CC BY
83
Библиографический список
1. Хованский Н.Ф. Очерки по истории г. Саратова и Саратовской губернии /
Н.Ф. Хованский. — Саратов, 1884.
2. Миловидова И.Б. В поисках чужеземцев / И.Б. Миловидова // Очерки по охране природы. Опасайтесь потерять друзей. — Саратов, 1983. — 130 с.
3. Сокольская О.Б. Сквозь тени времен / О.Б. Сокольская / / Садово-парковое наследие Приволжской возвышенности: эволюция, современное состояние и применение. — Саратов: ИЦ «РАТА», 2010. — С. 286-292.
+ + +
УДК 579.61:582.31
А.М. Шариков
ИЗУЧЕНИЕ АНТИБИОТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ МЕТАБОЛИТОВ ГРИБОВ РОДА TRICHODERMA В ОТНОШЕНИИ ШТАММА BACILLUSSUBTILIS
Ключевые слова: несовершенные грибы, метаболиты, бактерицидное действие, грампозитивные микроорганизмы, метод лунок.
Введение
Интерес к получению из несовершенных грибов биологически активных препаратов, в частности, антибиотиков, в наше время только растёт [1].
Метаболиты и экстракты несовершенных грибов обладают биологической активностью; одной из важнейших таковых характеристик является бактерицидность [2-4].
Источником производства новых антибиотиков могут служить грибы родов Trihoderma, способные синтезировать широкий комплекс веществ [5, 6].
К сожалению, систематические исследования биологической активности штаммов грибов рода Trichoderma, изолированных в Центральной Сибири, и изучение их метаболитов в отношении условнопатогенных и патогенных микроорганизмов к настоящему времени проводятся не в должном объёме [7, 8].
Целью работы являлось изучение антибиотической активности метаболитов грибов родов Trichoderma штаммов T. as-perellum К-12; T. asperellum 01-00; T. as-perellum 30 и штамма T. citrinoviridа ТН 4 в отношении условно-патогенного грампо-зитивного штамма Bacillus subtilis.
Объекты и методы
В работу были взяты метаболиты, полученные из выделенных в Центральной Сибири изолятов грибов рода Trichoderma видов T. asperellum, штамма К-12; T. asperellum штамма 01-00; вида T. asperellum штамма 30 и штамма ТН 4 вида T. citrinoviridа.
Действие всех метаболитов, полученных от изолированных штаммов, изучали в отношении условно-патогенного, детально охарактеризованного, полученного из музея живых культур микроорганизмов КрасГМУ грампозитивного штамма Bacillus subtilis.
Метаболиты грибов получали, культивируя последние на агаре Чапека методом глубинного культивирования на качалке в течение пяти суток при температуре 25±2°С.
Для предварительного культивирования изучаемый штамм засевали на питательный агар (ГРМ-агар) производства ФГУП «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии», затем инкубировали в термостате в течение трёх суток при 37°С. Полученные изолированные типичные колонии отбирали петлёй и суспендировали в пробирках со стерильным физиологическим раствором по стандарту мутности. Посевная доза взвесей микроорганизмов составляла 1,5х108 КОЕ/мл (0,5 по стандарту мутности McFarland).
Таблица
Величина зон отсутствия роста штамма В. subtilis вокруг лунок, содержащих метаболиты изученных штаммов грибов (М±о, мм)
Тест-культура Длительность инкубирования штаммов, сут.
2 5
T. asperellum К-12 12,0±2,0 12,0±1,0
T. asperellum 01-00 15,0±2,0 12,0±2,0
T. asperellum 30 16,0±2,0 13,0±2,0
T. citrinovirida ТН 4 17,0±2,0 15,0±1,0
Посев приготовленной суспензии осуществляли по Кирби-Бауэру отжатым ватным тампоном в трёх направлениях на пластины подсушенного агара Мюллера-Хинтон, разлитого толстым слоем.
Определение бактерицидной активности исследуемых метаболитов осуществляли методом лунок. В лунки, сделанные стерильным пробочным сверлом в только что засеянных чашках, стерильными сменными носиками вносили метаболит в количестве 0,1 мл.
Контролем служил физиологический раствор. Опыт проводили в трёх повторностях. После внесения в лунки метаболитов засеянные чашки, не переворачивая, переносили в термостат и инкубировали при температуре 37°С в течение пяти суток.
Наблюдения за ростом тест-культур начинали после суток инкубирования.
Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакета прикладных программ STATISTICA v.6.0.
Результаты и обсуждение
В ходе проведённой работы было установлено, что в наименьшей степени воздействовал на исследуемый штамм бактерий метаболит штамма гриба T. asperellum К-12: зона отсутствия роста составляла 12 мм.
Наибольшая же величина зоны отсутствия роста вокруг лунок с изучаемыми метаболитами была при действии на исследуемый штамм Bacillus subtilis метаболита гриба T. citrinovirida ТН 4 как на вторые, так и на пятые сутки: максимальная зона отсутствия роста составляла 17 мм (табл.).
При дальнейшем инкубировании однако в некоторых случаях наблюдалось незначительное уменьшение зоны подавления роста тест-культуры. Надо полагать, это связано скорее с бактериостатическим, чем с бактериолитическим действием биологических активных веществ, на тот момент в максимальном объёме присутствовавших в изучаемом метаболите.
Заключение
Изучаемые метаболиты центральносибирских изолятов грибов рода Trichoderma однозначно могут быть дополнительным источником биологически активных веществ — антибиотиков. Последние же вполне способны в определённой степени участвовать в решении давней проблемы человечества — преодолении лекарственной устойчивости [9].
Библиографический список
1. Филиппова И.А. Естественное лекарство нового тысячелетия: грибы против рака / И.А. Филиппова. — СПб.: Диля, 2005. — 128 с.
2. Ершова Е.Ю. Поиск продуцентов антибиотиков грибного происхождения, эффективных в отношении метициллинрези-стентных стафилококков: автореф. дис. ... канд. биол. наук / Е.Ю. Ершова. — М., 2003. — 26 с.
3. Molitoris H.P. Mushrooms in medicine / H.P. Molitoris / / Folia Mikrobiol. — 1994.
— V. 39. — N. 2. — P. 91-98.
4. Чхенкели В.А. Некоторые аспекты медико-биологических исследований высших дереворазрушающих базидиомицетов как источника биологически активных веществ / В.А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели, Е.Д. Агапова и др. // Сиб. мед. журнал.
— 2001. — № 1. — С. 59-65.
5. Сейкетов Г.Ш. Грибы рода Trichoderma и их использование в практике / Г.Ш. Сейкетов. — Алма-Ата: Наука, 1982. — 245 с.
6. Sharikov A.M. To the issue of using of the fungi of Trichoderma kind as the produ-cent of the biologicalli active substances / A.M. Sharikov, D.A. Nes-humaev, N.A. Zai-ka et al. // Program & abstracts: The XII Symposium of the Rassia — Japan medical exchange. — Krasnojarsk, 2005. — P. 661662.
7. Шариков А.М. Выраженная антибиотическая активность грибов рода TRICHODERMA в отношении штамма BACILLUS ANTHRASIS СТИ-1 / А.М. Ша-
58
Вестник Алтайского государственного аграрного университета № 2 (76), 2011
риков // Научная перспектива. — 2010. — № 10. — С. 92-93.
8. Шариков А.М. Изучение антибиотической активности метаболитов грибов рода TRICHODERMA в отношении бактерий рода VIBRIO / А.М. Шариков // Актуальные проблемы гуманитарных и есте-
ственных наук. — 2010. — № 10. —
С. 24-25.
9. Яковлев В.П. Перспективы создания и внедрения новых антимикробных препаратов / В.П. Яковлев, С.В. Яковлев / / Инфекц. и антимикроб. химиотерапия. — 2002. — № 4(2). — С. 1-5.
+ + +
