CC BY
42
ACTUAL ISSUES OF TRANSPLANTATION
https://doi.org/10.23873/2074-0506-2020-12-l-20-27 | (ФЕД
Исследование субпопуляции CD3+CD4-CD8- даблнегативных Т-лимфоцитов у пациентов после трансплантации почки
С.В. Зыблева*, С.Л. Зыблев
ГУ «Республиканский научно-практический центр радиационной медицины и экологии человека»,
246040, Республика Беларусь, Гомель, ул. Ильича, д. 290 * Контактная информация: Светлана Валерьевна Зыблева, канд. мед. наук, врач-иммунолог, ученый секретарь Республиканского научно-практического центра радиационной медицины и экологии человека,
e-mail: zyb-svetlana@yandex.ru
Введение. СВ3+СВ4'СВ8' являются одной из субпопуляций Т-регуляторных лимфоцитов. Согласно данным литературы, обнаружено увеличение содержания графт-инфильтрирующих СВ3+СВ4-СВ8- в тканях ксенотрансплантата сердца экспериментальной модели с длительной выживаемостью трансплантата. Описана эффективность инфузии СВ3+СВ4-СВ8- с целью индуцирования толерантности трансплантата кожи. Показано также, что снижение уровня СВ3+СВ4-СВ8- в периферической крови у пациентов при трансплантации гемопоэтических стволовых клеток ассоциировалось с развитием реакции трансплантат против хозяина.
Цель исследования. Изучить изменения показателей СВ3+СВ4-СВ8- даблнегативных Т-лимфоцитов в периферической крови у реципиентов почечного трансплантата.
Материал и методы. В исследование включены 165 реципиентов, которым выполнена трансплантация почки. Определяли концентрацию в крови креатинина и мочевины перед операцией, на 7-е и 360-е сутки после трансплантации. Содержание СВ3+СВ4-СВ8- лимфоцитов изучали перед операцией, на 3-и, 7-е, 30-е, 90-е, 180-е и 360-е сутки после операции. Ранняя функция трансплантата оценивалась на 7-е сутки после операции. При уровне креатинина ниже 300 мкмоль/л функция считалась первичной. Дисфункция трансплантата считалась установленной при значениях креатинина равных или превышающих 300 мкмоль/л и необходимости в диализе на первой неделе после операции. Удовлетворительная функция трансплантата через год характеризовалась уровнем креатинина в крови ниже 150 мкмоль/л, отсутствием эпизодов отторжения трансплантата и необходимости в диализе на первом году наблюдения. Сформированы четыре группы реципиентов. Первая группа — пациенты с первичной и удовлетворительной поздней функцией трансплантата. Вторая группа — с первичной функцией и поздней дисфункцией трансплантата. Третья группа — с первичной дисфункцией и поздней удовлетворительной функцией. Четвертая группа — с первичной и поздней дисфункцией трансплантата.
Результаты. В первой и второй группах статистически значимых различий по уровню СВ3+СВ4-СВ8- в крови в течение года выявлено не было. Через год отмечено статистически значимое снижение содержания СВ3+СВ4-СВ8- в группе с поздней дисфункцией трансплантата. В третьей и четвертой группах была выявлена похожая тенденция. В четвертой группе (с поздней дисфункцией трансплантата) уровень СВ3+СВ4-СВ8- был статистически значимо ниже только через год наблюдения по сравнению с показателем в третьей группе. Отмечены отрицательные корреляционные связи между показателями СВ3+СВ4-СВ8- и уровнем креатинина и мочевины. Таким образом, высокие значения содержания СВ3+СВ4-СВ8- у реципиентов почечного трансплантата через год ассоциировались с удовлетворительной функцией трансплантата. Выводы. 1. Для стабильной годовой удовлетворительной функции почечного трансплантата характерно повышение уровня в крови СВ3+СВ4-СВ8- Т-лимфоцитов. 2. Дисфункция почечного трансплантата в позднем посттрансплантационном периоде характеризуется снижением уровня в крови СВ3+СВ4 -СВ8- Т-лимфоцитов.
Ключевые слова: СВ3+СБ4-СБ8-, Т-лимфоциты, дисфункция почечного трансплантата, трансплантация почки
Конфликт интересов Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов Финансирование Исследование проводилось без спонсорской поддержки
Зыблева С.В., Зыблев С.Л. Исследование субпопуляции СВ3+СВ4-СБ8- даблнегативных Т-лимфоцитов у пациентов после трансплантации почки. Трансплантология. 2020;12(1):20-27. https://doi.org/10.23873/2074-0506-2020-12-1-20-27
ACTUAL ISSUES OF TRANSPLANTATION
Research of subpopulation CD3+CD4-CD8- double-negative T lymphocytes in kidney transplant recipients
S.V. Zybleva*, S.L. Zyblev
Republican Research Center for Radiation Medicine and Human Ecology, 290 Il'ich St., Gomel 246040 Republic of Belarus * Correspondence to: Svetlana V. Zybleva, Cand. Med. Sci., Immunologist, Academic Secretary, Republican Research Center for Radiation Medicine and Human Ecology, e-mail: zyb-svetlana@yandex.ru
Introduction. CD3+CD4'CD8' cells represent one of the subpopulations of T-regulatory lymphocytes. According to literature reports, an increase in the content of graft-infiltrating CD3+CD4-CD8- T cells was detected in the heart xenograft tissues of an experimental model with a long-term graft survival. The efficacy of CD3+CD4-CD8- infusion to induce skin graft tolerance was described. Some studies have shown that a decrease in CD3+CD4-CD8- content in peripheral blood of patients undergoing to hematopoietic stem cell transplantation was associated with the development of a graft-versus-host reaction.
Objectives. To study changes in the values of CD3+CD4-CD8- double-negative T lymphocytes in peripheral blood in kidney transplant recipients.
Material and methods. The study included 165 recipients who underwent kidney transplantation. The creatinine and urea concentrations in blood were determined before surgery, on day 7, and day 360 after transplantation. The content of CD3+CD4-CD8- lymphocytes was studied before surgery, on the 3rd, 7th, 30th, 90th, 180th and 360th days after surgery. Early graft function was assessed on day 7 after transplantation. The function was defined as a primary one at creatinine levels below 300 ¡mol/L. The graft dysfunction was defined as creatinine values equal to or greater than 300 ¡mol/L and the need for dialysis in the first week after surgery. The satisfactory graft function after a year was characterized by the blood creatinine level below 150 ¡mol/L, absent episodes of graft rejection, and no need for dialysis in the first year of follow-up. There were 4 groups of recipients formed. The first group included patients with the primary graft function and satisfactory late graft function. The second group included patients with the primary function and late graft dysfunction. The third group included patients with the primary dysfunction and late satisfactory function. The fourth group included patients with the primary and late graft dysfunction.
Results. In the first and second groups, there were no significant differences in the blood level of CD3+CD4-CD8- during the year. After a year, a significant CD3+CD4-CD8- decrease was noted in the group with late graft dysfunction. A similar tendency was revealed in the third and fourth groups. In the fourth group (with late graft dysfunction), the level of CD3+CD4-CD8- was significantly lower only after a year of observation compared with the levels in the third group. A negative correlation was noted between the CD3+CD4-CD8- values and the creatinine and urea levels. Thus, high CD3+CD4-CD8- values in kidney transplant recipients after a year were associated with a satisfactory graft function. Conclusions. 1. A stable 1-year satisfactory kidney graft function is characterized by an increase in the blood level of CD3+CD4-CD8- T lymphocytes. 2. A kidney graft dysfunction in the late post-transplant period is characterized by a decrease in the blood level of CD3+CD4-CD8- T lymphocytes.
Keywords: CD3+CD4"CD8", T lymphocytes, kidney graft dysfunction, kidney transplantation
Conflict of interests Authors declare no conflict of interest Financing The study was performed without external funding
Zybleva SV, Zyblev SL. Research of subpopulation CD3+CD4-CD8- double-negative T lymphocytes in kidney transplant recipients. Transplantologiya. The Russian Journal of Transplantation. 2020;12(1):20-27. (In Russ.). https://doi.org/10.23873/2074-0506-2020-12-1-20-27
ДН Т-лимфоциты - даблнегативные 003+004-008-
Т-лимфоциты ДФТ - дисфункция почечного трансплантата ПФТ - первичная функция почечного трансплантата РПТ1 - первая группа реципиентов почечного трансплантата
Введение
Регуляторные Т-лимфоциты играют важную роль при различных заболеваниях [1, 2]. Одной
РПТ2 - вторая группа реципиентов почечного
трансплантата РПТ3 - третья группа реципиентов почечного
трансплантата РПТ4 - четвертая группа реципиентов почечного
трансплантата РТПХ - реакция «трансплантат против хозяина»
из субпопуляций T-регуляторных лимфоцитов являются даблнегативные CD3+CD4-CD8-T-лимфоциты (ДН T-лимфоциты). Данная субпопуляция составляет 1-3% от периферических
Т-клеток [3]. ДН Т-лимфоциты могут быть вовлечены в системное воспаление и повреждение тканей при аутоиммунных/воспалительных состояниях, включая системную красную волчанку, синдром Шегрена и псориаз [4]. ДН Т-лимфоциты обладают способностью подавлять антиген-специфические ауто-, алло- или ксенореактивные СБ8+Т-лимфоциты [3, 5, 6], СБ4+Т-лимфоциты [6-9] или В-лимфоциты [10, 11].
Рядом авторов было обнаружено увеличение количества ДН Т-лимфоцитов при алло- и ксе-нотрансплантации сердца, посттрансплантационный период которых протекал без эпизодов острого отторжения [12]. Адаптивный перенос Ag-активированных ДН Т-лимфоцитов, по данным некоторых исследований, может увеличивать выживание алло- или ксенотрансплантатов кожи и сердца [3, 8, 13]. В отличие от аллогенных СБ4+ или СБ8+ Т-клеток инфузия аллогенных ДН Т-лимфоцитов индуцирует толерантность алло-трансплантата кожи, не вызывая реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ) [14]. Ранние исследования показали, что доля и общее количество ДН Т-лимфоцитов значительно снижались у пациентов при трансплантации гемопоэтических стволовых клеток, у которых развилась РТПХ, и что соотношение СБ8/ДН Т-лимфоцитов напрямую коррелировало с тяжестью РТПХ [15]. Также было установлено, что ДН Т-лимфоциты вовлечены в противоопухолевый иммунитет [16]. Учитывая вышеизложенное, становится ясно, что роль, которую ДН Т-лимфоциты играют при различных заболеваниях, важна и малоизучена.
Механизмы, с помощью которых CD4+CD25+Tregs опосредуют иммунную супрессию, широко изучены [17], а механизмы, с помощью которых ДН Т-лимфоциты опосредуют антиген-специфическую супрессию, остаются малоизученными. Предыдущие исследования показали, что ДН Т-лимфоциты могут подавлять иммунные ответы посредством прямого цитолиза активированных антиген-специфических Т-эффекторных клеток [3, 7, 8, 18, 19]. Также одним из механизмов супрессии иммунного ответа является подавление ДН Т-лимфоцитами экспрессии костимулирующих молекул CD80 и CD86 на аллогенных дендритных клетках, индуцированных липополисахаридом [1]. Помимо этого, ДН Т-лимфоциты посредством Fas-FasL-взаимодействия способны вызывать гибель антиген-специфических дендритных клеток [1].
В данной статье представлены результаты изучения динамики ДН Т-лимфоцитов при раз-
личных вариантах течения посттрансплантационного периода у пациентов после трансплантации почки.
Цель исследования. Изучить изменения показателей CD3+CD4-CD8- даблнегативных Т-лимфоцитов в периферической крови у реципиентов почечного трансплантата.
Материал и методы
Настоящая работа выполнена на базе ГУ «Республиканский научно-практический центр радиационной медицины и экологии человека» (ГУ «РНПЦ РМиЭЧ») Гомеля.
В исследование были включены 165 реципиентов почечного аллотрансплантата с терминальной стадией хронической болезни почек, которым выполнена трансплантация аллогенной почки в хирургическом отделении (трансплантации, реконструктивной и эндокринной хирургии) ГУ «РНПЦ РМиЭЧ». Срок посттрансплантационного наблюдения составил 12 месяцев. Клиническое исследование проведено в соответствии с Хельсинкской декларацией 1975 г. и одобрено комитетом по этике ГУ «РНПЦ РМиЭЧ» (протокол № 5 от 02.12.2013).
Всем пациентам проведено динамическое определение концентрации в сыворотке крови креатинина и мочевины на предоперационном этапе, на 7-е и 360-е сутки после трансплантации. Содержание CD3+CD4-CD8- лимфоцитов изучали перед операцией, на 3-и, 7-е, 30-е, 90-е, 180-е и 360-е сутки после операции. Ранняя функция почечного трансплантата оценивалась на 7-е сутки после операции по уровню креатинина крови. При показателях ниже 300 мкмоль/л функция считалась первичной (ПФТ), при значениях, равных или превышающих 300 мкмоль/л, а также при возникновении необходимости в диализе на первой неделе после трансплантации, состояние классифицировалось как дисфункция почечного трансплантата (ДФТ) [20]. Удовлетворительная функция почечного трансплантата через год характеризовалась уровнем креатинина крови ниже 150 мкмоль/л, отсутствием эпизодов отторжения почечного трансплантата и необходимости в диализе на первом году наблюдения [21].
Основными критериями включения в группу исследования являлись:
1. Первичная почечная трансплантация.
2. Индукционная терапия моноклональными анти-СD25-антителами.
3. Трехкомпонентная иммуносупрессивная терапия в течение первых 12 месяцев наблюдения.
Мужчин было 100 (60,6%), женщин - 65 (39,4%). Возраст составил от 19 до 71 лет, средний возраст был 45,95±0,94 [95% ДИ 44,9; 47,81] года. До трансплантации 81,21% пациентов находились на программированном гемодиализе и 18,79% -на перитонеальном диализе. Медианный уровень креатинина в крови до проведения трансплантации почки составлял 705,0 [579,0; 920,0] мкмоль/л, а мочевины - 17,0 [13,9; 20,2] ммоль/л. Средняя длительность холодовой ишемии трансплантата почки равнялась 12,14±0,32 часа [95% ДИ 11,50; 12,77]. Отрицательный результат прямой перекрестной пробы (cross-match) наблюдали в 100% случаев.
Средняя длительность нахождения на диализе составила 32,9±2,45 [95% ДИ 28,06; 37,76] месяца. По продолжительности диализа отмечалось следующее распределение: 5 лет и более - 23 пациента (13,94%), от 1 года до 5 лет - 103 (62,42%) и до 1 года - 39 (23,64%).
Из 165 реципиентов с учетом состояния первичной и поздней функции трансплантата были сформированы четыре группы реципиентов почечного трансплантата. В первую группу (РПТ1) были включены пациенты, имеющие удовлетворительную первичную и позднюю функции почечного трансплантата (n=76), во вторую (РПТ2) - имеющие первичную удовлетворительную функцию и позднюю дисфункцию трансплантата (n=17), в третью (РТП3) - первичную дисфункцию и позднюю удовлетворительную функцию (n=44), а в четвертую (РПТ4) вошли пациенты с первичной и поздней дисфункцией трансплантата (n=28).
Все пациенты получали иммуносупрессив-ную терапию согласно клиническим протоколам трансплантации почки (Приложение 1 к приказу Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 05.01.2010 № 6). Пациенты из обследуемой группы получали индукционную терапию моноклональными анти-СБ25-антителами. Схема иммуносупрессивной терапии включала: ингибиторы кальциневрина в сочетании с микофе-нолатом (87,35%) или азатиоприном (12,65%), а также кортикостероиды. Моноклональные анти-СБ25-антитела вводили дважды в дозе 20 мг в 0-е и 4-е сутки. Кроме того, 72,89% пациентов получали в качестве ингибитора кальци-неврина циклоспорин, а 27,11% - такролимус.
Для определения иммунологических особенностей реципиентов почечного трансплантата применяли методику проточной цитомет-рии, используя проточный цитофлуориметр FaсsCanto II (Becton Dickinsonand Company, BD Biosciences, США) в комплекте со станцией про-боподготовки с применением моноклональных антител CD4PС7, CD8FITC, CD3PС5.5 (Beckman Coulter и BD, США) с использованием моно-, двух- и шестипараметрического анализа согласно инструкции производителя с применением многократного поступательного гейтирования. Иммунологическое обследование пациентов проводили перед операцией и на 3-и, 7-е, 30-е, 90-е, 180-е и 360-е сутки после операции.
Методика определения относительного и абсолютного количества субпопуляции лимфоцитов
Забор крови производили из локтевой вены в пробирки с антикоагулянтом (этилендиаминтет-рауксусная кислота). Для определения экспрессии поверхностных маркеров ДН Т-лимфоцитов методом проточной цитометрии производили пробоподготовку по безотмывочной технологии в панели оценки активационной способности Т-лимфоцитов. К 100 мкл крови добавляли моноклональные антитела CD4PС7, CD8FITC, CD38PE, CD3PС5.5, Anti-HLADR АРС (Beckman Coulter и BD, США) в объемах, рекомендуемых фирмой-производителем. Инкубировали 15 минут в темноте при комнатной температуре. Для лизиса эритроцитов использовали лизирую-щий раствор OptiLyse B. Пробы анализировали на проточном цитофлуориметре FACS CantoII (BD, США). Накапливали не менее 10 000 событий. Популяцию Т-лимфоцитов определяли как CD3+ клетки в гейте SSClowCD45+bright, характерной для лимфоцитов. Оценку даблнегативной популяции производили по гистограмме, гейтиро-ванной по CD3+ Т-лимфоцитам по соотношению CD4+ и CD8+ клеток. В квадранте CD3+CD4-CD8-определялись ДН Т-лимфоциты. Необходимо отметить, что популяция ДН Т-лимфоцитов не подлежала иммунофенотипической дифферен-цировке на субпопуляции и могла включать в себя ДН Т-лимфоциты с экспрессией TCRaP-, так и TCRya-клетки. Для вычисления абсолютного содержания ДН Т-лимфоцитов использовали результаты общего анализа крови, выполнявшегося из данной пробирки в тот же день.
ACTUAL ISSUES OF TRANSPLANTATION
Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакета программ Statistica 10,0. Описательная статистика качественных признаков представлена абсолютными и относительными частотами, а количественных признаков - в формате: среднее (доверительный интервал) -M [Confidence -95%; +95%] и медиана (интерквар-тильный размах) - Me [Q25; Q75]. Для сравнения значений использовали метод числовых характеристик (Mann-Whitney U Test, Wilcoxon Matched Pairs Test) с оценкой распределения переменных. Связь показателей с помощью корреляционного анализа оценивали с использованием определения ранговой корреляции Спирмана (Spearman Rank Order Correlations). Результаты считали статистически значимыми при достигнутом уровне значимости, равной или менее 0,05.
Результаты и обсуждение
Результаты биохимического обследования пациентов изучаемых групп представлены в табл. 1.
Сравнительный анализ четырех групп по изучаемым показателям выявил статистически значимые различия при динамическом наблюдении в послеоперационном периоде. Перед операцией отмечено только статистически значимое превышение уровня мочевины в группе РПТ1 по сравнению с показателем в группе РПТ2 (р№пп-Whltney и Test=0,020). На 7-е сутки обследования статистически значимых различий уровня мочевины в группах РПТ1 и РПТ2 выявлено не было
^Mann-Whitney U Test=0,758) На 360-е в ^ппе
РПТ2 уровень мочевины был статистически значимо чем в группе РПТ1 (Гз60Mann-Whitney U
Test=0,0003). На 7-е сутки в группе РПТ1 креа-тинин был статистически значимо ниже, чем в группе РПТ2, хотя по критериям оценки функ-
ции почечного трансплантата функция считалась
удовлетворительной (р7Мат^пеу и Те^=0,039). На 360-е сутки наблюдения уровень креатинина в
группе РПТ2 соответствовал критериям ДФТ и был статистически значимо выше, чем в группе РПТ1 (р360Мапп^пеу и Те.= 0,001). На сутки обследования уровень креатинина в группе РПТ4 был статистически значимо выше по сравнению с показателем в группе РПТ3 (P7Mann-Whitney
и тest=0,005). Сравнение содержания мочевины в крови групп РПТ3 и РПТ4 не выявило статистически значимых различий ни на 7-е, ни на 360-е
сутки обследования (PoMann-WhitneyUTest=0,477 М Pз60Mann-Whitney и Test=0,167 соответственно). Уровень
креатинина в группе РПТ3 через год наблюдения снизился и соответствовал критериям удовлетворительной функции трансплантата, а в группе РПТ4 был статистически значимо выше, чем в
группе РПТ3 (р^^у и Test=0,007).
Результаты определения содержания ДН Т-лимфоцитов в группах реципиентов почечного трансплантата с различными вариантами течения посттрансплантационного периода представлены в табл. 2.
При сравнении двух групп пациентов РПТ1 и РПТ2 статистически значимых различий по уровню субпопуляции ДН Т-лимфоцитов в тече-
ние года не было выявлено (р
= 0,471, р
0Mann-Whitney U Test 7Mann-Whitney U Test
=0,402,
=0,721,
P3Mann-Whitney U Test
р =0 191 р =0 85
P30Mann-Whitney U Test 0>191> p90Mann-Whitney U Test 0,05> P180Mann-Whitney U Test=0,347) Ч^е3 1 Г0Д НаблЮДения отмечено статистически значимое снижение уровня данной субпопуляции в группе РПТ2 (с поздней дисфункцией трансплантата) (р^^^
Whitney U Test~0'001)'
При анализе динамики уровня CD3+CD4-CD8- лимфоцитов в группах РПТ3 и РПТ4 была выявлена похожая тенденция. В группе РПТ4 (с поздней дисфункцией трансплантата) дан-
Таблица 1. Биохимические показатели крови пациентов изучаемых групп, Me (Q25; Q75) Table 1. Biochemical parameters of patients in the studied groups, Me (Q25; Q75)
Показатель Сутки Группы пациентов
РПТ1 РПТ2 РПТ3 РПТ4
Креатинин, мкмоль/л 0 649,5 (569,0; 927,5) 705,0 (596,0; 920,0) 745,0 (566; 864,0) 818,0 (615,0; 1005,0)
7 148,0 (114,0; 196,5) 192,0 (146,0; 197,0) 500,0* (352,0; 638,0) 545,0* (426,0; 738,0)
360 107,0 (96,0; 121,0) 204,0* (152,0; 277,0) 109,0* (97,0; 126,0) 201,0*,** (169,5; 260,0)
Мочевина, ммоль/л 0 19,2 (16,8; 22,2) 16,8* (14,3; 18,6) 15,2* (10,2; 17,3) 15,8* (11,5; 17,55)
7 10,35 (7,8; 14,5) 10,3 (7,8; 16,5) 21,5* (17,4; 36,05) 23,45* (16,9; 36,7)
360 7,2 (5,9; 10,6) 11,2* (10,3; 14,0) 7,65 (6,4; 15,9) 12,3* (6,7; 17,9)
Примечания: * - р<0,05 при сравнении c РПТ1; ** - р<0,05 при сравнении c РПТ3
Таблица 2. Показатели абсолютного и относительного содержания CD3+CD4-CD8- даблнегативных Т-лимфоцитов у реципиентов почечного трансплантата, Me (Q25; Q75)
Table 2. Absolute and relative count of CD3+CD4-CD8- double-negative T lymphocytes in kidney transplant recipients, Me (Q25; Q75)
Сутки Ед. изм. CD3+CD4-CD8- даблнегативные Т-лимфоциты
РПТ1 РПТ2 РПТ3 РПТ4
0 отн х % 3,8 (2,98; 4,5) 4,09 (3,4; 4,57) 4,93 (2,51; 5,42) 3,64 (2,51; 5,4)
109 кл/л 0,015 (0,013; 0,028) 0,02 (0,014; 0,045) 0,017 (0,015; 0,023) 0,022 (0,013; 0,057)
3 отн х % 1,89 (1,54; 2,16) 1,71 (1,48; 2,22) 4,3* (3,27; 5,05) 3,75* (2,95; 4,5)
109 кл/л 0,12 (0,007; 0,019) 0,011 (0,004; 0,023) 0,025* (0,016; 0,029) 0,019* (0,012; 0,043)
7 отн х % 1,93 (1,47; 2,43) 1,85 (1,22; 2,43) 4,6* (2,9; 6,13) 4,19* (3,06; 5,0)
109 кл/л 0,03 (0,02; 0,048) 0,024 (0,017; 0,032) 0,061* (0,034; 0,105) 0,063* (0,041; 0,072)
30 отн х % 1,93 (1,8; 2,11) 2,08 (1,9; 2,28) 5,12* (1,4; 7,71) 5,77* (3,8; 6,74)
109 кл/л 0,031 (0,02; 0,048) 0,033 (0,021; 0,04) 0,06 (0,012; 0,082) 0,078* (0,043; 0,115)
90 отн х % 5,56 (3,56; 6,92) 5,56 (2,92; 7,32) 6,12* (4,66; 7,89) 5,15 (4,05; 6,12)
109 кл/л 0,116 (0,061; 0,16) 0,1 (0,047; 0,176) 0,124* (0,101; 0,169) 0,101 (0,069; 0,124)
180 отн х % 4,49 (3,28; 5,52) 3,59 (3,3; 3,77) 3,5 (2,66; 4,4) 3,71 (2,66; 4,4)
109 кл/л 0,09 (0,052; 0,125) 0,082 (0,048; 0,084) 0,072 (0,043; 0,096) 0,09 (0,048; 0,102)
360 отн х % 4,58 (3,33; 5,8) 2,76* (2,22; 3,33) 3,94 (2,48; 7,44) 2,5*,** (1,6;3,43)
109 кл/л 0,1 (0,071; 0,128) 0,04* (0,036; 0,071) 0,099 (0,044; 0,161) 0,049 (0,02; 0,099)
Примечания: * — р<0,05 при сравнении c РПТ1; ** — р<0,05 при сравнении c РПТ3
ная субпопуляция была статистически значимо ниже только через 1 год наблюдения по сравнению с показателем в группе РПТ3 (PoMann-Wh1tney U Test 0,5 8 9, P3Mann-Whitney U Test=0,163, P7Mann-Whltney U
= 0 502 р =0 407 р
Test ' *"30Mann-Whitney U Test ' i^90Mann-Whitney U
Test 0, 2 2 2 , P180Mann-Whitney U Test=0,993, P360Mann-Whltney
U Test=0,039). Динамика и различия абсолютных значений данной субпопуляции Т-лимфоцитов в группах РПТ1 и РПТ2, РПТ3 и РПТ4 соответствовали относительным (р„„ тг „ =0,397,
v^uMann- Whitney U Test ' ' P3Mann-Whitney U Test=0,612, P7Mann-Whitney U Test=0,2, P30Mann-
=0734, р =0,99, р
Whitney U Test ' ^90Mann-Whitney U Test ' ' ^180Mann-Whitney
U Test 0,567 P360Mann-Whitney U Test=0,025).
Исходя из полученных данных, можно отметить, что в дотрансплантационном периоде различий по содержанию ДН Т-лимфоцитов между изучаемыми субпопуляциями не было. В группах с ранней ПФТ показатели данной субпопуляции лимфоцитов прогрессивно снижались, возможно, в ответ на проводимую иммуносупрессивную терапию и сохранялись на стабильно низком уровне в течение первого месяца. В группах с первичной ДФТ статистически значимой динамики ДН Т-лимфоцитов в течение первого месяца выявлено не было. На 90-е сутки выявлен рост данной субпопуляции во всех группах, причем в
группах ПФТ прирост был более значительным, чем в группах с ДФТ.
Исходя из полученных данных, более высокие значения ДН Т-лимфоцитов у реципиентов почечного трансплантата на 360-е сутки наблюдения ассоциировались с удовлетворительной функцией трансплантата, причем как в группе РПТ1 со стабильной на всем протяжении наблюдения функцией, так и в группе РПТ3, в которой первоначально на 7-е сутки была отмечена дисфункция трансплантата.
Учитывая полученные результаты, мы провели корреляционный анализ между значениями субпопуляций СВ3+СБ4-СБ8- Т-лимфоцитов и показателями биомаркеров функции почечного трансплантата (табл. 3).
Как следует из табл. 3, на 360-е сутки появляются отрицательные корреляционные связи между показателями СВ3+СБ4-СБ8-Т-лимфоцитов и биомаркерами функции почечного трансплантата. Таким образом, рост уровня субпопуляции ДН Т-лимфоцитов ассоциируется с удовлетворительной функцией почечного трансплантата. Определение уровня СВ3+СВ4-СБ8" Т-лимфоцитов может быть использовано в качестве дополнительного лабораторного признака
ACTUAL ISSUES OF TRANSPLANTATION
компенсаторной регуляторной реакции иммунной системы при трансплантации почки.
Таблица 3. Уровень корреляции между показателями CD3+CD4-CD8- Т-лимфоцитов и биомаркеров функции почечного трансплантата (Spearman Rank Order Correlations)
Table 3. The level of correlation between indices of CD3+CD4-CD8- T lymphocytes and biomarkers of kidney graft function (Spearman Rank Order Correlations)
Показатель Сутки Ед. изм. Коэффициент корреляции, r (p)
Креатинин Мочевина
ДН Т-лимфоциты 0 % -0,11 -0,11 отн х % (р=0,29) (р=0,29)
109 кл/л +0,14 (р=0,24) -0,10 (р=0,38)
360 % -0,53 -0,38 0ТН х % (р<0,001) (р<0,001)
109 кл/л -0,33 (р<0,001) -0,21 (р=0,028)
Выводы
1. Для пациентов со стабильной в течение первого года удовлетворительной периферической функцией почечного трансплантата характерно повышение уровня в крови субпопуляции СБ3+СБ4-СБ8- Т-лимфоцитов.
2. Нарушение функции почечного трансплантата в позднем посттрансплантационном периоде характеризуется снижением уровня СБ3+СБ4-СБ8- Т-лимфоцитов.
3. Изменение содержания субпопуляций СБ3+СБ4-СБ8- Т-лимфоцитов может быть использовано в качестве дополнительного лабораторного признака компенсаторной регулятор-ной реакции иммунной системы при трансплантации почки.
4. Изучение субпопуляций СБ3+СБ4-СБ8" Т-лимфоцитов у пациентов после трансплантации почки дает возможность прогнозировать варианты течения посттрансплантационного периода, что позволит разрабатывать потенциальные терапевтические стратегии лечения этой категории пациентов.
Литература / References
1. Gao JF, McIntyre MS, Juvet SC, Diao J, Li X, Vanama RB, et al. Regulation of antigen-expressing dendritic cells by double negative regulatory T cells. Eur J Immunol. 2011;41(9):2699-708. PMID: 21660936 https://doi. org/10.1002/eji.201141428
2. Sakaguchi S, Miyara M, Costanti-no CM, Hafler DA. FOXP3+ regulatory T cells in the human immune system. Nat Rev Immunol. 2010;10(7):490-500. PMID: 205 5 9 32 7 https://doi.org/10.1038 / nri2785
3. Zhang Z, Yang L, Young K, DuTemple B, Zhang L. Identification of a previously unknown antigen-specific regulatory T cell and its mechanism of suppression. Nat Med. 2000;6(7):782-789. https://doi.org/10.1038/77513
4. Brandt D, Hedrich CM. TCRap(+) CD3(+)CD4(-)CD8(-) (double negative) T cells in autoimmunity. Autoimmun Rev. 2018;17(4):422-430. PMID:
29428806 https://doi.org/10.1016/j. autrev.2018.02.001
5. Ford MS, Chen W, Wong S, Li C, Vanama R, Elford AR, et al. Peptide-activat-ed double-negative T cells can prevent autoimmune type-1 diabetes development. Eur J Immunol. 2007;37(8):2234-41. PMID: 17578845 https://doi. org/10.1002/eji.200636991
6. Chen W, Ford MS, Young KJ, Cybul-sky MI, Zhang L. Role of double-negative regulatory T cells in long-term cardiac xenograft survival. J Immunol. 2003;170(4):1846-53. PMID: 12574350 https://doi.org/10.4049/jimmu-nol.170.4.1846
7. Voelkl S, Gary R, Mackensen A. Characterization of the immunoregulatory function of human TCR-ap+ CD4- CD8-double-negative T cells. Eur J Immunol. 2011;41(3):739-48. PMID: 21287552 https://doi.org/10.1002/eji.201040982
8. Zhang D, Yang W, Degauque N,
Tian Y, Mikita A, Zheng XX. New differentiation pathway for double-negative regulatory T cells that regulates the magnitude of immune responses. Blood. 2007;109(9):4071-9. PMID: 17197428 https://doi.org/10.1182/blood-2006-10-050625
9. Chen W, Zhou D, Torrealba JR, Waddell TK, Grant D, Zhang L. Donor lymphocyte infusion induces long-term donor-specific cardiac xenograft survival through activation of recipient
double-negative regulatory T cells. J Immunol. 2005;175(5):3409-16. PMID: 16116235 https://doi.org/10.4049/jim-munol.175.5.3409
10. Hillhouse EE, Beauchamp C, Chabot-Roy G, Dugas V, Lesage S. Interleukin-10 limits the expansion of immunoregulatory CD4-CD8- T cells in autoimmune-prone non-obese diabetic mice. Immunol Cell Biol. 2010;88(8):771-80. PMID: 20603635 https://doi.org/10.1038/
icb.2010.84
11. Zhang ZX, Ma Y, Wang H, Arp J, Jiang J, Huang X, et al. Double-negative T cells, activated by xenoantigen, lyse autologous B and T cells using a perforin/granzyme-dependent, Fas-Fas ligand-independent pathway. J Immunol. 2006;177(10):6920-9. PMID: 17082607 https://doi.org/10.4049/jim-munol.177.10.6920
12. Chen W, Diao J, Stepkowski SM, Zhang L. Both infiltrating regulatory T cells and insufficient antigen presentation are involved in long-term cardiac xenograft survival. J Immunol. 2007;179(3):1542-8. PMID: 17641020 https://doi.org/10.4049/jimmu-nol.179.3.1542
13. Chen W, Ford MS, Young KJ, Zhang L. Infusion of in vitro-generated DN T regulatory cells induces permanent cardiac allograft survival in mice. Transplant Proc. 2003;35(7):2479-80. PMID: 14611991 https://doi. org/10.1016/j. transproceed.2003.08.030
14. Young KJ, DuTemple B, Phillips MJ,
Светлана Валерьевна Зыблева
Сергей Леонидович Зыблев
Svetlana V. Zyblev
Sergey L. Zyblev
Статья поступила: 19.11.2019 Статья принята в печать: 3.12.2019
ACTUAL ISSUES OF TRANSPLANTATION
Zhang L. Inhibition of graft-versus-host disease by double-negative regulatory T cells. J Immunol. 2003;171(1):134-41. PMID: 12816991 https://doi. org/10.4049/jimmunol.171.1.134
15. McIver Z, Serio B, Dunbar A, O'Keefe CL, Powers J, Wlodarski M, et al. Double-negative regulatory T cells induce allotolerance when expanded after allogeneic haematopoietic stem cell transplantation. Br J Haematol. 2008;141(2):170-8. PMID: 18318770 https://doi.org/10.1111/j.1365-2141
16. Young KJ, Kay LS, Phillips MJ, Zhang L. Antitumor activity mediated by double-negative T cells. Cancer Res. 2003;63(22):8014-21. PMID: 14633734.
17. Sakaguchi S, Yamaguchi T, Nomura T, Ono M. Regulatory T cells and immune tolerance. Cell. 2008;133(5):775-787. PMID: 18510923 https://doi. org/10.1016/j.cell.2008.05.009
18. Chen W, Ford MS, Young KJ, Zhang L. The role and mechanisms of double negative regulatory T cells in the suppression of immune responses. Cell
Information about authors
Mol Immunol. 2004;1(5):328-35. PMID: 16285891.
19. Ford McIntyre MS1, Gao JF, Li X, Naeini BM, Zhang L. Consequences of double negative regulatory T cell and antigen presenting cell interaction on immune response suppression. Int Immunopharmacol. 2011;11(5):597— 603. https://doi.org/10.1016/j. intimp.2010.11.015
20. Cantaluppi V, Dellepiane S, Tamag-none M, Medica D, Figliolini F, Messina M, et al. Neutrophil gelatinase associated lipocalin is an early and accurate biomarker of graft function and tissue regeneration in kidney transplantation from extended criteria donors. PLoS One. 2015;10(6):e0129279. PMID: 26125566 https://doi.org/10.1371/jour-nal.pone.0129279
21. Massart A, Ghisdal L, Abramowicz M, Abramowicz D. Operational tolerance in kidney transplantation and associated biomarkers. Clin Exp Immunol. 2017;189(2):138 —157. PMID: 28449211 https://doi.org/10.1111/cei.12981
Информация об авторах
канд. мед. наук, врач-иммунолог, ученый секретарь ГУ «Республиканский научно-практический центр радиационной медицины и экологии человека», ЬМрБ://огаЛ о^/0000-0003-3061-5324
канд. мед. наук, доцент, врач-хирург хирургического отделения (трансплантации, реконструктивной и эндокринной хирургии) ГУ «Республиканский научно-практический центр радиационной медицины и экологии человека», ЬМрз://огм4 о^/0000-0002-0968-6630
Cand. Med. Sci., Immunologist, Academic Secretary, Republican Research Center for Radiation Medicine and Human Ecology, https://orcid.org/0000-0003-3061-5324
Cand. Med. Sci., Associate Professor, Surgeon, Transplantation, Endocrine and Reconstructive Surgery Department, Republican Research Center for Radiation Medicine and Human Ecology, https://orcid.org/0000-0002-0968-6630
Received: November 19,2019 Accepted for publication: December 3,2019
