CC BY
58
УДК / UDC 638.178
ИССЛЕДОВАНИЕ МЕТОДОВ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ВОДНЫХ ЭКСТРАКТОВ ПРОПОЛИСА И ПРОПОЛИСНОЙ ВОДЫ
STUDY OF METHODS OF PREPARATION OF WATER EXTRACTS FROM PROPOLIS AND PROPOLIS WATER
Вахонина Е.А., кандидат сельскохозяйственных наук, старший научный
сотрудник
Vahonina E.A., Candidate of Agricultural Sciences, Senior Resercher ФГБНУ «Федеральный научный центр пчеловодства», Рыбное, Россия
Federal State Budgetary Scientific Institution "Federal Beekeeping Research Centre",
Rybnoe, Russia E-mail: [email protected]
Цель исследования - изучить технологию приготовления и биологическую активность водных экстрактов прополиса и прополисной воды из остатков прополиса после спиртовой экстракции. Исследования проведены в лаборатории ФГБНУ «ФНЦ пчеловодства». Объектом исследования служили: нативный прополис, остатки прополиса после спиртовой экстракции, водные экстракты прополиса, прополисная вода. Объект исследования - водные экстракты прополиса, прополисная вода, которые были получены методом мацерации (с нагреванием и без нагревания). Исследование биологической активности водных экстрактов прополиса и прополисной воды проводили по ГОСТ 28886-19, ТУ 9882-027-00669424-2015. Изучено влияние температуры, времени экстракции, степень измельчения сырья, перемешивание, на количество биологически активных соединений в водном экстракте прополиса. Изучены условия приготовления прополисной воды из остатков прополиса после спиртовой экстракции, содержание биологически активных соединений в прополисной воде. Прополисную воду хранили при t = 6 ± 2 °С, анализировали физико-химические показатели свежеприготовленной прополисной воды, через 10 дней и через 1 месяц хранения. Водный экстракт прополиса хранили t = 6 ± 2 °С, анализировали физико-химические показатели свежеприготовленного экстракта прополиса, 1 месяц хранения, полгода и год хранения. Изучены биологическая активность водных экстрактов прополиса и прополисной воды в процессе хранения. При исследовании разных методов экстрагирования прополиса пополнили базу данных содержания биологически активных веществ в прополисной воде и водных экстрактах прополиса. Прополисную воду можно получать из остатков прополиса после спиртовой экстракции, что улучшает степень переработки прополиса. Повышение температуры экстрагирования, увеличение времени экстракции увеличивает выход в раствор биологически активных соединений прополиса. Использование шунгитовой воды увеличивает сроки хранения водного экстракта прополиса. Водные экстракты прополиса, прополисная вода являются перспективными биологически активными продуктами.
Ключевые слова: прополис, водный экстракт прополиса, прополисная вода.
The purpose of the study was to investigate the technology of preparation and biological activity of aqueous extracts of propolis and propolis water from propolis residues after alcohol extraction. The studies were carried out in the laboratory of the
Federal State Budgetary Scientific Institution "Federal Research Beekeeping Centre". The object of the study was: native propolis, propolis residues after alcohol extraction, aqueous extracts of propolis, propolis water. Such objects of the study as aqueous extracts of propolis, propolis water were obtained by maceration (with and without heating). The study of the biological activity of aqueous extracts of propolis and propolis water was carried out according to GOST 28886-19, TU 9882-027-006694242015. The influence of temperature, extraction time, the degree of grinding of raw materials, mixing on the amount of biologically active compounds in the aqueous extract of propolis were studied. The conditions for the preparation of propolis water from propolis residues after alcohol extraction, the content of biologically active compounds in propolis water were also studied. Propolis water was stored at t = 6 ± 2 °C, the physicochemical parameters of freshly prepared propolis water were analyzed after 10 days and after 1 month of storage. The aqueous extract of propolis was stored at t = 6 ± 2°C, the physicochemical parameters of the freshly prepared propolis extract were analyzed after 1 month of storage, half a year and a year of storage. The biological activity of aqueous extracts of propolis and propolis water during storage was investigated. In the study of various methods of extracting propolis, the database of the content of biologically active substances in propolis water and aqueous extracts of propolis was replenished. Propolis water can be obtained from propolis residues after alcohol extraction, which improves the degree of processing of propolis. An increase in the extraction temperature, an increase in the extraction time increases the yield of biologically active propolis compounds into the solution. The use of shungite water increases the shelf life of the water extract of propolis. Aqueous extracts of propolis, propolis water are promising biologically active products. Key words: propolis, water extract of propolis, propolis water.
Введение. Экстракция является ключевым способом использования биологически активных веществ прополиса. Водно-спиртовые растворители являются наиболее эффективными, перспективно использовать масляные растворители и растворители глубокой эвтектики (НАДЕС). Экстракция ультразвуком увеличивает выход биологически активных компонентов [1].
Этанольные экстракты прополиса обладают более высокой антиоксидантной активностью и содержат большее количество флавоноидных соединений по сравнению с водными экстрактами [2].
Водные экстракты прополиса содержат флавоноиды, фенольные кислоты, такие как фенетиловый эфир кофейной кислоты, и сложные эфиры являются наиболее биологически активными соединениями. Водный экстракт прополиса можно использовать при остром и хроническом воспалении [3].
Водные и неводные экстракты прополиса различаются по составу, но все они обладают антиоксидантными свойствами. Экстракционная способность воды может быть увеличена за счет добавления сорастворителя (этиловый спирт, полиэтиленгликоль), который увеличивает как растворимость, так и проникновение соединений прополиса [4].
Способом получения водных экстрактов прополиса является субкритическая экстракция при высокой температуре, давлении и динамической скорости потока экстрагента. Субкритическая экстракция более полно извлекает из прополиса фенольные соединения, бензойные кислоты, ванилин, сакуранетин и другие биологичеки активные вещества [5].
Употребление спиртовых экстрактов ограничивает применение прополиса, так как он противопоказан при ряде заболеваний, у детей раннего возраста и
беременных женщин. В настоящее время одним из ключевых вопросов в области химии является разработка так называемых «зеленых» технологий, направленных на сохранение окружающей среды и снижение негативного влияния человека. В последнее время ведется разработка к природных глубинных эвтектических растворителей (НАДЭС). Интерес к НАДЭС возрастает в связи с их успешным применением для экстракции биоактивных метаболитов растений, в том числе нерастворимых в воде [6].
Водный экстракт Иранского коричневого прополиса уменьшает объём очага инсульта и активность маркеров оксидативного стресса в модели на мышах [7].
Водный экстракт прополиса может быть безопаснее для использования во время беременности, чем экстракт прополиса этанолом, показано в эксперименте на мышах. [8].
При совместном применение прополиса и его экстрактов с антибиотиками возникает синергическое действие этих препаратов. Биологически активные вещества прополиса предупреждают поражение почек, сердца, печени, мозга, репродуктивной системы [9].
Целью настоящего исследования являлось изучение условий водной экстракции прополиса. Влияние температуры, времени экстракции степень измельчения сырья, перемешивание, на количество биологически активных соединений в водном экстракте прополиса. Изучить условия приготовления прополисной воды из остатков прополиса после спиртовой экстракции, содержание биологически активных соединений в прополисной воде. Изучить сроки хранения водных экстрактов прополиса и прополисной воды.
Условия, материалы и методы. Исследования проводились в лаборатории ФГБНУ «ФНЦ пчеловодства». Объектом исследования служили: нативный прополис, остатки прополиса после спиртовой экстракции, водные экстракты прополиса, прополисная вода.
Объект исследования - водные экстракты прополиса, прополисная вода, которые были получены методом мацерации (с нагреванием и без нагревания).
Прополис охлаждали при t = -18 ± 2 °С в течение 2 часов, и измельчали на мельнице.
Получение водного экстракта при t = 20 ± 2 °С проводили на магнитной мешалке, а также при t = 93 ± 2 °С на водяной бане с использованием обратного холодильника (для сохранения летучих соединений). Соотношение порошка прополиса и воды 1 : 10. Время экстракции составило 2, 4, 6, 8 и 10 часов.
Получение прополисной воды проводили при t = 93 ± 2 °С на водяной бане с использованием обратного холодильника (для сохранения летучих соединений). Соотношение остатков прополиса после спиртовой экстракции и воды и 1 : 3. Время экстракции 4 часа.
Прополисную воду хранили при t = 6 ± 2 °С, анализировали физико-химические показатели свежеприготовленной прополисной воды, через 10 дней и через 1 месяц хранения.
Водный экстракт прополиса хранили t = 6 ± 2 °С, анализировали физико-химические показатели свежеприготовленного экстракта прополиса, 1 месяц хранения, полгода и год хранения.
Массовую долю механических примесей и массовую долю воска в прополисе определяли по ГОСТ 28886-19 [10].
Выход экстрактивных веществ (массовая доля сухих веществ) определяли методом высушивания до постоянной массы по ГОСТ 28886-19 [10]. Метод основан на высушивании навески водного экстракта прополиса до постоянной
массы при определенной температуре и расчете потери массы после высушивания по отношению к массе навески до высушивания.
Определение ненасыщенных соединений выполняли по ГОСТ 28886-19 [10]. Метод основан на определении времени окисления ненасыщенных соединений, входящих в состав прополиса, и выражается временем (в секундах), в течение которого происходит обесцвечивание раствора марганцовокислого калия.
Определение флавоноидных и других фенольных соединений выполняли методом фотометрии по ГОСТ 28886-19 (общие флавоноидные соединения) [10]. Принцип метода заключается в извлечении флавоноидных соединений и других фенольных соединений 96-градусным этиловым спиртом и последующем их количественном определении на фотоэлектроколориметре (ФЭК).
Определение водородного показателя (рН) выполняли по техническим условиям, показатель преломления - методом рефрактометрии [11]. ТУ 9882027-00669424-2015.
Результаты и обсуждение. Исследовали прополис по ГОСТ 28886-19. Массовая доля механических примесей в прополисе составила 19,05±2,26 %, что не превышает требования ГОСТ 28886-19 (20 %), содержание воска составило 16,0±1,79 % нормативное содержание по ГОСТ 28886-19 (25 %). Окисляемость прополиса составила 11,18±0,81 с, массовая доля флавоноидных соединений составила 35,1±1,22 % (Таблица 1).
Таблица 1 - Физико-химические показатели прополиса, для приготовления водных экстрактов по ГОСТ 28886-19, п=8_
М.д. механических примесей, % Массовая доля воска, % Окисляемость, с Массовая доля флавоноидных соединений,%
19,05±2,26 16,0±1,79 11,18±0,81 35,1±1,22
10,4-31,8 8,17-25,0 8,0-15,0 30,0-39,2
Массовая доля механических примесей остатков прополиса после спиртовой экстракции составила 63,16±0,87 %, массовая доля воска 26,98±0,91 %. Окисляемость остатков прополиса после спиртовой экстракции составила 8,75±0,9 с, что показывает достаточное количество биологически активных соединений в остатках прополиса после спиртовой экстракции. Массовая доля флавоноидных соединений составила 10,73±1,65 %, что в 3,5 раза меньше чем в исходном прополисе (таблица 2).
Таблица 2 - Физико-химические показатели остатков прополиса после спиртовой экстракции, п=8_
М.д. механических примесей, % Массовая доля воска, % Окисляемость, с Массовая доля флавоноидных соединений, %
М±m 63,16±0,87 26,98±0,91 8,75±0,9 10,73±1,65
59,53-67,31 24,19-30,22 4,5-13,0 3,92-18,45
Коэффициент рефракции от 1,3333 до 1,3378, в среднем 1,3354±0,0005. Окисляемость в водных растворах прополиса этой группы составила от 4,0 до 47,0 с, в среднем 13,13±5,01 с. Ненасыщенные соединения, в основном
свободные жирные кислоты относятся к продуктам обмена пчел. Большая часть этих кислот хорошо растворяется в воде (таблица 3).
Количество флавоноидных соединений прополисной воды составило от 0,229 до 0,75 %, в среднем 0,456±0,07 %.
Таблица 3 - Физико-химические показатели прополисной воды, п=8
Коэффициент рефракции Пд20 Массовая доля воска, % Массовая доля флавоноидных соединений, % Окисляемость, с
М±m 1,3354±0,0005 0,0081±0,002 0,456±0,07 13,125±5,01
1,3333-1,3378 0,0025-0,0175 0,229-0,75 4,0-47,0
Свежеприготовленная прополисная вода имеет показатель окисляемости 19,2±3,76 при хранении прополисной воды в течение 10 дней окисляемость составила 19,2±3,51. В процессе хранения прополисной воды в течение 30 дней окисляемость увеличилась от 19,2 ±3,76 с до 30,6±0,02. Значение показателя окисляемости больше 22,0 с говорит о снижении биологической активности продукта (таблица 4).
Определили количество флавоноидных соединений в свежеприготовленной прополисной воде, их количество составило 0,33±0,02 %. В процессе хранения в течение 10 дней и 30 дней количество флавоноидных соединений осталось на одном уровне 0,31±0,02 % и 0,32±0,02 % соответственно.
Таблица 4 - Физико-химические показатели прополисной воды при хранении
Окисляемость, с Массовая доля флавоноидных соединений,%
Свежеприготовленный Хранение 10 дней Хранение 1 месяц Свежеприготовленный Хранение 10 дней Хранение 1 месяц
М± 19,2±3,76 19,2±3,51 30,6±8,61 0,33±0,02 0,31±0,02 0,32± 0,02
6,0-27,0 7,0-26,0 9,0-60,0 0,26-0,38 0,26-0,36 0,270,390
Исследование времени экстракции водного прополиса
Способ 1. Образцы для исследования готовили следующим способом.
Экстрагировали прополис однократно, соотношение воды и прополиса (порошок) 1:10, на водяной бане, t=93 оС, 2 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч, 10 ч. Использовали обратный холодильник (для сохранения летучих соединений).
Получение водной вытяжки проводили: однократным извлечением и последовательным извлечением активных веществ из прополиса-порошка.
Количество воска во всех образцах составило от 0,1 до 0,12 %. Количество сухих веществ - от 0,34 до 0,54 %; коэффициент рефракции от 1,3345 до 1,335. Окисляемость в водных растворах прополиса этой группы составила от 0,4 до 2,4 с, в среднем 1,52 с (таблица 4).
Ненасыщенные соединения, в основном свободные жирные кислоты относятся к продуктам обмена пчел. Большая часть этих кислот хорошо растворяется в воде. С увеличением времени экстракции количество ненасыщенных соединений в водном растворе прополиса увеличилось, время
окисления при экстракции в течение 8 ч составило 0,6 с, в течение 10 ч - 0,4 с (таблица 5).
Количество флавоноидных соединений, извлеченных при данном виде экстракции, составило от 0,06 до 0,15 %, в среднем 0,12 %.
Водородный показатель (рН) соответствует активной реакции среды, водного раствора прополиса. В данных растворах его средняя величина составила 3,11. Средняя величина свободной кислотности составила 43,62±3,91.
Кислая реакция среды способствует сохранению биологически активных веществ.
Таблица 5 - Физико- химические показатели водного раствора прополиса, 2020г
№ образца, время экстракции Коли-чест-во воска, %; М.д. сухих веществ, % (высуши вание) М.д. влаги, % Коэффициент рефракции, ПД20 Окисляемость, с Массовая доля флавоно-идных соединений, по ГОСТ 28886-19,% рН Свободная кислотность
1 - 2 ч 0,11 0,36 99,64 1,335 2,2 0,06 3,302 30,1
2 - 4 ч 0,1 0,38 99,62 1,3345 2,4 0,11 3,066 43,0
3 - 6 ч 0,12 0,37 99,63 1,335 2,0 0,13 3,045 43,4
4 - 8 ч 0,12 0,34 99,66 1,335 0,6 0,12 3,04 47,6
5 - 10 ч 0,1 0,54 99,46 1,335 0,4 0,15 3,1 54,0
М±т 0,1± 0,004 0,398± 0,04 99,6± 0,04 1,3349± 0,00012 1,52± 0,42 0,114±0,015 3,11± 0,05 43,62± 3,91
Пределы колебаний 0,10,12 0,34-0,54 99,46 -99,66 1,33451,335 0,4-2,4 0,06±0,15 3,04± 3,302 30,1-54
Способ 2. Экстрагировали прополис однократно, соотношение воды и прополиса (порошок) 1:10, на магнитной мешалке, без нагревания, время экстракции: 2 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч, 10 ч.
Количество воска во всех образцах составило от 0,1 до 0,13 %. Количество сухих веществ - от 0,22 до 0,54 %; коэффициент рефракции - от 1,339 до 1,3345. Окисляемость в водных растворах прополиса этой группы составила от 0,6 до 4,0 с, в среднем 2,2±0,68 с. (таблица 6). Ненасыщенные соединения, в основном свободные жирные кислоты относятся к продуктам обмена пчел. Большая часть этих кислот хорошо растворяется в воде. С увеличением времени экстракции количество ненасыщенных соединений в водном растворе прополиса увеличилось, время окисления при экстракции в течение 8 ч составило 0,6 с, в течение 10 ч - 0,4 с.
Количество флавоноидных соединений, извлеченных при данном виде экстракции, составило от 0,01 до 0,1 %, в среднем 0,62 %.
Водородный показатель (рН) соответствует активной реакции среды, водного раствора прополиса. В данных растворах его средняя величина составила 3,26±0,0112, с колебанием от 3,23 до 3,28. Средняя величина свободной кислотности составила 16,36±1,04. Кислая реакция среды способствует сохранению биологически активных веществ.
Таблица 6 - Физико- химические показатели водного раствора прополиса, 2020
№ обра з-ца Колич ес-тво воска, %; М.д. сухих веществ, % (высушивание) М.д. влаги, % Коэффициент рефракции ПД20 Окис ляемо сть, с Массовая доля флавоно-идных соединений, по ГОСТ 28886090,% РН Свободная кислотность
1х 0,1 0,54 99,46 1,3345 2,8 0,05 3,225 14,0
2х 0,11 0,22 99,78 1,3339 4,0 0,06 3,244 14,2
3х 0,11 0,24 99,76 1,3339 3,0 0,1 3,27 16,8
4х 0,12 0,35 99,05 1,3339 0,6 0,01 3,272 17,2
5х 0,13 0,43 99,57 1,3339 0,6 0,09 3,288 19,6
М±т 0,114± 0,005 0,356± 0,06 99,52± 0,13 1,334± 0,00012 2,2± 0,68 0,62± 0,015 3,26± 0,0112 16,36± 1,04
Пределы колебаний 0,10,13 0,22-0,54 99,0599,78 1,33391,3345 0,64,0 0,01-0,1 3,233,28 14-19,6
Исследовали водные экстракты прополиса: хранение 1 месяц, полгода, 1 год, в холодильнике, 1=4-6 оС.
Исследование сроков хранения водных экстрактов прополиса.
Способ 1. Экстрагировали прополис однократно, соотношение воды и прополиса (порошок) 1:10, на водяной бане, при 1=93 оС, в течение 2 часов, использовали обратный холодильник (для сохранения летучих соединений).
Получение водной вытяжки проводили: однократным извлечением и последовательным извлечением активных веществ из прополиса-порошка.
Способ 2. Экстрагировали прополис однократно, соотношение воды и прополиса (порошок) 1:10, на магнитной мешалке, при 1=20 оС, в течение 2 часов.
Способ 3. Экстрагировали прополис однократно, соотношение воды (настоянной на шунгите) и прополиса (порошок) 1:10, на водяной бане, 1=93 оС, в течение 2 часов с использованием обратного холодильника (для сохранения летучих соединений).
Исследовали водные экстракты прополиса: хранение 1 месяц, полгода, 1 год, в холодильнике, 1=4-6 оС.
В течение месяца хранения физико-химические показатели водного экстракта прополиса, приготовленного разными способами изменились незначительно (таблица 7, рис. 1). Окисляемость водных экстрактов прополиса увеличилась от 1,8 с, 2,56 с и 1,96 с до 2,36 с, 2,82 с и 2,24 с соответственно (1, 2, 3 способ).
В течение полгода хранения окисляемость увеличилась до 2,8 (1 способ) и 2,3 с (3 способ) (таблица 7, рис. 1).
В течение года хранения водных растворов прополиса, окисляемость увеличилась до 3,0 с (1 способ), до 3,0 с(3 способ) с (таблица 7, рис. 1).
Содержание флавоноидных соединений после хранения в течение 1 месяца снизилось на 6,16 %, 6,72 % и 4,55 % (1,2, 3 способ); (Таблица 7, рис. 2).
Таблица 7 - Исследования сроков хранения водных экстрактов прополиса, приготовленных разными способами (М±т)_
Срок хранения экстрактов прополиса М.д. сухих веществ, % (высушивание) Окисляем ость, с Массовая доля флавоноидных соединений, по ГОСТ 28886090,% РН Свободная кислотность
Способ приготовления №1
Свежеприготовленный 0,46±0,08 1,8±0,13 0,26±0,05 3,73±0,09 22,36±2,71
1 месяц хранения 0,47±0,07 2,36±0,1 0,24±0,05 3,63±0,12 21,36±2,64
Хранение полгода 0,47±0,08 2,8±0,23 0,22±0,04 3,54±0,13 19,84±2,8
Хранение 1 год 0,46±0,09 3,0±0,19 0,21±0,04 3,4±0,12 24,06±3,26
Способ приготовления №2
Свежеприготовленный 0,37±0,05 2,56±0,29 0,134±0,03 4,37±0,18 11,9±2,21
1 месяц хранения 0,34±0,05 2,82±0,18 0,125±0,03 4,43±0.27 9,74±2,28
Хранение полгода 0,32±0,05 0,106±0,02 4,56±0,36 8,8±2,52
Хранение 1 год 0,3±0,05 0,1±0,02 4,66±0,3 10,96±2,96
Способ приготовления №3
Свежеприготовленный 0,37±0,08 1,96±0,16 0,22±0,04 3,78±0,03 19,24±2,66
1 месяц хранения 0,41±0,09 2,24±0,13 0,21±0,04 3,67±0,04 18,35±2,81
Хранение полгода 0,45±0,09 2,3±0,18 0,19±0,04 3,62±0,04 17,86±2,93
Хранение 1 год 0,46±0,1 2,96±0,17 0,182±0,04 3,44±0,03 22,08±1,96
3,5
0,5 0
свежеприготовленный 1 месяц 6 месяцев 1 год
Ф способ 1 И способ 2 А способ 3
Рисунок 1 - Изменение количества ненасыщенных соединений в водных растворах прополиса в зависимости от срока хранения
В течение полгода хранения содержание флавоноидных соединений снизилось на 15,39; 20,9 и 13,64 % (1,2, 3 способ); (Таблица 7, рис. 2).
В течение года хранения водных растворов прополиса содержание флавоноидных соединений уменьшилось на 19,23 % (1 способ), 25,38 % - 2 способ, холодного экстрагирования и на 17,28 % (3 способ); (Таблица 7, рис. 2).
Величина водородного показателя уменьшилась в процессе хранения от 3,73; 4,37 и 3,68 до 3,23; 3,76 и 3,44, соответственно, для разных способов приготовления.
Свободная кислотность уменьшилась при хранении в течение 1 года от 22,36; 11,9 и 19,24 до 24,06; 10,96 и 22,08, соответственно, для разных способов приготовления.
0,3
| 0,05
о ■о
то 0
свежеприготовленный 1 месяц 6 месяцев 1 год
Ф способ 1 Я способ 2 А способ 3
Рисунок 2 - Изменение количества флавоноидных соединений в водных растворах прополиса в зависимости от срока хранения
Выводы. Увеличение времени экстракции при t=93 оС водного раствора прополиса не влияет на количество сухих веществ, с увеличением времени экстракции возрастает содержание ненасыщенных соединений, показатель окисляемости составляет 2,2 с при экстракции 2 часа. При экстракции 10 часов при t=93 оС показатель окисляемости составляет 0,4 с. Количество флавоноидных соединений в водном экстракте прополиса при извлечении в течение 2 часов при t=93 оС составляет 0,06 %. С увеличением времени экстракции содержание флавоноидных соединений возрастает до 0,15 % при извлечении в течение 10 часов при t=93 оС.
Срок хранения прополисной воды составляет 10 дней. Водный раствор прополиса, приготовленный при нагревании, хранится в течение 1 года. Водный раствор прополиса, приготовленный без нагревания хранится 1 месяц.
БИБЛИОГРАФИЯ
1. Propolis extraction methods: A review / V. Bankova, B. Trusheva, M. Popova // Journal of Apicultural Research. 2021. Т. 60. №. 5. С. 734-743. https://doi.org/10.1080/00218839.2021.1901426
2. Comparison of Chemical Contents of Extracts in Different Solvents of Propolis Samples Produced in Duzce Province / Donmez M., Karadeniz §., Rasgele P. G. [at al.] // International Journal of Traditional and Complementary Medicine Research. 2020. Т. 1. №. 3. С. 137-146. https://dergipark.org.tr/en/pub/ijtcmr/issue/58250/829029
3. Jarusaitiene D. Bee products in corneal disorders // Second congress of the international Federation of Apitherapy „Apitherapy and bee products: problems and challenges": September 23-24, 2016, Kaunas, Lithuania https://www.lsmu.lt/cris/handle/20.500.12512/18115
4. Comparison of aqueous, polyethylene glycol-aqueous and ethanolic propolis extracts: antioxidant and mitochondria modulating properties / L. Kubiliene, A. Jekabsone, M. Zilius, S. Trumbeckaite, D. Simanaviciute, R. Gerbutaviciene, D. Majiene // BMC complementary and alternative medicine, 2018. T. 18(1), V.1-10. http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
5. Экстракция биологически активных соединений прополиса водой в субкритических условиях / Павлова Л. В. [и др.] //Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья. 2020. С. 88-89. https://www.elibrary.ru/item.asp?id=44188445
6. Application of natural deep eutectic solvents for green extraction of bioactive compounds from poplar propolis: a preliminary study. / H. Petkov, B. Trusheva, M. Popova, [et al/] // Journal of Apitherapy and Nature. 2018. T. 1(3), P. 76-76. https://dergipark.org.tr/en/pub/jan/issue/40577/489949
7. Brown propolis attenuates cerebral ischemia-induced oxidative damage via affecting antioxidant enzyme system in mice / Bazmandegan G. [et al.] // Biomedicine & Pharmacotherapy. 2017. Vol. 85. P. 503-510. DOI: 10.1016/j.biopha.2016.11.057
8. Water Extract of Propolis Might be Safer to Use During Pregnancy than Ethanol Extract / Sulaeman A., Marliyati S. A., Fahrudin M. // Journal of Apitherapy and Nature,2018. T. 1(3), P. 43-45. https://dergipark.org.tr/en/pub/jan/issue/40577/489449
9. Ашурова Н.Г. Прополис и современные медикаменты // Биология и интегративная медицина. 2020. №. 2 (42). С. 140-156. https://cyberleninka.ru/article/n/propolis-i-sovremennye-medikamenty
10. ГОСТ 28886-2019. Прополис. Технические условия. Введ. 2020-01-06. М.: Изд-во стандартов, 2019. 28 с.
11. Технические условия ТУ 9882-027-00669424-2015 // https://beecentr.ru/deyatelnost/nauchnye-napravleniya/23-nauchnoe-napravlenie-khimiko-biologicheskikh-issledovanij-produktov-pchelovodstva (дата обращения: 28.04.2022).
REFERENCES
1. Propolis extraction methods: A review / V. Bankova, B. Trusheva, M. Popova // Journal of Apicultural Research. 2021. T. 60. №. 5. S. 734-743. https://doi.org/10.1080/00218839.2021.1901426
2. Comparison of Chemical Contents of Extracts in Different Solvents of Propolis Samples Produced in Duzce Province / Donmez M., Karadeniz §., Rasgele P. G. [at al.] // International Journal of Traditional and Complementary Medicine Research. 2020. T. 1. №. 3. S. 137-146. https://dergipark.org.tr/en/pub/ijtcmr/issue/58250/829029
3. Jarusaitiene D. Bee products in corneal disorders // Second congress of the international Federation of Apitherapy „Apitherapy and bee products: problems and challenges": September 23-24, 2016, Kaunas, Lithuania https://www.lsmu.lt/cris/handle/20.500.12512/18115
4. Comparison of aqueous, polyethylene glycol-aqueous and ethanolic propolis extracts: antioxidant and mitochondria modulating properties / L. Kubiliene, A. Jekabsone, M. Zilius, S. Trumbeckaite, D. Simanaviciute, R. Gerbutaviciene, D. Majiene // BMC complementary and alternative medicine,
2018. T. 18(1), V.1-10. http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
5. Ekstraktsiya biologicheski aktivnykh soedineniy propolisa vodoy v subkriticheskikh usloviyakh / Pavlova L. V. [i dr.] //Novye dostizheniya v khimii i khimicheskoy tekhnologii rastitelnogo syrya. 2020. S. 88-89. https://www.elibrary.ru/item.asp?id=44188445
6. Application of natural deep eutectic solvents for green extraction of bioactive compounds from poplar propolis: a preliminary study. / H. Petkov, B. Trusheva, M. Popova, [et al/] // Journal of Apitherapy and Nature. 2018. T. 1(3), P. 76-76. https://dergipark.org.tr/en/pub/jan/issue/40577/489949
7. Brown propolis attenuates cerebral ischemia-induced oxidative damage via affecting antioxidant enzyme system in mice / Bazmandegan G. [et al.] // Biomedicine & Pharmacotherapy. 2017. Vol. 85. P. 503-510. DOI: 10.1016/j.biopha.2016.11.057
8. Water Extract of Propolis Might be Safer to Use During Pregnancy than Ethanol Extract / Sulaeman A., Marliyati S. A., Fahrudin M. // Journal of Apitherapy and Nature,2018. T. 1(3), P. 43-45. https://dergipark.org.tr/en/pub/jan/issue/40577/489449
9. Ashurova N.G. Propolis i sovremennye medikamenty // Biologiya i integrativnaya meditsina. 2020. №. 2 (42). S. 140-156. https://cyberleninka.ru/article/n/propolis-i-sovremennye-medikamenty
10. GOST 28886-2019. Propolis. Tekhnicheskie usloviya. Vved. 2020-01-06. M.: Izd-vo standartov,
2019. 28 s.
11. Tekhnicheskie usloviya TU 9882-027-00669424-2015 // https://beecentr.ru/deyatelnost/nauchnye-napravleniya/23-nauchnoe-napravlenie-khimiko-biologicheskikh-issledovanij-produktov-pchelovodstva (data obrashcheniya: 28.04.2022).
