CC BY
17
ШШМГИТОЖ ксщшм
Исследование аллергизирующих свойств и иммуно-токсичности готовой лекарственной формы дипептидного миметика мозгового нейротрофического фактора ГСБ-106
Коваленко Л. П., Коржова К. В., Журиков Р. В., Никитин С. В., Дурнев А. Д.
ФГБНУ«НИИ фармакологии имени В.В. Закусова», Москва
Аннотация. Проведено исследование аллергизирующих свойств и иммунотоксического действия готовой лекарственной формы препарата ГСБ-106. Исследование аллергизирующих свойств и иммунотоксического действия ГСБ-106 выполнено на самцах морских свинок альбиносов массой 250-300 г и на самцах мышей линий СВА, C57BL/6, гибридах Р1(СВЛхС57В1_/6). При оценке иммунотоксичности ГСБ-106 вводили мышам перорально 14 дней в дозах 2,2 мг/кг и 22 мг/кг, при изучении аллергенности ГСБ-106 морским свинкам альбиносам вводили препарат в дозах 1 мг/кг и 10 мг/кг, согласно стандартным схемам иммунизации. Результаты проведённого исследования иммунотоксичности и аллергенности ГСБ-106 позволяют заключить, что введение готовой лекарственной формы препарата ГСБ-106 в диапазоне изученных доз не оказывает иммунотоксического действия и не обладает аллергизирующими свойствами.
Ключевые слова: готовая лекарственная форма ГСБ-106; фагоцитоз; хемилюминесценция; гуморальный иммунный ответ; клеточный иммунный ответ; иммунотоксичность; реакция системной анафилаксии; гиперчувствительность замедленного типа; реакция воспаления на Кон А
Для цитирования:
Коваленко Л.П., Коржова К.В., Журиков Р.В., Никитин С.В., Дурнев А.Д. Исследование аллергизирующих свойств и иммунотоксичности готовой лекарственной формы дипептидного миметика мозгового нейротрофического фактора ГСБ-106 // Фармакокинетика и фармакодинамика. - 2020. -№ 1. - С. 30-33. DOI: 10.37489/2587-7836-2020-1-30-33
Evaluation of allergenic properties and immunotoxicity of dipeptide mimetic of brain-derived neurotrophic factor GSB-106
Kovalenko LP, Korzhova KV, Zhurikov RV, Nikitin CB, Durnev AD FSBI «Zakusov Institute of Pharmacology», Moscow
Abstract. The study of allergenic properties and immunotoxic effects of the ready-to-use drug form of GSB-106 was carried out. The study of allergenic properties and immunotoxicity of GSB-106 was performed on male albino guinea pigs weighing 250-300 g and on male CBA, C57BL / 6, F1 hybrids (CBAxC57BL / 6) mice. When assessing immunotoxicity, GSB-106 was inject to mice per os for 14 days in doses of 2.2 mg / kg and 22 mg / kg. When studying the allergenicity, GSB-106 was injected to albino guinea pigs in doses of 1 mg / kg and 10 mg / kg according to standard regimens of immunization. The results of the study of the immunotoxicity and allergenicity of GSB-106 allow us to conclude that the injection of the ready-to-use drug form of GSB-106 in the range of studied doses does not have an immunotoxic effect and does not have allergenic properties.
Keywords: dipeptide mimetic of brain-derived neurotrophic factor GSB-106; phagocytosis; chemiluminescence; humoral immune response; cellular immune response; immunotoxicity; systemic anaphylaxis; delayed hypersensitivity; concanavalin A-induced inflammation
For citations:
Kovalenko LP, Korzhova KV, Zhurikov RV, Nikitin CB, Durnev AD. Evaluation of allergenic properties and immunotoxicity of dipeptide mimetic of brain-derived neurotrophic factor GSB-106. Farmakokinetika i farmakodinamika. 2020;(1):30-33. DOI: 10.37489/2587-7836-2020-1-30-33
Введение
В ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова» синтезирован димерный дипептидный миметик 4-й петли BDNF ГСБ-106 (гексаметилен-диамид бис(моносукцинил-серил-лизина). ГСБ-106 обладает нейропротективной активностью и создан для лечения нейродегенеративных и психических заболеваний, включая депрессию, биполярные расстройства и шизофрению [1].
Целью данной работы являлось изучение аллергизирующих свойств и иммунотоксического действия готовой лекарственной форма ГСБ-106.
Материалы и методы
Исследование аллергизирующих свойств и иммунотоксического действия готовой лекарственной формы ГСБ-106 выполнено на сертифицированных лабораторных животных,180 самцах мышей линий СВА, C57BL/6, гибридах F1(CBAхС57BL/6) массой 18—20 г, 80 самцах морских свинок альбиносов массой 250—300 г, клинически здоровых особях, полученных из питомников «Столбовая» и «Андреевка».
При оценке иммунотоксичности ГСБ-106 мышам опытных групп 14 дней перорально вводили лекарственную форму препарата в дозах 2,2 мг/кг и 22 мг/кг (активного вещества), при изучении аллергенности
30
ФАРМАКОКИНЕТИКА И ФШЩИШИКА
шсшмшташ ишщшшм
ГСБ-106 морским свинкам альбиносам вводили препарат в дозах 1 мг/кг и 10 мг/кг, согласно стандартным схемам иммунизации. При изучении иммуноток-сичности в качестве контроля мышам контрольных групп вводили дистиллированную воду, при изучении аллергенности — воду для инъекций. Каждая группа включала 10 животных.
При изучении иммунотоксичности ГСБ-106 использовали следующие методы:
— определение массы и клеточности органов иммунной системы мышей-гибридов F1 (СВАхC57BL/6)
— оценка фагоцитарной активности перитонеаль-ных макрофагов мышей-гибридов F1 (СВАхС57БЬ/6)
— оценка активности нейтрофилов в тесте хемилю-минесценции на мышах-гибридах (СВАхC57BL/6)
— постановка реакции гиперчувствительности замедленного типа на мышах-гибридах (СВАхС57БЬ/6);
— постановка реакции гемагглютинации на мышах линии СБА и линии С57БЬ/6 [3, 4].
При оценке аллергенности ГСБ-106 проводили постановку реакции общей системной анафилаксии и активной кожной анафилаксии на морских свинках альбиносах; при изучении реакции гиперчувствительности замедленного типа морских свинок альбиносов иммунизировали ГСБ-106 в смеси с полным адъюван-том Фрейнда. Наличие псевдоаллергических реакций на готовую лекарственную форму ГСБ-106 изучали в реакции воспаления на неиммунологический активатор конканавалин А (Кон А) на мышах линии СВА [2]. Для всех показателей иммунотоксикологи-ческих исследований с нормальным распределением проводили межгрупповые сравнения по непарному ¿-критерию Стьюдента. Для множественных сравнений показателей с распределением, отличающимся от нормального, применяли непараметрический критерий Манна—Уитни, различия считали статистически значимыми прир < 0,05.
Результаты и обсуждение
При оценке иммунотоксичности ГСБ-106 выявлено, что 14-дневное пероральное введение в дозе 2,2 мг/кг мышам-гибридам F1 (СВАхС57БЬ/6) не оказывало значимого влияния на массу тимуса, селезёнки и подколенных лимфатических узлов. Введение ГСБ-106 в дозе 22 мг/кг значимо (р < 0,05) увеличивало индекс массы селезёнки в 1,8 раза по сравнению с контрольными особями, получавшими дистиллированную воду, и не влияло на индекс массы тимуса и подколенных лимфатических узлов.
Курсовое введение ГСБ-106 в дозе 2,2 мг/кг значимо (р < 0,05) увеличивало фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов в 1,6 раза по сравнению с контрольной группой, получавшей дистиллированную воду (табл. 1). 14-дневное введение ГСБ-106 в дозе 2,2 мг/кг не приводило к значимому изменению по-
Таблица 1
Влияние препарата ГСБ-106 на фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов при пероральном введении в течение 14 дней
Группы, п = 10 ФИ (усл. ед.)
Контроль 3,0 ± 0,3
ГСБ-106, 2,2 мг/кг 4,8 ± 0,3**
ГСБ-106, 22 мг/кг 3,8 ± 0,1
Примечание: п — число животных; ** — р < 0,01 — достоверность различий по сравнению с контрольной группой по непарному ¿-критерию Стьюдента.
казателей хемилюминесцентного ответа нейтрофилов на опсонизированный зимозан. Введение ГСБ-106 в дозе 22 мг/кг значимо (р < 0,05) увеличивало уровень активированной зимозаном хемилюминесценции в 8,2 раза и значимо в 6,6 раза (р < 0,01) увеличивало интегральный показатель хемилюминесценции S по сравнению с контрольной группой (табл. 2).
Таблица 2
Влияние препарата ГСБ-106 на показатели хемилюминесцентного ответа нейтрофилов на зимозан при пероральном введении в течение 14 дней
Группы, п = 10 Д1, (ту) S, (ед.) / 104 ^тах
Контроль 20 (12-35) 2,9 (2,3-4,6) 949,1 ± 96,9
ГСБ-106, 2,2 мг/кг 56 (24-72) 3,4 (3,0-4,2) 925,5 ± 102,0
ГСБ-106, 22 мг/кг 163,5* (48-320) 19,0** (6,7-36,8) 1031,3 ± 45,2
Примечание: п — число животных; А1 — показатель уровня активированной хемилюминесценции; 8 — интегральный показатель хемилюминесценции; ¿тах — время достижения максимальной интенсивности ХЛ после добавления стимула. * — р < 0,05, ** — р < 0,01 — достоверность различий по сравнению с контрольной группой.
Введение препарата ГСБ-106 перорально 14 дней в дозе 22 мг/кг мышам линии СВА значимо увеличивало антителообразование по сравнению с данными контрольной группы животных. Двухнедельное пероральное введение ГСБ-106 в дозах 2,2 мг/кг и 22 мг/кг мышам гибридам Б1 (CBAхC57BL/6) в течение 14 дней не вызывало значимой стимуляции клеточного иммунитета по сравнению с контрольной группой.
Результаты проведённого исследования иммунотоксичности ГСБ-106 позволяют заключить, что введение лекарственной формы препарата ГСБ-106 в диапазоне изученных доз не оказывает иммуноток-сического действия.
При оценке аллергенности введение ГСБ-106 по стандартной схеме иммунизации в дозах 1 мг/кг и 10 мг/кг (активного вещества) не вызывало у морских свинок альбиносов системной реакции анафилаксии и реакции активной кожной анафилаксии. После иммунизации морских свинок препаратом ГСБ-106 в
шшмгитож ксщшм
дозах 1 мг/кг и 10 мг/кг в смеси с полным адъювантом Фрейнда (ПАФ) на 21-й день опыта у всех животных опытных групп при внутрикожном введении разрешающей дозы препарата не выявлено аллергических реакций замедленного типа. Однократное пероральное введение ГСБ-106 в доза 2,2 мг/кг и 22 мг/кг мышам линии СВА не вызывало значимого уменьшения реакции воспаления на Кон А по сравнению с данными контрольной группы.
Заключение
Результаты проведённого комплексного исследования позволяют заключить, что готовая лекарственная
форма дипептидного миметика мозгового нейротрофического фактора ГСБ-106 в диапазоне изученных доз не оказывает иммунотоксического действия, не вызывает системной реакции анафилаксии, активной кожной анафилаксии, гиперчувствительности замедленного типа и псевдоаллергических реакций.
Проведённое исследование не установило данных, препятствующих клиническому испытанию готовой лекарственной формы ГСБ-106.
Исследование выполнено в рамках Федеральной целевой программы "Развитие фармацевтической и медицинской промышленности Российской Федерации на период до 2020 года и дальнейшую перспективу".
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ
Коваленко Лариса Петровна Автор, ответственный за переписку
e-mail: [email protected] ORCID ID: 0000-0002-2083-0832 SPIN-код: 5185-4250
д. б. н., в. н. с. лаборатории лекарственной токсикологии ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова», Москва
Коржова Ксения Витальевна
ORCID ID: 0000-0002-8087-4976 SPIN-код: 3831-3782 м. н. с. лаборатории лекарственной токсикологии ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова», Москва
Kovalenko Larisa Corresponding author
e-mail: [email protected] ORCID ID: 0000-0002-2083-0832 SPIN code: 5185-4250
D. Sci. in Biology, Leading Researcher of drug toxicology department FSBI «Zakusov institute of Pharmacology», Moscow
Korzhova Ksenia
ORCID ID: 0000-0002-8087-4976
SPIN code: 3831-3782
Junior researcher of laboratory of drug toxicology FSBI «Zakusov institute of Pharmacology», Moscow
Журиков Руслан Валерьевич
ORCID ID: 0000-0003-1084-690X SPIN-код: 6648-1794 м. н. с. лаборатории лекарственной токсикологии ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова», Москва
Zhurikov Ruslan
ORCID ID: 0000-0003-1084-690X SPIN code: 6648-1794
Junior researcher of laboratory of drug toxicology FSBI «Zakusov institute of Pharmacology», Moscow
Никитин Сергей Васильевич
ORCID ID: 0000-0001-7630-7816 к. х. н., с. н. с. отдела химии лекарственных средств ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова», Москва
Дурнев Андрей Дмитриевич
ORCID ID: 0000-0003-0218-8580 SPIN-код: 8426-0380
д. м. н., профессор, член-корр. РАН, зав. отдела лекарственной токсикологии, директор ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова», Москва
Nikitin Sergei
ORCID ID: 0000-0001-7630-7816 PhD Chemistry, Senior research officer of the medicinal chemistry department FSBI «Zakusov institute of Pharmacology», Moscow
Durnev Andrei
ORCID ID: 0000-0003-0218-8580 SPIN code: 8426-0380
D. Sci. in Medicine, professor, corresponding member of the RAS, Head of the department of drug toxicology, Director FSBI «Zakusov institute of Pharmacology», Moscow
32
ФШШШШ И ФШЩШМШ
шсшмшташ ишщшшм
Литература / References
1. Гудашева Т.А., Логвинов И.О., Антипова Т.А., Середенин С.Б. Доклады Академии наук. — 2013. — Т. 451. — № 5. — С. 577—580. [Gudasheva TA, Logvinov IO, Antipova TA, Seredenin SB. Academy of Science Reports, 2013;451(5):577-580. (In Russ).]
2. Коваленко Л.П., Федосеева В.Н., Дурнев А.Д. и др. Методические рекомендации по оценке аллергизирующих свойств лекарственных средств. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. — М.: Гриф и К; 2012,1(2), 51—63. [Kovalenko LP, Fedoseeva VN, Durnev AD, et al. Metodicheskie recomendaciipo otsenke allergiziruushchih svoistv lekarstvennih sredstv. Rukovodstvo po provedeniu doklinicheskih issledovanii lekarstvennih sredstv. Ch.1. Moscow: Grif i K; 2012, 1(2), 51-63. (In Russ).]
3. Хаитов Р.М., Иванова А.С., Коваленко Л.П. и др. Методические рекомендации по оценке иммунотоксического действия фармакологических веществ. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. — М.: Гриф и К; Metodicheskie recomendacii po otsenke immunotoksicheskogo deistviia farmakologicheskih veshchestv. Rukovodstvo po provedeniu doklinicheskih issledovanii lekarstvennih sredstv. Ch.1. Moscow: Grif i K; 2012, 1(3), 64—79. (In Russ).]
4. Хаитов Р.М., Гущин И.С., Пинегин Б.В. и др. Методические рекомендации по доклиническому изучению иммунотропной активности фармакологических веществ «Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. — М.: Гриф и К; 2012, 1(38), 626—656. [Haitov RM, Gushchin IS, Pinegin BV, et al. Metodicheskie recomendacii po doklinicheskomu izucheniiu immunotropnoi aktivnosti farmakologicheskih veshchestv. Rukovodstvo po provedeniu doklinicheskih issledovanii lekarstvennih sredstv. Ch.1. Moscow: Grif i K; 2012, 1(38), 626—656. (In Russ).]
33
ФШКОШЕТШ И ФШЩШМШ
