CC BY
18ФУНДАМЕНТАЛЬНАЯ И ПРИКЛАДНАЯ БИОЛОГИЯ
УДК 618.3
ИЗМЕНЕНИЕ БИОХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА КРОВИ ЧЕЛОВЕКА ПРИ
ВИРУСНОМ ГЕПАТИТЕ В
Л.А. Капустина, Е.В. Ноздрачева
ФГБОУ ВО «Брянский государственный университет имени академика И.Г. Петровского»
Несмотря на значительные усилия, предпринимаемые в течение многих лет службами здравоохранения Российской Федерации по предотвращению распространения гепатита В, эта инфекция и в настоящее время является актуальной проблемой. Лабораторная диагностика является одним из ведущих этапов в системе лечения больных вирусными гепатитами. Важное значение имеют биохимические методы исследования, применяемые для определения вирусных частиц и антител, содержащихся в крови, а также изучение метаболитов, ферментов и субстратов в процессах обмена веществ при поражении человека вирусом гепатита. Ключевые слова: биохимический анализ крови, маркеры, вирусный гепатит В.
Введение. Вирусные гепатиты продолжают оставаться одной из главных проблем здравоохранения, как в нашей стране, так и в большинстве стран мира. Это определяется высокой заболеваемостью и летальностью, развитием хронического гепатита, цирроза печени и гепатоцеллюлярного рака печени, а также социальными проблемами, связанными с вирусными гепатитами, с гигантскими экономическими затратами, которые необходимы для полноценной борьбы с этими инфекциями [1].
В сумме всех острых вирусных гепатитов парентеральные вирусные гепатиты составляют 60,8%, при этом на долю вирусного гепатита В приходится 47,6% [3].
По разным данным, в мире насчитывается до 2 миллиардов человек, в крови которых обнаруживаются серологические маркеры перенесенного заболевания, а свыше 350 млн. человек являются хроническими больными и носителями вируса гепатита В. До 80% случаев гепатоцеллюлярной карциномы ассоциированы с хроническим вирусным гепатитом В. Ежегодно по всему миру от гепатоцеллюлярной карциномы погибают от 500 тыс. до 1,2 млн. человек, что ставит данную патологию в структуре смертности на девятое место в мире [2].
Различия в клинических проявлениях вирусных гепатитов достаточно неспецифичны, эпидемиология, патогенез и отдаленные последствия вызываемых им заболеваний неодинаковы. Это обусловливает исключительную ценность результатов лабораторных исследований, поскольку только они позволяют установить этиологию, определить фазу заболевания, дифференцировать формы заболевания [6].
Методика исследования. Исследование проводилось на базе ЧУЗ «РЖД-Медицина» в клинико-диагностической лаборатории. Исследованию подверглись 100 образцов крови.
В данном исследовании был использован гетерогенный метод иммуноферментного анализа с использованием ELISA (от англ. Enzyme Linked Immunosorbent Assay -опосредованный ферментом иммуносорбционный анализ). В организме больного гепатитом В методом иммуноферментного анализа могут быть обнаружены вирусные антигены HBsAg и HBeAg, а также антитела к ним и HBcore-белку: анти-HBcore, анти-HBe, анти-HBs. Данные антигены и антитела в совокупности представляют комплекс специфических маркёров вирусного гепатита В, который находится в динамическом изменении и отражает вирусную репликацию и иммунную реакцию пациента. Вирусные антигены HBsAg определяли при помощи тест-системы фирмы "Вектор-Бест" [5].
Определение концентрации общего белка в плазме крови производили биуретовым методом с использованием фотоэлектроколориметра и биохимического анализатора. Метод
основан на том, что белки в щелочной среде образуют с ионами меди (II) окрашенные в фиолетовый цвет комплексы (биуретовая реакция).
Определение концентрации альбумина в сыворотке и плазме крови производили унифицированным колориметрическим методом, принцип которого заключается в том, что альбумин образует окрашенный комплекс с бромкрезоловым зеленым в слабокислой среде в присутствии детергента.
Определение активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови производили методом Райтмана-Френкеля, принцип которого заключается в том, что под действием фермента аланинаминотрансферазы в результате переаминирования происходит перенос аминогруппы с аланина на а-кетоглутарат. Активность аланинаминотрансферазы пропорциональна количеству образовавшихся динитрофенилгидразонов пирувата в щелочной среде, которое определяется фотометрически.
Определение активности аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови также определяли методом Райтмана-Френкеля. Принцип метода заключается в том, что под действием фермента аспартатаминотрансферазы в результате переаминирования происходит перенос аминогруппы с аспартата на а-кетоглутарат. Активность аспартатаминотрансферазы пропорциональна количеству образовавшихся динитрофенилгидразонов пирувата и оксалоацетата в щелочной среде, которое определяется фотометрически [4].
Результаты и обсуждения. При проведении исследования учитывались такие биохимические показатели крови, как содержание альбумина, общего белка, активность аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы, коэффициент де Ритиса.
В 7% случаев среди всех исследованных образцов крови показатели по альбумину находятся за границами нормы, при этом в 6% случаев показатели альбумина были ниже нормы, что может свидетельствовать о развитии инфекционных заболеваний, в том числе и вирусного гепатита В. У 1% от общего числа обследованных образцов крови показатель альбумина был выше нормы. Повышение уровня альбумина (гиперальбуминемия) существенного диагностического значения не имеет, исключая состояния, связанные с дегидратацией.
Далее мы определяли концентрацию общего белка в сыворотке крови. В 6% случаев показатели общего белка отклонены от нормы, при этом у 4% исследованных образцов крови показатели по общему белку были выше нормы и у 2% - были зафиксированы значения этого показателя ниже нормы.
На следующем этапе исследования, нами была определена активность аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (АСТ). Так у 10% исследованных образцов крови значение показателя аланинаминотрансферазы было выше нормы, при этом в 3 % случаев этот показатель превышал нормальное значение в несколько раз, что свидетельствует о воспалительном процессе в печени. В отношении содержания в крови аспартатаминотрансферазы нами были получены данные, свидетельствующие о том, что у 6 % исследованных образцов крови значение этого показателя было выше нормы, что наряду с превышающим норму содержанием аланинаминотрансферазы, свидетельствует о наличии воспалительного процесса в печени.
Важно отметить, что весомый вклад в изучение биохимии трансаминаз и их роли в организме был внесен итальянским учёным Фернандо де Ритисом (Fernando De Ritis). Исследования Ф. де Ритиса показали, что диагностическое значение имеет не только содержание в крови АСТ и АЛТ само по себе, но и их соотношение. Де Ритис разработал диагностический критерий, названный в его честь коэффициентом де Ритиса. Коэффициент де Ритиса представляет собой отношение уровня АСТ к АЛТ.
Многочисленные медико-биохимические исследования последнего десятилетия с высокой достоверностью доказали, что значение коэффициента де Ритиса (DRr) имеет важное диагностическое значение. Так, коэффициент DRr <1 характерен для вирусных гепатитов, а DRr >1- для хронических гепатитов и дистрофических заболеваний печени.
Расчёт Коэффициента де Ритиса целесообразен только при выходе АСТ и/или АЛТ за пределы референтных значений.
В связи с вышеизложенным на следующем этапе исследования нами был рассчитан коэффициент Де Ритиса для тех образцов крови обследуемых, у которых значение АСТ и /или АЛТ выходят за пределы референтных значений. Нами были получены данные, свидетельствующие о том, что при вирусном поражении печени в 100% случаев наблюдается изменение биохимических показателей крови.
При проведении иммуноферментного анализа с использованием спектрофотометра Bio Rad (модель 680) с целью выявления в крови обследуемых HBS антигена нами были получены данные, свидетельствующие, что в 4% случаев в крови персистирует вирус гепатита В. Сопоставление результатов биохимического анализа крови обследуемых с результатами иммуноферментного анализа свидетельствует о том, что в 100 % случаев в образцах крови, в которых был обнаружен антиген HBS ag, повышен показатель содержания АЛТ, при этом в 50% случаев содержание АЛТ превышает норму более чем в 6 раз, что может свидетельствовать об остром воспалительном процессе в печени. Содержание АСТ повышено в 50% случаев, в следствие чего можно сделать вывод, что повышение АСТ при вирусном гепатите В является неспецифическим маркером, и его следует рассматривать только в комплексе с АЛТ, а также при расчете коэффициента Де Ритиса. Содержание общего белка в образцах крови, в которых был обнаружен антиген HBS ag, превышает норму в 50 % случаев, что свидетельствует об остром воспалительном процессе, а также о том, что содержание общего белка является неспецифическим маркером вирусного гепатита В, содержание которого с одной стороны может повышаться в крови, а с другой стороны - с одинаковой вероятностью оставаться в пределах референтных значений. Содержание альбумина понижено только у одного носителя вируса гепатита В, что говорит о неспецифичности данного показателя в биохимическом анализе крови по отношению к вирусу гепатита В.
Заключение. Биохимический анализ крови при гепатите имеет особенности, которые характерны для поражения печени в связи с тем, что его показатели реагируют на поражение печеночной паренхимы. В связи с этим изучение биохимической картины крови при вирусном гепатите В на современном этапе является актуальным и важным для оптимизации лабораторной диагностики и лечения вируса гепатита В, а также эпидемиологического контроля над ним. Специфическим методом определения вирусного гепатита В в организме человека является определение антигенов крови человека методом иммуноферментного анализа.
Список литературы
1. Абдурахманов Д.Т. Латентная HBV инфекция в патогенезе хронических заболеваний печени // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2002. - Т. 12. - № 6. - С. 207 - 212.
2. Ивашкин В.Т., Герман Е.Н., Маевская М.В. Скрытая инфекция вирусом гепатита В // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2008. - Т. 18, № 2. - С. 411.
3. Камышников В.С. Клинико-лабораторная диагностика заболеваний печени. - М.: МЕДпресс- информ, 2013. - С. 55-78.
4. Лобзин Ю.В., Жданов К.В., Волжанин В.М. Вирусные гепатиты клиника, диагностика, лечение. - СПб.: Фолиант, 2003. - 192 с.
5. Лифшиц В.М., Сидельникова В.Н. Лабораторные тесты при заболеваниях человека // Справочник для врачей. - М.: «Триада - Х», 2003. - 352с.
6. Петруня A.M. Иммунные и микроциркуляторные нарушения у больных с затяжным течением вирусного гепатита В и его коррекция // Врачебное дело. - 2007. - №1. - С.130-132.
Сведения об авторах
Капустина Людмила Анатольевна - магистрант кафедры биологии Брянского государственного университета имени академика И.Г. Петровского, e-mail: mila. kapustina.68 @mail.ru
Ноздрачева Елена Владимировна - кандидат биологических наук, доцент кафедры биологии Брянского государственного университета имени академика И.Г. Петровского, email: nozd-ev@ mail.ru.
CHANGES OF BIOCHEMICAL BLOOD COMPOSITION IN THE DISEASE VIRAL
HEPATITIS B
L.A. Kapustina, E.V. Nozdracheva
Bryansk State University named after Academician I. G. Petrovsky
Despite the considerable efforts made over the years by the health services of the Russian Federation to prevent the spread of hepatitis B, this infection is currently an urgent problem. Laboratory diagnostics is one of the leading stages in the treatment of patients with viral hepatitis. Important are biochemical research methods used to determine the viral particles and antibodies contained in the blood, as well as the study of metabolites, enzymes and substrates in the metabolic processes in human hepatitis virus. Keywords: biochemical blood analysis, markers, viral hepatitis B.
References
1. Abdurahmanov D.T. Latentnaya NVV infekciya v patogeneze hronicheskih zabolevanij pecheni // Rossijskij zhurnal gastroenterology, gepatologii, koloproktologii. - 2002. - T. 12. - № 6. - Р.207 - 212.
2. Ivashkin V.T., German E.N., Maevskaya M.V. Skrytaya infekciya virusom gepatita V // Ros. zhurn. gastroenterologii, gepatologii, koloproktologii. - 2008. - T. 18, № 2. - S. 4-11.
3. Kamyshnikov, V.S. Kliniko-laboratornaya diagnostika zabolevanij pecheni. - M.: MEDpress- inform, 2013. - Р. 55- 78.
4. Lobzin, Yu.V., Zhdanov K.V., Volzhanin V.M. Virusnye gepatity klinika, diagnostika, lechenie. - SPb.: Foliant, 2003. - 192 р.
5. Lifshic V.M., Sidel'nikova V.N. Laboratornye testy pri zabolevaniyah cheloveka» // Spravochnik dlya vrachej. - M.: «Triada - H», 2003. - 352s.
6. Petrunya A.M. Immunnye i mikrocirkulyatornye narusheniya u bol'nyh s zatyazhnym techeniem virusnogo gepatita V i ego korrekciya //Vrachebnoe delo. - 2007. - №1. - Р. 130-132.
About authors
Kapustina L.A. - Postgraduate, Department of Biology, Bryansk State University named after Academician I.G. Petrovsky, e-mail: mila. kapustina.68 @mail.ru
Nozdracheva E.V. - PhD in Biological Sciences, Associate Professor of Department of Biology, Bryansk State University named after Academician I. G. Petrovsky, e-mail: nozd-ev@ mail.ru.
