CC BY
16
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНА
Р. К. Стикеева
ВЛИЯНИЕ «МЕДИАТОРОВ» ФЕТАЛЬНЫХ КЛЕТОК НА ПОКАЗАТЕЛИ ОБМЕНА ВЕЩЕСТВ
Кафедра общей и клинической фармакологии КазГМА (Астана)
Гибель метаболически активных гепато-цитов приводит к уменьшению функционирующей паренхимы печени, что характеризуется прогрессирующим нарушением показателей обмена веществ при заболеваниях печени, сопровождающихся печеночной недостаточностью [2, 3].
При получении взвеси фетальных гепа-тоцитов в качестве надосадочной жидкости выделяют cупернатант, содержащий в себе бел-ково-пептидный комплекс («медиаторы»). «Медиаторы» фетальных клеток человека для проведения экспериментов на животных получали по разработанной в Национальном научно-медицинском центре РК методике. Метод основан на щадящей механической диссоциации и общепринятой методике дифференцированного центрифугирования фрагментов фетальной печени плода человека, полученного после индуцированного выкидыша при прерывании беременности по медицинским и социальным показаниям в срок гестации от 16 до 22 нед. (Приказ Министерства здравоохранения РК №685 от 23.05.2002 г.).
«Медиаторы» представляют собой бесклеточную фракцию фетальных гепатоцитов и содержат гормоны, альфа-фетопротеин, факторы роста, пептиды, цитокины, иммуноглобулины, электролиты и др. (состав определен в клинико-диагностической лаборатории ННМЦ, данные от 27.04.04 г.). В эксперименте изучено влияние «медиаторов» на показатели цитолиза, холестаза, иммунитета и воспаления [1, 4, 5, 6].
Цель исследования - изучение влияния «медиаторов» на состояние белкового, липид-ного и углеводного обмена при моделировании у крыс хронической печеночной недостаточности.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Хронический гепатит у экспериментальных крыс вызывали введением в течение 45 дней 50% масляного раствора четыреххлори-стого углерода в дозе 0,2 мл/100 г с кратностью применения 3 раза в нед. перорально. «Медиаторы» фетальных клеток вводили внут-рибрюшинно по 0,3 мл/кг 1 раз в 3 сут. Эта доза является средней терапевтической дозой, рассчитанной в эксперименте для внутрибрю-шинного введения мелким экспериментальным животным [7]. Таким же способом вводили препарат сравнения - известный гепатопро-тектор эссенциале в средней терапевтической
дозе 0,14 мл/кг, общепринятой, по данным литературы, для лечения экспериментального гепатита у крыс [8].
Биохимические методы исследования проводились в клинико-диагностической лаборатории на биохимическом анализаторе «Flexor vitalab PC AVL» (Австрия). Во всех группах в сыворотке крови экспериментальных животных изучали уровень активности триглицеридов, холестерина, ЛПНП и ЛПВП, общий белок, альбумин, глюкозу. Изменения биохимических показателей изучали на 15, 30 и 45 сут.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
При изучении динамики уровня холестерина в сыворотке крови экспериментальных крыс с хроническим гепатитом на 30 сут выявлено повышение показателя в 2,7 раза, после чего он уже не изменялся, составив 4,45±1,73 (р<0,001). Показатель триглицеридов у животных с хронической печеночной недостаточностью имел такую же динамику. ЛПНП повысился к 30 сут в 1,6 раза и составил 1,36±0,25 (р<0,001). Увеличение ЛПВП отмечено позже. Лишь к 45 сут эксперимента показатель ЛПВП у крыс с хронической печеночной недостаточностью увеличился в 1,8 раза, но достоверных отличий с контрольной группой не наблюдалось.
1,5-месячное лечение хронической печеночной недостаточности у крыс гепатопротектро-ным средством эссенциале практически не влияло на динамику уровня холестерина, триглицери-дов. Эти показатели у группы сравнения не отличались от показателей контроля-II во все дни эксперимента.
В то же время эссенциале сдерживал рост уровня ЛПНП. Так на 30 сут уровень ЛПНП в группе сравнения составил 0,43±0,19, на 45 сут -0,45±0,19, что в 3 раза ниже, чем в контроле-II (р<0,001).
Лечение хронической печеночной недостаточности «медиаторами» способствовало более выраженному протекторному влиянию на показатели жирового обмена. Уровень холестерина в крови при применении «медиаторов» восстановился до уровня показателя интактных крыс уже на 15 сут и оставался таким до конца эксперимента.
Лечение «медиаторами» также способствовало сдерживанию роста уровня атероген-ных липопротеидов и восстановлению нормального показателя неатерогенных липопротеидов при хронической печеночной недостаточности. Так, уровень ЛПНП во все дни эксперимента составлял 0,71±0,19, что в 2 раза меньше, чем в контроле-II (р<0,001), и практически не отличался от показателя интактных крыс. Уровень триг-лицеридов у крыс, леченных «медиаторами», несколько повышенный в начале эксперимента, также с 30 сут и до конца эксперимента не отличался от контроля-I, в 2 раза превышая показатель контроля-II.
ческим гепатитом «медиаторами» привело к восстановлению белкового обмена. Так, если на 15 сут после начала введения четыреххлористого углерода уровень белка в контрольной группе нелеченных животных с хроническим гепатитом, а также в обеих группах, получавших лечение, оставался одинаковым, достоверно отличаясь от показателя интактной группы, то к 30 сут отмечались заметные сдвиги в показателях у крыс, получавших лечение.
На 30 сут исследования в экспериментальной группе уровень общего белка составлял 63,43±9,0 ммоль/л, что в 1,8 раз выше, чем в контроле-11 (р<0,001). В группе сравнения (контроль-Ш) в этот срок показатель отличался от показателя в контроле-11 в 1,9 раз (р<0,001) и составил 68,85±4,01. Причем в обеих группах показатели не отличались от показателя в кон-троле-11.
К концу эксперимента показатели в экспериментальной группе и в группе сравнения достоверных изменений не претерпели и оставались на уровне контроля-1. В то время как в кон-троле-11 в этот период наблюдался выраженный дефицит общего белка в крови (табл. 2).
Ранее был установлен мембраностабили-зирующий эффект «медиаторов», приводящий к стабилизации печеночной паренхимы, с устране-
Таблица 1.
Влияние «медиаторов» на показатели липидного обмена при печеночной недостаточности
Показатель Срок (сут) Интактные (контроль-1) Хронический гепатит нелеченные (контроль-11) Хронический гепа-тит+эссенциале (контроль-Ш) Хронический гепа-тит+«медиаторы»
Холестерин 15 1,9±0,33 1,22±0,51 1,25±0,53 1,86±0,63
30 1,9±0,33 4,85±0,49 р1<0,001 Р4<0,001 4,51±1,27 р1<0,001 1,59±0,71 Р2<0,001 р3<0,001
45 1,9±0,33 4,45±1,45 р1<0,001 Р4<0,001 4,09±1,13 р1<0,001 1,93±0,99 Р2<0,05 р3<0,05
ЛПНП 15 0,82±0,16 0,47±0,29 0,48±0,31 0,76±0,33
30 0,82±0,16 1,36±0,25 р1<0,001 0,43±0,19 Р1<0,01 Р2<0,001 0,71±0,19 Р2<0,01
45 0,82±0,16 1,39±0,22 р1<0,001 0,45±0,18 Р1<0,01 Р2<0,001 0,84±0,31 Р2<0,05
ЛПВП 15 0,44±0,13 0,39±0,30 0,32±0,16 0,31±0,11
30 0,44±0,13 0,58±0,41 0,39±0,16 0,44±0,17
45 0,44±0,13 0,81±0,67 0,39±0,09 0,39±0,11
Триглицериды 15 0,54±0,28 0,34±0,29 0,43±0,20 0,77±0,23
30 0,54±0,28 2,71±0,82 р1<0,001 Р4<0,001 3,65±1,03 р1<0,001 Р4<0,001 0,47±0,22 Р2<0,001 Р3<0,001
45 0,54±0,28 2,23± 1,09 р1<0,01 Р4<0,001 3,21±1,51 р1<0,001 Р4<0,001 0,57±0,31 Р2<0,001 Р3<0,001
Р1 - по сравнению с контролем-1; р2 - по сравнению с контролем-11; р3 - по сравнению с контролем-Ш; р4 - по сравнению с 15 сут; р5 - по сравнению с 30 сут
Токсическое воздействие четыреххлористого углерода на гепатоциты привело к выраженной и стойкой гипогликемии. При длительном течении печеночной недостаточности возникает гиперинсулинемия, связанная со снижением разрушения гормона в печени. Использование «медиаторов» для лечения этого состояния способствовало сдерживанию гипогликемии. Практически с самого начала эксперимента показатель уровня глюкозы в крови у крыс, получавших «медиа-торы», оставался на уровне показателей контроля-1 и составлял 8,41±3,17, 8,2±1,32 и 7,3±1,81 ммоль/л в разные сроки исследования. Такая же динамика наблюдалась и в группе сравнения, получавшей в качестве терапии эссенциа-ле.
Синдром недостаточности синтетических процессов при печеночной недостаточности также проявляется в снижении синтеза гепатоцита-ми транспортных белков, белков свертывающей системы и др., что в свою очередь проявляется снижением уровня общего белка плазмы крови.
Моделирование хронического гепатита у экспериментальных крыс привело к значительному снижению (в 1,25 - 1,3 раза) уровня общего белка в крови, которое наблюдалось во все сроки эксперимента.
Лечение крыс с экспериментальным токси-
Таблица 2.
Изменение уровня общего белка в сыворотке крови у крыс при экспериментальном гепатите
Срок (сут) Интактные (контроль-1) (п=7) Хронический гепатит (контроль-11) (п=7) Хронический гепатит+ эссенциале (контроль-Ш) (п=7) Хронический гепатит+ «медиаторы» (п=7)
15 64,43±5,82 49,44±3,18 р1<0,001 51,57±1,97 р1<0,001 49,85±1,95 р1<0,001
30 64,43±5,82 35,57±3,95 р1<0,001 р4<0,01 68,85±4,01 р2<0,001 р4<0,001 63,43±9,0 р2<0,001 р4<0,01
45 64,43±5,82 34,86±4,0 р1<0,001 Р4<0,001 Р5<0,01 77,8±18,9 Р2<0,001 Р4<0,001 56,85^10,21 Р2<0,001 Р4<0,001
р1 - по сравнению с контролем-1; р2 - по сравнению с контролем-11; р3 - по сравнению с контролем-Ш; р4 - по сравнению с 15 сут; р5 - по сравнению с 30 сут
нием синдрома цитолиза, увеличением детокси-кационного потенциала, устранением холестаза, восстановлением синтетических функций печени, что лежит в основе гепатопротекторного эффекта «медиаторов» фетальных клеток [4]. Гепато-протекторное действие в свою очередь способствует восстановлению нарушенных звеньев го-меостаза при патологии печени, способствуя восстановлению липидного, белкового и углеводного обмена.
Таким образом, «медиаторы» фетальных клеток человека, являясь комплексом БАВ, гармонично созданных природой в ответственный период роста и созревания плода, оказывают комплексное патогенетическое терапевтическое действие на все звенья гомеостаза. Белково-пептидный комплекс, содержащийся в этой биологической массе, является мощным регулятором, влияющим на клетки организма реципиента, корректирующим их функциональное состояние и взаимодействие, обладающим щадящим, направленным воздействием на функции регуля-торных систем, во многих случаях способствует восстановлению нормальной жизнедеятельности организма [1, 6, 7].
ВЫВОДЫ
1. Применение «медиаторов» фетальных клеток при моделировании хронической печеночной недостаточности способствует значительному положительному влиянию на нарушенные показатели липидного обмена. Медиаторы не только сдерживают нарушения в показателях холестерина, триглицеридов и липопротеидов, связанных с хроническим введением в организм гепатотропного яда, но и способствуют восстановлению показателей до уровня интактных крыс.
2. При хронической печеночной недостаточности применение «медиаторов» сдерживало гипогликемию во все сроки эксперимента, а также восстанавливало белковый обмен к 30 сут.
3. Положительное влияние «медиаторов»
фетальных клеток на обмен веществ при печеночной недостаточности превосходит эффекты гепатопротектора эссенциале.
ЛИТЕРАТУРА
1. Гормональный и клеточный состав препаратов фетальных тканей человека /О. П. Рябчиков, Л. В. Кузнецова, С. В. Назимова и др. //Бюл. экс-перим. биологии и медицины. - 1998. - Т.126. -С. 156 - 157.
2. Изменения уровней липидов, липопротеидов и аполипопротеидов плазмы крови у больных с хроническим алкоголизмом при длительном лечении /В. Ф. Трюфанов, В. Т. Лозовский, И. А. Олейник и др. //Вопр. наркологии. - 1993. -№1. - С. 44 - 48.
3. Климов А. Н. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения /А. Н. Климов, Н. Г. Никуличева. - СПб, 1999. - 500 с.
4. Медиаторные вещества фетальных клеток защищают гепатоциты от воздействия токсинов / Р. К. Стикеева, Д. С. Тажибаева, Ж. К Букеева и др. //Валеология. - 2007. - №2. - С. 111 - 113.
5. Применение инструментальных и физико-химических методов анализа в исследовании супернатанта фетальных гепатоцитов /Ж. А. До-скалиев, А. К. Амирова, Б. А. Каюпов, С. С. Са-парбаев //Клинич. мед. Казахстана. - 2007. -№2. - С. 59 - 61.
6. Стикеева Р. К. Противовоспалительное действие «медиаторных веществ» фетальных клеток //Вестник ЮКГМА. - 2007. - №3. - С. 224 -226.
7. Стикеева Р. К. Дозозависимость терапевтического действия «медиаторов» фетальных кле-ток человека //Тез. I евразийского конгресса по фар-макоэкономике и управлению качеством медицинской помощи - Астана, 2007. - С. 60.
8. Энтеросорбенты усиливают гепатозащитное действие эплира при экспериментальном токсическом гепатите /А. И. Венгеровский, Е. Л. Головина, В. Н. Буркова, А. С. Саратиков //Эксперим. клинич. фармакология. - 2001. - №1. - С. 46 -
R. K. Stikeeva
INFLUENCE OF «MEDIATORS» OF FETAL CELLS ON METABOLISM
Influence was studied «mediators» fetal hutches of the person on factors lipid, protein, and carbon exchange. On the grounds of result of the experiment is installed, that «mediators» render significant positive influence on metabolism. This effect exceeds effect essential.
Р. К. Стикеева
ФЕТАЛЬДЫ ЖАСУШАЛАРДЬЩ «МЕДИАТОРЛАРЫНЬЩ» ЗАТ АЛМАСУЫНЬЩ К0РСЕТК1ШТЕР1НЕ ЭСЕР ЕТУ1
Адамныч фетальды жасушаларыныч «медиаторыныч» липидтердiн, акууздыч, канттыч алмасуына типзетш acepi зерттелдi. Эксперименттердiн нэтижесiнен медиаторлдыч зат алмасуын жаксартатыны аныкталды. Жане «медиаторлардын» эссенциаледен бул эcepiнiч кYшi артык eкeнi аныкталды.
З. А. Джуматаева
ИССЛЕДОВАНИЕ ЭНТРОПИИ ГЛАЗНОГО ДНА ПРИ РАЗВИТИИ ГЛАУКОМЫ
Казахский НИИ глазных болезней (Алматы)
Серьезной проблемой теоретической медицины является совершенствование, а тем более - получение точных определений (с позиций представлений точных наук) таких понятий, как гомеостаз, резистентность, адаптация, адаптационное напряжение, патология и т.п. Обычно все сводится к углублению или приданию уже имеющимся определениям современных форм [2].
Известно, что такой показатель, как энтропия давно используется биологами при описании процессов, происходящих на молекулярном уровне. Принципиальную возможность использования классического понятия энтропии при изучении более высоких иерархических уровней живых систем теоретически доказал и частично проиллюстрировал Г. П. Гладышев. Ему удалось корректно оценить энтропию на внутриклеточном уровне и показать возможность оценки физической энтропии на любых иерархических уровнях. Он утверждает, что каждый иерархический уровень организма выполняет роль термостата для нижележащего уровня [1]. Заметим, что в последние несколько десятилетий большинство устойчивых функциональных динамических характеристик организма рассматривают как возникающие из хаоса, динамические системы нелинейной природы [3]. Однако эта ситуация до сих пор не привела к началу серьезных исследований в области статистических свойств организма, характеризующих его общесистемное поведение.
Итак, можно сказать, что представление об энтропии и ее значении для организмов, имеющих иерархическое устройство, развито слабо. Хотя важность развития такого взгляда и связанных с ним понятий для оценки общего состояния организма даже в первом приближении трудно переоценить.
Цель работы - путем анализа энтропии и форм распределения по отдельно взятому параметру расширить возможность теоретического
расчета значимых для ранней диагностики глаукомы показателей.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Исследование параметров ГЗН и толщины слоя нервных волокон сетчатки проводилось на 69 глазах пациентов с первичной открытоуголь-ной и закрытоугольной глаукомой на аппарате «OCT Stratus» (версия 3000) фирмы «Zeiss». Сканирование диска зрительного нерва осуществлялось с помощью протокола сканирования Optical Disk (диск зрительного нерва), к нему применен протокол анализа Optic Nerve Head (головка зрительного нерва). Распределение пациентов по стадиям заболевания было следующим: начальная стадия - 15 пациентов (22 глаза), развитая стадия - 11 пациентов (18 глаз), далеко зашедшая стадия - 10 пациентов (17 глаз), терминальная стадия - 10 пациентов (12 глаз). Также были проанализированы сканы группы здоровых лиц -15 пациентов (30 глаз).
Зная, что плотность ткани фактически отображает уровень накопления потенциальной энергии системы, проанализировали поведение распределения квазиплотности. Под квазиплотностью подразумеваем те единицы измерения, в которых ведутся различные томографические измерения, включая оптико-когерентные, и фактическая величина которых пропорциональна истинной плотности тканей. Разрешающая способность аппаратуры позволяет измерять квазиплотность на площади в 0,005 мм2 и иметь шкалу по плотности в 250 у.е. Сканируемая площадь составляет около 50 мм2, промежуточная площадь статистических ансамблей - 0,2 мм2. В поддержании распределения квазиплотности участвуют, по крайней мере, три иерархических уровня организма: клеточные взаимодействия, система микроциркуляции, нервная система, отвечающая за трофику и регуляцию на уровне целостного организма. В нашем случае глаз как система может находиться в пяти состояниях: здоровом, в состоянии, характерном для начальной, развитой, далеко зашедшей и терминальной стадии глаукомы.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Изучены типичные картины этих состояний, оценивая по статистической картине рас-
