CC BY
7ИТОГИ КВАЛИФИКАЦИОННОЙ ПРОГРАММЫ VQC-2002 по ГЕНОДИАГНОСТИКЕ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ. Квалификационные программы VQC (viral quality control) проводятся с 1992 г. в Нидерландах на базе отдела диагностических служб Sanquin в г.Алкмаар и диагностической лаборатории в г.Дельфт при участии национальной серологической референс-лаборатории в Мельбурне (Австралия). Целью программы является межлабораторное сравнение и стандартизация методов генодиагностики вирусных инфекций, применяемых в клинической и трансфузионной микробиологии.
Организаторы программы готовят вирусные стандарты, входящие в состав закодированных панелей для количественной оценки диагностических наборов в лабораториях-участниках испытаний. Стандарты на вирусные гепатиты готовятся из плазмы инфицированных больных. Панели предоставляются участникам испытаний за небольшую плату. Полученные участниками результаты обрабатываются и анализируются организаторами программы, после чего результаты испытаний публикуются на сайте www.vqc.nl.
В программе 2002 г. результаты испытания тестов на гепатит С были получены от 39 лабораторий, па гепатит В - от 24 лабораторий и на гепатит А - от 9 лабораторий. Количество данных для заключительного анализа превышало число лабораторий, т.к.некоторые из них использовали несколько различных методов генодиагностики или несколько повторений одного анализа.
Вирус гепатита С (ВГС). Квалификационная панель 2002 включала два отрицательных образца и 10-кратные разведения стандартов РНК ВГС генотипов 1, 2 и 3. Концентрации стандарта генотипа 1 были определены с помощью набора Quantiplex bDNA v2.0 и откалиброваны в международных единицах (ME) путем сравнения с аналогичным стандартом ВОЗ. Таким образом, концентрация в 3800 геном-эквивалентов (гэ)/мл соответствовала 1000 МЕ/мл. Стандарты ВГС генотипов 2 и 3 были откалиброваны в ME с помощью стандарта ВГС генотипа 1 в серии экспериментов с использованием набора Versant bDNA v2.0. Целью программы 2002 являлось количественное определение различных генотипов ВГС в лабораториях-участниках испытаний.
В Таблице 1 представлены методы (наборы) для выявления РНК ВГС в образцах квалификационной панели. В большинстве лабораторий панель тестировали один или два раза.
Таблица 1
Методы (наборы), использованные в 39 лабораториях для тестирования РНК ВГС в _образцах панели VQC__
Метод (набор) Качественное Количественное
определение определение
Авиценна-НСУ-ПЦР 1
Байер Квантиплекс bDNA V3.0 4
Ген-Проб TMAV 1.05 1
Рош Ампликор КОБАС 27
Рош Ампликор MWP 5
Рош Ампликор Монитор КОБАС 5
Рош Ампликор Монитор MWP 2
Рош Амплискрайб Мультипреп 1
"домашний" ПЦР в реальном времени 2
"домашний",количественная кДНК-ПЦР 6
"домашний", количественнаякД НК-ПЦР 2
Всего: 43 13
Критериями квалификации лаборатории по качественному определению являлись правильная идентификация отрицательных контролен и положительных образцов с концентрацией РНК ВГС 3800 гэ/мл (1000 МЕ/мл) или выше. Для количественных исследований требовалась правильная идентификация отрицательных контролей и положительных образцов в концентрации 38 000 гэ/мл и выше. В Таблицах 2, 3, 4 и 5 представлены результаты, полученные различными методами.
Таблица 2
Квалификация лаборатории на панелях ВГС: ложноположительные результаты на отри нцательных контролях
Метод (набор) Качественное определение Количественное определение
Авиценна-НСУ-ПЦР 0/1
Байер Квантиплекс ЪБМЛ У3.0 0/4
Ген-Проб ТМЛ У 1.05 0/1
Рош Ампликор КО БАС Один/27
Рош Ампликор MWP 0/5
Рош Ампликор Монитор КОБАС 0/5
Рош Ампликор Монитор MWP 0/2
Рош Амплискрайб Мультипреп 0/1
"домашний" ПЦР в реальном времени 0/2
"домашний" количественная кДНК-ПЦР Два/6
"домашний",количественная кДНК-ПЦР 0/2
Всего: Три/43 0/13
Таблица 3
Квалификация лабораторий на панелях ВГС: ложноотрицательные результаты на
положительных образцах
Метод (набор) Качественное Количественное
определение определение
Авиценна-НСУ-ПЦР 0/1
Байер Квантиплекс ЪБМЛ У3.0 0/4
Ген-Проб ТМЛУ 1.05 0/1
Рош Ампликор КОБАС Один/27
Рош Ампликор MWP 0/5
Рош Ампликор Монитор КОБАС 0/5
Рош Ампликор Монитор MWP 0/2
Рош Амплискрайб Мультипреп 0/1
"домашний" ПЦР в реальном времени 0/2
"домашний",количественная кДНК-ПЦР 0/6
"домашний",количественная кДНК-ПЦР Дт/о
Всего: Один/43 0/13
Таблица 4
Квалификация лабораторий на панелях ВГС: отрицательные результаты на
образцах, содержащих 3800 гэ/мл
Метод (набор) Качественное определение Количественное определение
Авиценна-НСУ-ПЦР 0/1
Байер Квантиплекс ЪБМЛ У3.0 Четыре/4
Ген-Проб ТМА У1. 05 0/1
Рош Ампликор КОБАС Два/27
Рош Ампликор MWP 0/5
Рош Ампликор Монитор КОБАС 0/5
Рош Ампликор Монитор MWP 0/2
Рош Амплискрайб Мультипреп 0/1
"домашний" ПЦР в реальном времени 0/2
"домашний", количественная кДНК-ПЦР Два/6
" домашний" количественная кДНК-ПЦР 0/2
Всего: Пять/43 Четыре/ 13
Таблица 5 ьности методов на
Квалификационные результаты апа.гатической чувствител серийных разведе ни их стандартов ВГС
Метод (набор) Качественное определение Количественное определение
Авиценна-НСУ-ПЦР Один/1
Байер Квантиплекс ЪБМЛ У3.0 Четыре/4
Ген-Проб ТМА У1. 05 Один/1
Рош Ампликор КОБАС 26/27
Рош Ампликор MWP Пять/5
Рош Ампликор Монитор КОБАС Пять/5
Рош Ампликор Монитор MWP Два/2
Рош Амплискрайб Мультипреп 0/1
"домашний" ПЦР в реальном времени Два/2
"домашний",количествениая кДНК-ПЦР Четыре/6
"домашний",количественная кДНК-ПЦР Два/2
Всего: 40/43 13/13
Правильное определение положительных образцов (стандартов) в разведениях
получено в 100%, правильное определение отрицательных контролен в 95% и достаточная аналитическая чувствительность в 98% использованных методов. При сравнении 'домашних' методов и коммерческих наборов, использованных в испытаниях, последние не показали преимущества над первыми. Отмечалось расхождение в количественной оценке стандартов в МЕ/мл между различными коммерческими методами. В течение периода с 1992 по 2002 гг. лаборатории повысили качество диагностики гепатита С.
Вирус гепатита В (ВГВ).
Квалификационная панель была составлена из серийных разведений стандарта ДНК ВГВ генотипа А с шагом разведений в 0.5 log. Первое разведение, содержавшее 3x10 гэ/мл, представляло собой 10-кратное разведение исходного стандарта, откалиброванного по стандарту Eurohep и стандарту ВОЗ. Одна ME стандарта ВОЗ эквивалентна 7.4 гэ стандарта VQC. Панель позволяла оценивать методы, основанные на ПЦР или гибридизации, с чувствительностью определения соответственно 3x104 гэ/мл и 106 гэ/мл.
Таблица 6
Методы (наборы), использованные в 24 лабораториях для правильного определения
ДНК ВГВ в разведениях стандарта
Метод (набор) Качественное Количественное
определение определение
Авиценна-HBV DNA Один/1
Байер Квантиплекс bDNA V3.0 Один/1
Ампликор HBV монитор 16/18
Дайджин Гибрид Шесть/б
Дайджин Гибрид Сверхчувств Один/1
"домашний"ПЦР реального времени 3/4
"домашние" ПЦР наборы 13/14 Один/1
В Таблице 6 представлены методы (наборы), использованные лабораториями-участниками квалификационной программы. 24 лаборатории представили 44 результата. Правильное определение отрицательных образцов получено в 96%, положительных образцов разведений стандарта в 96% всех результатов,
В Таблице 7 представлены результаты соответствия лабораторий квалификационным критериям.
Таблица 7
Методы (наборы), использованные в 24 лабораториях для правильного определения
ДНК ВГВ в разведениях стандарта
Метод (набор) Качественное Количественное
определение определение
Авиценна-HBV DNA 0/1
Байер Квантиплекс bDNA V3.0 0/1
Ампликор HBV монитор 0/18
Дайджин Гибрид О/б
Дайджин Гибрид Сверхчувств 0/1
"домашний" ПЦР реального времени 1/4
"домашние" ПЦР наборы 1/14 0/1
Аналитическая чувствительность качественных методов (наборов) представлена в Таблице 8, количественных методов в Таблице 9.
Таблица 8
Процент положительных результатов, полученных разными методами на разведениях VQC стандартов ВГВ: качественные тесты
HBV-DNA (гэ/мл) «домашние» (n=3) ПЦР в реальном Авиценна
времени (n=3) (n=1)
30 000 000 100% 100% 100%
10000000 100% 100% 100%
3 000 000 100% 100% J00%
1 000 000 100% 100% 100%
300 000 100% 100% 100%
100000 100% 100% 100%
30000 100% 100% 100%
10000 100% 100% 100%
-3-000- 85% 1 00% 100%
1 000 77% 33% 0%
Таблица 9
Процент положительных результатов, полученных разными методами на разведениях
VQC стандартов ВГВ: количественные тесты
HBV-DNA «домашние» bDNA Ампликор Дайджи Дайджин
(гэ/мл) (n=1) (n=1) (n=16) н Сверхчувстви-
(n=6) тельный (n=1)
30000000 100% 100% 100% 100% 100%
10000000 100% 100% 100% 100% 100%
3 000 000 100% 100% 100% 100% 100%
1 000 000 100% 0% 100% 100% 100%
300 000 100% 100% 100% 83% 100%
100000 100% 0% 100% 0% 100%
30000 100% 0% 100% 0% 100%
10000 100% 0% 88% 0% 0%
3 000 100% 0% 94% 0% 0%
1 000 100% 0% 81% 0% 0%
Сравнение результатов в Табл. 8 и 9 показывает, что 'домашние' тесты более чувствительны по сравнению с коммерческими наборами.
Вирус гепатита А (ВГА). Квалификационная панель состояла из разведений (шаг 0.5 log) стандарта VQC, откалиброванного в МЕ/мл при использовании теста Roche LightCycler.
В испытаниях принимало участие 9 лабораторий, большинство из которых использовало коммерческие методы определения РНК ВГА, основанные на ПЦР в реальном времени. Предел аналитической чувствительности для оценки квалификации лаборатории был установлен в 50 МЕ/мл. Из 9 лабораторий только одна, использовавшая коммерческий набор для количественной ПЦР, не удовлетворяла установленным критериям. Данная лаборатория показала два ложноположительных результата на отрицательных контролях. Количественный метод Roche продемонстрировал линейную зависимость в диапазоне концентраций от 17 до 16 700 МЕ/мл (1 ME соответствует 5.1 копии РНК ВГА).
Кроме вирусных гепатитов квалификационная программа VQC включала панели для определения РНК ВИЧ-1, ДНК цитомегаловируса, ДНК парвовируса В19, ДНК вируса герпеса простого 1 и 2 типов и ДНК хламидии трахоматис. К сожалению, от России в данных испытаниях из года в год принимает участие только одна лаборатория медицинского центра «Авиценна», Москва. В 2003 г. программа VQC будет включать в себя инактивированные образцы (стандарты) и обеспечивать участникам доступ к интернет-системе для межлабораторного сравнения результатов и их статистической обработки, А.Х.Асади Мобархан, Медицинский центр «Авиценна», Москва.
