветках растения Tamarix ramosissima
№ Растворимые белки
1 Цветок T. ramosissima 11,54%
2 Стебель T. ramosissima 10,41%
Выводы
Таким образом, в результате работы определена концентрация аминокислот и белков в надземном стебле и цветках растения Tamarix ramosissima, собранных на территории памятника природы в Дан-гаринском районе Ферганского государственного лесного хозяйства. В результате исследований установлено, что количество белков в цветке растения
Т. ramosissima выше, чем в стебле. Изучено количество свободных аминокислот в различных органах растения ^ ramosissima. В результате анализа было установлено, что стебли и цветки растения ^ ramosis-sima содержат 20 аминокислот, а также большое количество свободных аминокислот, таких как тирозин, валин и гистидин.
Список литературы:
1. de Fatima A., Silva Terra B., Moreira da Silva C., Leite da Silva D., Pereira Araujo D., da Silva Neto L., Nascimento, Anderson, de Aquino, R., 2014. From nature to market: Examples of natural products that became drugs. Recent Pat. Biotechnol. 8, 76-88.
2. Горшкова С.Г. Tamarix ramosissima Ldb. — Гребенщик многоветвистый // Флора СССР : в 30 т. / начато при рук. и под гл. ред. В.Л. Комарова. — М. ; Л. : Изд-во АН СССР, 1949. — Т. 15 / ред. тома Б.К. Шишкин, Е.Г. Бобров. — С. 311—312. — 742 с. — 4000 экз.
3. Steven A., Cohen Daviel J. Amino acid analysis utilizing phenylisothiocyanata derivatives // Jour. Analytical Biochemistry - 1988. - V.17.-№1.-P.1-16.
4. Методы контроля. Химические факторы. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. Руководство Р 4.1.1672-03. М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004.
5. Р.Скоупс - Методы очистки белков. Москва. 1985. 341-342с.
6. https://ru.wikipe-
dia.org/wiki/%D0%93%D1%80%D0%B5%D0%B1%D0%B5%D0%BD%D1%89%D0%B8%D0%BA_%D0%B2 %D0%B5%D 1 %82%D0%B2%D0%B8%D 1 %81 %D 1 %82%D 1 %8B%D0%B9
