CC BY
105.18.04-ТЕХНОЛОГИЯ МЯСНЫХ, МОЛОЧНЫХ И РЫБНЫХ ПРОДУКТОВ _И ХОЛОДИЛЬНЫХ ПРОИЗВОДСТВ (ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ)_
DOI 10.53980/24131997_2022_2_5
Л.М. Каманина, канд. техн. наук, доц., e-mail: [email protected] И.С. Хамагаева, д-р техн. наук, проф., e-mail: [email protected] Восточно-Сибирский государственный университет технологий и управления, г. Улан-Удэ
УДК 637.1
ИССЛЕДОВАНИЕ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКОГО ПОТЕНЦИАЛА БИФИДОБАКТЕРИЙ И ПРЕБИОТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ОВСЯНОГО ТОЛОКНА
Изучен биотехнологический и колонизационный потенциал штамма бифидобактерий Bifidobacterium infantis DSM 20088. Установлено, что данный штамм бифидобактерий характеризуется высокой скоростью роста и размножения с накоплением достаточного количества клеток. Отмечено высокое содержание экзополисахаридов, что свидетельствует об адгезивной способности бифидобактерий прикрепляться к стенкам кишечника и оказывать положительное влияние на организм ребенка. Установлено, что бифидобактерии хорошо переносят неблагоприятные условия желудочно-кишечной среды. Выявлено, что овсяное толокно стимулирует рост бифидобактерий и обладает пре-биотическими свойствами. Подобрана оптимальная доза овсяного толокна в количестве 3 %. Полученные данные свидетельствуют о целесообразности совместного использования пробиотического штамма Bifidobacterium infantis и пребиотика - овсяного толокна для производства продукта-сим-биотика для детей.
Ключевые слова: бифидобактерии Bifidobacterium infantis, биотехнологический потенциал, колонизационный потенциал, овсяное толокно, пребиотические свойства.
L.M. Kachanina, Cand. Sc. Engineering, Assoc. Prof.
I.S. Khamagaeva, Dr. Sc. Engineering, Prof.
STUDY ON BIOTECHNOLOGICAL POTENTIAL OF BIFIDO-BACTERIA AND PREBIOTIC PROPERTIES OF OATMEAL
The article reveales biotechnological and colonization potential of bifidobacterium strain Bifidobacterium infantis DSM 20088. This strain of bifidobacteria is characterized by a high growth and reproduction rate with the accumulation of a sufficient number of cells. The research states a high content of exopolysac-charides, which indicates adhesive ability of bifidobacteria to attach to intestinal walls and have a positive effect on child's body. The resuls show that bifidobacteria tolerate adverse conditions of the gastrointestinal environment wel and that oatmeal stimulates the growth of bifidobacteria and has prebiotic properties. The optimal dose of oatmeal in the amount of 3 % is selected. The data obtained indicate the expediency ofjoint use of the probiotic strain Bifidobacterium infantis and the prebiotic oatmeal for the production of a symbiotic product for children.
Key words: bifidobacteria Bifidobacterium infantis, biotechnological potential, colonization potential, oatmeal, prebiotic properties.
Введение
Согласно распоряжению Правительства РФ «Основы государственной политики Российской Федерации в области здорового питания населения на период до 2020 года» необходимо обеспечить 80 % рынка специализированными продуктами детского питания отечественного производства [15]. Однако на данный момент российский рынок специализированных
продуктов детского питания представлен в основном импортной продукцией и не покрывает потребности населения [17].
По распоряжению Правительства РФ № 1364-р от 29.06.2016 «Об утверждении Стратегии повышения качества пищевой продукции в Российской Федерации до 2030 года» необходимо разрабатывать технологии глубокой переработки сельскохозяйственного сырья для получения новых видов специализированной, функциональной и обогащенной пищевой продукции [16].
Поэтому конкурентоспособные инновации и выпуск продукции для сегмента детского питания являются актуальными, особенно в условиях импортозамещения.
Исследования видового состава бифидофлоры у здоровых грудных детей показали наличие В. bifidum, В. longum, В. breve, В. Infantis [2, 4]. Кишечная микрофлора формируется и изменяется с взрослением ребенка и сама поддерживает свой баланс. Однако ряд неблагоприятных факторов (применение лекарственных средств, экологический прессинг, инфекционные заболевания и др.), искусственное вскармливание, введение раннего прикорма сопровождаются уменьшением в кишечнике физиологичной для ребенка микрофлоры и появлением редких штаммов бифидобактерий - В. adolescentis, В. catenulatum, B. йепйиши B. angulatum [2, 8, 11]. Дисбаланс кишечной микрофлоры приводит к функциональным нарушениям органов пищеварения (включая воспалительные заболевания кишечника, аллергию, ожирение, диабет, нарушение обмена веществ и др.) у детей и распространяется на последующие этапы жизни человека, переходя в хронические заболевания [9, 10].
Очевидно, что в пробиотических продуктах для детей качественный состав бифидо-флоры должен соответствовать содержанию этих микроорганизмов в кишечнике здоровых детей. Все известные кисломолочные продукты для детей содержат в основном В. longum и В. bifidum, практически отсутствуют продукты с использованием Bifidobacterium infantis.
Ключевая пробиотическая роль Bifidobacterium infantis состоит в его разнообразной геномной емкости и способности переваривать и утилизировать сложные углеводы [12], расщеплять компоненты пищи, тем самым помогая еще не сформировавшемуся процессу пищеварения детей. Они синтезируют необходимые витамины В1, B6, B9, К и участвуют в выработке определенных гормонов. Польза B. infantis для детей состоит в том, что эти колонии бактерий подавляют рост патогенной и условно-патогенной микрофлоры, ускоряя созревание иммунного отклика, приводят в равновесие иммунную систему, улучшают барьерные функции кишечника и увеличивают выработку органических кислот, губительно действующих на болезнетворные микроорганизмы [13, 14, 17].
Овсяное толокно - уникальный продукт, пищевая ценность которого на порядок выше обычной овсяной муки или хлопьев, так как в нем сохраняются практически все полезные фракции зерна. При производстве толокна осуществляется глубокая гидротермическая обработка овсяного ядра, в результате чего образуется почти полностью клейстеризованный крахмал и увеличивается содержание водорастворимых веществ - декстринов и сахаров (в необработанном овсяном ядре - 7-8 %, после гидротермической обработки - до 15 %), что повышает их усвояемость организмом ребенка [1, 3].
Толокно служит источником пищевых волокон (17,8 %), причем преимущественно водорастворимых Р-глюканов, также содержит биофлавоноиды, оказывающие антиоксидантный эффект. Лецитин, содержащийся в толокне, особенно важен для нормального роста и развития детского организма. Его дефицит приводит к нарушению не только умственного, но и физического развития. Он является «строительным материалом» клеточных мембран, нервных тканей человека и основой построения миелиновых клеток нервов, белого вещества головного мозга и защищает его оболочки; лецитин участвует в образовании эритроцитов и гемоглобина, способствует усвоению витаминов А, D, Е и К, обладает гепатопротекторными свойствами, защищая печень [1, 3].
Таким образом, сочетание пробиотиков и пребиотиков растительного происхождения может быть использовано при проектировании сбалансированного питания для детей. Существенным резервом в производстве специализированных молочных продуктов является разработка и внедрение биотехнологий функциональных продуктов на основе инновационных про-биотических бактерий Bifidobacterium infantis и натурального растительного сырья, позволяющих создавать новые виды продуктов детского питания.
Целью работы является изучение биотехнологического потенциала Bifidobacterium infantis и пребиотических свойств овсяного толокна.
Объекты и методы исследований
Объектом исследований служил штамм Bifidobacterium longum subsp. Infantis DSM 20088, выделенный из кишечника ребенка и активизированный запатентованным методом [5]. В исследовании использовалось толокно овсяное по ГОСТ 2929-75.
Биотехнологические свойства бифидобактерий определяли по стандартным органолеп-тическим, физико-химическим и микробиологическим показателям.
Количество колоний клеток бифидобактерий определяли на кукурузно-лактозной среде по МУК 4.2.999.00.
Колонизационный потенциал бифидобактерий определяли по устойчивости бактерий:
- к NaCl и фенолу - посевом в молоко с различной концентрацией соли и фенола исследуемой культуры и по образованию сгустка;
- к желудочному соку - путем инкубирования бактерий с последующим посевом на питательную среду и определения подсчета выживших бактериальных клеток;
- к кишечному соку - посевом в молоко с различной концентрацией кишечного сока исследуемой культуры и по времени образования сгустка.
Количество экзополисахаридов измеряли колориметрическим фенол-кислотным методом [6].
Результаты и их обсуждение
Одним из специфических требований, предъявляемым к пробиотическим бактериальным закваскам, предназначенным для детского питания, является их биотехнологический и колонизационный потенциал. Это означает, что пробиотические бактерии должны обладать высокой скоростью роста и размножения на питательных средах и накапливать достаточную биомассу клеток, иметь отличительные морфологические характеристики для четкой их идентификации, а также колонизироваться в желудочно-кишечном тракте и приспосабливаться к стрессовому воздействию окружающей среды. Важным является изучение иммобилизацион-ной способности бактерий, характеризующей возможность микробных клеток прикрепляться к слизистой оболочке эпителия пищеварительного тракта и оказывать положительное действие на организм хозяина.
Известно, что характерным для бифидобактерий является достаточно высокая чувствительность к воздействию стрессовых факторов. Низкое значение рН желудочного сока, фенол, соли желчных кислот могут оказать губительное действие на бактерии. Пройдя желудок и находясь продолжительное время в тонком кишечнике, бактерии проявляют функциональную активность и пробиотический эффект [7].
В связи с вышеизложенным изучаемый штамм бифидобактерий Bifidobacterium infantis DSM 20088 исследовали по показателям, характеризующим биотехнологические свойства и способность сохранять активность при неблагоприятных условиях культивирования. Результаты представлены в таблицах 1 и 2.
Из таблицы 1 видно, что данный штамм бифидобактерий обладает хорошими органо-лептическим показателями, за исключением в меру жидкой консистенции, которая характерна для всех штаммов бифидобактерий. Эффективная вязкость составила 175сПз, что характерно для бифидобактерий, так как они дают легкотекучие сгустки. Также Bifidobacterium infantis
проявил высокие биотехнологические свойства: образование сгустка происходило за 10-12 ч до кислотности 57±2 °Т с образованием достаточного количества клеток - 109 КОЕ/ см .
Таблица 1 - Характеристика и биотехнологические свойства закваски Bifidobacterium infantis DSM 20088
Показатели
органолептические микроско- титруемая актив- количество вяз- количество
пическии кислот- ность- клеток бифи- кость, экзополиса-
препарат ность, рН скваши- добактерий, сПз харидов,
°т вания, ч КОЕ в 1 см3 мкг/см3
сгусток -плотный с глянцевой поверхностью, вкус - чистый, кисломолочный; консистенция -нежная, однородная, в меру жидкая кокковид- ные короткие цепочки и диплокок-ковые клетки 57±2 5,4± 0,02 10-12 109 175 7,6
Полученные результаты по количественному содержанию экзополисахаридов свидетельствуют о том, что данный штамм обладает важными производственно-ценными признаками и может выступать в роли фактора, способствующего адгезии полезных микроорганизмов на стенках кишечника.
Таблица 2 - Влияние стрессовых факторов на активность Bifidobacterium infantis DSM 20088
Устойчивость штамма бифидобактерий к
хлориду натрия, % фенолу, % желудочному соку (рН - 3±0,1) кишечному соку, % (рН - 6,3)
2 4 6,5 4 КОЕ в 1 см3 20 30 40
+ + - + 107 + + +
Как видно из таблицы 2, исследования показали хорошую устойчивость культуры Bifidobacterium infantis DSM 20088 к фенолу, желудочному соку (низкому значению рН), кишечному соку (желчи) и соли. Уже через 12-16 ч культивирования все исследуемые образцы, кроме образца с концентрацией хлорида натрия - 6,5 %, образовали в молоке сгусток. В результате установили, что данный штамм бифидобактерий хорошо переносит желудочный и кишечный стресс.
Таким образом, проведенные исследования показали возможность применения штамма Bifidobacterium infantis DSM 20088 при производстве кисломолочного пробиотического продукта для детского питания.
Далее изучали влияния овсяного толокна на активность бифидобактерий в процессе ферментации. Для этого в нормализованное молоко с температурой 35-40 °С вносили разные дозы толокна, подвергали тепловой обработке, выдерживали определенное время, охлаждали до температуры 37±1 °С, вносили закваску бифидобактерий Bifidobacterium infantis DSM 20088 в количестве от 2 до 7 % с интервалом 1 % и ферментировали. В качестве контрольного образца использовали молочную основу.
Экспериментальные исследования проводили с использованием метода математического планирования второго порядка. Матрица проведения эксперимента представлена в таблице 3.
Таблица 3 - Матрица проведения эксперимента
Xu Yu ^
0 1 59
0 5 64
4 1 62
4 5 68
0 3 60
4 3 66
3 1 62
3 5 65
3 3 63
где Xu - массовая доза толокна, %; Yu - массовая доза закваски бифидобактерий (АН), %.
Процесс контролировали по показателям кислотности ^1). Полученные результаты обработаны в пакете Statiatica 6.0. и представлены на рисунке 1.
Рисунок 1 - Функция отклика изменения титруемой кислотности в зависимости от массовой доли компонентного состава продукта
Данные рисунка 1 свидетельствуют о том, что оптимальным соотношением вносимых ингредиентов является доза толокна 2-3 %, а закваски - 3-5 %. При этом кислотность достигает значения 61-68 °Т, которое является наиболее физиологичным и приемлемым для детского организма.
Влияние массовой доли толокна на продолжительность ферментации и накопление клеточной концентрации бифидобактерий представлено на рисунках 2 и 3 соответственно.
л н о о и
H
о
ч
о
(D
S
H
70 60 50 40 30 20 10
4а .......■— -■
/М К
J
/
У У
1,5
Контроль ---2%
4,5
3%
7,5 9
Время ферментации, ч
4%
Рисунок 2 - Влияние массовой доли толокна на продолжительность ферментации при дозе закваски 3 %
Из рисунков 2 и 3 видно, что в молочно-растительных смесях интенсифируется процесс кислотообразования по сравнению с контрольным образцом. Полученные данные свидетельствуют, что ускоряется процесс образования сгустка и повышается кислотообразующая способность бифидобактерий. Так, титруемая кислотность в образцах с массовой долей толокна от 2 до 4 % составила 61-66 °Т, активизировался процесс образования сгустка от 7,5 до 6 ч. Тогда как в контрольном образце образование сгустка произошло только по истечении 9 ч до кислотности 59 °Т. Следует отметить, что при дозе закваски 5 % время сокращается и составляет 5 ч при дозе толокна 3 %.
Сравнительный анализ изменения общего содержания клеточной концентрации бифи-добактер ий в ферментированных смесях показал, что растительная добавка стимулирует развитие би фидобактерий до 109 КОЕ в 1 см3 через 6-7,5 ч при дозе толокна в количестве 2-4 %. В контроле это же количество клеток бактерий накапливается только через 9 ч ферментации.
2 S Ö -Ц 5 W
« о § *
т
о
е
§
ф и
иар
L-
о
10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0
2,5
9
Время ферментации, ч
5 7,5
■ Контроль I 2% ■ 3% ■ 4% Рисунок 3 - Влияние массовой доли толокна на рост клеток бифидобактерий
0
3
6
Ростостимулирующее влияние толокна на бифидобактерии можно объяснить богатым химическим составом муки, содержащей водорастворимые вещества - декстрины, сахара и пищевые волокна, обладающие бифидогенными свойствами.
Исходя из результатов исследования установили, что целесообразной является доза толокна в количестве 3 %, а закваски - 3-5 % в зависимости от необходимых условий, возникающих перед изготовителем.
Микроскопические картины продукта без добавки и с добавлением толокна показаны на рисунке 4.
а б
Рисунок 4 - Морфология бифидобактерий в зависимости от состава молочной среды: а - без толокна; б - с толокном (1:90 МКМ)
Сравнительный анализ микрокартин показывает, что морфология бифидобактерий изменяется в зависисмости от состава среды. Установили положительное влияние толокна на морфологию клеток бифидобактерий, которые утолщаются и за счет влияния пищевых волокон толокна собираются в агрегаты, а затем образуют обширные микроколонии, что способствует их лучшей адаптации и устойчивости к факторам желудочно-кишечной среды.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют о перспективности использования бифидобактерий Bifidobacterium infantis DSM 20088 и овсяного толокна для получения кисломолочного биопродукта для детей и расширения ассортимента детского питания.
Выводы
В результате проведенных исследований установлен высокий биотехнологический и колонизационный потенциал штамма бифидобактерий Bifidobacterium infantis DSM 20088. Установлено, что он обладает хорошей адгезивной способностью и устойчив к неблагоприятным условиям желудочно-кишечного тракта. Подобрана оптимальная доза овсяного толокна в количестве 3 % и выявлено, что толокно обладает пребиотическими свойствами и стимулирует рост бифидобактерий. Полученные данные свидетельствуют о целесообразности совместного использования пробиотического штамма Bifidobacterium infantis и пребиотика - овсяного толокна для производства симбиотического продукта для детей.
Библиография
1. Аникина Е.Н. Исследование и разработка технологии биопродукта с овсяным толокном: дис. ... канд. техн. наук. - Омск: Изд-во ОмГАУ им. П.А. Столыпина, 2014. - 140 с.
2. Жиленкова О.Г., Воронина О.Л, Амерханова А.М. и др. Видовой состав бифидофлоры желудочно-кишечного тракта у детей // Астраханский медицинский журнал. - 2014. - № 1. - C. 49-55. -URL: https://cyberleninka.ru/article/n/vidovoy-sostav-bifidoflory-zheludochno-kishechnogo-trakta-u-detey (дата обращения: 12.04.2022).
3. Куцова А.Е., Куцов С.В., Сергиенко И.В. и др. Использование овсяного толокна в технологии продуктов функционального назначения // Вестник МАХ. - 2015. - № 2. - C. 23-27. - URL: https://cyberleninka.ru/article/n/ispolzovanie-ovsyanogo-tolokna-v-tehnologii-produktov-funktsionalnogo-naznacheniya (дата обращения: 13.04.2022).
4. Функ И.А., Иркитова А.Н. Биотехнологический потенциал бифидобактерий // Acta Biologica Sibirica. - 2016. - № 4. - URL: https://cyberleninka.rU/article/n/biotehnologicheskiy-potentsial-bifidobakteriy (дата обращения: 12.04.2022).
5. Хамагаева И.С. Научные основы биотехнологии кисломолочных продуктов для детского и диетического питания: монография / И.С. Хамагаева; ВСГТУ. - Улан-Удэ: Изд-во ВСГТУ, 2005. -278 с.
6. Хамагаева И.С., Хазагаева С.Н., Замбалова Н.А. Создание консорциума пробиотических микроорганизмов с высокой биохимической активностью и экзополисахаридным потенциалом // Вестник ВСГУТУ. - 2014. - № 1. - С. 97-102.
7. Харченко Н.В. Выделение бифидобактерий и изучение их пробиотических свойств при длительном хранении: дис. ... канд. биол. наук. - М., 2016. - 141 с.
8. Gronlund, M.M., Gueimonde M., Laitinen K. et al. Maternal breast-milk and intestinal bifidobacteria guide the compositional development of the Bifidobacterium microbiota in infants at risk of allergic disease // Clinical and Experimental Allergy. - 2007. - Vol. 37, N 12. - Р. 1764-1772.
9. Damman C.J., Miller S.I., Surawicz C.M. et al. The microbiome and inflammatory boweldisease: is there a therapeutic role for fecal microbiota transplantation // Am. J. Gastroenterol. - 2012. - N 107 (10). -P.1452-1459.
10. Kallus S.J., Brandt L.J. The intestinal microbiota and obesity // J. Clin. Gastroenterol. - 2012. -N 46 (1). - P. 16-24.
11. Smehilova M., Vilkova E., Nevoral J. et al. Comparison of intestinal microflora in healthy infants and infants with allergic colitis // Folia Microbiol (Praha). - 2008. - Vol. 53, N 3. - Р. 255-258.
12. UnderwoodM.A., German J.B., Lebrilla C.B. et al. Bifidobacterium longum subspecies infantis: Champion colonizer of the infant gut // Pediatr. Res. - 2015. - N 77. - P. 229-235. - doi: 10.1038/pr.2014.156.
14. Chichlowski M., Shah N., Wampler J.L. et al. Bifidobacterium longum subspecies infantis (B. infantis) in Pediatric Nutrition: Current State of Knowledge // Nutrients. - 2020, May 28. - 12 (6): 1581. -doi: 10.3390/nu12061581. PMID: 32481558; PMCID: PMC7352178.
15. https://docs.cntd.ru/document/902242308 (дата обращения: 13.04.2022).
16. https://docs.cntd.ru/document/420363999 (дата обращения: 12.04.2022).
17. http://propionix.ru/bifidobakterii-longum-podvid-infantis (дата обращения: 12.04.2022).
Bibliography
1. Anikina E.N. Research and development of bioproduct technology with oatmeal: dissertation for ... Candidate of Engeneering Sciences. - Omsk: Omsk State Agrarian University named after P.A. Stolypin, 2014. - 140 p.
2. Zhilenkova O.G., Voronina O.L., Amerkhanova A.M. et al. Species composition of the bifidoflora of the gastrointestinal tract of children [Electronic resource] // Astrakhan Medical Journal. - 2014. - N 1. -URL: https://cyberleninka.ru/article/n/vidovoy-sostav-bifidoflory-zheludochno-kishechnogo-trakta-u-detey (date of access: 04/12/2022).
3. Kutsova A.E., Kutsov S. V., Sergienko I.V. et al. The use of oatmeal in the technology of functional products [Electronic resource] // Journal of International Academy of Refrigiration. - 2015. -N 2. - URL: https://cyberleninka.ru/article/n/ispolzovanie-ovsyanogo-tolokna-v-tehnologii-produktov-funktsionalnogo-naznacheniya (date of access: 04/13/2022).
4. Funk I.A., Irkitova A.N. Biotechnological potential of bifidobacteria [Electronic resource] // ActaBi-ologicaSibirica.- 2016. - N 4. - URL: https://cyberleninka.ru/article/n/biotehnologicheskiy-potentsial-bifidobacteriy (accessed: 04/12/2022).
5. Khamagaeva I.S. Scientific bases of biotechnology of fermented milk products for children and dietary nutrition: monograph / I.S. Khamagaeva; the ESSTU Publishing House. - Ulan-Ude, 2005. - 278 p.
6. Khamagaeva I.S., Khazagaeva S.N., Zambalova N.A. Creation of a consortium of probiotic microorganisms with high biochemical activity and exopolysaccharide potential // Bulletin of the ESSUTM. - 2014. -N 1 - P. 97-102.
7. KharchenkoN.V. Isolation of bifidobacteria and study of their probiotic properties during long-term storage: dissertation for ... Candidate of Biological Sciences. - M., 2016. -141 p.
8. GronlundM.M., Gueimonde M., Laitinen K. et al. Maternal breast-milk and intestinal bifidobacteria guide the compositional development of the Bifidobacterium microbiota in infants at risk of allergic disease // Clinical and Experimental Allergy. - 2007. - Vol. 37, N 12. - P. 1764-1772.
9. Damman C.J., Miller S.I., Surawicz C.M. et al. The microbiome and inflammatory boweldisease: is there a therapeutic role for fecal microbiota transplantation // American Journal of Gastroenterology. - 2012.
- N 107 (10). - P. 1452-1459.
10. Kallus S.J., Brandt L.J. The intestinal microbiota and obesity // Journal of Clinical Gastroenterology.- 2012. - N 46 (1). - P. 16-24.
11. Smehilova M., Vilkova E., Nevoral J. et al. Comparison of intestinal microflora in healthy infants and infants with allergic colitis // Folia Microbiol (Praha). - 2008. - Vol. 53, N 3. - P. 255-258.
12. UnderwoodM.A., German J.B., Lebrilla C.B. et al. Bifidobacterium longumsubspecies infantis: Champion colonizer of the infant gut // Pediatric Research. - 2015. - N 77 - P. 229-235. -doi:10.1038/pr.2014.156.
14. Chichlowski M, Shah N, Wampler J. L. et al. Bifidobacterium longum Subspecies infantis (B. infantis) in Pediatric Nutrition: Current State of Knowledge // Nutrients. - 2020. - May 28, N 12(6). - 1581 p.
- doi: 10.3390/nu12061581. PMID: 32481558; PMCID: PMC7352178.
15. https://docs.cntd.ru/document/902242308 (date of access: 04/13/2022).
16. https://docs.cntd.ru/document/420363999 (date of access: 04/12/2022).
17. http://propionix.ru/bifidobakterii-longum-podvid-infantis (date of access: 04/12/2022).
