CC BY
33
Исследование эффективности препаратов для терапии зоонозного кожного леишманиоза in vivo на лабораторной модели
Ю. К. КУЗНЕЦОВА
Поликлиника № 2, УДП РФ, Москва
Study of the Effectiveness of Drugs for the Treatment of Zoonotic Cutaneous Leishmaniasis In Vivo on a Laboratory Model
YU. K. KUZNETSOVA
Federal state budgetary institution «Polyclinic No. 2» of the Administration of the President of the Russian Federation, Moscow
Получены подтверждённые данные о достаточной эффективности монотерапии зоонозного кожного лейшманиоза меглу-мина антимонатом и доксициклина в сочетании с интерфероном альфа-2Ь человеческим рекомбинантным (реафероном). Лейшмании в очаге поражения на 60-й день полностью отсутствовали при лечении доксициклином. Комплексная терапия экспериментального зоонозного кожного лейшманиоза у золотистых хомяков по данным in vivo позволила повысить эффективность меглумина антимоната и доксициклина за счёт интерферона альфа-2Ь человеческого рекомбинантного по всем показателем в сравнении с монотерапией теми же препаратами.
Ключевые слова: зоонозный кожный лейшманиоз, меглумина антимонат, проблемы терапии, антибиотики, доксицик-лин, интерферон альфа-2Ь человеческийрекомбинантный.
Confirmed evidence of sufficient effectiveness of monotherapy of zoonotic cutaneous leishmaniasis with meglumine antimonate and doxycycline in combination with interferon alpha 2b human recombinant (reaferon) has been obtained. Leishmania in the lesion was completely absent on day 60 of treatment with doxycycline. According to in vivo data, the combined therapy of experimental zoonotic cutaneous leishmaniasis in golden hamsters increased the effectiveness of meglumine antimonate and doxycycline by all parameters due to the addition of recombinant human interferon alpha 2b in comparison with monotherapy with the same drugs.
Keywords: zoonotic cutaneous leishmaniasis, therapy problems, antibiotics, meglumine antimonate, doxycycline, interferon alpha 2Ь human recombinant.
Введение
Европейские рекомендации по управлению кожным лейшманиозом в 2013 г. предложили новый видо-направленный подход к терапии [1, 2]. Данный подход стал возможен благодаря более доступным методам молекулярной диагностики видов [3]. В целом, каждый регион (как Старый Свет, так и Новый Свет), на основе собственного опыта, имеют представление о первичной терапии, а также свои подходы к лечению. Рекомендации ВОЗ 2010 г. были в первую очередь ориентированы на эндемичные страны, не для туристов [4]. На сегодняшний день в России не существует ни одного эффективного способа или средства лечения для всех видов и синдромов кожного лейшманиоза (КЛ), что представляет серьёзную проблему для практического здравоохранения [5, 6].
© Ю. К. Кузнецова, 2018
Адрес для корреспонденции: E-mail: [email protected]
Исследования, проведённые зарубежными специалистами, свидетельствуют, что этиологическим фактором заболевания могут являться не сами лейшмании, а вирус, находящийся в них (ЬЯУ — лейшманиальный РНК-вирус). Он впервые обнаружен в 1988 г. у больного, инфицированного Ь.^иуапгт1& [7]. Позднее его обнаружили в Ь.ЪгагШгт1$ и указали на связь с более тяжёлым течением КЛ вплоть до развития кожно-слизис-того лейшманиоза [8]. Авторами установлена корреляция между наличием вируса и иммунным ответом хозяина, что может служить прогностическим критерием тяжести лейшманиоза и распространения инфекции по лимфатической системе. Геномные нуклеиновые кислоты ЬЯУ экстрагировали из 50 культивируемых изолятов, принадлежащих к видам Ь.та]ог, ЬЛгорка и Ьлп/апШт. Определена частичная последовательность генов их вирусной РНК-полимеразы. Далее эти гены попытались обнаружить в образцах изолятов, хранящихся в базе данных ОепБапк. Их наличие подтверждено в двух изо-лятах — от пациента, резистентного к терапии
меглумина антимонатом, от песчанки Rhombomys opimus [9]. Доказано различие геномных последовательностей вирусов в лейшманиях Нового и Старого Света. Гистологические исследования свидетельствуют, что наличие лейшманий в тканях слизистой оболочки больных не всегда сопровождается их патологией. Назначение препаратов сурьмы, разрушающих паразитов, приводит к распространению инфекции [10]. По сути, мы имеем дело с эндоцитобиозом вируса внутри лейшманий. Лейшманиями, содержащими LRV, и безвирусными паразитами заражали хомяков. Доказано, в первом случае имел место сильный воспалительный ответ за счёт повышения уровня IFN-в. Установлено продление выживаемости паразитов с вирусом [11, 12].
Цель исследования — изучить in vivo на лабораторной модели эффективность препаратов для лечения зоонозного кожного лейшманиоза и дать сравнительную оценку.
Материал и методы
В данных исследованиях изучалась эффективность следующих препаратов: доксициклина, цефотаксима, цефтриаксо-на, меглумина антимоната (MA) и интерферона альфа-2Ь человеческого рекомбинантного (ИФ).
MA давно зарекомендовал себя как эффективное средство, рекомендованное авторитетными организациями. Однако данный препарат достаточно токсичный. Поэтому одной из задач было попробовать уменьшить токсичность, сохранив или усилив эффективность этого препарата, путём дополнительного введения ИФ.
По данным некоторых исследований [13, 14], тетрацик-лины показали некоторую эффективность в лечении кожного лейшманиоза. С уровнем эффективности 71 %, доксициклин сравним с пятивалентной сурьмой, эффективность которой составляет от 60 до 90 %. Несмотря на то что механизм действия пятивалентной сурьмы хорошо известен (ингибирование аденозинтрифосфата синтетазы паразита) [15], механизм действия доксициклина до сих пор обсуждается. Доксициклин, возможно, может представлять терапевтическую альтернативу в лечении кожного лейшманиоза, особенно в эндемичных зонах, обеспечивая лучшую переносимость и более низкую стоимость. Одним из изучаемых препаратов, стал клафоран (цефотаксим). Изучая и анализируя литературные источники, статьи о лечении КЛ в международных базах данных, таких как MEDLINE, EMBASE, Web of Science и Cochrane Library, были найдены публикации о возможной противолейшмани-альной активности препарата клафоран [5]. Цефтриаксон также был включен в исследование, как препарат, относящийся к III поколению цефалоспоринов (как и цефотаксим). Опубликованных данных по применению при кожном лейшманиозе цефтриаксона не обнаружено.
В данном исследовании в качестве лабораторной модели использовались GSH (классическая модель висцерального лейшманиоза). Они обладают более высокой восприимчивостью к заболеванию. Заражение животных в эксперименте in vivo выполнялось на животных 2-месячного возраста, масса которых была около 30 г. Клинические проявления заболевания возникали значительно позже, когда масса животных увеличивалась до 100 г. и более. Именно эти животные участвовали в эксперименте по оценке эффективности выбранных нами антилейшманиальных препаратов.
Формирование всех опытных групп проводилось с учётом массы тела животного, однозначности клинических проявле-
ний на коже и длительности существования язвы. В соответствии с этими показателями лабораторные модели животных были репрезентативными. Для стандартизации опытов использовалось руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств по (2012 г).
В качестве возбудителя заболевания использовали про-мастиготы L.major. Заражение животных промастиготами более близко к естественному, так как оно подобно укусу переносчика. Эти формы лейшманий легко культивировать на искусственных питательных средах и дозировать под контролем камеры Горяева. Заражение осуществлялось культуральными формами высоковирулентных штаммов L.major, выделенных из язв человека или грызунов, находившихся на хранении в криобанке Института медицинской паразитологии, тропических и трансмиссивных заболеваний им. Е. И. Марциновско-го. Культуру лейшманий выращивали при температуре 20— 25°С на среде NNN. Учитывая, что в процессе длительного культивирования промастигот на искусственных питательных средах их вирулентность утрачивается, использована биомасса после 1—2 пассажей.
Методика заражения патологическим материалом. Для заражения использовали 10—14-дневную культуру. Подсчёт промастигот производили в камере Горяева. Затем готовили такую взвесь, которая содержала 106 паразитов в объёме 0,05 мл. Эта минимально заражающая доза. Каждому животному однократно единовременно внутрикожно вводили по 2 млн промастигот в виде суспензии культуры L. major симметрично в пах (минимальный волосяной покров) и уши (наиболее частый очаг заражения животных в природных условиях) с образованием эффекта «лимонной корочки».
Методика оценки эффективности испытуемых лекарственных препаратов. Их введение осуществляли на разных стадиях развития инфекции (лечебное исследование). Лечение хомяков начинали после завершения инкубационного периода и трансформации большинства бугорков в язву, обычно спустя месяц и более с момента заражения. Эффективность терапии оценивалась с использованием следующих критериев: 1) сроки клинического выздоровления, 2) средняя прибавка массы тела GSH, 3) средняя степень местного поражения на коже, 4) среднее число лейшманий, выявленных микроскопически. Основным критерием отбора животных для начала терапии была клиническая картина лейшманиоза с ярко выраженным кожным процессом, подтвержденным микроскопически — обнаружением амастигот в мазке из очагов поражения.
Методология испытаний. Для изучения эффективности монотерапии перечисленными препаратами на первом этапе испытаний использовались лабораторные модели золотистых хомяков по 30 животных в каждой группе. Вторая серия опытов посвящена сравнению монотерапии МА и комбинированной терапии, включающей МА + ИФ. Третья серия опытов была направлена на изучение эффективности комбинированной терапии доксициклином в сочетании с ИФ. Во второй и третьей серии опытов использовались лабораторные модели по 24 разнополых GSH в каждой группе.
Формирование всех опытных групп проводилось с учётом массы тела животного, однозначности клинических проявлений на коже и длительности существования язвы. В соответствии с этими показателями лабораторные модели животных были репрезентативными.
Результаты и обсуждения
Инкубационный период экспериментального зоонозного КЛ (ЗКЛ) у хомяков колебался от 1 до 8 мес., составляя в среднем 76,8±21,8 дня. Более чем у половины животных (58,1%) клинические проявления ЗКЛ возникали в течение 2 мес. с момента заражения, у остальных (41,9%) — спустя 2 мес., в том числе у 1/3 (30,8%) — спустя 3 мес.
Показатели эффективности противолейшманиальных препаратов в эксперименте ш vivoна GSH: меглумина антимонат (МА), доксициклин (ДЦ), интерфероном альфа-2Ь человеческим рекомбинантным (ИФ) и их комбинаций — меглумина антимонат + интерферон альфа-2Ь человеческий рекомбинантный (МА + ИФ), доксициклин + интерферон альфа-2Ь человеческий рекомбинантный (ДЦ + ИФ)
Показатели_МА_ДЦ_ИФ_МА + ИФ ДЦ + ИФ
Показатели до начала терапии
Масса лабораторной модели, г. 107,8+1,7 103,3+2,3 109,5 + 1,9 110,5+3,6 103,3+1,1
Средний размер язв, см2_0,6_0,44_0,49_0,47_0,46_
Степень местного поражения_3,2+0,7 3,1+0,8_3,2+0,6_3,2+0,8_3,1+0,7
Микроскопия/число лейшманий_3,5+0,4_3,7+0,3_3,6+0,4_3,7+0,3_3,6+0,4
Показатели через 30 дней после начала терапии Масса лабораторной модели, г. 109,3+1,6 109,1+1,6 126,2+4,5 136,0+3,4 134,8+1,3
Средний размер язв, см2 0,06 0 0 0 0
Степень местного поражения 1,2+0,7 1,07+0,70 1,07+0,74 0,46+0,5 0,042+0,02
Микроскопия/число лейшманий_1,5+0,5 1,27+0,45 1,27+0,45 1,3+0,46 0,9+0,3
Показатели через 60 дней после начала терапии Масса лабораторной модели, г. 112,8+1,6 113,3+1,4 136,9+4,3 136,1+1,7 135,1 + 1,3 ~
Средний размер язв, см2 0 0 0 0 0
Степень местного поражения 0,1+0,03 0,07+0,01 0,17+0,08 0 0
Микроскопия/число лейшманий_0,6+0,6 0,03+0,01 1,17+0,38 0,09+0,03 0,04+0,01
Средний срок клинического выздоровления, дни 40,7+3,2 20,1+2,3 27,2+3,8 22,1+1,2 19,2+0,9
Эволюционный полиморфизм морфологических элементов в очаге поражения. Первоначально на месте введения биомассы Ь.ша]ог появлялся блестящий бугорок плотной консистенции. В центре его через 5—7 дней возникала язва диаметром 1— 2 мм. В дальнейшем она увеличивалась в размере и приобретала характерный для ЗКЛ вид. Первоначально язвы, в подавляющем большинстве случаев, были размером до 4 мм, округлой формы. Имели валикообразно приподнятый край и обширную зону инфильтрата в основании. Со временем размер язв увеличивался до 1 см в диаметре (61,3%), иногда до 2 см (38,7%). По мере не-кротизации язвы её дно обильно покрывалось гнойным налётом, и отделялся гнойный экссудат. У трети — 52 (34,7%) хомяков от язв исходил неприятный запах. Нередко экссудат ссыхался в корки, плотно прилегающие к краям язвы. При надавливании на корку по краям язвы выступала серозная жидкость, содержащая большое количество лейшманий. При локализации язв в области паха у животных возникал лимфостаз в области половых органов (7,6%), что нередко приводило к нарушению передвижения животного.
При локализации язвы на ушных раковинах всегда наблюдалось частичное или полное расплавление хрящевой ткани. Учитывая, что язвы практически всегда имели форму эллипса, то измеряли длину их малой и большой оси. Затем рассчитывали среднюю площадь очагов язвенного дефекта по формуле:
8=1/2Бх1/2ахя
где: Б — длина большой оси эллипса, d — длина малой оси эллипса, п=3,14.
Для верификации диагноза делали скарифи-каты с валикообразного края язвы. Лейшмании в большом числе обнаруживались и в серозной жидкости, получаемой при надавливании на кор-
ку. Большое количество лейшманий, расположенных в макрофагах и свободно лежащих, свидетельствовало о наличии специфического процесса. При микроскопическом обнаружении лейшманий в очагах поражения животные включались с экспериментальный раздел работы для изучения противолейшманиальной активности препаратов. Сроки наблюдения за животными после введения препаратов составляли 60 дней.
Результаты оценки эффективности лечения МА — контрольная группа экспериментального ЗКЛу золотистых хомяков. Для изучения эффективности МА на модели ЗКЛ использованы 30 золотистых хомяков. Препарат вводили 1 раз в неделю в дозе 0,03 г на 100 г массы лабораторной модели. Кратность введения препарата зависела от его переносимости. Максимально число инъекций завило от результатов клинического выздоровления и составляло 6—7. Средняя масса лабораторной модели в данной серии опытов составила 107,8+1,7 г (таблица). При лечении МА экспериментальной модели ЗКЛ у золотистых хомяков смертности животных не зарегистрировано. В течение первых 2 нед. отмечено снижение активности животных, потеря аппетита и незначительное уменьшение массы тела. Однако впоследствии состояние животных стабилизировалось. Выздоровление животных происходило в течение 2 мес., в среднем за 40,7+3,2 дня. На 30-й день после начала введения МА снижения массы тела животных не зарегистрировано, средняя прибавка массы тела составила 1,5+0,5 г (р>0,05). Рубцевание язв наступило у 6 (20%) животных, у остальных 24 (80%) средний размер площади язв уменьшился в 10 раз (0,06 см2 против 0,6 см2) (р<0,05). Степень местного поражения уменьшилась в 2,7 раза (1,2+0,7 против 3,2+0,7) (р<0,05), а число лейшманий в очагах
поражения — в 2,3 раза (1,5±0,5 против 3,5±0,4) (р<0,05). На 60-й день по сравнению с началом эксперимента средняя прибавка массы тела составила 5,0 ±1,1 г. Рубцевание язв наступило у всех хомяков, что соответствовало степени местного поражения, равной 0. Степень местного поражения уменьшилась в 32 раза (0,1±0,03 против 3,2±0,7) (р<0,05). Рубцевание язв наступило у всех 08Н при сохранении лишь небольшой инфильтрации. Микроскопически в очагах поражения обнаружено в среднем 0,6±0,6 лейшма-ний в мазке. Выше отмечено, что факт наличия паразита в мазках не отражает жизнеспособность возбудителя. Учитывая, что животные, пролеченные МА, являются группой контроля, то при сравнении с опытными группами нами использованы показатели: степень местного поражения через 30 дней (1,2±0,7) и через 60 дней (0,1±0,03).
Результаты оценки эффективности лечения доксициклином экспериментального ЗКЛу золотистых хомяков. Для изучения эффективности монотерапии доксициклином на модели ЗКЛ использованы 30 золотистых хомяков. Препарат вводили 1 раз в неделю в дозе 0,00033 г на 100 г массы лабораторной модели. Максимально число инъекций, учитывая быструю положительную динамику кожного процесса, не превышало 4—5. Средняя масса золотистых хомяков в данной серии опытов составила 103,3±2,3 г. При лечении доксициклином экспериментальной модели ЗКЛ у золотистых хомяков смертности животных не зарегистрировано. Выздоровление животных происходило в течение месяца, в среднем за 20,1±2,3 дня, что достоверно в 2 раза быстрее, чем в контрольной группе (МА 40,7±3,2 дня) (р<0,05). С самого начала животные переносили лечение без каких-либо побочных реакций. На 30-й день по сравнению с началом эксперимента средняя прибавка массы тела хомяков составила 5,8±3,2 г. Учитывая, что все язвы зарубцевались в течение 3 нед., средний размер язвы равнялся 0 см. Степень местного поражения составляла 1,07±0,7 и кожные проявления были представлены лишь небольшой инфильтрацией на месте язвы. Сравнение степени местного поражения в данной опытной группе с контролем отличалось всего на 0,13, но животных с сохранившимися язвами не было. Иными словами, происходило активное рубцевание язв. Результаты микроскопического исследования соответствовали 1,27±0,45 лейшманий в мазке из очага поражения. Это в 2,9 меньше, чем до начала терапии (3,7±0,3) (р<0,05) и на 0,23 меньше, чем при лечении МА (1,5±0,5) (р>0,05). Существенно, что на 60-й день эксперимента по сравнению с его началом, животные прибавили в массе тела, в среднем на 10,0±3,0 г. Степень местного пораже-
ния была минимальной — 0,07±0,01 (контроль 0,1±0,03). Результаты микроскопического исследования соответствовали 0,03±0,01 лейшманий в мазке из очага поражения, что в 20 раз меньше, чем в контроле (0,6±0,6) (р<0,05).
Подводя итог данному исследованию, можно заключить, что по всем критериям доксициклин более эффективен, чем МА, являющийся «золотым стандартом» при лечении лейшманиоза. Разрешение язвенного процесса на коже наступило в 2 раза быстрее (40,7±3,2 против 20,1±2,3) (р<0,05), при показателях степени местного поражения (0,1±0,03 и 0,07±,001) (р<0,05) и результатов микроскопического исследования лейшма-ний в мазке из очага поражения (0,6±0,6 и 0,03±0,01) (р<0,05).
Результаты оценки эффективности лечения цефотаксимом экспериментального ЗКЛ у золотистых хомяков. Для изучения эффективности монотерапии цефтриаксоном на модели ЗКЛ использованы 30 золотистых хомяков. Препарат вводили 1 раз в неделю в дозе 0,00343 г на 100 г массы лабораторной модели. Максимально число инъекций, учитывая гибель животных, не превышала 3. Средняя масса лабораторной модели в данной серии опытов составила 106,6± 1,44 г. Средний размер язв до начала терапии составлял 0,47 см2. При лечении цефтриаксоном экспериментальной модели ЗКЛ у 08Н наблюдалось резкое снижение массы, сопровождаемое снижением активности животных, апатией, потерей аппетита, жидким стулом, воспалительными изменениями конъюнктивы, скорее всего бактериальной этиологии. За 30 дней масса тела животных уменьшилась в 1,8 раза (58,5±3,1 против 106,6±1,4 г) (р<0,05). Средний размер язвы, наоборот, увеличился в 2,2 раза (1,05 против 0,47) (р<0,05). Степень местного поражения достоверно не изменилась и составила 2,83±0,75 (р>0,05). По результатам микроскопического исследования количество лейшманий в мазке из очага поражения (2,77±0,73) несколько снизилось (р<0,05), что возможно обусловлено специфическим действием препарата. Все животные погибли к концу первого — началу второго месяца. Подводя итог данному исследованию, можно заключить, что при использовании терапевтической дозы цефтриаксона для лечения 08Н, экспериментально зараженных промастиготами лейшманий, наступает гибель животных. Это согласуется с полученными ранее данными.
Результаты оценки эффективности лечения интерфероном альфа-2Ь человеческим рекомби-нантным экспериментального ЗКЛ у золотистых хомяков. Для изучения эффективности монотерапии ИФ на модели ЗКЛ использованы 30 08Н. Препарат вводили 1 раз в неделю в дозе 164,410 МЕ на 100 г массы лабораторной модели. Макси-
мальное число инъекций, учитывая быструю положительную динамику кожного процесса, не превышало 4—5. Средняя масса лабораторной модели в данной серии опытов составила 109,5+1,9 г. Средний размер язв до начала терапии составлял 0,49 см2. При лечении ИФ экспериментальной модели ЗКЛ у смертности животных не зарегистрировано. Выздоровление животных происходило в течение месяца, в среднем за 27,2+3,8 дня. С самого начала лечения животные переносили его без каких-либо побочных реакций. На 30-й день, по сравнению с началом эксперимента, средняя прибавка массы тела составила 16,7+4,2 г. Учитывая, что все язвы зарубцевались в течение 4 нед., средний размер язвы равнялся 0 см2. Степень местного поражения уменьшилась в 3 раза (1,07+0,74 против 3,2+0,6) (р<0,05) и кожные проявления были представлены лишь выраженной инфильтрацией на месте язвы. Результаты микроскопического исследования свидетельствовали о снижении инфициро-ванности очага поражения в 2,9 раза (1,27+0,45 против 3,6+0,4) (р<0,05). На 60-й день по сравнению с началом эксперимента средняя прибавка массы тела составила 25%. Степень местного поражения уменьшилась в 18,8 раз (0,17+0,08 против 3,2+0,6) (р<0,05), а показатель инфицирован-ности очага поражения лейшманиями — в 3,2 раза (1,17+0,38 против 3,7+0,4). Можно заключить, что сроки разрешения клинических проявлений на коже при использовании ИФ были всего на неделю больше, чем при использовании докси-циклина и на 2 недели меньше, чем МА. Прибавка массы тела при использовании интерферона была максимальной (25%) по сравнению с докси-циклином (9,7%) и МА (4,6%). Степень местного поражения на 30-й день у доксициклина и ИФ не отличалась (1,07+0,7) и была меньше, чем у МА (1,2+0,7). Обращает на себя внимание факт различий в оценке микроскопического исследования по выявлению лейшманий в очагах поражения спустя 60 дней. Наилучший результат зарегистрирован у доксициклина (0,03+0,01), промежуточный — у МА (0,6+0,6) и максимальный по выявлению лейшманий — у ИФ (1,17+0,38). Можно полагать, что ИФ, обладая опосредованным противовоспалительным и частично специфическим эффектом, способствует разрешению высыпаний на коже, но не обеспечивает полную элиминацию возбудителя.
Это послужило поводом для оценки эффективности двух вариантов комбинированной терапии, включающей МА в сочетании с ИФ и докси-циклин в сочетании с ИФ.
Результаты оценки эффективности комбинированного лечения меглумина антимонатом (глю-кантимом) + интерферон альфа-2Ь человеческий рекомбинантный (реаферон) экспериментального
ЗКЛ у золотистых хомяков. Для изучения эффективности комбинированной терапии МА + ИФ на модели ЗКЛ использованы 24 08И. Препарат вводили 1 раз в неделю в дозе 0,03 г + 155 356 МЕ на 100 г массы лабораторной модели. Максимально число инъекций, учитывая быструю положительную динамику кожного процесса, не превышало 4—5. Средняя масса лабораторной модели в данной серии опытов составила 110,5+3,6 г. Средний размер язв до начала терапии составлял 0,47см2. При лечении МА + ИФ экспериментальной модели ЗКЛ у 08И смертности животных не зарегистрировано. Выздоровление животных происходило в течение месяца, в среднем за 22,1+1,2 дня. С самого начала животные переносили лечение без каких-либо побочных реакций. На 30-й день, по сравнению с началом эксперимента, средняя прибавка массы тела составила 25,5+4,9 г. Учитывая, что все язвы зарубцевались в течение 4 нед., средний размер язвы равнялся 0 см2. Степень местного поражения уменьшилась в 7 раз (0,46+0,5 против 3,2+0,8) (р<0,05), и кожные проявления были представлены лишь инфильтрацией на месте язвы в 45,8% случаев. Результаты микроскопического исследования свидетельствовали о снижении инфицированности очага поражения в 2,9 раза (1,3+0,46 против 3,7+0,3) (р<0,05). На 60-й день, по сравнению с началом эксперимента, средняя прибавка массы тела составила 23,2% (25,6+3,8 г). Степень местного поражения равнялась 0 см2, а показатель инфицированности очага поражения лейшманиями улучшился на 97,6% или в 41,1 раза (0,09+0,03 против 3,7+0,3) (р<0,05).
Подводя итог данному исследованию, можно заключить, что сроки разрешения клинических проявлений на коже при использовании комбинированной терапии МА в сочетании с ИФ были на 3 нед. или в 1,8 раза меньше, чем при использовании МА (22,1+1,2 дня против 40,7+3,2 дней) (р<0,05). Прибавка массы тела животных на 30-й день эксперимента при комбинированной терапии была в 16,5 раз больше, чем при монотерапии (23,1% против 1,4%) (р<0,05), степень местного поражения — в 2,6 раза меньше (0,46+0,5 против 1,2+0,7), а результаты микроскопического исследования лейшманий в мазках из очага поражения — практически идентичными (1,3+0,46 и 1,5+0,5, соответственно). На 60-й день при полном рубцевании язв у животных при комбинированной терапии в сравнении с монотерапией показатель инфицированности очага поражения лейшманиями был в 6,7 раза меньше (0,09+0,03 против 0,6+0,6) (р<0,05).
Результаты эффективности комбинированного лечения доксициклином +интерферон альфа-2Ь человеческий рекомбинантный экспериментального ЗКЛ у золотистых хомяков. Для изучения эффек-
тивности комбинированной терапии доксицик-лином в сочетании с ИФ на модели ЗКЛ использованы 24 GSH. Препараты вводили 1 раз в неделю одновременно разными шприцами внутримышечно в симметричные участки тела (бедро). Доза доксициклина составляла 0,0003 г. на 100 г. массы лабораторной модели, а доза ИФ — 156146 МЕ. Максимально число инъекций, учитывая быструю положительную динамику кожного процесса, не превышала 3—4. Средняя масса лабораторной модели в данной серии опытов составила 103,3±1,1 г, Средний размер язв до начала терапии составлял 0,46 см2. При комбинированной терапии доксициклином в сочетании с ИФ экспериментальной модели ЗКЛ у GSH смертности животных не зарегистрировано. Выздоровление животных происходило в течение месяца, в среднем за 19,2±0,9 дня. С самого начала животные переносили лечение без каких-либо побочных реакций. На 30-й день, по сравнению с началом эксперимента, средняя прибавка массы тела составила 31,5±1,3 г. Учитывая, что все язвы зарубцевались в течение 3 нед., средний размер язвы равнялся 0 см2. Степень местного поражения уменьшилась в 74 раза (3,1±0,7 против
0.042.0,02) (p<0,05), и кожные проявления были представлены лишь небольшой инфильтрацией на месте язвы (у одного животного), т.е. происходило их активное рубцевание. Результаты микроскопического исследования свидетельствовали о снижении инфицированности очага поражения в 4 раза (3,6±0,4 против 0,9+0,3) (p<0,05). На 60-й день по сравнению с началом эксперимента средняя прибавка массы тела составила 30,8% (31,8+1,9 г). Степень местного поражения равнялась 0, а показатель инфицированности очага поражения лейшманиями уменьшился на 98,9% (3,6+0,4 против 0,04+0,01).
Подводя итог данному исследованию, можно заключить, что сроки разрешения клинических проявлений на коже при использовании доксициклина и комбинированной терапии до-ксициклина с ИФ были идентичными (19,2+0,9 дня и 20,1+2,3) (p>0,05). Прибавка массы тела животных на 30-й день эксперимента при комбинированной терапии была в 5,5 раза больше, чем при монотерапии (30,8% против 5,6%) (p<0,05),
ЛИТЕРАТУРА
1. Blum /., Buffet P., Visser L, Harms G, Bailey M.S., Caumes E. et al. LeishMan recommendations for treatment of cutaneous and mucosal leishmaniasis in travelers. J Travel Med 2014; 21: 116—129.
2. Hodiamont C, Kager P., Bart A., de Vries H.J., van Thiel P.P., Leenstra T. et al. Species-directed therapy for leishmaniasis in returning travellers: a comprehensive guide. PLoS Negl Trop Dis 2014; 8: e2832.
3. Van der Auwera G, Dujardin /.Species typing in dermal leishmaniasis. Clin Microbiol Rev 2015; 28: 265—294.
4. WHO, 2010. Control of the leishmaniases. Report of a meeting of the WHO Expert Committee on the Control of Leishmaniases, Geneva, 22—26 March 2010. WHO Technical Report Series 949: 1—186.
степень местного поражения — в 25,5 раз меньше (0,042+0,02 против 1,07+0,7) (p<0,05), а результаты микроскопического исследования лейшманий в мазках из очага поражения — в 1,4 раза лучше (0,9+0,3 против 1,27+0,45, соответственно). На 60-й день при полном рубцевании язв у животных при комбинированной терапии и монотерапии в мазках лейшмании отсутствовали.
Заключение
Инкубационный период экспериментального ЗКЛ у хомяков колебался от 1 до 8 мес., составляя в среднем 7б,8+21,8 дня. У 58,1% животных клинические проявления ЗКЛ возникали в течение 2 мес., у 41,9% — спустя 2 мес., в том числе у 30,8% — через 3 мес. Размер язв до 1 см в диаметре зарегистрирован в б1,3% случаев, до 1,5 см — в 38,7%. Лимфостаз в области половых органов (7,б%) наблюдался редко. При локализации язв на ушных раковинах наблюдалось частичное или полное расплавление хрящевой ткани.
При введении in vivo цефтриаксона и цефо-таксима в терапевтической дозе происходила гибель лабораторных животных. Mонотерапия мег-лумина антимонатом, доксициклином и интерфероном альфа^ человеческим рекомбинант-ным достаточно эффективна и не различается к 30-му дню их применения по таким показателям, как средняя степень местного поражения (1,20+0,70; 1,07+0,70 и 1,07+0,74, соответственно) и среднему числу лейшманий в очаге поражения (1,50+0,50; 1,27+0,45 и 1,27+0,45, соответственно). Отличия зарегистрированы в показателях средней прибавки массы тела (максимальная при лечении интерфероном — 15,3%), средних сроках клинического выздоровления (минимальный при лечении доксициклином — 20,1+2,3 дня). Лейшмании в очаге поражения на б0-й день полностью отсутствовали при лечении доксициклином.
Комплексная терапия экспериментального ЗКЛ у золотистых хомяков по данным in vivo позволила повысить эффективность меглуми-на антимоната и доксициклина за счет интерферона альфа^ человеческого рекомбинант-ного по всем показателем в сравнении с монотерапией.
5. Кузнецова Ю.К., Сергеев В.П., Кузнецова К.Ю. Исторические аспекты лечения кожного лейшманиоза. Am^rora™ и химиотер. — 2017. — Т. б2. — № 3—4. — С. 53—57. / Kuznetsova Yu.K., Sergeev V.P., Kuznetsova K.Yu. Istoricheskie aspekty lecheniya kozhnogo leysh-manioza. Antibiotiki i khimioter 2017; б2: 3—4: 53—57. [in Russian]
6. Кузнецова Ю.К., Янг Д. Исторические аспекты лечения кожного лейшманиоза. Mедицинская паразитология и паразитарные болезни. — 2017. — № 1. — С. 33—35. / Kuznetsova Yu.K, Yang D. Istoricheskie aspekty lecheniya kozhnogo leyshmanioza. Meditsinskaya parazitologiya i parazitarnye bolezni 2017; 1: 33—35. [in Russian]
7. Tarr P.I., Aline R.F. Jr., Smiley B.L., Scholler J., Keithly J., Stuart K. LR1: a candidate RNA virus of Leishmania. Proc Natl Acad Sci USA 1988 Dec; 85 (24): 9572—5.
8. Kariyawasam R., Grewal J, Lau R, Purssell A., Valencia B.M., Llanos-Cuentas A. et al. Influence of Leishmania RNA Virus 1 on Proinflammatory Biomarker Expression in a Human Macrophage Model of American Tegumentary Leishmaniasis. J Infect Dis 2017 Oct 17; 216 (7): 877—886.
9. Hajjaran H. Mahdi M, Mohebali M, Samimi-Rad K., Ataei-Pirkooh A., Kazemi-Rad E. et al. Detection and molecular identification of leishma-nia RNA virus (LRV) in Iranian Leishmania species. Arch Virol 2016 Dec;161 (12): 3385—3390. Epub 2016 Sep 7.
10. Hartley M.A., Drexler S., Ronet C, Beverley S.M., Fasel№The immunological, environmental, and phylogenetic perpetrators of metastatic leishmaniasis. Trends Parasitol. 2014 Aug; 30 (8): 412—22. doi: 10.1016/j.pt.2014.05.006. Epub 2014 Jun 20.
11. Кузнецова Ю.К. Сравнительные данные противолейшманиальной активности антибактериальных препаратов отечественного производства, полученные в экспериментальных исследованиях in vitro. Здоровье населения и среда обитания. — 2017. — № 1 (286). — С.
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ:
50—51. / Kuznetsova Yu.K. Sravnitel'nye dannye protivoleyshmanial'noy aktivnosti antibakterial'nykh preparatov otechestvennogo proizvodstva, poluchennye v eksperimental'nykh issledovaniyakh in vitro. Zdorov'e naseleniya i sreda obitaniya 2017; 1 (286): 50—51. [in Russian]
12. Кузнецова Ю.К. Кожный лейшманиоз: причины резистентности терапии. Проблемы медицинской микологии. — 2018. — Т. 20. — № 2. / Kuznetsova Yu.K. Skin leishemaniasis: reasons for the resistance of therapy. Problems in medical mycology 2018; 20: 2. [in Russian]
13. Masmoudi A., Dammak A., Chaaben H, Maalej N, Akrout F, Turki H. Doxycycline for the treatment of cutaneous leishmaniasis. Dermatology Online Journal 2008; 14 (8).
14. Khairulin F.Ia, Ereshov M.E., Khuseiinova Kh.Kh, Rozyreva A.A., Sukhanova T.A. Treatment of cutaneous leishmaniasis with methacycline and doxycycline (vibramycin). Vestn Dermatol Venerol 1989; 3: 62—66.
15. William H. M, Khaldoun M. Cutaneous Leishmaniasis: Recognition and Treatment. Am Fam Phys 2004; 69: 455—460.
Кузнецова Юлия Константиновна — врач-дерматовенеролог ФГБУ «Поликлиника 2» УДП РФ, Москва
