CC BY
25
Антистрессорная защита клеточными медиаторами у пациентов с высоким операционно-анестезиоло-гическим риском снижает синтез стрессовых гормонов, повышает продукцию противовоспалительных цитокинов.
С целью практической оценки тяжести состояния больных и контроля эффективности терапии СЭИ при осложненных формах эхинококкоза нами разработан алгоритм диагностики и лечения синдрома эндогенной интоксикации. Он внедрен в практику работы ОАРИТ ННМЦ.
Использование клеточных медиаторов у пациентов с высоким риском операции и анестезии оказывает положительное влияние на развитие эндокринных, метаболических, иммунновоспалитель-ных реакций в ответ на хирургический стресс, что уменьшает степень тяжести состояния и органных дисфункций, послеоперационные осложнения, летальность и срок госпитализации (Жетимкаринова А.Д., 2008).
Таким образом, применение ФКМ у больных с высоким риском хирургического вмешательства снижает тяжесть состояния по шкале АРАСНЕ- II в 1,3 раза, степень нарушений органных дисфункции по шкале SOFA в 1,5 раза и сокращает сроки пребывания в ОАРИТ и в стационаре соответственно на 0,9 и 4 койко-дня [10,11]. Показаниями к применению фетальных клеточных медиаторов являются: 1. Признаки СПОН с оценкой по шкале APACHE II 15-60 баллов, по шкале SAPS 20-48 балла [12]; 2. Признаки сепсиса в форме септицемии, септикопиемии, септического шока; 3. Клиника тяжелого, тор-пидного к традиционному лечению, синдрома ДВС; 4. Клиника синдрома эндогенной интоксикации; 5. Хирургические пациенты с высоким операционно-анестезиологическим риском.
1.
2.
3.
4.
5.
7.
Литература
Приказ № 687 от 24 июля 2001 г. «О показаниях и правилах проведения прерывания беременности в Республике Казахстан».
Доскалиев Ж.А., Байгенжин А.К., Асабаев А.Ш. и др. Медиаторы фетальных тканей: новые возможности «метаболической реанимации» синдрома полиорганной недостаточности у хирургических больных //В материалах международной конференции «Биотехнология и медицина».- Москва, март, 2006г.- С. 139.
Букеева Ж.К. Влияние «медиаторных веществ» фетальных клеток на течение острого и хронического гепатита у крыс (экспериментальное исследование): Дис. ... канд. мед. наук.- 2007. Стикеева Р.А. Фармакодинамика «медиаторов» фетальных клеток и патогенетическое обоснование их применения в терапии экспериментальных гепатитов (экспериментальное исследование): Дис. ... док. мед. наук.- 2009.
Акполатова ГМ. Влияние «медиаторных веществ» фетальных клеток на изменение адаптивных реакций организма при стрессе, вызванном иммобилизацией и гипоксией (экспериментальное исследование): Дис. . канд. мед. наук.- 2008.
8.
9.
10.
6. Жетимкаринова А.Д. Антистрессорная защита клеточными медиаторами при высоком опе-
рационно-анестезиологическом риске (экспериментально - клиническое исследование): Дис. ... док.мед. наук -2008._
Кушенова С.Ж., ЖетимкариноваА.Д., Б.К. Конакбай. Клинический опыт применения клеточных медиаторов в интенсивной терапии хирургического сепсиса // Астана медициналык журналы - 2007 - №5 - С.56.
Конакбай Б.К. Роль клеточных медиаторов в комплексном лечении синдрома эндогенной интоксикации у больных с осложненными формами эхинококкоза (клиническое исследование): Дис. ... канд.мед. наук - 2007.
Кушенова С.Ж. Клеточные медиаторы в комплексной интенсивной терапии послеоперационного синдрома ДВС (клиническое исследование): Дис. ... канд.мед. наук - 2007. Knaus WA et al. APACHE II : A severity of disease classification system. Crit Care Med. 1985;13:818-29.
11. Vincent JL et al. The SOFA (Sepsis-related Organ Failure Assessment) score to describe organ dysfunction / failure. Intensive Care Med. 1996;22:707-710
12. Le Gall J.-R., Loirat Ph., Alperoviytch A. et al. A simplified acute physiology score for ICU patients //Crit. Care Med.- 1984.- Vol. 12.- P. 975-977.
УДК 616-089.843
ИССЛЕДОВАНИЕ СУПЕРНАТАНТА ФЕТАЛЬНЫХ ГЕПАТОЦИТОВ
Амирова А.К.
Национальный научный медицинский центр, Астана, Казахстан
В лаборатории Центра клеточных технологий и трансплантологии (ЦКТиТ) АО «Национальный научный медицинский центр» (ННМЦ) осуществляется выделение и культивирование фетальных клеток, а также получение супернатанта фетальных гепатоцитов (СФГ), именуемых «клеточными
медиаторами» (КМ) [1].
Наличие биологически активных веществ в СФГ доказано экспериментально и клинически. В научном труде Жетимкариновой А.Д. имеются данные биохимического, гормонального состава КМ, выявлены альфа-фетопротеин, фактор роста фибробластов, цитокины (интерлейкины ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-10) [2,3].
Для исследования состава и изучения физико-химических параметров образцов СФГ применяли современные инструментальные и классические методы анализа. Методом микробиологического контроля образцы СФГ подвергаются обязательному анализу на стерильность в бактериологической лаборатории АО «ННМЦ». В клинико-диагностической лаборатории (КДЛ) АО «ННМЦ» образцы тестируются на выявление возбудителей вирусных, бактериальных, протозойных инфекций методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР) [2].
Впервые изучен спектр СФГ в ультрафиолетовой и видимой области. Методом абсорбционной спектрофотометрии с помощью спектрофотометра «Varian» Cary 50 UV в режиме сканирования определены максимумы и минимумы поглощения. В видимой области спектра наблюдали полосы поглощения с максимумами при 575 нм, 545-540 нм, 415 нм. Между максимумами 575 нм и 545-540 нм имеется минимум при 560 нм. В УФ области наблюдали полосы поглощения: при 340-345 нм и 260-265 нм, наиболее максимальное поглощение при 200-220 нм [5,6]. Качественное определение свободных аминокислот провели методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинках «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ». В СФГ определены свободные аминокислоты, представленные незаменимыми алифатическими - валин, незаменимыми ароматическими - фенилаланин, полузаменимыми - гистидин и заменимыми - глицин, глютамин [7].
В изучении количества белковых фракций и их молекулярной массы был применен гель-электрофорез в денатурирующих условиях по методу Лэммли. С помощью полиакриламидного гель-электрофореза в лаборатории РГП «РКМ» КМ МОН РК (Хасенов Б., Кожахметов С.) определили более 12 белковых фракций с диапазоном молекулярных масс от 6500 до 205000 Да [8].
Цель: Определить относительную плотность и рН супернатанта фетальных гепатоцитов.
Материалы и методы. Материал исследования - супернатант фетальной ткани печени, полученный из фетального материала 18-21 недель гестации. Образцы СФГ хранятся в вакутейнерах в условиях криоконсервации.
Для определения относительной плотности в работе использовали пикнометр на 5мл, воронку, термостат, фильтровальная бумага, весы аналитические, таймер, воду очищенную. Расчет относительной плотности (г/см3) проводили по формуле [9].
Определение величины рН проводили на рН-метре (милливольтметре портативном) МАРК-901 ВР24.00.000РЭ (Россия, ООО «ВЗОР»), использовали электрод комбинированный стеклянный ЭСК-10601 [10].
Статистическая обработка результатов проводилась в соответствии с требованиями Государственной Фармакопеи с помощью программы EXCEL-2007. Расчет граничных значений доверительного интервала проводили по Стьюденту при доверительной вероятности 95% [11].
Результаты и обсуждения. В виду малого объема образцов СФГ определение относительной плотности образцов СФГ было проведено по методу 1, с точностью до 10 -3 [9]. Исследовано 16 образцов СФГ Среднее значение полученных результатов и их статистическая обработка представлены в таблице 1.
Таблица 1. Метрологические характеристики среднего результата относительной плотности образцов СФГ
n f X S2 S S x Р,% t(P,f) Дх Дх
6 3 4 6 8 4
5 4 4 3 3 8
8 0 5 6 9 4 5
16 15 en 0 о 0 CD 0 о 95 2,13 со со 0 со 0,
,0 ,0 ,0 ,0 ,01 ,0
0, 0, 0, 0, 0,
Для определения рН исследовано 16 образцов СФГ Среднее значение полученных результатов и их статистическая обработка представлены в таблице 2.
Таблица 2. Метрологические характеристики среднего результата рН образцов СФГ.
_ _ _
n f X S2 S S х R% t(P,f) Дх Дх
16 15 6,34 0,00092 0,0303 0,0075 95 2,13 0,0645 0,0161 0,25
Диаграмма рН образцов супернатанта фетальных гепатоцитов
02-----------------
СЛ-----------------
е> \----------------
1 2 Э 4 s Л -7 4 t lrt n 1г 1Э 14 15
OfipAMJbd с^ПйрЧА^НТЭф еталкны К1РП^7Н(НТ1>И
В результате проведенной работы установленны рН и относительная плотность супернатанта фетальных гепатоцитов. Данные показатели дополняют ранее установленные физические и физико-химические характеристики клеточных медиаторов.
Литература:
1. Инновационный патент «Способ получения медиаторов фетальных изолированных гепатоцитов человека» № 19900. Зарегистрировано в Государственном реестре изобретений РК 28.05.2008г. |Жетимкаринова А.Д., Конакбай Б.К., Каюпов Б.А., Сапарбаев С.С.
2. Жетимкаринова А.Д] «Антистрессорная защита клеточными медиаторами при высоком опе-рационно-анестезиологическом риске». Автореферат д.м.н., 17.04.2008г, г. Астана, КазГМА - 2008г. С.40
3. Каюпов Б.А. Влияние модифицированных питательных сред на культивирование фетальных клеток человека на примере нефроцитов.//«Астана Медицинальщ Журналы»-2008, №1. С.149-151.
4. Амирова А.К., Муталляпова Г.З., Каюпов Б.А., Сапарбаев С.С. «Использование метода ПЦР в тестировании клеточных медиаторов» сборник III международной конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологии и медицины», Ростов-на-Дону-2009г., с.-37-38
5. Амирова А.К., Доскалиев Ж.А., Каюпов Б.А., Сапарбаев С.С. Анализ супернатанта спек-трофотометрическим методом в УФ - и видимой области спектра// «Астана Медициналык Журналы» №4-2008. С. 87-88.
6. Амирова А.К. Исследование супернатанта фетальной ткани печени методом абсорбционной спектрофотометрии. Материалы 1 Международной научно-практической конференции «Достижения, инновационные направления, перспективы развития и проблемы современной медицинской науки, генетики и биотехнологии» г. Екатеринбург, 31 март-2011г. С. 39-40
7. Амирова А.К. Арыстанова Т. А. Тонкослойная хроматография в определении свободных аминокислот в супернатанте фетальных гепатоцитов//Материалы Международной научно-практической конференции «Фармация Казахстана: интеграция науки, образования и производства». Шымкент-2009г.с. 78-79.
8. Амирова А.К., Аскаров М.Б., Сапарбаев С.С., Сембаев К.Д. «Применение полиакриламид-ного гель-электрофореза в исследовании супернатанта фетальных гепатоцитов»// «Вестник
Медицинского центра управления делами Президента РК». №2-2011. С. 73-75.
9. Относительная плотность. Государственная Фармакопея Республики Казахстан. Т.-1.-Алматы-2008. С.44-46
10. Потенциометрическое определение рН. Государственная фармакопея Республики Казахстан. Т.-1 .-Алматы-2008. С.41-43.
11. Государственная Фармакопея Х1-издание. М.: Медицина-1987,- вып.1. С.336
УДК 616.8-089
КЛЕТОЧНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ ПРИ ЛЕЧЕНИИ БОЛЬНЫХ С ПОВРЕЖДЕНИЕМ ПЕРИФЕРИЧЕСКИХ
НЕРВНЫХ СТВОЛОВ
Калиев Е.Н.
Национальный научный медицинский центр, Астана, Казахстан
Введение. В структуре неврологической заболеваемости болезни периферической нервной системы составляют 48-52% [1]. Использование даже самых современных микрохирургических методов лечения не всегда приводят к полному восстановлению целостности нервных стволов и нормализации их функции. Несмотря на усовершенствование методов нейропластики, микрохирургических способов нейрорафии, результаты лечения поврежденных периферических нервов остаются не достаточно эффективными и не удовлетворяют клиницистов [2].
Целью исследования был анализ результатов применения клеточных технологий у больных с повреждением периферических нервных стволов.
Материал и методы. Больные были распределены на две группы. В первую основную группу включены 25 больных, которым наряду с традиционной терапией проводилась транспланация ней-роцитов. Вторую контрольную группу составили 11 больных, которым проводилась традиционная терапия - микрохирургическая операция - экзо-эндоневролиза или шва нерва, общепринятая патогенетическая и реабилитационная терапия. 11 больных были с плексопатиями (Дюшен Эрба и Дежерина Клюмпке), 25 - с поражениями лучевого, срединного, локтевого нервов и их сочетаниями.
Нейротрансплантация фетальных нейроцитов больным с повреждением периферических нервных стволов проводилась однократно при проведении микрохирургической операции - экзо -эндоневролиза, наложении шва нервов путем эндоневрального введения взвеси фетальных клеток (патенты РК № 48181, № 48192) [3].
Больные обследовались при поступлении, через 6 и 12 месяцев после операции - у 18 больных основной и 12 больных контрольной группы. При клиническом исследовании оценивалась мышечная сила, двигательные, чувствительные, вегетативные нарушения и выраженность болевого синдрома.
Результаты и их обсуждение. Все больные удовлетворительно перенесли нейротрансплан-тацию. Ни у одного больного не было каких-либо осложнений, ухудшающих соматическое состояние или нарастание неврологической симптоматики за весь период наблюдения.
Клинических исследований показали, что результаты у больных в основной группы были значительно лучше, чем у пострадавших контрольной группы. Так, средняя сила мышц до лечения у больных основной группы составила 2,4 +- 0,3 балла, через 6 месяцев - 3,43 +- 0,7 и через 12 месяцев - 4,09 +- 0,6 балла. В то время как, средняя сила мышц у пострадавших контрольной группы составляла 2,3 +- 0,5, через 6 месяцев - 2,8 +- 0,6 и через 12 месяцев - 2,5 +- 0,4 балла.
Если нарастание средней силы мышц у больных основной группы через 6 и 12 месяцев по сравнению с данными до лечения является значимым (р < 0,001), то у контрольной группы больных различие в средней силе мышц через 6 и 12 месяцев по сравнению с данными при поступлении являются несущественными (р > 0,05).
Кроме того, отмечено достоверное увеличение средней силы мышц у больных основной группы, по сравнению с контрольной через 6 (р < 0,01) и 12 (р < 0,001) месяцев.
Частичное восстановление функции конечности позволило значительно уменьшить количество больных с тяжелой степенью к 12 месяцу наблюдения в основной группе на 7 больных, а в контрольной только на одного, хотя р > 0,05. Чувствительные нарушения через 12 месяцев регрессировали у 7 больных основной и 4 больных контрольной группы (г = 0,34 р < 0,05). Вегетативные нарушения через 12 месяцев купированы у 5 больных основной и двух - контрольной группы (р > 0,05). Болевой синдром через 12 месяцев был купирован у 7 больных основной и одного больного контрольной группы (г = 0,61 р < 0,05). Умеренно выраженный болевой синдром наблюдался у 4 больных основной и двух пострадавших контрольной группы. У 5 больных контрольной группы сохранялся болевой синдром через 12 месяцев после операции, в то время как в основной группе таких больных не было.
Аналогичные результаты были получены при фетальной нейротрансплантации и другими авторами [4].
Таким образом, проведенные исследования показали, что использование клеточных технологий позволило улучшить результаты лечения больных с повреждением периферических нервных стволов
