CC BY
88
УДК 678.01;544.23.02 ИССЛЕДОВАНИЕ СТРУКТУРЫ МАКРОМОЛЕКУЛ ЛИГНИНОВ*
© А.П. Карманов , В.Ю. Беляев, Л. С. Кочева
Институт химии Коми научного центра УрО РАН, ул. Первомайская, 48, Сыктывкар, 167982 (Россия). E-mail: apk0948@yandex.ru
Проведено исследование гидродинамических свойств разбавленных растворов лигнина, выделенного из древесины рябины Sorbus aucuparia и яблони Malus domestica borkh. Рассмотрена взаимосвязь гидродинамических и скейлинговых характеристик полимеров. Полученные данные свидетельствуют о том, что макромолекулы лигнинов имеют топологическую структуру типа звезда с линейными лучами.
Ключевые слова: лигнин, гидродинамические свойства, скейлинг, конформация, топология макромолекул
Введение
Лигнин - весьма распространенный биополимер, точнее группа родственных биополимеров, которые синтезируются высшими растениями. В состав грибов, лишайников и водорослей лигнины не входят. Лигнины характеризуются чрезвычайной сложностью химической структуры, неоднородностью по мономерному составу и типам межмономерных связей, что затрудняет расшифровку строения макромолекулы [1]. В отличие от целлюлоз, структура которых одинакова для всех растений, идентичных лигнинов в природе не существует. Одним из ключевых факторов, определяющих строение и свойства лигнина, является его филогенетическая предыстория как объекта биологической природы. Считается, что лигнины покрытосеменных древесных растений имеют более сложную химическую структуру, чем лигнины голосеменных растений.
Топологическая структура макромолекул лигнинов различных классов изучена еще недостаточно глубоко, особенно это относится к лигнинам покрытосеменных растений. Одной из наиболее известных и признанных концепций считается теория о сетчатом строении лигнинов, согласно которой все лигнины, вне зависимости от биологической предыстории, являются пространственно-сшитыми системами микрогелево-го типа. Однако эта концепция постепенно теряет своих сторонников, поскольку накапливаются новые данные о структуре макромолекул лигнина, которые лучше интерпретируются другими воззрениями. В частности, в работе [2] утверждается, что макромолекула лигнина из резуховидки Таля (Arabidopsis thaliana (L.) Heynh.) имеет линейную структуру, построенную в основном из монолигнолов сирингильного типа. Аналогичный вывод сделан по результатам изучения лигнинов из соломы злаков [3]. С другой стороны, по данным Н.И. Афанасьева [4], лигнины ели характеризуются как хаотически разветвленные биополимеры, лигнины осины и березы [5] - как звездообразные биополимеры. Полученные в последние годы данные позволили выдвинуть новую гипотезу [6] - о существовании различных универсальных классов лигнинов в соответствии с биологической систематикой, в этой гипотизе, в отличие от общепринятых представлений, постулируется многообразие топологических структур.
В данной работе представлены результаты исследования лигнинов, выделенных из древесины лиственных пород: рябины обыкновенной Sorbus aucuparia и яблони Malus domestica borkh. - типичных представителей класса двудольных растений порядка розоцветные Rosales семейства розовые Rosaceae. Основная задача состояла в изучении гидродинамических и конформационных свойств разбавленных растворов лигни-нов указанных биополимеров с целью установления топологической структуры их макромолекул.
* Статья рекомендована к публикации оргкомитетом научно-практической конференции, посвященной 10-летию создания учебно-научного центра «Физико-химическая биология» в Республике Коми.
Автор, с которым следует вести переписку.
Экспериментальная часть
Объекты исследования - лигнины вторичной ксилемы рябины Sorbus aucuparia и яблони Malus domestica borkh. Исходным сырьем для выделения лигнина рябины была выбрана стволовая часть 20-летнего растения, произраставшего в умеренной климатической зоне (Максимовский стационар Института биологии Коми НЦ УрО РАН, Сыктывкар). Сырьем для выделения лигнина яблони послужило дерево возрастом 23 года (Ботанический сад Института биологии Коми НЦ УрО РАН). Содержание лигнина в древесине рябины -20,3%, в древесине яблони - 22,7% (по методу Комарова). Препараты лигнинов выделяли путем обработки в течение 2 ч водным диоксаном в присутствии НС1 (0,7%) при температуре кипения. Выход ЬБ -20%, ЬМ -25% от лигнина (по методу Комарова) в исходном сырье. Химическая характеристика образцов выделенных лигнинов представлена в таблице 1.
Фракционирование лигнинов проводили методом дробного осаждения в системе диоксан - бензол, где диоксан являлся растворителем, бензол - осадителем. Для исследования гидродинамических свойств лигнина были использованы методы скоростной седиментации, поступательной диффузии и вискозиметрии. Растворитель - диметилформамид (ДМФА), Т=298К, ^о= 0,78-10-2 П. Концентрация полимеров при измерениях отвечала критерию С[л]<1. Коэффициенты скоростной седиментации и поступательной диффузии измеряли на аналитической ультрацентрифуге М0М-3180 в двухсекторной полиамидной кювете с образованием искусственной границы. Вязкость растворителя и растворов измеряли в капиллярном вискозиметре Оствальда при температуре 25 °С.
Характеристическую вязкость [л] фракций полимера определяли линейной экстраполяцией зависимостей приведенной вязкости "Лг к бесконечному разбавлению. Для расчетов [л] использовали экспериментально установленные значения удельной вязкости и уравнение Хаггинса:
Луд./С=[л]с +кх[Л]с2 С+..., (1)
где С - массовая концентрация, кх- коэффициент Хаггинса, [л]с= ["Л]р0, Р0 - плотность растворителя.
На рисунке 1 представлены результаты экстраполяции приведенной вязкости [л]уд./С к нулевой концентрации в рамках уравнения Хаггинса для образца ЬМ.
Явление так называемой тепловой диффузии молекул в растворах можно применять для оценки коэффициента поступательного трения макромолекул полимеров. В свою очередь знание коэффициентов поступательной диффузии для набора узких фракций образца полимера и использование их в рамках современной теории гидродинамики макромолекул позволяют установить размеры и форму макромолекул, т.е. их конформацию.
В диффузионных измерениях с оптическим методом регистрации распределения макромолекул дс/дх по смещениям х в области границы раствор-растворитель определяется распределение 5(х) - диффузионная кривая
5(х) ~ дп/дх =^п/й?с)дс/дх,
где ^пМс) - инкремент показателя преломления системы полимер-растворитель. ^п^с)= Ишс^0(п-п0)/с, где п - показатель преломления раствора с концентрацией с и п0 - показатель преломления растворителя.
Коэффициент диффузии Б находится из экспериментальных данных (рис. 2) по формуле
(4лБ1)0,5= Б/Н,
где Б - площадь под контуром интерференционной полосы; Н - максимальная ордината.
Процедура нахождения коэффициентов Б состоит из следующих стадий: определение максимальной ординаты диффузионной кривой Н, мм; измерение площади Б под кривой, мм2; установление величины так называемого интеграла вероятности Ф(х) и аргумента х; построение зависимости дисперсии диффузионной границы (Б/Н)2 от 1. Наклон этой зависимости используется для нахождения искомого значения коэффициента диффузии: Б=(1/2)д (Б/Н)2/д1 На рисунках 3а и 3б представлены временные зависимости дисперсии диффузионной границы для фракций исследуемых препаратов.
Таблица 1. Характеристика образцов лигнинов (%)
Образец лигнина Обозначение С* H* О ОСН3 СООН
Диоксанлигнин рябины Sorbus aucuparia LS 57,7 5,9 36,4 21,2 3,3
Диоксанлигнин яблони Malus domestica borkh. LM 59,9 5,5 34,6 19,5 1,5
Ошибка определения углерода составляет +0,60%, водорода - +0,25%.
Рис. 1. Зависимость приведенной вязкости от Рис. 2. Диффузионные кривые фракции №1 образца
концентрации раствора для фракций образца ЬМ ЬБ
а б
Рис. 3. Временная зависимость дисперсии (Б/Н)2 для ряда фракций ЬМ (а) и ЬБ (б)
Для оценки коэффициента поступательного трения макромолекул наиболее часто используется метод скоростной седиментации, который в комбинации с диффузионным методом позволяет определить молекулярную массу полимера по уравнению Сведберга
Мбв=БЯТ/(1- уро)Б.
На рисунке 4 представлены седиментационные кривые, полученные с помощью ультрацентрифуги в двухсекторной полиамидной кювете с образованием искусственной границы при 48000 об/мин для одной из фракций образца ЬБ.
На рисунке 5 представлены зависимости Д1пх от М для высокомолекулярных фракций ЬБ и ЬМ. Коэффициенты седиментации рассчитаны согласно соотношению
S= (Діпх/Д^ю
где ю = 2ли - частота вращения ротора центрифуги, х - координата максимума седиментограммы.
Рис. 4. Седиментационные кривые фракции №1 образца ЬБ в ДМФА
(А!пх х103)
а б
Рис. 5. Зависимость А1пх (х - координата максимума границы) от времени седиментации для фракций ЬМ (а) и ЬБ (б)
При определении ММ низкомолекулярных фракций, в отличие от высокомолекулярных, вместо соотношения Сведберга использовали уравнение
МСл=Л03([Б]3[П]),
где [Б]=^о0/Т; Л0 - гидродинамический инвариант, определенный по результатам исследований высокомолекулярных фракций методом седиментационно-диффузионного анализа: Л0=^0Б(Мзс[^])1/3/Т.
Обсуждение результатов
В таблицах 2 и 3 приведены экспериментальные данные о гидродинамических характеристиках фракционированных образцов ЬБ и ЬМ соответственно. Величина [^] нефракционированного образца ЬБ составляет 7,8 см3/г, хотя в его состав входят фракции с вязкостью, отличающейся более чем в 3 раза. Максимальное значение характеристической вязкости наблюдается для фракции №1 образца ЬБ - 12,9 см3/г, а для другого образца ЬМ - лишь 10,5 см3/г, хотя его Мж выше. Коэффициенты диффузии существенно и закономерно увеличиваются с ростом порядкового номера фракций, что отражает уменьшение гидродинамических размеров макромолекул. Как видно из представленных результатов, по размеру (гидродинамическому радиусу) макромолекулы ЬБ попадают в нанометровый диапазон и варьируют в интервале 1,2—3,7 нм. Результаты оценки радиусов гидродинамически эквивалентной сферы, приведенные в таблицах 2 и 3, показывают, что размеры макромолекул изучаемых полимеров ЬБ и ЬМ в первом приближении одинаковы и заметно меньше, чем для линейных полимеров равной молекулярной массы [7].
Параметры Хаггинса кх, как видно из таблиц 2 и 3, непостоянны. Для образца ЬБ они имеют тенденцию к возрастанию с уменьшением молекулярной массы, для образца ЬМ зависимость кх от ММ носит экстремальный характер: максимальное значение кх наблюдается для фракции №5, оно составляет 1,73. Однако, несмотря на неодинаковость значений кх по фракциям, значения фрактальной размерности, вычисленные по этим данным для каждой из отдельных фракций, практически совпадают (табл. 2). Это подтверждает объективный характер флуктуаций коэффициентов Хаггинса, которые обусловлены сложными процессами взаимодействий полимер - растворитель и полимер - полимер.
Таблица 2. Гидродинамические характеристики фракций образца ЬБ в ДМФА
№ фракции М, см3/г Дх107, см2/с £х1013, с Мжх10 3 МВтх10 3 Лх1010, эргх-К-1хмоль'1/3 кх гн, нм
1 12,9 7,5 2,11 21,2 20,4 2,8 0,80 3,7 1,9
2 11,4 8,6 1,78 15,6 15,3 2,7 0,91 3,3 1,9
3 10,1 9,4 1,66 13,3 13,2 2,7 0,93 3,0 1,8
4 8,0 10,9 1,49 10,3 10,7 2,7 0,87 2,6 1,8
5 7,6 11,7 1,39 8,9 9,1 2,7 0,95 2,4 1,8
6 6,8 12,3 - - 8,8 - 1,05 2,3 1,8
7 5,6 13,7 - - 7,7 - 1,12 2,0 1,8
8 4,7 16,0 - - 5,8 - 0,98 1,8 1,8
9 3,5 23,3 - - 2,5 - 1,23 1,2 1,7
10* 7,8 12,1 - - 7,9 - 0,88 2,3 1,8
* Нефракционированный образец.
Таблица 3. Гидродинамические характеристики фракций образца ЬМ в ДМФА
№ фракции [т], см3/г БхЮ1, см2/с £х1013, с М8Вх10 3 МВт|х10 3 А0х1010 эрг град-1-моль'1/3 кх гн, нм
1 10,5 6,9 2,73 28,1 23,2 2,6 0,82 4,0
2 8,7 6,5 2,45 26,7 33,5 2,3 1,47 4,3
3 7,7 7,8 2,23 20,3 21,9 2,4 1,30 3,6
4 7,1 9,3 1,72 13,1 14,0 2,4 1,11 3,0
5 5,5 11,6 1,59 9,7 9,3 2,5 1,73 2,4
6 5,4 12,9 1,41 7,8 6,9 2,5 1,06 2,2
7 4,9 15,6 - - 4,3 - 1,15 1,8
8 3,8 18,2 - - 3,5 - 1,41 1,5
9* 6,7 9,0 - - 16,4 - 1,19 3,1
*Исходный образец нефракционированный.
Форма макромолекул полимера в растворе может быть установлена путем построения корреляционных соотношений между [л], коэффициентами диффузии Д седиментации £ и молекулярной массой М. Зависимость между этими величинами выражается степенными соотношениями типа Марка-Куна-Хаувинка (М-К-Х):
[л]=клм3, Б =К3Мс, Б =КсМь.
На рисунках 6 и 7 представлены зависимости ^[л], и 1^ от 1gMSD , которые можно аппроксимировать уравнениями прямых. Значения скейлинговых параметров а, Ь и с представлены в таблице 4. Стандартные ошибки (МНК) определения параметров М-К-Х для исследованных препаратов лигнина относительно малы, что свидетельствует о корректности линейной аппроксимации и указывает на однородность фракций полимеров по топологической структуре.
|д[т]
Рис. 6. Зависимость характеристической вязкости от молекулярной массы 1gMSD для образца ЬБ (1) и ЬМ (2)
igD+7
igS+13
ig Ms,
б
Рис. 7. Зависимости М-К-Х по данным измерений коэффициентов поступательной диффузии (а) и коэффициентов седиментации (б) для образцов ЬБ (1) и ЬМ (2)
а
Таблица 4. Параметры уравнения М-К-Х для образцов LS и LM в ДМФА
Образец лигнина a b c Кл, см3/г KD, см2/с Ks , с
LS 0,65+0,06 -0,52+0,02 0,47+0,02 1,90x10-4 1,4x10-4 1,8x10-15
LM 0,48+0,06 -0,51+0,0 0,48+0,02 8,2x10-4 1,3x10-4 1,8x10-15
Сравнение скейлинговых параметров в явлениях поступательного трения, оцениваемое по диффузионным и седиментационным экспериментам, показывает, что в рамках экспериментальных погрешностей оба образца совершенно одинаковы. Некоторые отличия по величине а объясняются, на наш взгляд, экспериментальными трудностями, имевшими место при измерениях характеристической вязкости высокомолекулярных фракций образца ЬМ (рис. 1).
Таким образом, гидродинамическое поведение образцов ЬБ и ЬМ характеризуются следующими уравнениями М-К-Х:
LS LM
[n]=1,9x 10-4M0,65 [n]=8,2x 10-4M0,48
S0 =1,8x 10-15M0,47 S0 =1,8x 10-15Ma48
Dо =і,4xі0-4M-0,52 Dо = і,3xі0-4M-о,51
Следует отметить, что для лигнина из растений семейства березовые (Betula nana и Betula verrucosa) были найдены аналогичные скейлинговые параметры: а=0,бі-0,б5, b=-0,53^-0,54, c=0,47-0,46 [5, 8]. В отличие от этого, для хвойных лигнинов семейства сосновые, по данным Д. Горинга [9], О. Соколова с сотрудниками [і0], Н. Афанасьева [4], установлены следующие значения параметров М-К-Х: а=0,25+0,1, b=-0,38+0,05, c=0,6+0,05. В соответствии с классическими воззрениями физикохимии полимеров это указывает на хаотически разветвленный тип топологии макромолекул хвойных лигнинов. Итак, скейлинговые параметры свидетельствуют о том, что лигнины лиственных пород древесины существенно отличаются от лигнинов хвойной древесины, соответственно возникает вопрос о топологической структуре макромолекул различных классов лиственных лигнинов, в данном случае на примере лигнинов, выделенных из древесных растений семейства розовые Rosaceae.
Гибкоцепные линейные макромолекулы в зависимости от термодинамического качества растворителя, числа мономерных звеньев и размера сегмента Куна могут принимать такие конформации, как непротекае-мый гауссов клубок, набухший непротекаемый клубок, компактная глобула и протекаемый клубок. Разветвленные полимеры также образуют непротекаемые клубки, однако статистика распределения мономерных звеньев для этих структур отличается от гауссовой, поскольку макромолекулы указанных типов образуют более компактные клубки, чем макромолекулы простых линейных полимеров.
В данном случае значения параметров М-К-Х, характеризующих поступательное трение макромолекул, соответствуют конформации непротекаемого гауссового клубка, т.е. гидродинамическое поведение макромолекул ЬБ и ЬМ аналогично поведению линейных макромолекул в разбавленных растворах.
Значит ли это, что лигнины ЬБ и ЬМ относятся к линейным полимерам? Безусловно, нет, о чем свидетельствуют значения гидродинамического инварианта Цветкова-Кленина - Ао, которые существенно отличаются от типичных значений для линейных полимеров. Параметр Ло представляет собой квинтэссенцию гидродинамических свойств высокомолекулярных соединений. Для синтетических гибкоцепных и умеренно жесткоцепных полимеров Ло обычно составляет величину (3,2+0,2) х10-10 эргхК^моль-13, Жесткоцепные полимеры характеризуются средним значением инварианта Цветкова-Кленина Ло=(3,7+0,4)х10-10 эргхК-1хмоль-1/3 [11]. Для лигнинных полимеров, в отличие от типичных синтетических, инвариант Ло - параметр изменчивый и зависит от ботанического происхождения лигнина. По имеющимся на настоящий момент данным наибольшими значениями Ао характеризуются лигнины травянистых растений семейства злаковые - 3,2х10-10 эргхК-1хмоль-1/3, что находится в полном соответствии с линейной топологией макромолекул лигнинов данного ботанического вида растений. Как видно из таблиц 2 и 3, инвариант Цветкова-Кленина для препарата ЬБ равен 2,7х10-10 эргхК-1хмоль-1/3 и для препарата ЬМ - 2,5 х10-10 эргхК-1хмоль1/3. Низкие - менее 3,0х10-10 эргхК-1моль-1/3 - значения гидродинамического инварианта обусловлены, без сомнения [12], разветвленностью макромолекул полимеров. Поэтому можно сделать вывод о том, что лигнины яблони и рябины относятся к разветвленным полимерам, что подтверждается и относительно невысокими значениями характеристической вязкости. Как правило, линейные полимеры имеют вязкость выше, чем наблюдаемая в данной работе. Еще один признак разветвленности макромолекул рассматриваемых полимеров - непостоянство значений, как было отмечено выше, параметров Хаггинса. В пользу этого предположения свидетельствуют результаты исследования разветвленных полимеров [13], для которых установлена сильная вариабельность значений кх; в то же время типичные значения коэффициентов Хаггинса для полимеров линейного строения составляют ~0,5 для растворов в ©-растворителях и 0,25 +0,05 - в хороших растворителях.
Таким образом, комплекс физико-химических свойств, обнаруженный для лигнинов ЬБ и ЬМ (табл. 2-4), указывает на то, что топология этих биополимеров не относится ни к классически линейному типу, ни к хаотически разветвленному. Вместе с тем отдельные признаки, характерные для линейной топологии, существуют, в частности это значения параметров М-К-Х; другие результаты свидетельствуют о разветвленности лигнинных полимеров ЬБ и ЬМ. Двойственность гидродинамического поведения исследуемых лигнинов позволяет выдвинуть предположение о звездообразной топологической структуре макромолекул этих полимеров. Еще в 1948 г. Флори теоретически показал [14], что для звездообразных макромолекул с функциональностью меньше 8 значение параметра а совпадает с величиной а для линейных макромолекул, что наблюдается и в нашем случае. Для звездообразного полистирола экспериментально было установлено постоянство этого параметра даже в растворителях, отличных от ©-растворителя.
Предложенная нами гипотеза подтверждается результатами проведенных ранее работ [15, 16], в которых были исследованы гидродинамические свойства лигнина, выделенного из древесины робинии ЯоЫта рБеМоасааа и осины. Лигнин робинии характеризовался следующими уравнениями М-К-Х:
[л]=0,83х10-4М0,72 £0 =1,97х10-15М0,48 Бо = 1,25х10~4М-0,52
Согласно [15] макромолекулы лигнина робинии представляют собой тетрафункциональные звезды, гидродинамические и конформационные свойства которых определяются линейной топологией ветвей и наличием центра роста ветвей - узла разветвления. Аналогичные конформационные свойства установлены для лигнина из осины. Вопрос о природе центра звезды остается открытым, хотя наиболее вероятно, что таким центром может быть фенилпропановая единица (ФПЕ), при этом ветви могут отходить как от алифатической части ФПЕ (Саи Ср-атомы), так и от ароматического кольца (Сь С4 и С5).
Таким образом, проведено исследование гидродинамических свойств природных лигнинов, выделенных из древесины рябины обыкновенной £отЬш аысырапа и яблони Ма1ш domestica Ьвгкк. На основании анализа гидродинамических, скейлинговых и конформационных свойств лигнинов из указанных древесных растений, а
также ранее изученных лигнинов лиственных древесных пород обнаружена общность в структурной организации лигнинов гваяцилсирингильного типа на топологическом уровне и высказано предположение о возможности отнесения указанных биополимеров к классу звездообразных высокомолекулярных соединений.
Список литературы
1. Фенгел Д., Вегенер Г. Древесина: Химия. Ультраструктура. Реакции: пер. с англ. М., 1988. 512 с.
2. Lewis N.G., Davin L.B. Lignin primary structures and dirigent sites // Current opinion in biotechnology. 2005. V. 16. Pp. 407-415.
3. Кочева Л.С. Структурная организация и свойства лигнина и целлюлозы травянистых растений семейства злаковых: автореф. дис. ... д-ра хим. наук. Архангельск, 2008. 43 с.
4. Афанасьев Н.И. Структура макромолекул в растворах, на границах раздела фаз и поверхностно-активные свойства лигносульфонатов: автореф. дис. ... д-ра хим. наук. СПб., 1996. 41 с.
5. Карманов А.П., Беляев В.Ю., Марченко Т.А., Кочева Л.С., Монаков Ю.Б. Топологическая структура лигнина березы // Высокомол. соед. 2002. Т. 44(А). №2. С. 233-238.
6. Карманов А.П. Концепция топологической структуры лигнина // Физикохимия лигнина: матер. II межд. конф. Архангельск, 2007. С. 7-11.
7. Рафиков С.Р., Будтов В.П., Монаков Ю.Б. Введение в физикохимию растворов полимеров. М., 1978. 328 с.
8. Карманов А.П., Беляев В.Ю., Марченко Т.А. Топологическая структура природных лигнинов. I. Исследование гидродинамических свойств карликовой березы (Betula nana) // Химия и технология растительных веществ: тр. Коми научного центра УрО РАН Российской АН. Сыктывкар, 2003. №171. С. 32-39.
9. Rezanowich A., Yean W.Q., Goring D.A.I. Macromolecular properties of milled wood and dioxane lignins: sedimentation, diffussion, viscosity, refractive index and ultra violet absorption // Svensk Papperstidn. 1967. V. 66. Pp. 141-149.
10. Алексеев А.Д., Резников В.М., Богомолов Б.Д., Соколов О.М. Исследование гидродинамических свойств лигнина Бьеркмана // Химия древесины. 1971. №7. С. 31-36.
11. Цветков В.Н. Жесткоцепные полимерные молекулы. Л., 1986. 380 с.
12. Будтов В.П. Физическая химия растворов полимеров. СПб., 1992. 384 с.
13. Павлов Г.М., Корнеева Е.В., Мейер Е.В. Поступательное трение молекул дендримеров на основе по-ли(пропиленимина) // Журнал прикладной химии. 2000. Т. 73. Вып. 10. С. 1700-1704.
14. Твердохлебова И.И. Основные гидродинамические характеристики полимеров со звездной и гребнеобразной структурой макромолекул // Успехи химии. 1977. Т. 46. Вып. 7. C. 1279-1301.
15. Кузьмин Д. В. Исследование химической и топологической структуры лигнина древесины лиственницы и акации: автореф. дис. ... канд. хим. наук. Архангельск, 2004. 20 с.
16. Боголицын К.Г., Лунин В.В., Косяков Д.С., Карманов А.П., Скребец Т.Э., Попова Н.Р., Малков А.В., Горбова Н.С., Пряхин А.Н., Шкаев А.Н., Иванченко Н. Л. Физическая химия лигнина. Архангельск, 2009. 489 с.
Поступило в редакцию 20 ноября 2009 г.
