Изменение фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови больных острым шигеллезом и чувствительности шигелл к антимикробным препаратам в присутствии вобэнзима in vitro Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УЧЕНЫЕ ЗАПИСКИ СПбГМУ ИМ. АКАД. И. П. ПАВЛОВА • ТОМ XVIII • N02 • 2011

© Коллектив авторов, 2011 г. УДК 616.993.1:616.155.34]-08

B. Д. Иващенко, Е. А. Кожухова,

C. А. Егорова, Т. В. Беляева, А. М. Иванов

ИЗМЕНЕНИЕ ФАГОЦИТАРНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ ОСТРЫМ ШИГЕЛ-ЛЕЗОМ И ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ШИГЕЛЛ К АНТИМИКРОБНЫМ ПРЕПАРАТАМ В ПРИСУТСТВИИ ВОБЭНЗИМА IN VITRO

Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И. П. Павлова; Санкт-Петербургский НИИЭМ имени Пастера

Среди случаев верифицированной бактериальной дизентерии в Санкт-Петербурге в течение последних десятилетий преобладает шигеллез, вызванный шигеллой Флекснера, которая, как известно, обладает выраженной патогенностью, что нередко предопределяет тотальное поражение толстой и дистальных отделов тонкой кишок [4]. Угроза тяжелого течения шигеллеза диктует необходимость применения для лечения больных антимикробных препаратов (АМП). В последние годы для лечения пациентов с бактериальными инфекциями, наряду с АМП, все чаще используют препарат системной энзимотера-пии (СЭТ) вобэнзим, успех использования которого определяется такими анонсированными его эффектами, как противовоспалительный, противоотечный, анальгезиру-ющий, фибринолитический, иммуномодулирующий [5, 6].Уточнение влияния вобэнзима на течение острой дизентерии остается актуальной задачей.

Цель исследования: охарактеризовать изменения фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови больных острой дизентерией и чувствительности шигелл к АМП в присутствии вобэнзима in vitro.

Проводили комплексное клинико-лабораторное обследование 217 больных средней тяжести формой верифицированного острого шигеллеза. У 15 больных шигелле-зом и 10 сопоставимых по возрасту и полу здоровых лиц (контрольная группа) определяли фагоцитарную активность нейтрофилов (Нф) периферической крови с использованием фракции полинуклеаров, полученной из венозной гепаринизированной крови. К половине проб от больных шигеллезом добавляли испытуемый препарат вобэнзим (мукосфарма) в терапевтической концентрации (экспозиция - один час). Инфицирование клеток проводили шигеллами Зонне в соотношении микробов и фагоцитов 25:1. Определяли количество фагоцитирующих нейтрофилов в % (фагоцитарный индекс - ФИ) и сред-

нее число поглощенных шигелл Зонне, характеризующих поглотительную способность клеток (фагоцитарное число - ФЧ в условных единицах, у. е.). Для объективной количественной оценки полученного эффекта применения вобэнзима использовали понятие коэффициента стимуляции (КС), который рассчитывали по формуле КС=(Х2 --Х1) 100 %/Х1, где Х1 - исходное значение показателя; Х2 -значение показателя в динамике наблюдения. При значении от 0 до 15 % степень стимуляции считали умеренной, при КС более 15 % - выраженной. Чувствительность клинических изолятов шигелл к р-лактамам (ампициллин, амоксиклав, цефтазидим, цефотаксим, меропенем), хинолонам (налидиксовая кислота, ципрофлоксацин), аминогликозидам (гентамицин, амикацин, тобрамицин), нитрофуранам (фуразолидон), хлорамфениколу, тетрациклину определяли диско-диффузионным методом на агаре Мюллера-Хинтон [3, 7]. В коллекцию шигелл вошли 427выделенных от взрослых больных в 2000-е гг. в Санкт-Петербурге штаммов (Б./¡ехпеп 2а - 44,5 %; 3а - 37,2 %; Б. яопп& - 18,3 %). Изучали выживаемость 20 клинических изолятов шигелл в присутствии ципрофлоксацина и гентамицина до и после инкубации шигелл с ферментным комплексом вобэнзим (доза - 100 мкг/мл, время инкубации - 2, 24 и 48 часов) с использованием метода серийных разведений в мясопептонном бульоне с последующим посевом инокулюма на среду Эндо и подсчета КОЕ [2]. Сравнительный статистический анализ проводили с использованием метода максимального правдоподобия хи-квадрат, хи-квадрат с поправкой Йетса, хи-квадрат Пирсона, точного критерия Фишера.

Обследованные больные переносили средней тяжести форму шигеллеза, вызванную преимущественно Б. Аехпеп (79,9 %). Дизентерию Зонне диагносцировали у 20,1 % больных. Средний возраст обследованных больных составил 43, 1 года. В стационар пациенты поступали в среднем на 5,1±0,3 дня заболевания. Большинство больных (72,7 %) имели различную сопутствующую патологию. Преимущественными синдромальными диагнозами были гастроэнтероколит и энтероколит (более 80 % больных), синдром гемоколита диагносцировали у 69,8 % пациентов. Более 95 % пациентов в качестве этиотропной терапии получали ципрофлоксацин в стандартной терапевтической дозировке. При этом большинству больных (83,5 %) одновременно с ципрофлоксацином назначали второй АМП, преимущественно гентамицин (72,2 % пациентов). Исследование фагоцитарной активности нейт-рофилов выявило, что у 76 % больных шигеллезом фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови по фагоцитарному индексу была снижена в среднем на 10 % по сравнению со здоровыми лицами (норма ФИ=72,2± 1,80 %), что не противоречит данным В. Н. Игнатьева (1999) [1]. У остальных больных доля фагоцитирующих Нф была близка к нормальным значениям или незначительно превышала их. Поглотительная способность нейтрофилов (Нф) периферической крови больных ши-геллезом (по результатам подсчета фагоцитарного числа) в среднем существенно не отличалась от таковой

ОРИГИНАЛЬНЫЕ РАБОТЫ

Выживаемость изолятов шигелл в присутствии различных комбинаций препаратов (время инкубации 24 часа) (КОЕ)

Шигеллы (контроль культуры) Шигеллы в присутствии гентамицина Шигеллы в присутствии ципрофлоксацина Шигеллы в присутствии гентамицина и вобэнзима Шигеллы в присутствии ципро-флоксацина и вобэнзима

1,2 103 7,8 102 2,4 102 5,2 101 2,3 101

Примечание: * КОЕ колониеобразующие единицы.

у здоровых лиц (р>0,05). В присутствии вобэнзима имело место повышение фагоцитарной активности Нф по ФИ в среднем на 11 % от исходного уровня (р<0,001). Коэффициент стимуляции в отношении ФИ составил 16 %. Поглотительная способность Нф при воздействии препарата достоверно не изменялась. Анализ результатов определения чувствительности к АМП клинических изолятов шигелл показал, что изученные штаммы сохраняли чувствительность к налидиксовой кислоте и фторхинолонам (ципрофлоксацину), цефалоспоринам 3-го поколения (це-фотаксиму и цефтазидиму) и карбапенемам (меропене-му). Однако к препаратам других групп с разной частотой выявляли резистентность. В целом доля резистентных штаммов среди S. flexneri 2a составила 95,4 %, S. flexneri 3a- 92,8 % и S. sonnei- 76,2 %. Подавляющее большинство штаммов S. flexneri 2a и 3a (более 90 %) имели соче-танную резистентность к трем препаратам - ампициллину, хлорамфениколу и тетрациклину, в отличие от штаммов S. sonnei, у которых данный фенотип резистентности выявляли существенно реже. У штаммов S. sonnei не выявлена резистентность к аминогликозидам. У S. flexneri доля резистентных штаммов к этим препаратам колебалась и в разные годы составила 1,4-9,9 % (у S. flexneri 3a) и 2,9-28,6 % (у штаммов S. flexneri 2a). В популяции S. flexneri 2a 50,1 % штаммов были устойчивы к широко используемому в прошлые годы фуразолидону, в отличие от S. flexneri 3a и S.sonnei, доля резистентных штаммов среди которых не превышала 5,7 %. Контакт вобэнзима с шигеллами Флекснера в течение 24 и 48 часов инкубации привел к снижению выживаемости шигелл в присутствии ципрофлоксацина в 5-10 раз и в присутствии гентамицина в 10 -15 раз (таблица).

По результатам исследования можно сделать следующие выводы.

1. В период разгара острого шигеллеза у большинства больных имеет место снижение фагоцитарного индекса нейтрофилов периферической крови в среднем на 10 % по сравнению со здоровыми лицами.

2. Более 90 % S. flexneri 2a и 3a и более 70 % S. sonnei, выделенных в Санкт-Петербурге от взрослых больных острым шигеллезом, обладают резистентностью к АМП. При этом к группе фторхинолоновых антибиотиков чувствительность у шигелл сохраняется, но в отношении ген-тамицина, наиболее часто используемого в сочетании с фторхинолонами, в популяции шигелл (преимущественно S. flexneri) отмечается формирование резистентности.

3. В присутствии вобэнзима in vitro имеет место снижение выживаемости шигелл Флекснера под воздействием ципрофлоксацина и гентамицина и усиление фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови

взрослых больных шигеллезом Флекс-нера средней тяжести, что может служить основанием для включения его в комплексную терапию заболевания.

ЛИТЕРАТУРА

1. Игнатьев, В. Н. Влияние на иммунные реакции при шигеллезе дибазола и озона : автореф. дис. ... канд. мед. наук / В. Н. Игнатьев. - Саранск, 1999. - 18 с.

2. Лабораторное дело. - 1966. - № 10. - С. 628-630.

3. Методические указания по определению чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. МУК 4. 12. 1890-04 / Минздрав России. - М., 2004. - 65 с.

4. Пирцхалаишвили, Г. Г. Состояние слизистой оболочки толстой кишки у больных шигеллезами / Г. Г. Пирцхалаишвили,

B. И. Лучшев, М. 3. Щахмарданов // Рос. мед. журн. - 2002. - № 3. -

C. 22-23.

5. Повышение эффективности и снижение побочных эффектов антибактериальной терапииметодом системной энзимотерапии : метод. реком. / под ред. А. В. Сундукова. - М., 2005. - 32 с.

6. Технологии системной энзимотерапии в педиатрической практике // Усовершенствованная медицинская технология / под ред. А. Г. Румянцева, А. В. Картелишева, Н. С. Смирновой. - М., 2006. - 54 с.

7. National Committee for Clinical Laboratory Standards : Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests. - 8th ed. - USA (PA) : Wayne, 2003.

РЕЗЮМЕ

В. Д. Иващенко, Е. А. Кожухова, С. А. Егорова, Т. В. Беляева, А. М. Иванов

Изменение фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови больных острым шигеллезом и чувствительности шигелл к АМП в присутствии вобэнзима in vitro

Представлены результаты обследования 217 взрослых больных средней тяжести острым шигеллезом Флекснера и Зонне. Присутствие вобэнзима стимулировало фагоцитарную активность нейтрофилов больных шигеллезом (по фагоцитарному индексу) на 11 % по сравнению с исходным уровнем. Контакт вобэнзима с шигеллами привел к снижению выживаемости шигелл в присутствии ципрофлоксацина в 5-10 раз и в присутствии гентамицина в 10-15 раз.

Ключевые слова: шигеллез, резистентность к АМП, вобэнзим.

SUMMARY

V. D. Ivaschenko, E. A. Kozhukhova, S. A. Egorova, T. V. Belyaeva, A. M. Ivanov

Change of the serum neutrophil ingection rate in shigellosis cases and shigella antimicrobial resistance at the wobenzym presence in vitro

The observed were 217 adult acute shigellosis cases (80 % caused by S.flexneri, 20 % - by S. sonnei) with moderate severity course. The wobenzym added in vitro stimulated the neutrophils ingection rate (the phagocytic index) in shigellosis cases up to the 11 % higher level than that without it. The revealed is the high percentage of shigella strains resistant to ampicillin, chloramfenicol and tetracycline; no strains resistant to ciprofloxacin and nalidixic acid and forming resistance to aminoglycosides. The wobenzym added in vitro to shigella culture suppressed the strain survivability 5-10 folds at the ciprofloxacin presence and 10-15 folds at the gentamycin presence.

Key words: shigellosis, antimicrobial resistance, wobenzym.