CC BY
39
Шариков А.М.
Научный сотрудник лаборатории клеточно-молекулярной физиологии и патологии, соискатель, НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, Красноярск
ИЗУЧЕНИЕ АНТИБИОТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ МЕТАБОЛИТОВ ГРИБОВ РОДА TRICHODERMA В ОТНОШЕНИИ БАКТЕРИЙ РОДА VIBRIO
Аннотация
Изучали биологические свойства метаболитов аборигенных штаммов гриба T. harzianum. Показана выраженная антибиотическая активность в отношении изученного штамма грампозитивных бактерий. Изученные метаболиты гриба T. harzianum перспективны в плане получения новых антибиотиков.
Ключевые слова: бактерицидное действие, метаболиты грибов рода Trichoderma, метод лунок.
Key words: bactericidal action, metabolites, method of the holes.
Несовершенные грибы известны как продуценты биологически активных веществ. Известно, что культуральная жидкость несовершенных грибов, в частности, грибов рода Trichoderma содержит вещества с антибиотическими свойствами. Исследования в этой области ведутся достаточно активно; постоянно обнаруживаются новые метаболиты с полезными свойствами [1; 2; 3; 4; 7].
Центральносибирские аборигенные штаммы грибов-продуцентов антибиотических веществ в отношении условно-патогенных микроорганизмов в настоящее время изучены недостаточно [5; 6].
Изучали антибиотическую активность метаболитов грибов вида T.
harzianum в отношении нетипированного штамма Vibrio spp.
Объектами исследования служили стерильные метаболиты, полученные из грибов видов T. harzianum.
Предварительное культивирование штамма Vibrio spp. осуществлялось на питательном ГРМ-агаре с последующим инкубированием в термостате в течение трёх суток при 37°С. Полученные изолированные типичные колонии отбирали бактериологической петлёй и суспендировали в пробирках со стерильным физиологическим раствором по стандарту мутности. Посевная доза взвесей микроорганизмов составляла 1,5х108 КОЕ/мл (0,5 по стандарту мутности McFarland). Посев приготовленной суспензии осуществляли отжатым ватным тампоном в трёх направлениях на пластины подсушенного агара Мюллера-Хинтон, разлитого толстым слоем в чашках Петри. Определение бактерицидной активности исследуемых экстрактов осуществляли методом лунок.
После посева взвеси микроорганизмов в каждой засеянной чашке Петри стерильным пробочным сверлом диаметром 10 мм делали лунки, затем автоматической пипеткой постоянного объёма в каждую лунку одноразовым стерильным наконечником вносили исследуемый метаболит. Контролем исследования служил физиологический раствор.
После внесения метаболита чашки Петри инкубировали не переворачивая в термостате при температуре 37°С в течение шести суток. Все опыты проводились в трёхкратной повторности. Наблюдения за ростом тест-культур начинали после суток инкубирования.
Измерение диаметра задержки роста микроорганизмов проводили на вторые, четвёртые и шестые сутки инкубирования.
Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакета прикладных программ STATISTICA v.6.0. Рассчитывали среднее значение и среднеквадратичное
отклонение, достоверность отличий определяли по непараметрическому критерию Манна-Уитни.
Установлена антибиотическая активность метаболитов гриба T.
charzianum в отношении Vibrio spp. : уже на вторые сутки инкубирования зона отсутствия роста штамма составляла 27,0±2,8 мм. Наибольшая величина зоны подавления роста 27,4±2,8 мм (р<0,05) наблюдалась на шестые сутки инкубировании штамма.
Предположительно механизм действия антибиотических веществ, выделенных из изучаемых грибов, связан с влиянием на клеточную стенку микроорганизмов.
Полученные метаболиты гриба T. charzianum перспективны в плане получения новых антибиотиков.
Литература
1. Белова Н.В. Природа биологической активности высших грибов. Успехи медицинской микологии: Мат. I Всерос. конгр. по мед. микологии / Под ред. Ю.В. Сергеева. М.: Изд. Национ. акад. микологии, 2003. - Т.1. - С. 230-233.
2. Сейкетов Г.Ш. Грибы рода Trichoderma и их использование в практике.- Алма-Ата: Наука, 1982.- 245с.
3. Филиппова И.А. Естественное лекарство нового тысячелетия: грибы против рака / И.А. Филиппова. СПб.: Диля, 2005. 128с.
4. Чхенкели В.А.; Чхенкели Г.Д.; Агапова Е.Д. и др. Некоторые аспекты медико-биологических исследований высших дереворазрушающих базидиомицетов как источника биологически активных веществ // Сибирский медицинский журнал. - 2001. -№1. - С. 59-65.
5. Шариков А.М., Пашенова Н.В., Новицкий И.А. Выраженность бактерицидной активности гриба INONOTUS OBLIQUUS PILAT в отношении FRANCISELLA TULARENSIS линии 15 НИИЭГ //Сибирское медицинское обозрение. - 2008. - №1(49). -С. 19-21.
6. Шариков А.М., Пашенова Н.В., Нешумаев Д.А., Новицкий И.А. Исследование антибиотической активности гриба чаги в отношении возбудителя туляремии // Тихоокеанский медицинский журнал. - 2010. - №1. - С. 64-65.
7. Lumsden R.D., Lewis I.A., Locke J.C. Managing soilbome plant pathogens with fungal antagonists. In: Pest Management: Biologically Based Technologies (ed. R.D. Lumsden & J.L.Vaughn), 1993. - P. 196-203.
