CC BY
30
Химия растительного сырья. 2022. №1. С. 179-191. DOI: 10.14258/jcpim.2022019506
УДК 615.322
ИССЛЕДОВАНИЕ СВЕРХКРИТИЧЕСКИХ СО2-ЭКСТРАКТОВ БАГУЛЬНИКА БОЛОТНОГО LEDUM PALUSTRE L. (RHODODENDRON TOMENTOSUM HARMAJA) И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ЕГО МЕТАБОЛИТОВ МЕТОДОМ ТАНДЕМНОЙ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ
© М.П. Разгонова1'2*, А.М. Захаренко1'2'3, К.С. Голохваст1'2'3'4
1 Федеральный исследовательский центр Всероссийский институт генетических ресурсов растений им. Н.И. Вавилова, ул. Большая Морская, 42, Санкт-Петербург, 190031 (Россия), e-mail: [email protected]
2 Дальневосточный федеральный университет, о. Русский, Аякс, 10, Владивосток, 690922 (Россия)
3 Сибирский федеральный научный центр агробиотехнологий РАН, ул. Центральная, 2б, Краснообск, 633501 (Россия)
4 Тихоокеанский институт географии ДВО РАН, ул. Радио, 7, Владивосток, 690041 (Россия)
Цель данного исследования - экстрагировать биологически активные соединения методом сверхкритической СО2 экстракции и идентифицировать полифенольные комплексы и другие целевые аналиты методом тандемной масс-спектрометрии, представленные в листьях и стеблях багульника болотного - была успешно реализована. Для экстракции полифенольных комплексов и других биологически активных соединений багульника болотного Ledumpalustre L. использован метод сверхкритической СО2-экстракции. Характеристики сверхкритической СО2-экстракции Ledum palustre L. (давление 350 бар; температура 60 °С; экстракционное время 1 ч, сорастворитель MeOH 3.5%), при которых наблюдался наибольший выход биологически активных веществ, получены опытным путем перебора экстракционных условий. Для идентификации целевых аналитов в сверхкритических экстрактах использована тандемная масс-спектрометрия (высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) в комплексе с ионной ловушкой BRUKER DALTONIKS). Результаты исследований выявили присутствие 61 биологически активных соединений, соответствующих виду Rhododendron, из них 32 соединения идентифицировано впервые. Это флаванолы дигидрокепферол, араби-нозид кверцетина, галактозид мирицетина; флавоны: диосметин, невадензин, цирсимаритин; флаванон нарингенин; антоцианы дельфинидин, петунидин, пентозид цианидина, пентозид дельфинидина, глюкозид пеонидина, малонилг-люкозид пеонидина, рутинозид цианидина; эллаговая кислота; лигнан медиоресинол; димер процианидина А-типа; стеролы фукостерол и авенастерол и др.
Ключевые слова: Ledum palustre, Rhododendron tomentosum, сверхкритическая С02-экстракция, тандемная масс-спектрометрия, полифенолы, рододендрон.
Введение
Род Rhododendron является самым крупным родом семейства Ericaceae (вересковых) и насчитывает около 800 видов [1]. На территории России произрастает 19 видов, основная часть которых (14 видов)
встречается только во флоре Сибири и Дальнего
Разгонова Майя Петровна - кандидат технических наук, ВРИО директора Дальневосточной опытной станции, e-mail: [email protected]
Захаренко Александр Михайлович - кандидат химических наук, ведущий научный сотрудник, заместитель директора по научно-технической работе, e-mail: [email protected]
Голохваст Кирилл Сергеевич - доктор биологических наук, член-корреспондент РАО, профессор, директор, e-mail: [email protected]
Востока. Экспериментальные данные, а также сведения традиционной медицины народов, издавна населяющих территорию российского Дальнего Востока, свидетельствуют о широком использовании рододендронов флоры Сибири и Дальнего Востока в качестве фунгицидных, противовоспалительных, сердечно-сосудистых, тонизирующих,
* Автор, с которым следует вести переписку.
диуретических и антимикробных средств [2, 3]. Обширный ареал обитания данных видов и популярность в народной медицине создают объективные предпосылки для их детального изучения с целью внедрения в медицинскую практику.
Детальное исследование метаболитов растений является исключительно важной задачей, так как позволяет выявить химические вещества (или комплексы веществ), которые обусловливают те или иные полезные свойства растений [4]. Вместе с тем с химической точки зрения многие из этих растений изучены лишь поверхностно, хотя очевидна необходимость получения исчерпывающих сведений о составе вторичных метаболитов, и в особенности это касается тех растений, которые издавна используются в народной медицине [5].
Наиболее широко на территории Сибири и Дальнего Востока распространен Ledum palustre L. (Rhododendron tomentosum). В официальной медицине данное растение применяют как отхаркивающее средство. Народная медицина использует L. palustre для лечения ряда заболеваний органов дыхания, желудочно-кишечного тракта, хронических кожных заболеваний, гипертонии, ревматизма, гельминтозов и др. [6]. Одурманивающий запах, образующийся при сжигании листьев и вызванный резким испарением летучих терпенов, издавна использовался малыми народностями Сибири и Дальнего Востока как психоактивное, анальгетическое и наркотизирующее средство [7].
Широкое использование эфирных масел рододендронов в медицине обусловлено наличием в них биологически активных компонентов, которые обладают антимикробными, антифунгицидными, гипотензивными, цитотоксическими и противовоспалительными, рострегулирующими, инсектицидными и другими важными свойствами [8]. Весьма большие возможности применения в медицине имеет и L. palustre. В нем обнаружен целый комплекс биологически активных соединений: дубильные вещества, кумарины, флавоноиды, фенолы, фенолокислоты, катехины, микроэлементы, аскорбиновая кислота, тритерпеноиды и фитостерины [9]. Наибольший интерес, однако, вызывает изучение биологической активности эфирного масла багульника болотного. В первую очередь следует обратить внимание на возбуждение им центральной нервной и сердечно-сосудистой систем и противопаразитарные свойства [10].
Биологически активные соединения багульника болотного L. palustre эффективно экстрагируются с помощью органических растворителей, например метанола и этанола. Но экстракционные продукты на завершающей фазе нуждаются в дополнительной очистке от следовых количеств примененных растворителей. Сверхкритическая флюидная СО2-экстракция может использоваться как альтернатива традиционным методам экстрагирования: мацерации или Сокслет-экстракции. Сверхкритическая флюидная СО2-экстракция используется с конца 1970-х годов для аналитических процедур в оценке пищевых продуктов, выделения биологически активных веществ и определения уровней липидов в продуктах питания, а также уровней токсичных веществ. При сверхкритической экстракции в продуктах отсутствуют остатки органических растворителей, которые возникают при использовании обычных экстракционных методов, а растворители могут быть токсичными, например, в случае метанола и н-гексана. Легкое удаление растворителя из конечного продукта, высокая селективность и умеренные экстракционные температуры являются основными привлекательными факторами сверхкритической технологии, ведущими к значительному увеличению исследований для применения в пищевой и фармацевтической промышленности. При сравнении возможных сверхкритических растворителей диоксид углерода имеет наиболее привлекательные преимущества: нетоксичность, негорючесть, экологичность и возобновляемость ресурса [11].
Попова и др. (2018) исследовали влияние параметров сверхкритической СО2-экстракции и качества исходного сырья L. palustre на выходы хлорофиллов и каротиноидов из L. palustre. Полученные данные значимы для фармацевтической, пищевой и парфюмерно-косметической промышленности, где требуются натуральные красители и антиоксиданты [12]. Биологически активные вещества L. palustre экстрагировали методом сверхкритической флюидной С02-экстракции с использованием этанола в качестве сорастворителя.
Baananou et al. (2015) сообщали о противовоспалительной активности двух экстрактов из надземных частей L. palustre [13]. Эфирные масла багульника болотного получали двумя методами: с помощью сверхкритической СО2-экстракции и с помощью гидродистилляции. Результаты in vitro показывают, что эфирное масло L. palustre значительно усиливает подавление отеков (50-73%) для масла, полученного методом гидродистилляции и (52-80%), для масла, полученного методом сверхкритической экстракции.
Цель данного исследования - экстрагировать биологически активные соединения методом сверхкритической СО2 экстракции в диапазоне давлений 100-400 бар и идентифицировать полифенольные ком-
плексы и другие целевые аналиты методом тандемной масс-спектрометрии, представленные в листьях и стеблях багульника болотного L. palustre, собранных в Приморском крае (Лазовский район) на отрогах Сихотэ-Алиня. Ранее авторы данной статьи успешно использовали сверхкритическую СО2-экстракцию для получения биологически активных веществ из растений дальневосточной тайги Panax ginseng, Rhododendron adamsii, Rhododendron sichotense, Rhodiola rosea, чрезвычайно популярных лекарственных растений в традиционной медицине Юго-Восточной Азии [14].
Материалы и методы
В качестве объекта исследования были использованы листья и веточки багульника болотного L. palustre, собранные на северных отрогах Сихотэ-Алиня, Лазовский район, Приморский край. Все образцы морфологически соответствовали фармакопейным стандартам Государственной фармакопеи Российской Федерации [15].
Сверхкритическая СО2-экстракция листьев и веточек L. palustre выполнена с помощью сверхкритической системы флюидной экстракции Thar SFE-500F-2-FMC50 (США). В исследовании давление сверхкритического CO2 варьировалось от 100 бар до 400 бар, время воздействия 1 ч. Температура варьировалась от 35 до 60 °С. В системе флюидной экстракции использовался косольвент MeOH (Sigma-Aldrich, США) в соотношении к основному растворителю 3.5%. Объем экстракционной колбы сверхкритической системы флюидной экстракции составляет 0.5 л. Масса загружаемой для экстракции растительной матрицы составила 60 г отдельно для каждого эксперимента.
Высокоэффективная жидкостная хроматография. Для выполнения разделения многокомпонентных смесей использовался жидкостный хроматограф высокого давления Shimadzu LC-20 Prominence HPLC (Shimadzu, Япония), оборудованный UV-детектором и обратнофазной колонкой C18. Программа элюции градиента следующая: 0.0-4 мин, 100% CH3CN; 4-60 мин, 100%-25% CH3CN; 60-75 мин, 25%-0% CH3CN; контрольная промывка 75-120 мин 0% CH3CN. Весь ВЭЖХ-анализ сделан с UV-vis детектором SPD-20A (Shimadzu, Япония) при длинах волн 230 нм и 330 нм (данные длины волн соответствуют областям поглощения, характерным для фенольных веществ, в том числе используются при хроматографии танинов, флаваноидов и производных кумаровых кислот). Эффективная рабочая температура 17 °С. Объем впрыска составлял 1 мл.
Тандемная масс-спектрометрия. Масс-спектрометрические данные получены с помощью ионной ловушки amaZon SL (производство фирмы «BRUKER DALTONIKS», Германия), оснащенной источником ионизации электрораспылением ESI в режимах отрицательных и положительных ионов. Оптимизированные параметры получены следующим образом: температура источника ионизации: 70 °С, поток газа: 4 л/мин, газ-небилайзер (распылитель): 7.3 psi, капиллярное напряжение: 4500 V, напряжение на изгибе торцевой пластины: 1500 V, фрагментатор: 280 V, энергия столкновения: 60 eV. Масс-спектрометр использовался в диапазоне сканирования m/z 100-1.700 для MC и МС/МС. Ионная ловушка AmaZon SL оснащена специализированным программным обеспечением по управлению и по сопряжению её с 8 основными производителями систем ВЭЖХ. Для синхронизации с хроматографом Shimadzu использовался софт Compass HyStar (Версия Bruker Compass HyStar 4.1 SR1 (4.1.28.0)).
Результаты исследований
Исследовано несколько экспериментальных экстракционных условий в диапазоне давлений 100400 бар, с использованным объемом сорастворителя метанола в количестве 3.5% в жидкой фазе при температуре 31-60 °C. Экстрагирование проводили сверхкритическим СО2, подаваемым при постепенном повышении рабочего давления, которое доводили соответственно до 100-400 бар, в зависимости от порядкового номера эксперимента. Одновременно из емкости с сорастворителем с помощью насоса добавляли в экстракционный сосуд сорастворитель - водный раствор MeOH. После заполнения экстракционного сосуда и достижения рабочего давления проводили экстракцию при рабочем давлении 100-400 бар и температуре 31-60 °C в течение 1 ч. Полученный жидкий экстракт упаривают в роторном пленочном испарителе при температуре 30 °C с предварительным насыщением СО2 под давлением не менее 0.5 бар для удаления кислорода. Упаривание жидкого экстракта продолжают до получения пастообразной массы, которую затем подают на стадию высушивания. В результате применения широкого диапазона давлений и температур найдены наиболее под-
ходящие условия экстракции для извлечения целевых аналитов из листьев и веточек багульника болотного L. palustre. Наиболее эффективные условия экстракции, полученные опытным путем - это экстрактивный выход биологически активных веществ багульника болотного в количестве 8.95 мг/г загружаемой растительной матрицы при давлении 350 бар и температуре 60 °С. 3Б-график зависимости совокупного выхода биологически активных веществ L. palustre от экстракционных условий представлен на рисунке 1.
Уточнение метаболомного состава - чрезвычайно важный результат в системе биохимического анализа. В данной работе был использован метод ВЭЖХ-МС/МС с дополнительной ионизацией и анализом фрагментированных ионов. Высокоточные масс-спектрометрические данные регистрировались на ионной ловушке AMAZON SL BRUKER DALTONIKS, оснащенной источником ESI в режиме отрицательных/положительных ионов.
Всего на ионной хроматограмме было обнаружено 300 пиков присутствующих соединений в экстракте (рис. 2). Из них 61 пик удалось идентифицировать и детально показать дефрагментацию ионов целевого аналита, примеры на рисунках 3-5.
□ 0-1 □ 1-2 □ 2-3 □ 3-4 Ш4-5 D5-6 DÈ-f00 7-8 D8-9
Рис. 1. 3Б-график зависимости совокупного выхода биологически активных веществ L. palustre от экстракционных условий
Рис. 2. Распределенный график тандемной масс-спектрометрии анализируемых целевых аналитов сверхкритического экстракта L. palustre, представленный ионной хроматограммой (Голубая линия -график интенсивности сигнала положительных ионов; коричневая линия - график интенсивности сигнала отрицательных ионов)
По факту определения целевых аналитов составлена унифицированная системная таблица молекулярных масс соединений, идентифицированных в сверхкритическом СО2-экстракте L. palustre (табл.). В результате масс-спектрометрического исследования идентифицировано 61 соединение, из них 32 соединения обнаружены в L. palustre впервые. Идентификация соединений (значения m/z и фрагментированные ионы) производилась путем сравнения полученных экспериментальных данных с известными научными результатами (Rhus coriaria [16], Vitis vinifera [17], Halophytes [18], Rhododendron genus [19], L. palustre [20], Mentha spicata [21], Bituminaria bituminosa [22] и др.).
Целевые аналиты, идентифицированные в сверхкритическом СО2-экстракте багульника болотного L. palustre
№ Группы соединений Соединение Химическая формула Молярная масса Ион-аддукт [M-H]- Ион-аддукт [M+H]+ MS/MS фрагментация 2 порядка MS/MS фрагментация 3 порядка MS/MS фрагментация 4 порядка Использованные источники
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Kaempferol [3,5,7-Trihydroxy- 286;
1 Флаванол 2-(4-hydro- xyphenyl)-4H-chromen-4-one] C15H10O6 286.24 287 205; 163 181 163 [16; 17]
2 Флаванол Dihydrokaempferol [Aromadendrin; Katuranin] C15H12O6 288.25 289 228; 273; 189 229 [18]
3 Флаванол Quercetin C15H12O7 302.24 301 303 285; 163 181; 145 163 [17; 29; 30]
267;
4 Флаванол Dihydroquercetin [Taxifolin; Taxifoliol] Rhamnetin I [beta- C15H12O7 304.25 303 285 257; 241; 215; 135 171 [6; 17]
5 Флаванол Rhamnocitrin; Quercetin 7-Methyl ether] C16H12O7 316.26 317 269; 216 230 [9; 16]
Myricetin [3,5,7-Trihydroxy-2- 299; 241 240; 197 239; 197
6 Флаванол (3,4,5 -Trihydroxyphenyl)-4H-Chromen-4-One] C15H10O8 318.24 317 [17; 18]
7 Флаванол Ampelopsin [Dihydromyricetin; Ampeloptin] C15H12O8 320.25 319 317; 275 257; 217 [16; 30]
Quercetin-3,7,3',4'-Tetramethyl 329; 301; 283; 252 301;
8 Флаванол ether [Retusin; Tetrame- C19H18O7 358.34 359 344 283; [9; 21]
toxyquercetin] 255
9 Флаванол Avicularin (Quercetin 3-Alpha-L-Arabinofuranoside; Avicu-laroside) C20H18O11 434.35 435 303; 377 257; 153 229; 167 [23]
10 Флаванол Quercetin-3-0-arabinoside C20H18O11 434.35 433 301 179; 121 271; 151 [17]
11 Флаванол Quercetin pentoside C20H18O11 434.35 433 301 178; 121 151 [18; 19]
12 Флаванол Quercitrin [Quercetin 3-L-Rhamnoside; Quercetrin] C21H20O11 448.38 447 301 271; 179 151 [17; 19]
13 Флаванол Hyperoside (Quercetin 3-0-galactoside; Hyperin) C21H20O12 464.38 465 303 257; 191 229; 173 [28; 30]
14 Флаванол Quercetin 3-0- glucoside C21H20O12 464.38 463 301; 179 271; 179; 151 151 [17; 23; 28]
Продолжение таблицы
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
15 Флаванол Myricetin-3-0-galactoside C2lH20Ol3 480.38 481 317; 291; 215 302; 139 235; 153 [17; 30]
Quercetin 3-0-(6''-0- 300; 271; 179
16 Флаванол acetyl)-galactoside [^егое- C2зH22Ol3 506.41 505 463; [28]
йП 3-(6-O-acetylhyperoside] 145
17 Флаванол Quercetin 3^13-0 (6-р-hydroxybenzoyl) galactoside C28H24Ol4 584.48 583 463; 343; 301 463; 301; 151 271; 179 [20]
18 Флаванол Rutin ^иегсейп 3-0-rutinoside) C27HзoOl6 610.52 609 343; 301; 255; 179 301 255; 179 [17; 29]
19 Флавон Apigenin [5,7-Dixydroxy-2-(40Hydroxyphenyl)-4H-Chromen-4-One] ^5^005 270.24 271 253; 199 224; 193 [24; 32; 37]
20 Флавон 6,7-Dihydroxy-4'-methoxyisoflavone ^(¡П^Оз 284.26 285 270; 242; 167 242 197; 124 [34]
21 Флавон Apigenin-7,4'-dimethyl ether ^ШОз 298.29 299 284 256; 165 255; 211 [24]
22 Флавон Diosmetin Cl6Hl2O6 300.26 301 283; 177 264.98 200.98 [34; 37]
23 Флавон Cirsimaritin ^7^406 314.29 315 300 272 243; 167 [24]
315; 179 287;
24 Флавон Nevadensin Cl8Hl607 344.32 345 330 259; 167 [24; 34]
25 Флаванон Naringenin ^ап^еЫ; Naringenine] ^5^05 272.52 273 256; 188 212; 188; 171 [17; 29]
26 Флаван-3-ол Catechin [D-Catechol] ^5^406 290.27 291 271; 233; 216; 193 255; 245; 215 [9; 19; 28]
27 Флаван-3-ол Epicatechin ^5^406 290.27 291 273 245; 148 [6; 17; 18; 19]
28 Антоцианин Delphinidin ^5^107 303.24 304 212; 289 212; 111 212; [18]
29 Антоцианин Petunidin Cl6Hlз07+ 317.27 318 256 168; 112 [18]
30 Антоцианин Cyanidin-pentoside C20Hl9Ol0 419.36 419 287 257; 241; 165 129 [26]
31 Антоцианин Delphinidin pentoside C20Hl9Ol1 435.36 303 165; 137 229 [26]
287; 185; 115
32 Антоцианин Cyanidin-3-0-glucoside C2lH2l0l1+ 449.38 287 213; 137 [17; 26]
33 Антоцианин Peonidin 3-(6-0-acetyl)glucoside C24H250l2 505.45 506 303; 205 300; 257; 187 229 [17]
34 Антоцианин Peonidin-3-O-malonylglucoside C25H250l4 549.46 547 427; 505; 255; 179 271; 179 271; 242 [27]
Продолжение таблицы
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Cyanidin-3-rutinoside [Ker- 287; 449 463; 287; 185; 141
35 Антоцианин acyanin; Antirrhinin; Sam-bucin] C27H31O15 595.53 595 213; 137 [26]
36 Антоцианин Peonidin 3-O-rutinoside C28H33O15 609.55 609 343; 301; 179 301 245.98; 178.90 [26]
37 Сложный эфир кофейной кислоты Chlorogenic acid [3-O-Caffeoylquinic acid] C16H18O9 354.31 353 191; 135 173; 127 [6; 17; 19; 28; 29]
38 Сложный эфир кофейной кислоты Neochlorogenic acid [5-O-Caffeoylquinic acid] C16H18O9 354.31 353 191 173 [19; 28; 29]
39 Сложный эфир кофейной кислоты 3-O-Caffeoylquininc acid methyl ether C17H20O9 368.34 369 207; 271; 339 207 153 [28]
40 Гидроксибензойная кислота Ellagic acid [Benzoaric acid; Elagostasine; Lagistase; Eleagic acid] C14H6O8 302.19 303 284; 181 256 240; 185 [17; 27]
41 Кумарин Fraxetin C10H8O5 208.17 209 148.96 120.96 [9; 31; 36]
42 Кумарин Esculin [Aesculin; Esculoside; Polichrome] C15H16O9 340.28 341 281; 217; 151 174.96 [9; 17; 18; 25; 31; 36]
43 Глюкозид кумарина Fraxin (Fraxetin-8-O-glucoside) C16H18O10 370.31 369 207; 354 209; 192 164; 120 [17; 31; 36]
44 Лигнан Medioresinol C21H24O7 388.41 389 245; 271 149 [22]
425; 227; 137
45 Таннин Procyanidin A-type dimer C30H24O12 576.5 577 559; 287 287 [17; 28]
46 Феноловый амин N-Caffeoylputrescine C13H18N2O3 250.29 251 135; 233 [25]
47 Эфир галловой кислоты Beta-Glucogallin [1-O-Galloyl-Beta-D-Glucose; C13H16O10 332.26 331.03 169; 150 [27]
Galloyl glucose]
Другие соединения
48 Карбоновая кислота Myristoleic acid [Cis-9-Tetradecanoic acid] C14H26O2 226.36 227 209; 117 139 [18]
49 Октадекатетраеновая кислота Stearidonic acid [6,9,12,15-Octadecatetraenoic acid; C18H28O2 276.41 277 275; 207 257 157.11 [35]
Moroctic acid]
50 Одноосновная кар-боновая кислота Stearic acid [Octadecanoic acid; Stearophanic acid] C18H36O2 284.48 285 284; 229; 163 181; 135 163.03 [35]
51 Карбоновая кислота Oxo-nonadecanoic acid C19H36O3 312.49 313 298 270; 297 181 [18]
52 Оксилипин Hydroperoxy-octadecadienoic acid isomer C18H32O4 312.32 311 183 [25]
Fucosterol [Fucostein; 395; 333.10; 233
53 Стерол Trans-24- C29H48O 412.69 413 357; [18]
Ethylidenecholesterol] 203
Avenasterol [Delta7- 395; 317; 203; 127 353;
54 Стерол Avenasterol; 7- C29H48O 412.69 413 203; [18]
Dehydroavenasterol] 127
55 Терпеновый трилактон Bilobalide [ (-)-Bilobalide] C15H18O8 326.30 325 183 183; 119 119 [33]
Окончание таблицы
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
56 Пентациклический тритерпен Alpha-Amyrin [Viminalol] C30H50O 426.72 427 408; 309; 203 389; 309 373; 229; 143 [5]
57 Пентациклический тритерпен Lupeol [Fagarasterol; Clerodol; Monogynol B; Lupenol] C30H50O 426.72 427 409; 203 389; 248 371; 265 [5]
58 Тритерпеноид Uvaol C30H50O2 442.72 443 425; 233 407; 325 389; 231 [5; 18]
439; 421
411; 395;
357; 311;
59 Тритерпеновая кислота Oleanoic acid C30H48O3 456.70 457 326; 291; 239; 221; 175 286 250 228; 201 175 [5; 24; 28]
305;
60 Фитогормон GA8-hexose gibberellin C25H34O12 526.53 527 365 275; 144 [27]
203
61 Фторциклин Eravacycline C27H31FN4O8 558.56 559 289 271; 217 [21]
На рисунках 3-5 показаны примеры расшифровки масс-спектров ионной хроматограммы, полученной с помощью тандемной масс-спектрометрии. Масс-спектр флаванола гиперозида в режиме положительных ионов, полученный из сверхкритического СО2-экстракта L. palustre, показан на рисунке 3.
[M+H]+ ион продуцирует один фрагментированный ион, m/z 302.97 (рис. 3). Фрагментированный ион (m/z 303) формирует шесть характерных дочерних ионов (m/z 285, m/z 257, m/z 229, m/z 201, m/z 165, m/z 137). Фрагментированный ион m/z 257 формирует два дочерних иона: m/z 229 и m/z 201. В нижеприведенных статьях данное соединение идентифицируется как флаванол гиперозид: Impatients glandulifera Royle [30]; pear [28].
Масс-спектр тетраметоксикверцетина в режиме положительных ионов, полученный из сверхкритического СО2-экстракта L. palustre, показан на рисунке 4.
[M+H]+ ион продуцирует один фрагментированный ион, m/z 343.98 (рис. 4). Фрагментированный ион m/z 343.98 формирует один дочерний ион: m/z 329. Фрагментированный ион m/z 329 формирует два дочерних иона: m/z 300.97 и m/z 166.96. В нижеприведенных научных статьях данное соединение идентифицируется как флаванол тетраметоксикверцетин (ретузин): Ledum decumbens [4]; Mentha spicata [21].
Масс-спектр фитогормона GA8-гексоза гиббереллина в режиме положительных ионов, полученный из сверхкритического СО2-экстракта L. palustre, показан на рисунке 5. [M+H]+ ион продуцирует один фрагментированный ион, m/z 343.98 (рис. 5). Фрагментированный ион m/z 343.98 формирует один дочерний ион: m/z 329.01. Фрагментированный ион m/z 329.01 формирует два дочерних иона: m/z 300.97 и m/z 166.96. Данное соединение идентифицируется, как тетраметоксикверцетин (ретузин): Ledum decumbens [6]; Mentha spicata [21].
htens.-x107
0.50.0 x10T
21 ■
x106 2 1
x1005 1.0 0.5 0.0
268. L.palustre (noJJ) MeOH+H2O MS4 #1_-1_01_234.d: +MS, 33.5min #1301 1+487.00 2+ 1+ 1+ 1+ 464.99 174.99 229 00 , 30l" 36906 4130^, .Î 1 545 03 631.04 716+99 818.68 950+46
268. 1 302 + L.palustre (noJJ) MeOH+H2O MS4 #1 -1 01 234.d: +MS2(464.99), 33.6min #1303 .97 ♦
268. 256 1+ 1+ 164.96 228.99 136.95 200.98 L.palustre (noJJ) MeOH+H2O MS4 #1 -1 01 234.d: +MS3(464.99->302.97), 33.7min #1307 .97 284.96 , 1 t
268. L.palustre (noJJ) MeOH+H2O MS4 #1_-1_01_234.d: +MS4(464.99->302.97->256.97), 33.8min #1311 228.99 5+ 1+ 1 161.00 200.93
400 500 600 700
800 900 m/z
0
100
200
300
Рис. 3. Масс-спектр гиперозида, полученный из сверхкритического СО2-экстракта L. palustre, m/z 464.99
Intens. x106 21 ■
хЮ6 21 ■
L.palustre (noJJ) MeOH+H2O MS4 #1_-1_01_234.d: +MS, 61.4min #2405
318.27 359.12
217+11 ГГ I i 419+06 511,
3+ 630.11
1+ 2+ 3+ 1+
753.16 802.01 844.60 909.32
„...1------L.iLi.iLi Li. . 4.. u ......J,..„......... ..i......
L.palustre (noJJ) MeOH+H2O MS4 #1_-1_01_234.d: +MS2(359.12), 61.4min #2407
L.palustre (noJJ) MeOH+H2O MS4 #1_-1_01_234.d: +MS3(359.12->343.98), 61.5min #2411
L.palustre (noJJ) MeOH+H2O MS4 #1_-1_01_234.d: +MS4(359.12->343.98->329.01), 61.6min #2415
900 m/z
Рис. 4. Масс-спектр соединения тетраметоксикверцетина, полученный из сверхкритического СО2-экстракта L. palustre, m/z 359.12
x10
x10
0
0
00
200
300
400
500
600
700
800
Intens. x108-
42
x1005 2 1
202.94 274.
142.96 274.
304.91
9-1 -
L.palustre (noJJ) MeOH MS4 #1_-1_01_155.d: +MS, 9.6min #365
1+ 1 + 526.89 85 _i_i_
L.palustre (noJJ) MeOH MS4 #1_-1_01_155.d: +MS2(526.89), 9.7min #369
L.palustre (noJJ) MeOH MS4 #1_-1_01_155.d: +MS3(526.89->364.90), 9.7min #372
L.palustre (noJJ) MeOH MS4 #1_-1_01_155.d: +MS4(526.89->364.90->304.91), 9.8 min #375
700 800
900 m/z
0.5
x
x104 1.0
0
00
200
300
400
500
600
Рис. 5. Масс-спектр фитогормона вЛ8-гексоза гиббереллина, полученный из сверхкритического СО2-экстракта L. palustre, m/z 526.89
[M+H]+ ион продуцирует один фрагментированный ион, m/z 364.90 (рис. 5). Фрагментированный ион m/z 364.90 формирует три дочерних иона: m/z 304.91, m/z 274.95, m/z 202.94. Соответственно, фрагментированный ион m/z 304.91 формирует один дочерний ион: m/z 144.08. В нижеприведенной научной статье данное соединение идентифицируется как фитогормон вЛ8-гексоза гиббереллин: Fragaria vesca [27].
Таким образом, в сверхкритических экстрактах багульника болотного было идентифицировано 61 биологически активное соединение. Из них 32 компонента были идентифицированы впервые в данном виде растения. Это флаванолы дигидрокепферол, арабинозид кверцетина, галактозид мирицетина; флаво-ны: диосметин, невадензин, цирсимаритин; флаванон нарингенин; антоцианы дельфинидин, петунидин, пентозид цианидина, пентозид дельфинидина, глюкозид пеонидина, малонилглюкозид пеонидина, рутино-зид цианидина; эллаговая кислота; лигнан медиоресинол; феноловый амин N-кофеилпутресцин, галлоил глюкоза, миристолеиновая кислота, стеаридоновая кислота, оксононадеканоевая кислота, стеролы: фуко-стерол и авенастерол, фитогормон вЛ8-гексоза гиббереллин и др.
Заключение
Багульник болотный Ledum palustre L. (Rhododendron tomentosum Harmaja) содержит большое количество эфирных масел и полифенольных комплексов, являющихся биологически активными соединениями.
Для экологически чистой экстракции целевых полифенольных комплексов и других биологически активных соединений багульника болотного Ledum palustre L. использована сверхкритическая СО2-экстракция.
Наибольший выход биологически активных веществ (8 мг/г) наблюдался при следующих условиях СКФ СО2-экстракции: давление 350 бар; температура 60 °С; экстракционное время 1 ч, сорастворитель MeOH 3.5%.
Идентификация целевых аналитов в СКФ-экстрактах выполнена с использованием тандемной масс-спектрометрии (высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) в комплексе с ионной ловушкой BRUKER DALTONIKS).
Данные масс-спектрометрии продемонстрировали в СКФ-экстрактах присутствие 61 биологически активного соединения, соответствующих виду Rhododendron, из них 32 соединения идентифицировано впервые. Это флаванолы дигидрокепферол, арабинозид кверцетина, галактозид мирицетина; флавоны: диосметин, невадензин, цирсимаритин; флаванон нарингенин; антоцианы дельфинидин, петунидин, пен-тозид цианидина, пентозид дельфинидина, глюкозид пеонидина, малонилглюкозид пеонидина, рутинозид цианидина; эллаговая кислота; лигнан медиоресинол; димер процианидина А-типа; стеролы фукостерол и авенастерол и др.
Список литературы
1. Пояркова А.И. Род Рододендрон // Флора СССР. М.; Л., 1952. Т. 18. С. 31-60.
2. Арсеньев В.К. По Уссурийскому краю (Дерсу Узала). Путешествие в горную область Сихотэ-Алинь. Владивосток, 1921. 280 с.
3. Белоусова Н.И., Хан В.А., Ткачев А.В. Химический состав эфирного масла багульников // Химия растительного сырья. 1999. №3. С. 5-38.
4. Охлопкова Ж.М., Чирикова Н.К. Исследование компонентного состава эфирного масла багульника болотного, произрастающего в Якутии // Fundamental Research. 2012. №11. С. 1334-1336.
5. Букреева Т.В., Шаварда А.Л., Матусевич О.В., Морозов М.А. Урсановые, олеанановые и лупановые тритер-пеноиды листьев Ledum palustre (Ericaceae) на Северо-западе России // Растительные ресурсы. 2013. Т. 49. №2. С. 395-403.
6. Ганина M.M., Попова О.И. Содержание фенольных соединений в побегах багульника стелющегося (Ledum decumbens Lodd. ex Steud), произрастающего на территории Ямало-Ненецкого автономного округа // Химико-фармацевтический журнал. 2015. Т. 49. №4. С. 33-35.
7. Подмаскин В.В. Народные знания ороков (уйльта) // Россия и АТР. 2011. №1(71). C. 107-113.
8. Изотов Д.В. Эфирные масла и водомасляные продукты видов рода Ledum L., произрастающих на Дальнем Востоке: дис. ... канд. биол. наук. Владивосток, 2009. 235 с.
9. Коротаева М.С. Фармакогностическое изучение четырех видов рода Ledum L.: дис. ... канд. биол. наук. Ярославль, 2006. 240 с.
10. Пляшечник М.А. Химический состав эфирного масла Ledum palustre L. (Ericaceae) при увеличении содержания доступного азота в почве криолитозоны (Центральная Эвенкия) // Химия растительного сырья. 2012. №2. C. 139-144.
11. Baldino L., Reverchon E. Challenges in the production of pharmaceutical and food related compounds by SC-CO2 processing of vegetable matter // J. Supercrit. Fluids. 2018. Vol. 134. Pp. 269-273. DOI: 10.106/j.supflu.2017.11.034.
12. Попова A.С., Ивахнов A.Д., Скребец Т.Э., Боголицын К.Г. Сверхкритическая флюидная экстракция хлоро-филлов и каротиноидов багульника болотного (Ledum palustre) // Химия растительного сырья. 2018. №1. C. 61-66. DOI: 10.14258/jcprm.2018012994.
13. Baananou S., Bagdonaite E., Marongiu B., Piras A., Porcedda S., Falconieri D., Boughattas N.A. Supercritical CO2 extract and essential oil of aerial part of Ledum palustre L. - Chemical composition and anti-inflammatory activity // Natural Product Research. 2015. Vol. 29(11). Pp. 999-1005. DOI: 10.1080/14786419.2014.965167.
14. Razgonova M.P., Zakharenko A.M., Grudev V., Ercisli S., Golokhvast K.S. Comparative analysis of the multicom-ponent composition of Far East Sikhotinsky Rhododendron (Rh. sichotense) and East Siberian Rhododendron (Rh. adamsii) using supercritical CO2-extraction and HPLC-MS/MS spectrometry // Molecules. 2020. Vol. 25(17). P. 3774. DOI: 10.3390/molecules25173774.
15. Государственная фармакопея Российской Федерации. М., 2018. Т. 1-3.
16. Abu-Reidah I. M., Ali-Shtayeh M.S., Jamous R.M., Arraes-Roman D., Segura-Carretero A. HPLC-DAD-ESI-MS/MS screening of bioactive components from Rhus coriaria L. (Sumac) fruits // Food Chem. 2015. Vol. 166. Pp. 179-191. DOI: 10.1016/j.foodchem.2014.06.011.
17. Goufo P., Singh R.K., Cortez I. A Reference List of Phenolic Compounds (Including Stilbenes) in Grapevine (Vitis vinifera L.) Roots, Woods, Canes, Stems, and Leaves // Antioxidants. 2020. Vol. 9. P. 398. DOI: 10.3390/antiox9050398.
18. Hamed A.R., El-Hawary S.S., Ibrahim R.M., Abdelmohsen U.R., El-Halawany A.M. Identification of Chemopreven-tive Components from Halophytes Belonging to Aizoaceae and Cactaceae Through LC/MS-Bioassay Guided Approach // J. Chrom. Sci. 2021. Vol. 59. Pp. 618-626. DOI: 10.1093/chromsci/bmaa112.
19. Jaiswal R., Jayasinghe L., Kuhnert, N. Identification and characterization of proanthocyanidins of 16 members of the Rhododendron genus (Ericaceae) by tandem LC-MS // J. Mass Spectrom. 2012. Vol. 47. Pp. 502-515. DOI: 10.1002/jms.2954.
20. Jin C., Strembiski W., Kulchytska Y., Micetich R.G., Daneshtalab M. Flavonoid glycosides from Ledum palustre L. subsp. decumbens (ait) Hulton // DARU J. Pharm. Sci. 1999. Vol. 7(4). Pp. 5-8.
21. Li X., Tian T. Phytochemical Characterization of Mentha spicata L. Under Differential Dried-Conditions and Associated Nephrotoxicity Screening of Main Compound With Organ-on-a-Chip // Frontiers in Pharm. 2018. Vol. 9. Article 1067. DOI: 10.3389/fphar.2018.01067.
22. Llorent-Martinez E.J., Spinola V., Gouveia S., Castilho P. HPLC-ESI-MSn characterization of phenolic compounds, terpenoid saponins, and other minor compounds in Bituminaria bituminosa // Industrial Crops and Products. 2015. Vol. 69. Pp. 80-90. DOI: 10.106/j.indcrop.2015.02.014.
23. Lommen A., Godejohann M., Venema D.P., Hollman P.C.H., Spraul M. Application of Directly Coupled HPLC-NMR-MS to the Identification and Confirmation of Quercetin Glycosides and Phloretin Glycosides in Apple Peel // Anal. Chem. 2000. Vol. 72(8). Pp. 1793-1797. DOI: 10.1021/ac9912303.
24. Pandey R., Kumar B. HPLC-QTOF-MS/MS-based rapid screening of phenolics and triterpenic acids in leaf extracts of Ocimum species and their interspecies variation // J. Liquid Chromatogr. & Related Technol. 2016. Vol. 39(4). Pp. 225-238. DOI: 10.1080/10826076.2016.1148048.
25. Rodriguez-Perez C., Gomez-Caravaca A.M., Guerra-Hernandez E., Cerretani L., Garcia-Villanova B., Verardo V. Comprehensive metabolite profiling of Solanum tuberosum L. (potato) leaves T by HPLC-ESI-QTOF-MS // Food Res. Int. 2018. Vol. 112. Pp. 390-399. DOI: 10.1016/j.foodres.2018.06.060.
26. Ruiz A., Hermosin-Gutierrez I., Vergara C., von Baer D., Zapata M., Hitschfild A., Obando L., Mardones C. Antho-cyanin profiles in south Patagonian wild berries by HPLC-DAD-ESI-MS/MS // Food Res. Int. 2013. Vol. 51(2). Pp. 706-713. DOI: 10.1016/j.foodres.2013.01.043.
27. Sun J., Liu X., Yang T., Slovin J., Chen P. Profiling polyphenols of two diploid strawberry (Fragaria vesca) inbred lines using UHPLC-HRMSn // Food Chem. 2014. Vol. 146. Pp. 289-298. DOI: 10.1016/j.foodchem.2013.2013.08.089.
28. Sun L., Tao S., Zhang S. Characterization and Quantification of Polyphenols and Triterpenoids in Thinned Young Fruits of Ten Pear Varieties by UPLC-Q TRAP-MS/MS // Molecules. 2019. Vol. 24(1). P. 159. DOI: 10. 3390/molecules24010159.
29. Vallverdu-Queralt A., Jauregui O., Medina-Remon A., Lamuela-Raventos R.M. Evaluation of a Method To Characterize the Phenolic Profile of Organic and Conventional Tomatoes // Agricult. Food Chem. 2012. Vol. 60(13). Pp. 3373-3380. DOI: 10.1021/jf204702f.
30. Viera M.N., Winterhalter P., Jerz G. Flavonoids from the flowers of Impatients glandulifera Royle isolated by high performance countercurrent chromatography // Phytochem. Anal. 2016. Vol. 27. Pp. 116-125. DOI: 10.1002/pca.2606.
31. Wang Z., Zhu W., Liu H., Wu G., Song M., Yang B., Yang D., Wang Q., Kuang H. Simultaneous Determination of Aesculin, Aesculetin, Fraxetin, Fraxin and Polydatin in Beagle Dog Plasma by UPLC-ESI-MS/MS and Its Application in a Pharmacokinetic Study after Oral Administration Extracts of Ledum palustre L. // Molecules. 2018. Vol. 23(9). P. 2285. DOI: 10.3390/molecules23092285.
32. Wojakowska A., Perkowski J., Goral T., Stobiecki M. Structural characterization of flavonoid glycosides from leaves of wheat (Triticum aestivum L.) using LC/MS/MS profiling of the target compounds // J. Mass. Spectrom. 2013. Vol. 48. Pp. 329-339. DOI: 10.1002/jms.3160.
33. Xiao J., Wang T., Li P., Liu R., Li Q., Bi K. Development of two step liquid-liquid extraction tandem UHPLC-MS/MS method for the simultaneous determination of Ginkgo flavonoids, terpene lactones and nimodipine in rat plasma: Application to the pharmacokinetic study of the combination of Ginkgo biloba dispersible tablets and Ni-modipine tablets // J. Chromatogr. B. 2016. Vol. 1028. Pp. 33-41. DOI: 10.1016/j.jchromb.2016.06.005.
34. Xu L.L., Xu J.J., Zhong K.R., Shang Z.P., Wang F., Wang R.F., Liu B. Analysis of non-volatile chemical constituents of Menthae Haplocalycis herba by ultra-high performance liquid chromatography - high resolution mass spectrometry // Molecules. 2017. Vol. 22(10). P. 1756. DOI: 10.3390/molecules22101756.
35. Yang S.T., Wu X., Rui W., Guo J., Feng Y.E. UPLC/Q-TOF-MS Analysis for Identification of Hydrophilic Phenolics and Lipophilic Diterpenoids from Radix Salviae Miltiorrhizae // Acta Chromatogr. 2015. Vol. 27(4). Pp. 711728. DOI: 10.1556/achrom.27.2015.4.9.
36. Zakharenko A.M., Razgonova M.P., Pikula K.S., Golokhvast K.S. Simultaneous Determination of 78 Compounds of Rhodiola rosea Extract by Supercritical CO2-Extraction and HPLC-ESI-MS/MS Spectrometry // Biochemistry Research International. 2021. Article 9957490. DOI: 10.1155/2021/9957490.
37. Zhang Z., Jia P., Zhang X., Zhang Q., Yang H., Shi H., Zhang L. LC-MS/MS determination and pharmacokinetic study of seven flavonoids in rat plasma after oral administration of Cirsium japonicum DC. extract // J. Ethnophar-macol. 2014. Vol. 158. Pp. 66-75. DOI: 10.1016/j.jep.2014.10.022.
Поступила в редакцию 26 апреля 2021 г.
После переработки 30 ноября 2021 г.
Принята к публикации 30 ноября 2021 г.
Для цитирования: Разгонова М.П., Захаренко А.М., Голохваст К.С. Исследование сверхкритических СО2-экстрактов багульника болотного Ledum palustre L. (Rhododendron tomentosum Harmaja) и идентификация его метаболитов методом тандемной масс-спектрометрии // Химия растительного сырья. 2022. №1. С. 179-191. DOI: 10.14258/jcprm.2022019506.
190
M.n. Pa3rohoba, A.M. 3axapehko, K.C. fohoxbact
Razgonova M.P.1-2*, Zakharenko A.M.1-2-3, Golokhvast K.S.1-2-3-4 INVESTIGATION OF SUPERCRITICAL CO2-EXTRACTS OF WILD LEDUM PALUSTRE L. (RHODODENDRON TOMENTOSUM HARMAJA) AND IDENTIFICATION OF ITS METABOLITES BY TANDEM MASS SPECTROMETRY
1 Federal Research Center All-Russian Institute of Plant Genetic Resources named after N.I. Vavilov, ul. Bolshaya Morskaya, 42, St. Petersburg, 190031 (Russia), e-mail: [email protected]
2 Far Eastern Federal University, o. Russky, Ajax, 10, Vladivostok, 690922 (Russia)
3 Siberian Federal Scientific Center for Agrobiotechnologies RAS, ul. Centralnaya, 2b, Krasnoobsk, 633501 (Russia)
4 Pacific Institute of Geography FEB RAS, ul. Radio, 7, Vladivostok, 690041 (Russia)
The purpose of this research is to investigate and identify polyphenolic complexes and other biologically active compounds by tandem mass spectrometry, presented in the leaves and stems of Ledum palustre L. Carbon dioxide, compressed to a supercritical state, was used for the most environmentally friendly extraction of polyphenolic complexes and other biologically active compounds of Ledum palustre L. The most effective extraction characteristics (pressure 350 bar; temperature 60 °C; extraction time 1-hour, co-solvent MeOH 3.5%) supercritical CO2-extraction of L. palustre were obtained empirically. To identify target analytes in supercritical extracts, High Performance Liquid Chromatography (HPLC) was used in combination with a BRUKER DALTONIKS ion trap. The results showed the presence of 61 biologically active compounds corresponding to the rhododendron species, of which 32 were identified for the first time in L. palustre. These are flavanols dihydrokaempferol, quercetin arabinoside, myricetin galactoside; flavones: diosmetin, nevadensin, cirsimaritin; flavanone naringenin; anthocyanins delphinidin, petunidin, cyanidin pentoside, delphinidin pentoside, peonidin 3-(6-O-acetyl) glucoside, peonidin-3-O-malonylglucoside, cyanidin-3-rutinoside, peonidin 3-O-glucoside; ellagic acid; lignan medioresinol; a type A procyanidin di-mer; sterols fucosterol and avenasterol, etc.
Keywords: Ledum palustre, Rhododendron tomentosum, tandem mass spectrometry, polyphenols, rhododendron.
Referenses
1. Poyarkova A.I. Flora SSSR. [Flora of the USSR]. Moscow; Leningrad, 1952, vol. 18, pp. 31-60. (in Russ.).
2. Arsen'yev V.K. Po Ussuriyskomu krayu (Dersu Uzala). Puteshestviye v gornuyu oblast'Sikhote-Alin'. [In the Ussuri region (Dersu Uzala). Journey to the mountainous region of Sikhote-Alin]. Vladivostok, 1921, 280 p. (in Russ.).
3. Belousova N.I., Khan V.A., Tkachev A.V. Khimiya rastitel'nogo syr'ya, 1999, no. 3, pp. 5-38. (in Russ.).
4. Okhlopkova Zh.M., Chirikova N.K. Fundamental Research, 2012, no. 11, pp. 1334-1336. (in Russ.).
5. Bukreyeva T.V., Shavarda A.L., Matusevich O.V., Morozov M.A. Rastitel'nyye resursy, 2013, vol. 49, no. 2, pp. 395403. (in Russ.).
6. Ganina M.M., Popova O.I. Khimiko-farmatsevticheskiy zhurnal, 2015, vol. 49, no. 4, pp. 33-35. (in Russ.).
7. Podmaskin V.V. Rossiya i ATR, 2011, no. 1(71), pp. 107-113. (in Russ.).
8. Izotov D.V. Efirnyye masla i vodomaslyanyye produkty vidov roda Ledum L., proizrastayushchikh na Dal'nem Vostoke: dis. ... kand. biol. nauk. [Essential oils and water-oil products of species of the genus Ledum L. growing in the Far East: Cand. ... cand. biol. Sciences]. Vladivostok, 2009, 235 p. (in Russ.).
9. Korotayeva M.S. Farmakognosticheskoye izucheniye chetyrekh vidov roda Ledum L.: dis. ... kand. biol. nauk. [Pharma-cognostic study of four species of the genus Ledum L.: dis. ... cand. biol. Sciences]. Yaroslavl', 2006, 240 p. (in Russ.).
10. Plyashechnik M.A. Khimiya rastitel'nogo syr'ya, 2012, no. 2, pp. 139-144. (in Russ.).
11. Baldino L., Reverchon E. J. Supercrit. Fluids, 2018, vol. 134, pp. 269-273. DOI: 10.106/j.supflu.2017.11.034.
12. Popova A.S., Ivakhnov A.D., Skrebets T.E., Bogolitsyn K.G. Khimiya rastitel'nogo syr'ya, 2018, no. 1, pp. 61-66. DOI: 10.14258/jcprm.2018012994. (in Russ.).
13. Baananou S., Bagdonaite E., Marongiu B., Piras A., Porcedda S., Falconieri D., Boughattas N.A. Natural Product Research, 2015, vol. 29(11), pp. 999-1005. DOI: 10.1080/14786419.2014.965167.
14. Razgonova M.P., Zakharenko A.M., Grudev V., Ercisli S., Golokhvast K.S. Molecules, 2020, vol. 25(17), p. 3774. DOI: 10.3390/molecules25173774.
15. Gosudarstvennaya farmakopeya Rossiyskoy Federatsii. [State Pharmacopoeia of the Russian Federation]. Moscow, 2018, vol. 1-3. (in Russ.).
16. Abu-Reidah I. M., Ali-Shtayeh M.S., Jamous R.M., Arraes-Roman D., Segura-Carretero A. Food Chem., 2015, vol. 166, pp. 179-191. DOI: 10.1016/j.foodchem.2014.06.011.
17. Goufo P., Singh R.K., Cortez I. Antioxidants, 2020, vol. 9, p. 398. DOI: 10.3390/antiox9050398.
18. Hamed A.R., El-Hawary S.S., Ibrahim R.M., Abdelmohsen U.R., El-Halawany A.M. J. Chrom. Sci., 2021, vol. 59, pp. 618-626. DOI: 10.1093/chromsci/bmaa112.
19. Jaiswal R., Jayasinghe L., Kuhnert, N. J. Mass Spectrom., 2012, vol. 47, pp. 502-515. DOI: 10.1002/jms.2954.
20. Jin C., Strembiski W., Kulchytska Y., Micetich R.G., Daneshtalab M. DARU J. Pharm. Sci, 1999, vol. 7(4), pp. 5-8.
21. Li X., Tian T. Frontiers in Pharm., 2018, vol. 9, article 1067. DOI: 10.3389/fphar.2018.01067.
22. Llorent-Martinez E.J., Spinola V., Gouveia S., Castilho P. Industrial Crops and Products, 2015, vol. 69, pp. 80-90. DOI: 10.106/j.indcrop.2015.02.014.
23. Lommen A., Godejohann M., Venema D.P., Hollman P.C.H., Spraul M. Anal. Chem., 2000, vol. 72(8), pp. 17931797. DOI: 10.1021/ac9912303.
24. Pandey R., Kumar B. J. Liquid Chromatogr. & Related Technol., 2016, vol. 39(4), pp. 225-238. DOI: 10.1080/10826076.2016.1148048.
* Corresponding author.
hcctceflobahhe cbepxkphthheckhx со2-экстрактов earyhbhhka eohothoto
191
25. Rodriguez-Perez C., Gomez-Caravaca A.M., Guerra-Hernandez E., Cerretani L., Garcia-Villanova B., Verardo V. Food Res. Int., 2018, vol. 112, pp. 390-399. DOI: 10.1016/j.foodres.2018.06.060.
26. Ruiz A., Hermosin-Gutierrez I., Vergara C., von Baer D., Zapata M., Hitschfild A., Obando L., Mardones C. Food Res. Int., 2013, vol. 51(2), pp. 706-713. DOI: 10.1016/j.foodres.2013.01.043.
27. Sun J., Liu X., Yang T., Slovin J., Chen P. Food Chem., 2014, vol. 146, pp. 289-298. DOI: 10.1016/j.foodchem.2013.2013.08.089.
28. Sun L., Tao S., Zhang S. Molecules, 2019, vol. 24(1), p. 159. DOI: 10.3390/molecules24010159.
29. Vallverdu-Queralt A., Jauregui O., Medina-Remon A., Lamuela-Raventos R.M. Agricult. Food Chem., 2012, vol. 60(13), pp. 3373-3380. DOI: 10.1021/jf204702f.
30. Viera M.N., Winterhalter P., Jerz G. Phytochem. Anal., 2016, vol. 27, pp. 116-125. DOI: 10.1002/pca.2606.
31. Wang Z., Zhu W., Liu H., Wu G., Song M., Yang B., Yang D., Wang Q., Kuang H. Molecules, 2018, vol. 23(9), p. 2285. DOI: 10.3390/molecules23092285.
32. Wojakowska A., Perkowski J., Goral T., Stobiecki M. J. Mass. Spectrom., 2013, vol. 48, pp. 329-339. DOI: 10.1002/jms.3160.
33. Xiao J., Wang T., Li P., Liu R., Li Q., Bi K. J. Chromatogr. B, 2016, vol. 1028, pp. 33-41. DOI: 10.1016/j.jchromb.2016.06.005.
34. Xu L.L., Xu J.J., Zhong K.R., Shang Z.P., Wang F., Wang R.F., Liu B. Molecules, 2017, vol. 22(10), p. 1756. DOI: 10.3 390/molecules22101756.
35. Yang S.T., Wu X., Rui W., Guo J., Feng Y.E. Acta Chromatogr., 2015, vol. 27(4), pp. 711-728. DOI: 10.1556/achrom.27.2015.4.9.
36. Zakharenko A.M., Razgonova M.P., Pikula K.S., Golokhvast K.S. Biochemistry Research International, 2021, article 9957490. DOI: 10.1155/2021/9957490.
37. Zhang Z., Jia P., Zhang X., Zhang Q., Yang H., Shi H., Zhang L. J. Ethnopharmacol., 2014, vol. 158, pp. 66-75. DOI: 10.1016/j.jep.2014.10.022.
Received April 26, 2021 Revised November 30, 2021 Accepted November 30, 2021
For citing: Razgonova M.P., Zakharenko A.M., Golokhvast K.S. Khimiya Rastitel'nogo Syr'ya, 2022, no. 1, pp. 179-191. (in Russ.). DOI: 10.14258/jcprm.2022019506.
