Исследование влияния покрытия золотых наночастиц на характер взаимодействия с раковыми клетками для задач гипертермии Текст научной статьи по специальности «Биотехнологии в медицине»

ТЕЗИСЫ

МАТЕРИАЛЫ XI ВСЕРОССИЙСКОЙ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКОЙ..

17

С.В. Дидук, К.В. Смирнова ВОЗМОЖНЫЙ МЕХАНИЗМ РЕГУЛЯЦИИ

ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ОНКОГЕНА LMP1 ВИРУСА ЭПШТЕЙНА-БАРР

ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» РАМН, Москва

Вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ) - убиквитарный герпесвирус человека, который ассоциирован с широким спектром доброкачественных и злокачественных новообразований разного этиогенеза. Среди белков латентного цикла инфекции ВЭБ особое внимание привлекает интегральный мембранный белок LMP1, который обладает важным трансформирующим потенциалом. Несмотря на активное изучение LMP1, механизм влияния его отдельных мутаций на регуляцию онкогенной активности этого белка по-прежнему остается до конца не изученным. Отдельные точечные мутации влияют и на экспрессию укороченной неонкогенной, так называемой литической формы белка - lyLMP 1.

Цель исследования. Определение роли мутаций (G212S, Т350А и S366T), часто выявляемых в CTAR-областях lyLMP1, в его способности влиять на активность ключевых сигнальных путей клетки NF-kB и AP-1, вариантами онкогена LMP1 ВЭБ.

Материалы и методы. В работе использовались следующие векторные конструкции: pSG5-LMP1-Cao и pSG5-LMP1-B95-8, pSG5-lyLMP1, а также pSG5-LMP1-Triple и pSG5-lyLMP1-Triple. Для анализа активации транскрипционного фактора NF-kB использовали репортерную плазмиду pkB-ConA-Luc, для определения уровня активации JNK сигнального пути использовали уии2-люциферазную репортерную плазмиду (pAP1-Luc).

Результаты. В результате проведения серии экспериментов показано, что экспрессия мутантного варианта lyLMP1-Triple во всех случаях снижает уровень транскрипционного фактора NF-kB, активированного полноразмерным онкогеном LMP1 ВЭБ, в среднем на 18,4 % (р < 0,05). Ко-трансфекция lyLMP1 с различными вариантами онкогена LMP1 (B95-8, Triple и Cao) во всех случаях вызывала ингибирование NF-kB. Максимальное ингибирование NF-kB выявлено в случае ко-экспрессии lyLMP1-Triple и LMP1-B95-8 (23,2%, р < 0,001). Кроме того, показано, что вариант lyLMP1-Triple снижает уровень транскрипционного фактора АР-1, активированного онкогеном LMP1, в среднем на 14,6% (р < 0,05). Аналогично выше представленным результатам, экспрессия lyLMP 1-Triple вызывала большее ингибирование AP-1, по сравнению с контрольным вариантом lyLMP1.

Выводы. Дальнейшее выяснение роли часто встречающихся мутаций в механизме регуляции сигнальной активности LMP1, вероятно, поможет лучше понять природу ВЭБ-ассоциированного канцерогенеза. Исследование выполнено при финансовой поддержке РОНЦ им.Н.Н.Блохина РАМН и Благотворительного фонда «Протек».

-----------12------------2------------3------------2--------------1----------------------------

В.В. Елагин ' , Н.И. Евтеева , Е.А. Сергеева , М.Л. Бугрова , Д.В. Южакова ,

В.А. Надточенко4, Е.В. Загайнова2

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ПОКРЫТИЯ ЗОЛОТЫХ НАНОЧАСТИЦ

НА ХАРАКТЕР ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ С РАКОВЫМИ КЛЕТКАМИ ДЛЯ ЗАДАЧ ГИПЕРТЕРМИИ

1 Нижегородский государственный университет им. Н.И. Лобачевского, Нижний Новгород 2Нижегородская государственная медицинская академия, Нижний Новгород 3Институт прикладной физики РАН, Нижний Новгород 4Институт химической физики РАН, Москва

В настоящее время активно исследуются возможности применения золотых наночастиц (НЧ) для диагностики и терапии патологических состояний. Однако остается не до конца изученным вопрос об особенностях их взаимодействия с клетками. Задачей данного исследования являлось изучение особенностей взаимодействия золотых НЧ с различными типами покрытия и раковых клеток. Исследование выполнено на клетках линии 8КОУ-3. В работе использовали золотые НЧ в форме стержней, покрытые полиэтиленглико-лем (ПЭГ) с молекулярной массой 6000Да и 40000Да, плюроником Н27 и хитозаном. Взаимодействие НЧ с клетками исследовали методами многофотонной флуоресцентной и трансмиссионной электронной микроскопии. Методом многофотонной флуоресцентной микроскопии было установлено, что сигнал флуоресценции НЧ, покрытых ПЭГ 6000Да, плюроником и хитозаном регистрировался из цитоплазмы клеток, что свидетельствует о проникновении НЧ внутрь клеток. Однако, для НЧ, покрытых хитозаном, уровень сигнал был самым низким. При увеличении времени инкубации, сигнал флуоресценции от НЧ в клетках увеличивается. Для НЧ, покрытых ПЭГ 40000Да, было установлено, что они не способны проникать в цитоплазму, сигнал флуоресценции регистрировался с внешней стороны мембраны. Метод электронной микроскопии позволил установить локализацию НЧ в клетках. НЧ, покрытые плюроником, располагались в цитоплазме клеток, а также на наружной поверхности мембраны. Единичные НЧ обнаружены в ядрах клеток и митохондриях. Увеличение времени инкубации приводило к увеличению количества НЧ внутри клеток. В случае НЧ, покрытых хитозаном, через 6 часов большое количество обнаружено в цитоплазме и кариоплазме, единичные НЧ встречались в митохондриях и на плазматической мембране. В ходе исследования было установлено, что способность НЧ проникать в клетки и характер их внутриклеточного распределения зависит от типа покрытия.

Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки РФ (ГК №№ 02.740.11.0713, 16.512.11.2053, договор № 11.G34.31.0017), РФФИ (проект № 12-02-00914).________

№ 2/том 11/2012

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ