CC BY
20
Исследование микробного фона слизистых оболочек глаз молодняка КРС
В А. Ермолаев, д.в.н., профессор, А.В. Сапожников, к.в.н., А.В. Загумённов, аспирант; А.Д. Шишова, соискатель; ГА.Юдич, соискатель, ФБГОУ ВО Ульяновский ГАУ
Исследование слизистых оболочек животных, особенно молодняка, имеет большое клиническое значение при оценке их общего состояния. Организм животных постоянно контактирует с окружающей средой и, следовательно, сталкивается с огромным количеством бактерий, способных вызвать различные инфекционные заболевания. В нормальном состоянии слизистая оболочка глаза КРС имеет бледно-розовый оттенок. Веки и конъюнктива поддерживают персистенцию популяции микроорганизмов, не вызывающих болезнь. При изменении качественного и количественного состава микрофлоры возникает воспаление слизистой оболочки глаза или конъюнктивит. Глаза у коров являются наиболее чувствительными. При снижении резистентности организма у молодняка быстро развиваются заболевания глаз [1 — 3]. При отсутствии лечения животное быстро теряет зрение, что в свою очередь напрямую сказывается на его жизнедеятельности. Заболевания глаз у КРС могут стать причинами снижения продуктивности, иммунитета и заражения другими инфекционными заболеваниями, которые могут довольно быстро распространиться на большую часть поголовья и принести хозяйству убытки [4 — 5].
Целью исследования стало определение микробного фона слизистых оболочек глаз молодняка КРС и дальнейшее изучение антибиотикочувствитель-ности выделенных микроорганизмов.
Материал и методы исследования. Исследование проводили на базе ООО «Мегаферма «Октябрьский» Ульяновской области. Материал, полученный в ходе осмотра животных, изучали на кафедре микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Ульяновского ГАУ с 10 сентября по 5 октября 2018 г. Объектами исследования стали слизистые оболочки глаз молодняка 36 КРС. Для проведения исследования в лабораторных условиях нами было использовано оборудование: термостат ТС-80М-2, автоклав ГК-100-3, шкаф сушильно-стерилизационный ШСС-80п УХЛ 42, холодильник бытовой, дистиллятор, микроскоп «Биомед-6» с видеофотонасадкой, набор для окраски по Грамму, электронные весы. В ходе исследования нами были использованы специальные питательные среды: ГРМ-агар, ГРМ-бульон, агар Эндо-ГРМ, агар Клиглера-ГРМ, среда Сим-монса, мясопептонный солевой агар 7-процентный, среды Гисса-ГРМ с лактозой, глюкозой, маннитом, мальтозой, сахарозой, дульцитом, сорбитом, ксилозой, арабинозой, рамнозой. Для определения
антибиотикочувствительности были использоваы диски с антибиотиками — ципрофлоксацином, ампициллином, гентамицином, тетрациклином, левомицетином, эритромицином. Для проведения боксовых работ использовали комплект посуды, включающий колбы мерные, пипетки, чашки Петри, цилиндры мерные, флаконы различного объёма, пробирки, стёкла покровные, стёкла предметные, шпатели и др.
Результаты исследования. Для исследования микробного фона слизистых оболочек глаз КРС были взяты смывы у 36 животных. Стерильными ватными палочками производили забор материала и затем опускали палочки обратно в пробирку с физиологическим раствором (рис. 1).
Рис. 1 - Смывы со слизистых оболочек глаз КРС, физиологический раствор, время транспортировки 4 час.
Полученный материал высевали на дифференциально-диагностическую среду ЭНДО, предназначенную для выделения и дифференциации бактерий семейства Enterobacteriaceae и солевой мясопептонный агар (содержание соли 7%), предназначенный для выделения бактерий рода Staphylococcus (определённых видов микроорганизмов и подавления роста сопутствующих) [6, 7]. Далее 1 мл материала высевали на вышеуказанные питательные среды специального назначения и стерильным шпателем распределяли по поверхности агара. После подсыхания засеянные чашки помещали в термостат при температуре 37±1°С на 24 час.
По истечении указанного времени на чашках наблюдали обильный рост колоний (табл. 1). Одиночные колонии отбирали для окраски мазков по Граму и их дальнейшего микроскопирования.
1. Рост культур в пробах с описанием колоний
- мелкие жёлтые глянцевые колонии с ровными краями, 7-процентный солевой мясопептонный агар, 37±1°С; 18-24 час.
- ярко-жёлтые матовые колонии с углублённым центром, 7-процентный солевой мясопептонный агар, 37±1°С; 18-24 час.
- большие матовые тёмно-бежевые колонии с неровными краями, 7-процентный солевой мясопептон-ный агар, 37±1°С; 18-24 час.
- большая глянцевая, выпуклая колония бежево цвета, края ровные, 7-процентный солевой мясопептонный агар, 37±1°С; 18-24 час.
- большие матовые тёмно-бежевые колонии с неровными краями, 7-процентный солевой мясопептон-ный агар, 37±1°С; 18-24 час.
- мелкие белые глянцевые колонии, 7-процентный солевой мясопептонный агар, 37±1°С; 18-24 час.
Для изучения морфологии выделенных микроорганизмов были отобраны одиночные, изолированные колонии, сделаны мазки и окрашены по Граму. Данный метод позволяет разделить все микроорганизмы на две группы: грамположи-тельные (гр+) и грамотрицательные (гр—). Всего было отобрано 18 различных колоний. В процессе микроскопирования окрашенных мазков нами
были обнаружены кокковые и палочковидные формы микроорганизмов (рис. 2 — 5).
Клетки были различной формы и размера: мелкие одиночные кокки; парные кокки (диплококки); кокки, составляющие цепочку (стрептококки); кокки в виде грозди винограда (стафилококки); хаотично расположенные палочковидные клетки различной длины — короткие и толстые, длинные и тонкие.
Рис. 2 - Микроскопическая картина бактериальных клеток культуры № 15; микроскоп «Биомед-6», увеличение 1000 крат
Рис. 4 - Микроскопическая картина бактериальных клеток культуры № 12; микроскоп «Биомед-6», увеличение 1000 крат
Рис. 3 - Микроскопическая картина бактериальных Рис. 5 - Микроскопическая картина бактериальных
клеток культуры № 9; микроскоп «Биомед-6», увеличение 1000 крат
клеток культуры № 3; микроскоп «Биомед-6», увеличение 1000 крат
Установив, что клетки в мазках выглядят однообразно, вторую половину отобранных колоний засевали в мясопептонный бульон и культивировали в течение 24 часов при температуре 37±1°С в условиях термостата. Через указанное время делали мазки с суточных культур и окрашивали их по Граму для подтверждения чистоты выделенных культур [5 — 7].
Для дальнейшего типирования нами были отобраны шесть культур, имеющих аналогичные морфологические и тинкториальные свойства. Далее были изучены биохимические свойства выделенных микроорганизмов. Результаты биохимических свойств представлены в таблице 2.
Обобщив полученные результаты, мы отнесли изучаемые культуры к родам:
2. Биохимические свойства изучаемых культур
Тест Культура, №
1 2 3 4 5 6
Ксилоза + - - - - +
Сахароза + + + + + +
Маннит + + + + + +
Лактоза + + + + + +
Мальтоза + + + + + +
Дульцит + - - + - -
Арабиноза + - + + + +
Сорбит + + + + + ±
Глюкоза + + + + + +
Рамноза + + + + + +
Образование индола
Использование цитрата + - - - - +
Подвижность + - - - - +
Образование Н2Б - + - - - -
Каталаза + + + + + +
Оксида + - + + + -
культура № 1 — род Serratia, мелкие грамотри-цательные палочки;
культура № 2 — род Staphylococcus, грамположи-тельные сферические клетки, располагаются одиночно или небольшими кучками в виде отдельных скоплений неправильной формы, напоминающих гроздь винограда;
культура № 3 — род Moraxella, грамотрицатель-ные кокки, расположенные попарно;
культура № 4 — род Micrococcus, мелкие грам-положительные кокки;
культура № 5 — род Klebsiella, грамотрицатель-ные прямые палочки с закруглёнными концами, располагающиеся попарно или одиночно;
культура № 6 — род Enterobacter, грамотрица-тельные палочкообразные бактерии.
В ходе исследовательской работы была изучены антибиотикочувствительность выделенных микроорганизмов. Результаты представлены в таблице 3.
По таблице видно, что культуры рода Serratia, Klebsiella резистентны к эритромицину. Род Klebsiella не чувствителен к ампициллину и тетрациклину. Род Staphylococcus чувствителен к гентамицину, тетрациклину, левомицетину, эритромицину и высокочувствителен к ампициллину. К антибиотику тетрациклину чувствительны роды Moraxella, Micrococcus, Enterobacter. Высокочувствительной оказалась культура рода Micrococcus к ципрофлок-сацину, гентамицину, левомицетину, эритромицину Культура рода Klebsiella была резистентна к ампициллину, тетрациклину, эритромицину [7, 8].
Литература
1. Сунагатуллин Ф.А. Шарафутдинов Д.А. Распространение и этиология конъюнктиво-кератита крупного рогатого скота в ОАО «Заволжье» Кайбицкого района РТ // Учёные записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. 2013. Т. 213. С. 273 — 276.
3. Результаты антибиотикочувствительности выделенных культур
Антибиотик Культу ра рода
Serratia Staphylococcus Moraxella Micrococcus Klebsiella Enterobacter
Ципрофлоксацин 26 21** 25*** 29*** 21** 17**
Ампициллин 14* 34*** 22** 12* - 28***
Гентамицин 16** 17** 23** У--*** 26 12* 18**
Тетрациклин 12* 19** 20** 21** - 18**
Левомицетин 23** 15** 12* 26*** 9* 21**
Эритромицин - 18** 18** 25 *** - 20**
Примечания:
«-» культура резистентна к данному антибиотику;
* культура слабо чувствительна к антибиотику;
** культура чувствительна к антибиотику;
***культура высокочувствительна к антибиотику
2. Арзуманян Е.А. Животноводство. М.: ВО, Агропромиздат, 2017. 205 с.
3. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии / Под ред. А.С. Быкова, А.А. Воробьева, В.В. Зверева. М.: Медицинское информационное агентство, 2008. 272 с.
4. Бородин А.Н. Ветеринарная микробиология и микология: учебник. СПб.: Лань, 2014. 624 с.
5. Василенко Е.Г. Профилактика болезней глаз у животных / Е.Г. Василенко, В.А. Черванев, П.А. Тарасенко [и др.]. Брянск.: Издательство Брянской ГСХА, 2010. 48 с.
6. Антал А., Благо Р., Булла Я. Выращивание молодняка крупного рогатого скота. М.: Агропромиздат, 2016. 185 с.
7. Борзова Л.Д. Ветеринарная микробиология и иммунология. Практикум: учебное пособие / Л.Д. Борзова, Н.Ю. Черникова, В.В. Якушев [и др.]. СПб.: Лань П, 2016. 368 с.
8. Валеева А.Н. Оперативные методы лечения болезней глаз у животных: методич. пособ. для аспирантов и студентов ветеринарных вузов и практикующих врачей. Казань, 2016. 87 с.
Сравнительная характеристика циотморфологических изменений при лимфаденопатиях собак
АВ.Григорьева, аспирантка, А.В. Савинков, д.в.н., ФГБОУ ВО Самарский ГАУ
Лимфомы — это группа онкологических заболеваний лимфатической ткани, первоначально внекостномозгового происхождения, развивающихся преимущественно в лимфатических узлах и в лимфоидных тканях паренхиматозных органов (селезёнка, печень, лёгкие), кишечника, кожи.
Лимфомы являются одной из наиболее распространённых неопластических патологий у собак. Встречаемость лимфом у собак составляет примерно 80% от всех заболеваний кроветворной системы. В большинстве случаев болезнь поражает животных среднего возраста (6 — 7 лет), хотя может возникать
и у более молодых особей. Предрасположенность к данному заболеванию была отмечена у таких пород как боксёр, шотландский терьер, бассет-хаунд, эрдельтерьер, чау-чау, немецкая овчарка, пудель, сенбернар, бульдог, бигль, ротвейлер и золотистый ретривер. Гендерные особенности лимфомы у собак не указываются [1 — 3].
Следует отметить, что нередко увеличение лимфоузлов у животного длительное время остаётся незамеченным владельцами или принимается ими за воспалительную реакцию, вследствие чего собака попадает на приём уже при сильной выраженности клинической картины или после долгого безрезультатного лечения. Причина этому в том, что лимфаденопатия (любое изменение лимфати-
