CC BY
84
УДК 615.322:547.918
ИССЛЕДОВАНИЕ ДАЛЬНЕВОСТОЧНОГО ЖЕНЬШЕНЯ PANAX GINSENG, ИСПОЛЬЗУЯ СВЕРХКРИТИЧЕСКУЮ СО2-ЭКСТРАКЦИЮ И ВЭЖХ, ДЛЯ ДАЛЬНЕЙШЕГО ПРИМЕНЕНИЯ В ПИЩЕВОЙ И ЛЕКАРСТВЕННОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ
М.П. Разгонова, Т.К. Каленик, А.М. Захаренко, К.С. Голохваст
RESEARCH OF THE FAR-EASTERN PANAX GINSENG C.A. MEYER USING SUPERCRITICAL CO2 -EXTRACTION AND HPLC FOR FURTHER
USE IN THE FOOD AND MEDICINE INDUSTRY
M.P. Razgonova, T. K. Kalenik, A. M. Zacharenko, K.S. Golokhvast
Аннотация. В работе впервые в России была применена сверхкритическая флюидная СО2-экстракция к экстрагированию корня дальневосточного дикорастущего женьшеня Panax Ginseng C.A. Meyer при различных температурах и давлениях. Применяя различные экстракционные условия: переменное давление, температурой и количеством модификатора было найдено, что использование модификатора в сочетании с давлением давало самый значительный эффект на количество экстрагируемых гинсенозидов. Используя сверхкритический CO2+С2H5OН как модель, было исследовано несколько экспериментальных условий в диапазоне давлений 200-400 бар, доле со-растворителя от 1,7 до 3,4%, при температуре в пределах 40-70 °C. Была проведена ВЭЖХ всех полученных экстрактов и установлено количественное содержание гинзенозидов в полученных аналитах.
Ключевые слова: углекислый газ; сверхкритическая экстракция; женьшень; ВЭЖХ; модификатор.
Abstract. For the first time in Russia, supercritical fluid C02-extraction was used to extract the root of Far East wild ginseng Panax Ginseng C.A. Meyer at various temperatures and pressures. Applying different extraction conditions: variable pressure, temperature and amount of modifier, it was found that the use of a modifier in combination with pressure produced the most significant effect on the amount of extracted ginsenosides. Using supercritical CO2 + C2H5OH as a model, several experimental conditions were studied in the pressure range 200-400 bar, the co-solvent share from 1.7 to 3.4%, at a temperature in the range of 40-70 ° C. HPLC of all extracts was performed and the quantitative content of ginsenosides in the analytes was determined.
Keywords: carbon dioxide; supercritical extraction; ginseng; HPLC; modifier.
Введение
Сверхкритическая флюидная экстракция (SFE) и сверхкритическая жидкая хроматография (SFC) стали очень активно применяться с конца 1970-х для анализа продовольствия и для определения содержания жира в пище и уровней токсикантов. Использование SCF для фракционирования (сверхкритическое жидкое фракционирование, SFF) и/или обогащение определенных компонентов в продуктах было зарегистрировано с 1980-х; экстракты, полученные с помощью сверхкритической технологии содержат, в целом, все биологически активные компоненты наряду с инертными смесями экстрагированных составов [1,2].
Химические реакции, которые оказали наибольшее влияние в продовольственной технологии, это в основном энзимно-катализированная реакция [3], гидрогенизирование, разработанное, чтобы управлять трансизомерами в липидных смесях, и гидролиз, проводимый в присутствии ферментов или среды, например, субкритической воды (SCW)
[4],[5]. Активная деятельность в разработке технологий КЕББ и РОББ (относятся к группе методов нанодиспергирования, основанных на применении сверхкритических флюидных сред) началась с конца 90-х годов [6]. В последние годы, было уделено внимание внедрению новых технологий производства функциональных продуктов питания и в различные рецептуры [7].
В начале 2000-х внимание исследователей фокусируется снова на сверхкритической экстракции (ББЕ) и сверхкритическом фракционировании (8БЕ), которые в основном были интересны в использовании получения функциональных продуктов и растительных экстрактов для персонизированной заботы о здоровье. При использовании «зеленой технологии» обработки можно не только обеспечить получение конечного продукта без использования растворителя, но также и проявить заботу по поводу уменьшения загрязнения окружающей среды [8]. Далее в разработке возобновляемого производства бионергии (биоэтанол, био-дизель) те же самые проблемы стали основными в возобновляемом производстве биоэнергии и экстракции соединений, связанных с натуральными пищевыми матрицами [9]. Если рассмотреть проблему более пристально, то понятие био-очистительного завода предлагает дилемму «еда против топлива», что часто указывается в научных публикациях.
Использование сверхкритической флюидной экстракции (ББЕ) представляет большой интерес для естественной экстракции продукта. Как процесс, сверхкритическая экстракция имеет потенциальные преимущества перед обычными процессами экстракции (Сокслет-экстракция, водно-спиртовая экстракция, выпаривание), например: меньшее время экстракции, маленький объем органического растворителя, возможность более селективной экстракции [10]. Сверхкритические флюидные (БСБ) процессы, которые используют жидкость выше критической температуры и критического давления - активная область исследования для сепарации и экстракции, особенно натуральных продуктов. Если создать условия, при которых параметры давления и температуры будут превышать параметры так называемой критической точки, то газ при этом переходит в состояние сверхкритического.
Теоретически обосновано, что извлечение ценных компонентов происходит на наноуровне. В основу данной теории положена научная концепция, поясняющая возможность образования безлигандных биокластеров диоксида углерода при газовой агрегации. Из зоны высокого давления СО2-мисцелла, через отверстие диаметром 0,1-1,0 мм, выходит в зону низкого давления, температура ее резко понижается, что ведет к образованию биокластеров из отдельных молекул.
Кинетика химического взаимодействия наночастиц имеет характер, близкий к молекулярным реакциям, в отличие от частиц с размером выше критического, для которых химическое взаимодействие контролируется диффузионным массопереносом. Химическое сродство основных компонентов, извлекаемых путем флюидной экстракции, базируется на сходности наноразмеров компонентов и растворителя.
У сверхкритической флюидной СО2-экстракции есть преимущества - это низкое термическое разрушение и безопасность для пищевых продуктов и биологически активных веществ.
Сверхкритический углекислый газ (бсС02), в частности, является привлекательным сверхкритическим растворителем из-за низких критических температур использования (3040 °С), его нетоксичности и инертности. Но у чистого С02 имеется недостаток, отражающийся на эффективности экстракции: С02 является неэффективным растворителем для материалов с более высокой полярностью [11]. Для преодоления этого недостатка могут использоваться полярные модификаторы, чтобы увеличить общую полярность из жидкой фазы во время извлечения. Кроме того, модификаторы часто увеличивают экстракцию твердых материалов, нарушая связь между растворенными веществами и твердой матрицей.
ББЕ использовался в экстракции многих натуральных продуктов, включая нимбин из семян дерева Ним [12], антиоксидантов из семян кориандра [13], /? —каротина из моркови [14] и имбирного олеорезина (терпентин) из имбиря [15].
Дальневосточный женьшень Panax ginseng C.A. Meyer является многолетним растением, используемым в течение тысячелетий в традиционной восточной медицине. Подтверждены следующие свойства женьшеня: тонизирующее, адаптогенное и возбуждающее средство [16]. Наиболее полностью исследованные активные компоненты женьшеня, известные как гинзенозиды, представляют из себя гомологический ряд тритерпеноидных сапонинов с различным профилем гликолизирования (Рисунок 1) [17].
Гинзенозиды, как сообщали, имеют разнообразное положительное лекарственное действие: противоопухолевый, химиопрофилактический, иммуномодулирующий и антидиабетический эффекты [18].
Однако из-за тепловой нестабильности некоторых гинзенозидов, выработка и качество экстрактов из дальневосточного женьшеня зависит от экстракционного метода [19]. Обычные методы экстракции для изоляции гинзенозидов из женьшеня включают Soxhlet-экстракцию, ультразвуковую экстракцию, и микроволновую экстракцию [20]. Некоторые обычные методы экстракции требуют долгого экстракционного периода и больших количеств растворителя, что может привести к тепловому разрушению целевых компонентов. Кроме того, часто требуется последующий шаг фильтрации и/или концентрации, чтобы удалить твердый остаток [21]. Сверхкритическая флюидная экстракция (SFE), использующая CO2 и полярный модификатор, показала значительные преимущества при экстракции лекарственных растений [22]. Уникальные свойства сверхкритической жидкости послужили основой их применения в экстракции термолабильных соединений из натуральных матриц растений, в частности дальневосточного женьшеня Panax Ginseng C.A. Meyer.
Материалы и методы
В качестве объекта исследования послужил дикий женьшень (Panax ginseng C.A. Meyer) был доставлен из Лазовского района Приморья. Все аналитические качественные растворители, включая ацетонитрил марки UN 1648 (PanReac AppliChem, Германия), метанол, этанол для сверхкритической С02-экстракции и хроматографирования поставлялись Дальневосточным федеральным университетом FEFU. Деионизированная
http://vestnik-nauki.ru/
ISSN 2413-9858
используемая вода сорта HPLC была подготовлена на аппарате Siemens Ultra Clear (Siemens, Германия).
Для сверхкритической СО2 экстракции использовался экстракционный аппарат сверхкритического давления Thar SFC, S.N. 3526551, США (Рисунок 2).
Для процесса хроматографирования использовался жидкостной хроматограф Shimadzu LC-20 Prominence UFLC с квадрупольным хроматомасс-спектрометром LCMS-2020, Япония.
Стандарты HPLC для гинзенозидов Rb1, Rb2, Re, Rd, Re и Rg1 были получены из Indofine Chemical Company (Somerwill, New Jersey, USA). Все химикаты были использованы при получении.
Экстрагирование Panax ginseng C.A. Meyer
CO2-экстрагирование было выполнено с помощью сверхкритической системы флюидной экстракции. Углекислый газ был сжат до желаемого давления при помощи
компрессора аппарата сверхкритической экстракции (Thar SFC, S.N. 3526551, США).
п
Рисунок 2 - Схема аппарата сверхкритической экстракции ^БЕ): (А) баллон С02; (В & М) фильтры; (С) насос помпы; (Б, Ь & I) запорные клапаны; (Е & I) задвижки; (Б) насос дозатора; (О) емкость модификатора с действующим фильтром; (Н) охладитель/калькулятор;
(К) смешивание; (К) блок измерения; (0) ограничитель
Емкость экстрагирования была нагрета с помощью горячего кожуха, температура контролировалась термостатом (±1 °С). Давление контролировалось дозирующим клапаном. Измельченные корни женьшеня (9,5 г) были загружены в однолитровый экстрактор и экстрагированы сверхкритическим флюидным СО2 в скорости потока жидкости 250г/минута. Шесть SFE-экстрактов были получены при различных условиях давления углекислого газа (200, 300 и 400 бар) и температурах (31-70 °С). Модификатором в минимальных дозах был выбран этанол. Экстракты были собраны в сепараторе, приложенном к дозирующему клапану, и держались в циркуляционной ванне при 0 °С. В данном исследовании была изучена сверхкритическая экстракция углекислым газом женьшеня, полученный экстракт, который может быть использован в качестве пищевой, лечебной добавки или для контроля веса. Давление и температура углекислого газа сверхкритической флюидной экстракции
(С)
было оптимизировано, чтобы достигнуть максимального выхода продукта при экстрагировании.
Хроматографирование экстрактов
Разделение образцов было выполнено высокоэффективной жидкостной хроматографией HPLC на колонке Shodex 0DP-40 4E (250mm*4.6mm, particle size 4, число теоретических тарелок >17.000, Shodex, Япония) при комнатной температуре с двойной мобильной фазой, состоящей из ацетонитрила (растворитель A) и воды (растворитель B) при скорости потока 1.0mL/min. Программа элюции градиента была следующей: 0,01-4 мин, 100%A; 4-60 мин, 100-25% A; 60-75 мин, 25-0% A; контрольная промывка 75-120 мин 0% А. Весь анализ HPLC был сделан с DAD-детектором на уровне 230 нм и 330 нм.
Содержание гинсенозидов в сверхкритических СО2 экстрактах было проанализировано с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии ВЭЖХ (Рис. 3).
Для анализа соединений использовался жидкостный обратнофазный хроматограф Shimadzu LC-20 Prominence UFLC с квадрупольным хроматомасс-спектрометром LCMS-2020 (Япония), оборудованный ультрафиолетовым датчиком и колонкой обратной фазы Shodex 0DP-40 4E (250mm*4.6mm, particle size 4, число теоретических тарелок >17.000, Shodex, Япония), контроль был на уровне 230 нм и 330 нм. Объем инъекции был 20 ^L, температура термостата была 17C, и скорость потока жидкости составляла 0.4 мл/минуты.
Образец был проанализирован изократической растворяющей системой, мобильная фаза которой составляла в процентном соотношении 25:75 водного и органического растворителя.
Органический растворитель состоял из ацетонитрила марки UN 1648 (PanReac AppliChem, Германия). Ниже, на Рисунке 4 приведены хроматограммы нескольких успешных повторов опыта хроматографирования сверхкритического экстракта Panax Ginseng C.A. Meyer, представленные в одной системе координат. Было выделено 43 хроматографических пика, соответствующих соединениям гинзенозидов в женьшене.
Тем самым доказана экспериментальная возможность получения наиболее чистых термолабильных биологически активных веществ из природных матриц, используя революционную «зеленую» сверхкритическую СО2-экстракцию.
Результаты и обсуждение
Экстракция корня дальневосточного женьшеня, использующая чистый C02, привела к незначительным количествам экстрагируемых материалов (данные, не показанные). Этот результат последовательно отражен в описываемой научной литературе: продемонстрирована незначительная растворимость для компонентов женьшеня в сверхкритическом чистом C02 [23].
Рисунок 3 - Хроматограммы с указанием идентифицированных гинсенозидов Panax ginseng C.A.Meyer (1-опыт №185; 2-опыт №189). Программа элюции градиента: 0,01-4 мин, 100% A; 4-60 мин, 100-25% A; 60-75 мин, 25-0% A; контрольная промывка 75-120 мин 0% А
Хроматографический анализ HPLC экстракции (Рис.3) указал на присутствие шести общих гинзенозидов Rb1, Rb2, Rc, Rd, Re, Rg1 (Рис.1). В дополнение к этим общим гинзенозидам, четыре кислотных гинзенозида, которые называют «дынные» гинсенозиды, также представлены в значительных количествах в женьшене. Однако эти гинсенозиды термолабильны. Отсутствие значительных количеств «дынных» гинсенозидов после экстракции согласуется с работой [17], в которой упоминалось, что метанол-экстракции в течение 20 ч Soxhlet достаточно, чтобы за счет температуры преобразовать «дынные» гинзенозиды в нейтральные гинсенозиды.
http://vestnik-nauki.ru/
uV
AcN %
-1 0000-
-20000-
^0000-
•40000-
min
Рисунок 4 - Хроматограмма СО2-экстракта Panax Ginseng C.A. Meyer (43 хроматографических пика). Выход аналитов по максимумам пиков хроматограммы
Пики Яе и Rgi не были полностью достигнуты на используемой системе, однако, Rgi, как известно, является младшим основным родственником Re в корне женьшеня, таким образом, пик Re/Rg1, прежде всего, производил гинсенозид Re.
Большое изменение в сумме обнаруженного Rb2, скорее всего, должно соотнести к небольшому количеству этого гинзенозида, присутствующего в экстракте, что приводило к относительным ошибкам в результатах высокоэффективной жидкостной хроматографии HPLC.
Как было ранее сообщено в научной литературе, сверхкритическая экстракция с модификатором может иметь сильное воздействие на количество экстракта, позволяя сверхкритической жидкости экстрагировать матрицу [11]. Было проведено множество экспериментов с переменным давлением, температурой и количеством модификатора. В результате было доказано, что использование модификатора в сочетании с давлением и
перебором температур давало наибольший эффект на количество экстрагируемых гинсенозидов. Ниже представлен график в ортогональной проекции, представляющий результаты экстракции при давлении 200 бар и доле модификатора ЕЮН 1,7% - 3,4% (Рис.5).
1,70%
Рисунок 5 - Ортогональная проекция, представляющая зависимость количественного выхода гинзенозидов от температуры и доли модификатора.
В результате использования большего объема модификатора температура экстракционной системы была повышена до гарантированного единственного сверхкритического операционного состояния (Таблица 1). Увеличение концентрации модификатора может оказать большое влияние на сумму экстракционного выхода и требуемую температуру для эффективной сверхкритической экстракции.
Чем выше рабочие температуры, тем более они понижают плотность жидкости, условия более высокого давления были также изучены, чтобы повысить плотность жидкости (и последующую силу сольватации) и определить, как это влияло на экстракцию гинзенозидов. Температура в 60 °С фактически прекращала улучшение кинетики экстракции.
Таблица 1 - Количественный выход шести гинзенозидов при сверхкритической СО2-
экстракции в зависимости от экстракционного давления
№ Rb1 (мг/г) Rb2 (мг/г) Rс (мг/г) Rd (мг/г) Re/Rg1 (мг/г) Общий выход гинзенозидов (мг/г) Температура при экстракционном давлении 200 бар
1 34,3 1,35 4,78 7,64 17,4 65,47 31
2 35,3 1,01 6,12 5,88 19,1 67,41 40
3 36,1 1,14 4,69 6,18 18,5 66,61 45
4 36,4 0,78 5,03 7,38 18,2 67,79 50
5 37,4 1,25 4,57 7,04 18,4 68,66 55
6 18,6 0,35 2,32 5,12 14,5 40,89 60
7 18,9 0,89 2,27 4,94 13,2 40,2 70
Интересен факт, что после SFE при изученных условиях сумма найденных «дынных гинзенозидов» была незначительной, в то время как количество ацетилированных гинсенозидов было найдено гораздо выше. В этом отношении [24] было найдено, что диметилсульфоксид способствует обеспечению тепловой стойкости ацетилированных гинсенозидов при используемых рабочих температурах (>45 °С).
Это может быть связано с благоприятным кислотно-щелочным взаимодействием между углекислым газом и ацетильными группами гинзенозидов и в случае диметилсульфоксида, взаимодействие между диметилсульфоксидом и ацетилированными гинсенозидами далее укрепляет эту стабильность.
Заключение
Хотя в существующей литературе моноацетилированные гинсенозиды обычно определяются как незначительные элементы, в этой работе указывается, что моноацетилированный Rb1, вероятно, составляющий большую часть общего количества содержания гинзенозидов, преобразуется в Rb1 во время большей части нормальных процессов экстракции. Смесь гинзенозидов, полученная сверхкритической экстракцией, особенно при использовании CO2 + EtOH (в виде модификатора), может иметь более высокую биологическую активность, чем обычные экстракции. Также требуется более детально изучить эффективность экстракционного выхода в зависимости от перебора давлений сверхкритического экстрактора. Эта возможность будет проверена в будущей экспериментальной работе.
ЛИТЕРАТУРА
1. King J.W. Supercritical fluid processing of nutritionally functional lipids. In Healthful Lipids, ed. CCAkoh, O-MLai, pp. 99-126. Champaign, IL: AOCS Press, 2005.
2. Brunner G. Applications of supercritical fluids. Annu. Rev. Chem. Biomol. Eng. 2010. No1. P.321-42.
3. Baig M.N., Santos R.C.D., Zetzl C., King J., Pioch D., Bowra S. Evaluation and modeling the utility of SC-CO2 to support efficient lipase mediated esterification. Enzyme Microb. Technol. 2011. No 49. P. 420-26.
4. Turner C., Jacobson G., Almgren K., Waldeback M., Sjoberg P.J.R., et al. Subcritical water extraction and P-glucosidase-catalyzed hydrolysis of quercetin glycosides in onion waste. Green Chem. 2006. No 8. P. 949-959.
5. Sereewatthanawut I., Prapintip S., Watchiraruji K., Goto M., Sasaki M., Shotipruk A. Extraction of protein and amino acids from deoiled rice bran by subcritical water hydrolysis.
Bioresour. Technol, 2008. No 99. P. 555-561.
6. York P., Kompella U.B., Shekunov B. Y. Supercritical fluid technology for drug product development. Drugs and the Pharmaceutical Sciences. Marcel Dekker, Inc. 2004. Vol. 138
7. Weidner E. High-pressure micronization for food applications. J. Supercrit. Fluids. 2009. No 47. P. 556-565.
8. Clark J.H. Introduction to green chemistry. In Alternatives to Conventional Food Processing, ed. A Proctor. pp. 1-10. Cambridge, UK: RSC, 2011.
9. Pandey A., Larroche C., Ricke S.C., Dussap C.-G., Gnansounou E. Biofuels - Alternative Feedstocks and Conversion Processes. Amsterdam: Elsevier. 2011. 629 p.
10. Taylor L.T. Supercritical Fluid Extraction. Toronto: John Wiley & Sons, Inc., 1996, 181
p.
11. Lang Q., Wai C.M., Supercritical fluid extraction in herbal and natural product studies - a practical review. Talanta. 2001. No 53. P. 771-782.
12. Tonthubthimthong P., Douglas P.L., Douglas S., Luewisutthichat W., Teppaitoon W., Pengsopa L. Extraction of nimbin from neem seeds using supercritical CO2 and a supercritical CO2 + methanol mixture. J. Supercrit. Fluids. 2004. No 30. P. 287-301.
13. Yepez B., Espinosa M., Lopez S., Bolanos G. Producing antioxidant fractions from herbaceous matrices by supercritical fluid extraction. Fluid Phase Equilib. 2002. No 194. P. 879884.
14. Subra P., Castellani S., Jestin P., Aoufi A., Extraction of jS-carotene with supercritical fluids: experiments and modelling. J. Supercrit. Fluids. 1998. No 12. P. 261-269.
15. Zancan K.C., Marques M.O.M., Petenate A.J., Meireles M.A.A., Extraction of ginger (Zingiber officinale Roscoe) oleoresin with CO2 and co-solvents: a study of antioxidant action of extracts. J. Supercrit. Fluids. 2002. No 24. P. 57-76.
16. Kitts D.D., Hu C. Efficacy and safety of ginseng. Public Health Nutr. 2000. No 3. P. 473485.
17. Court W.A., Hendel J.G., Elmi J., Reversed-phase high performance liquid chromatographic determination of ginsenosides of Panax quinquefolium. J. Chromatogr. A. 1996. No 755. P. 11-17.
18. Ren G., Chen F., Degradation of ginsenosides in American ginseng (Panax quinquefolium) extracts during microwave and conventional heating. J. Agric. Food Chem. 1999. No 47. P. 1501-1505.
19. Wood J.A., Bernards M.A, Wankei W., Charpentier P.A. Extraction of ginsenosides from North American ginseng using modified supercritical carbon dioxide. J. of Supercritical Fluids. 2006. No 39. P. 40-47.
20. Kwon J.H., Belanger J.M., Pare J., Yaylayan V.A., Application of the microwave-assisted process (MAPTM) to the fast extraction of ginseng saponins. Food Research International. 2003. No 36. P. 491-498.
21. Wang L., Weller C.L. Recent advances in extraction of nutraceuticals from plants. Trends in Food Science & Technology. 2006. No 17. P. 300-312.
22. Reverchon E., De Marco I., Supercritical fluid extraction and fractionation of natural matter. The Journal of Supercritical Fluids. 2006. No 38. P. 146-166.
23. Wang H., Chen C., Chang C.J. Carbon dioxide extraction of ginseng root hair oil and ginsenosides. Food Chem. 2001. No 72. P. 505-509.
24. Gebhardt S., Bihler S., Schubert-Zsilavecz M., Riva S., Monti D., Falcone L., Danieli B., Biocatalytic generation of molecular diversity: modification of ginsenoside Rbi by ft-1,4-galactosyltransferase and Candida antarctica Lipase. Helv. Chim. Acta. 2002. No 85. P. 19431959.
ИНФОРМАЦИЯ ОБ АВТОРАХ.
Разгонова Майя Петровна Дальневосточный федеральный университет, г. Владивосток, Россия, НОЦ «Нанотехнологии», Инженерная школа, аспирант школы Биомедицины, мнс НОЦ «Нанотехнологии»
E-mail: Razgonova.mp@dvfu.ru
Razgonova Mayya Petrovna Far-Eastern Federal University, Vladivostok, Russia, SEC Nanotechnology, Engineering school, graduate student of Biomedical School, researcher of SEC Nanotechnology E-mail: Razgonova.mp@dvfu.ru
Каленик Татьяна Кузьминична Дальневосточный федеральный университет, г. Владивосток, Россия, Школа биомедицины, профессор Департамента пищевых наук и биотехнологий, доктор биологических наук, профессор, заслуженный деятель Высшей школы E-mail: Kalenik.tk@dvfu.ru
Kalenik Tatyana Kuzminichna Far-Eastern Federal University, Vladivostok, Russia, Biomedical School, DSc, Professor of Department Biomedical School E-mail: Kalenik.tk@dvfu.ru
Захаренко Александр Михайлович Дальневосточный федеральный университет, Владивосток, Россия, НОЦ «Нанотехнологии», Инженерная школа, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник НОЦ Нанотехнологии E-mail: zakharenko.am@dvfu.ru
Zakharenko Alexandr Mikhaylovich Far -Eastern Federal University, Vladivostok, Russian Federation, Nanotechnology Research and Education Center, Engineering School, PhD, Senior Researcher SEC Nanotechnology E-mail: Zakharenko.am@dvfu.ru
Голохваст Кирилл Сергеевич Дальневосточный федеральный университет, г. Владивосток, Россия, НОЦ «Нанотехнологии», Инженерная школа, доктор биологических наук, профессор, научный руководитель НОЦ Нанотехнологии, проректор по науке и инновациям Дальневосточного Федерального университета.
E-mail: Golokhvast.ks@dvfu.ru
Golokhvast Kirill Sergeevich Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russia, Nanotechnology Research and Education Center, Engineering School, Vice President for Research, Professor, Scientific Adviser SEC in Nanotechnology, MD, PhD, DSc, ERT E-mail: Golokhvast.ks@dvfu.ru
Корреспондентский почтовый адрес и телефон для контактов с авторами статьи: 690950, Владивосток, Российская Федерация, ул. Суханова, 8, Дальневосточный Федеральный университет, Школа Биомедицины, Разгонова М.П., 8-914-976-0275
