CC BY
19pneumonia in Wuhan, China: a descriptive study // Lancet. 2020. doi: 10.1016/S0140-6736(20)30211-7.
3. Huang C. et al. Cinical features of patients infected with 2019 novel coronavirus in Wuhan, China // Lancet. 2020 doi: 10.1016/S0140-6736(20)30183-5. [Epub ahead of print]
4. Corman V. M. et al. Detection of 2019 novel coronavirus (2019-nCoV) by real-time RT-PCR //Eurosurveillance. - 2020. - Т. 25. - №. 3. - 25(3). doi: 10.2807/1560-7917.ES
5. Грачёв В.И., Севрюков И.Т. Основы фотовоздействия на растительные и животные клетки. Введение в фототерапию. - Москва, Магнитогорск, 2018, с. 231 - 394.
6. Грачёв В.И., Маринкин И.О., Суслонова Н.В. Влияние кислородной недостаточности на животный организм. Москва, Новосибирск, Магнитогорск: Магнитогорский дом печати, 2019. -528 с.
7. Грачёв В.И. Фототерапия - будущее ме-
дицины. Москва, 2019, с. 18 - 21.
8. Чучалин А.Г. Заключение о потенциале применения фототерапевтического устройства «АВЕРС-Лайт» при лечении вирусных заболеваний дыхательных путей. Москва, 2020, http://www.aversnpk.ru/uploadedfiles/File/zaklyuchen ie-chuchalina.pdf
9. Отчет о клинических испытаниях фототерапевтического устройства «АВЕРС-Лайт» на базе Первого Московского государственного медицинского университета имени И.М. Сеченова по профилактике и терапии COVID-19. Москва, 2020,
http ://www. aversnpk.ru/uploadedfiles/File/otchyot-1 -mgmu-1.pdf ;
http ://www. aversnpk.ru/uploadedfiles/File/otchyot-1 -mgmu-2.pdf
;http://www.aversnpk.ru/uploadedfiles/File/otchyot-1-mgmu-2.pdf
CHANGES IN THE STRUCTURE AND FUNCTION OF PANCREAS OF RATS DURING PROLONGED OCCLUSION OF THE PANCREATIC DUCT
Krylova O.
Candidate of Medical Sciences, Senior Researcher, Endoscopist, Family Health and Rehabilitation Center Helios, LLC ""Sky-Winner ",
Dnipro, Ukraine Rudenko A.
Candidate of Biological Sciences, Senior Researcher, Head of the Laboratory of Pathophysiology, State Institution "Institute of Gastroenterology of National Academy of Medical Sciences of Ukraine",
Dnipro, Ukraine
Gaidar Yu.
MD, Senior Researcher, Head of the Laboratory of Pathomorphology, State Institution "Institute of Gastroenterology of National Academy of Medical Sciences of Ukraine",
Dnipro, Ukraine Karachinova V.
Candidate of Biological Sciences, Senior Researcher of the Research Sector of Biochemistry, State Institution "Institute of Gastroenterology of National Academy of Medical Sciences of Ukraine",
Dnipro, Ukraine
ИЗМЕНЕНИЕ СТРУКТУРЫ И ФУНКЦИИ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ КРЫС ПРИ ДЛИТЕЛЬНОЙ ОККЛЮЗИИ ПАНКРЕАТИЧЕСКОГО ПРОТОКА
Крылова Е.А.
кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник, врач-эндоскопист, Центр семейного здоровья и реабилитации Гелиос ООО «Скай-Виннер»,
г. Днепр, Украина Руденко А.И.
кандидат биологических наук, старший научный сотрудник, заведующий лабораторией патофизиологии ГУ «Институт гастроэнтерологии НАМН Украины»,
г. Днепр, Украина Гайдар Ю.А.
доктор медицинских наук, старший научный сотрудник, заведующий лабораторией патоморфоло-
гии ГУ «Институт гастроэнтерологии НАМН Украины»,
г. Днепр, Украина Карачинова В.А.
кандидат биологических наук, старший научный сотрудник научно-исследовательского сектора
биохимия ГУ «Институт гастроэнтерологии НАМН Украины»,
г. Днепр, Украина
Abstract
The article presents the results of experimental work on the study of morphological and functional changes of the pancreas during the development of obstructive pancreatitis at the rats. It was shown that with prolonged occlusion of the main pancreatic duct, the destructive process developed in the pancreas distal to the level of
obstruction, which was accompanied by oxidative stress, decreased enzyme activity, increased collagen formation, atrophy and fibrosis of the gland parenchyma.
Аннотация
В статье приводятся результаты экспериментальной работы по изучению морфологических и функциональных изменений поджелудочной железы при развитии обтурационного панкреатита у крыс. Показано, что при длительной окклюзии главного панкреатического протока развивался деструктивный процесс в поджелудочной железе дистальнее уровня обструкции, который сопровождался оксидативным стрессом, снижением активности энзимов, усилением коллагенообразования, атрофией и фиброзирова-нием паренхимы железы.
Keywords: chronic pancreatitis, experiment, pancreas, structure, function
Ключевые слова: хронический панкреатит, эксперимент, поджелудочная железа, структура, функция
Хронический панкреатит (ХП) - это заболевание поджелудочной железы (ПЖ), при котором рецидивирующее воспаление приводит к замещению паренхимы железы фиброзной тканью с развитием прогрессирующей экзокринной и эндокринной недостаточности [1]. ХП может существенно негативно влиять на качество жизни и приводить к тяжелым осложнениям.
Распространенность заболеваний ПЖ с каждым годом увеличивается, а социальное значение их определяется значительной распространенностью среди работоспособного населения, значительными потерями как временной, так и постоянной работоспособности, высоким уровнем инвалидности и смертности [1, 2, 3, 4].
В Государственном учреждении «Институт гастроэнтерологии НАМН Украины» в соответствии с планом НИР нами выполнена работа, которая являлась фрагментом научно-исследовательских работ «Изучить механизмы развития осложнений хронического панкреатита и разработать методы диагностики и хирургического лечения с использованием малоинвазивных технологий», 2008-2010 г.г. (шифр ВН. 25.01.001.08, номер государственной регистрации № 0107и012136) и «Изучить механизмы развития фибротических процессов при хроническом панкреатите и усовершенствовать технологии их хирургической коррекции», 2011-2013 г.г. (шифр ВН. 25.01.001.11, номер государственной регистрации № 011Ш001065).
Данное исследование было клиническим, рандомизированным, контролируемым, открытым, проспективным. В ходе исследования проверялась гипотеза о том, что развитие и течение клинико-морфологических форм ХП зависит от соотношения уровней цитокинов и медиаторов фиброзиро-вания ПЖ, факторов камнеобразования, апоптоза, оксидативного стресса и регуляторных факторов иммунной системы; и терапевтическое воздействие, направленное на торможение процессов фиброза, апоптоза, камнеобразования в ПЖ, нормализацию цитокинового профиля будет способствовать повышению эффективности терапии и улучшению качества жизни больных.
В работе использовались методы исследования: клинические, инструментальные (ультразвуковые, эндоскопическая ретроградная панкреато-графия, компьютерная томография), функцио-
нальные (зондирование желудка и дуоденальное зондирование), морфологические, биохимические (определение показателей перекисного окисления липидов (ПОЛ) и антиоксидантной защиты (АОЗ), молекул средней массы (МСМ), уровня общих липидов, продуктов синтеза коллагена), иммунологические (иммуноферментный метод для определения в крови уровней интерлейкинов Т№-а, TGF-P1, REG-1а, лактоферрина, фекальной эласта-зы-1, методы анализа иммунного статуса и неспецифической резистентности организма), микробиологические, динамические (проспективное наблюдение), анкетирование, статистические.
В результате исследования уточнена роль медиаторов воспаления, маркеров фиброгенеза и панкреатолитиаза, процессов апоптоза при клини-ко-морфологических формах ХП, установлены предикторы прогрессирования фиброзных изменений, образования кальцинатов / кальцификатов, разработаны способы лечения, направленные на торможение процессов фиброзирования, апоптоза, камнеобразования в ПЖ, нормализацию цитоки-нового профиля больных, что способствовало повышению эффективности лечения, удлинению ремиссии, улучшению качества жизни больных
[5].
Учитывая, что изменения в организме больного на ранних этапах развития ХП в условиях клиники проследить невозможно, мы провели экспериментальные исследования. Условия выполнения эксперимента отвечали требованиям Закона Украины № 3447- IV от 21.02.2006 г. ". О защите животных от жестокого обращения" и Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для исследовательских и других научных целей [6].
В рамках выполнения работы разработана экспериментальная модель ХП, который развивался в результате блокирования NO-синтазы [7] и изучено влияние глутаргина на состояние системы ПОЛ-АОЗ и метаболизм коллагена [8].
Для изучения основных патофизиологических, морфологических и биохимических изменений ПЖ при развитии ХП в эксперименте использовали разработанную нами модель экспериментального ХП [7] и модель ХП, который развивался в результате длительной обтурации панкреатического протока.
В настоящей статье мы приводим результаты нашего исследования с применением модели экспериментального обтурационного ХП.
Цель работы, изучить морфологические и функциональные изменения ПЖ при развитии обтурационного ХП.
Материал и методы. Исследование проведено на 30 лабораторных белых крысах-самцах линии Wistar весом 180-230 г. Крысам (п = 18) под наркозом кетамин гидрохлорид 110 мг/кг, введенного внутримышечно, проводили лапаротомию и перевязку панкреатического протока лигатурой "Рго1епе" 6/0, которая не рассасывается (длительная окклюзия панкреатического протока) в течение 6-ти (п = 6), 15-ти (п = 6) и 30-ти (п = 6) суток. Крысам контрольной группы (п = 12) под наркозом кетамин гидрохлорид 110 мг/кг выполняли лапаротомию, кратковременную окклюзию панкреатического протока лигированием (10 с) и ушивание раны передней брюшной стенки. Крыс выводили из эксперимента на 6 (п = 6), 15 (п = 6) и 30 (п = 6) сутки после оперативного вмешательства.
Для изучения индивидуально-типологических особенностей поведения крыс, характеризующих индивидуальную устойчивость к эмоциональным стрессам, проводили тестирование в открытом поле по известной методике Буреш [9]. Согласно методике «открытое поле», крысу помещают в освещенную камеру и учитывают дефекации, ури-нации, величину двигательной и ориентировочно-исследовательской активности в течение 5 минут.
Вывод животных из эксперимента осуществляли посредством введения летальной дозы кета-мина гидрохлорида. После вывода животных из эксперимента проводили забор крови для определения концентрации оксипролина белковосвязан-ного (ОПбсв), малонового диальдегида (МДА), глюкозы, нитритов/нитратов, активности а-амилазы, липазы и трипсина в сыворотке крови. Ткань ПЖ крыс использовали для гистологического исследования.
Для анализа полученных результатов использовали описательную и индуктивную статистику. В случае количественных данных и при условии их нормального распределения использовали среднее и стандартную ошибку среднего. Для определения достоверности различий использовали t-критерий Стьюдента. В случае отсутствия нормального распределения использовались медиана, минимум, максимум, верхние и нижние квартили, а достоверность различий определяли по U-критерию Манна-Уитни. Для описания качественных данных использовали частоту выявления признака (%). В этом случае для определения достоверности различий между группами пользовались Х-критерием. Показатель р < 0,05 считали статистически значимым. Все расчёты проводились в программе SPSS 9.0 for Windows (или Statistica 6) [10, 11].
Результаты. При изучении профиля поведения животных в условиях длительной окклюзии панкреатического протока установлено, что поведение животных изменялось: снижалась локомоторная активность и повышалась выраженность вегетативных реакций, то есть происходила разба-лансировка деятельности ПЖ и центральной нервной системы.
Результаты биохимических исследований сыворотки крови крыс с продолжительной окклюзией панкреатического протока представлены в табл. 1
Деструктивный процесс в ПЖ сопровождался ростом в плазме крови концентрации вторичного продукта ПОЛ - МДА во всех группах экспериментальных животных. Так, его уровень на 6 сутки увеличился в 1,2 раза (р <0,05) по сравнению с контролем, у крыс на 12 сутки концентрация данного показателя продолжала постепенно расти и в 1,8 раза (р <0,05) превышала контрольный показатель и в 1,4 раза была выше показателей 6-х суток (р <0,05). На 30 сутки наблюдался рост уровня МДА в 1,4 раза (р <0,05) в отличие от контроля, но показатель оставался выше, чем на 6 сутки (р <0,05).
Таблица 1
Биохимические показатели сыворотки крови у крыс с продолжительной окклюзией панкреатического
протока
Показатель, ед.измерения Контрольная группа (n=12) 6 сутки (n=6) 15 сутки (n=6) 30 сутки (n=6)
М±т М±т М±т М±т
МДА, нмоль/мл 4,50±0,23 5,57±0,16*а 8,05±0,19# 6,16±0,18х
а-Амилаза, мг/сл 96,02±20,30 190,80±23,70* 144,12±16,04 91,50±6,40
трипсин, мкмоль/млмин 4,19±0,92 20,70±1,60* 17,24±1,56# 11,60±0,70х
ОПбсв, мкмоль/л 179,28±9,19 183,62±9,10 206,16±13,80 230,81±8,82х
глюкоза ммоль/л 3,18±0,42 3,42±0,29 4,34±0,30# 5,37±0,38х
Примечания:
1. * - р <0,05 - достоверность различий между показателями группы контроля и показателями 6-х суток;
2. # - р <0,05 - достоверность различий между показателями группы контроля и показателями 15-х суток;
3. х - р <0,05 достоверность различий между показателями группы контроля и показателями 30-х суток
4.а - р <0,05 - достоверность различий между показателями 6-х и 15-х суток
То есть, к концу второй недели лигирования ванию вторичных продуктов ПОЛ, которые инак-главного панкреатического протока происходила тивируют катионные помпы, каналы и ионные интенсификация ПОЛ, что способствовало образо- проводимости, мембранные белки, энзимы.
Активность всех ферментов у крыс повышалась на 6-е сутки (р <0,05), а в дальнейшем - снижалась (а-амилаза в 1,3 раза, трипсин в 1,2 раза, р <0,05), однако, уровень их оставался выше по сравнению с контролем в 1,5 и 4,1 раза, (р <0,05, соответственно). Так, активность всех энзимов у крыс на 30 сутки снижалась по сравнению с показателями на 6 сутки: а-амилаза на 52,0%, (р <0,01), трипсин на 44,0%, (р <0,001), однако, трипсин оставался выше контроля на 63,9% (р <0,001). Уровень МДА достоверно возрастал во все сроки его определения (р <0,01), что свидетельствовало о развитии оксидативного стресса у крыс. Концентрация маркера синтеза коллагена - ОПбсв росла
постепенно и была самой высокой на 30 сутки (выросла в 1,3 раза, р <0,01). Развитие ХП протекало на фоне прогрессирующей гипергликемии: концентрация глюкозы выросла в 1,4 раза (р <0,01) по сравнению с контролем и в 1,3 раза по сравнению с показателями 6-х суток.
Установленные изменения гистоструктуры ПЖ в условиях длительной окклюзии ГПП. Так, при морфологическом исследовании на 6 сутки длительной окклюзии панкреатического протока определяли наличие признаков воспаления, что проявлялось лимфоцитарной и эозинофильной инфильтрацией внутри- и междольковых септ, очагами некроза (рис. 1).
Рисунок 1 - ПЖ крысы при экспериментальном панкреатите, индуцированном длительной окклюзией панкреатического протока (6 сутки). Лимфоцитарная и эозинофильная инфильтрация внутри- и меж-дольковых септ, очаги некроза. Окраска гематоксилином и эозином. Х 200
На 15 сутки отмечались значительная дилатация протоков и парциальная атрофия ацинарных клеток (рис. 2).
Рисунок 2 - ПЖ крысы при экспериментальном панкреатите, индуцированном длительной окклюзией панкреатического протока (15 сутки). Значительная дилатация протоков. Парциальная атрофия аци-
нарных клеток. Окраска по Ван-Гизону. Х 40
На 30 сутки мелкие протоки ПЖ были дилатированы, наблюдались признаки гиперплазии эпителия. В сохранившейся части протоковой структуры имела место парциальная атрофия ацинарных клеток.
Рисунок 3 - ПЖ крысы при длительной окклюзии панкреатического протока (30 сутки). Атрофия ацинарной ткани, гиперплазия островков, рыхлый вокруг- и внутридольковой фиброз.
Окраска по Маллори-Слинченко. Х 40.
Следует отметить, что вокруг магистральных и внутридольковых протоков определяли плотную фиброзную ткань, а рыхлая фиброзная ткань заполняла междольковое пространство и включала остатки разрушенных частиц островков, протоки и сосуды (рис. 3 и 4).
Рисунок 4 - ПЖ крысы при длительной окклюзии панкреатического протока (30 сутки). Атрофия ацинарной ткани, гиперплазия островков, плотный вокруг- и внутридольковой фиброз. Окраска по Маллори-Слинченко. Х100.
Эндокринные островки сохраняли нормальную структуру и состояли преимущественно из В-клеток (рис. 5).
Рисунок 5 - ПЖ крысы при экспериментальном панкреатите, индуцированном длительной окклюзией панкреатического протока (30 сутки). Эндокринные островки сохраняют нормальную структуру и состоят преимущественно из В-клеток. Непрямая иммуно-пероксидазная реакция. Х 40.
Следовательно, при длительной окклюзии панкреатического протока при исследовании ткани ПЖ на 6 сутки эксперимента выявляли признаки воспаления: лимфоцитарную и эозинофильную инфильтрацию внутри- и междольковых септ, очаги некроза. На 15 сутки отмечалась дилатация протоков и атрофия ацинарных клеток. На 30 сутки формировалась рыхлая и плотная фиброзная ткань вокруг магистральных и внутридольковых протоков. Эндокринные островки сохраняли нормальную структуру и состояли преимущественно из В-клеток.
Таким образом, полученные при экспериментальных исследованиях данные подтверждают, что при длительной окклюзии главного панкреатического протока развивался деструктивный процесс в ПЖ дистальнее уровня обструкции, который сопровождался увеличением в плазме крови концентрации МДА и снижением активности энзимов, усилением коллагенообразования. Отмечали разрушение паренхимы ПЖ и через 30 суток после перевязки дистального отдела панкреатического протока наблюдалось только частичное сохранение структуры ПЖ с атрофией паренхимы, образованием плотной фиброзной ткани вокруг магистральных и внутридолевых протоков, рыхлой фиброзной ткани в междольковом пространстве и сохранением структуры эндокринных островков.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:
1. United European Gastroenterology evidence-based guidelines for the diagnosis and therapy of chronic pancreatitis (HaPanEU) / J. M. Lohr, E. Dominguez-Munoz, J. Rosendahl [et al.] // UEG Journal. — 2017. — Vol. 5, No 2. — P. 153-199. doi: 10.1177/2050640616684695
2. Губергриц Н. Б. Практическая панкреато-логия. М.: 4ТЕ АРТ, 2008. 319 с.
3. Ивашкин В.Т., Маев И.В., Охлобыстин А.В. и др. Клинические рекомендации Российской гастроэнтерологической ассоциации по диагностике и лечению экзокринной недостаточности
поджелудочной железы // Рос. мед. журн. - 2017. -Т. 27 № 2. - С. 54-80. https://doi.org/10.22416/1382-4376-2017-27-2-54-80
4. Минушкин О.Н. Хронический панкреатит (определение, классификация, патогенез, диагностика, лечение). Медицинский Совет. 2014;(7):20-25. https://doi.org/10.21518/2079-701X-2014-7-20-25
5. Крылова Е.А. Хронический панкреатит: диагностические и лечебные аспекты клинико-морфологических форм (клинико-экспериментальное исследование): дис. ... д-ра мед. наук. ФГАОУ ВО Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова МЗ России (Сеченовский университет), Москва, 2020.
6. Европейская конвенция о защите позвоночных животных, используемых для научных экспериментов или в иных научных целях (European Convention for the Protection of Vertebrate Animals used for Experimental and Other Scientific Purposes). Страсбург, 1986. http://docs.cntd.ru/document/901909691
7. Губергриц Н.Б., Крылова Е.А., Руденко А.И. Дефицит оксида азота в развитии хронического панкреатита (экспериментальное исследование)// Дневник казанской медицинской школы. -2019. - № 2. - С.4-7.
8. Губергриц Н.Б., Крылова Е.А., Руденко А.И., Гайдар Ю.А. Возможности использования комбинации аргинина и глутаминовой кислоты (глутаргина) при хроническом панкреатите в эксперименте // Крымский терапевтический журнал. -2019. - № 2. - С. 38-43
9. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон. П. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. М.: Высшая школа, 1991. 399 с.
10. Енюков ИС. Методы, алгоритмы, программы многомерного статистического анализа. М.: Финансы и статистика; 1986. 232с.
11. Петри А, Сэбин К. Наглядная статистика в медицине. М.: ГЕОТАР-МЕД; 2003. 143с.
SURVIVAL RATE OF PATIENTS WITH PROSTATE CANCER DURING RADIOTHERAPY
Paliy M.
National Cancer Institute, Kyiv, Ukraine Stoliarova O.
DM, Professor, National Cancer Institute, Kyiv, Ukraine
Dumanskiy Yu.
DM, Professor, Institute of Experimental Pathology, Oncology and Radiobiology, Kyiv, Ukraine
Syniachenko O.
DM, Professor, Donetsk National Medical University, Lyman, Ukraine
Iermolaieva M.
DM, Professor, Donetsk National Medical University, Lyman, Ukraine
Abstract
The five-year survival rate of patients with prostate cancer depends on the initial level of Gleason score, the method of radiation therapy applied, the concurrent administration of hormonal therapy and chemotherapy, and the life expectancy of deceased patients is inversely related to the timing of the onset of radiotherapy after prostatectomy and directly correlates with the power of radiation, and the blood level of tumor markers decreases in the process of ongoing therapeutic measures, which determines the nature of the initial course of the disease. The medical technology of early radiation therapy of prostate cancer suggested by us made it possible to significantly
