CC BY
9
2010 г.
ОЦЕНКА ГЕНЕТИЧЕСКОЙ СТАБИЛЬНОСТИ ВАКЦИННОГО ШТАММА ВИРУСА ПАРОТИТА ЛЕНИНГРАД-3
5Игнатьев Г.М., ‘Кулак М.В.,1Гайдерова Л.А., 4Отрашевская Е.В., 2Нетесова Н.А., 3Неверов А.А., 5Отрашевская А.В., Юнасова Т.Н.
1 ФГБУ «ГИСК им. Л.А. Тарасевича» Минздравсоцразвития России, г. Москва, Россия;
2 Федеральное Государственное учреждение науки ГНЦ ВБ «Вектор», Кольцово, Россия;
3 FDA, CBER, Betezda, MD, USA;
4 НПО «Микроген», Кольцово, Россия;
5 РНПЦ эпидемиологии и микробиологии, Минск, Республика Беларусь
ВОЗ рекомендует осуществлять контроль производственных штаммов паротитных вакцин, контролируя их генетическую стабильность на всех этапах производства. Ранее было показано, что вакцинный штамм Ленинград-3 (Л-3) имеет нуклеотидные отличия от штамма Leningrad-Zagreb ^^адгеЬ).
Для изучения стабильности штамма Л-3 были выбраны «горячие области» возможного накопления мутаций, локализованные в С-концевой части гена N и N концевой части гена F. Дополнительно исследовался ген SH и ген Н^ Изучали восемь серий паротитной вакцины российского производства, из посевного вируса № 69, а также паротитный компонент 5 серий вакцины против кори, паротита и краснухи производства Индии.
В результате исследования было показано, что все
серии российской вакцины по изучаемым генам гомологичны между собой и идентичны структуре штамма Л-3, представленной в ОепеВапк, номер АУ508995. Сравнение последовательностей, полученных при изучении вакцины индийского производства, с последовательностью штамма Л-3 продемонстрировало наличие замен в генах F и N.
Для дифференциации вакцинных штаммов Л-3 и L-Zagreb от других штаммов вируса паротита разработан молекулярно-биологический метод ОТ-ПЦР с последующим рестрикционным анализом. Показана 100 % специфичность и воспроизводимость предложенного метода. Данный метод является уникальным при расследовании случаев поствакцинальных осложнений после применения вакцин на основе штаммов Л-3 и L-Zagreb.
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ ВЫСОКОПРОИЗВОДИТЕЛЬНОГО ПАРАЛЛЕЛЬНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ НУКЛЕОТИДНЫХ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ ДЛЯ МОНИТОРИНГА ГЕНЕТИЧЕСКОЙ СТАБИЛЬНОСТИ ЖИВЫХ ВИРУСНЫХ ВАКЦИН
Неверов А.А., Чумаков К.М.
US Food and Drug Administration, Center for Biologics Evaluation and Research, Laboratory of Method Development HFM-470, 1401 Rockville Pike, Rockville, MD 20852
Высокая генетическая изменчивость РНК-содержащих вирусов обуславливает наличие в их популяциях совокупности близких генетических вариантов, часто описываемых термином квазивид (quasispecies). Данный феномен возникает в результате ограниченной точности вирусных РНК-репликаз и обуславливает ряд свойств, важных для выживания вируса. Так, при in-vivo и in-vitro репликации аттенуированных штаммов, используемых для приготовления живой полиомиелитной вакцины, возможно накопление вирулентных вариан-
тов вируса, что приводит к непригодности некоторых серий полиемиелитной вакцины для вакцинации детей. Исходя из этого, для обеспечения безопасности полио-милелитной вакцины необходим строгий контроль ее качества в процессе производства. Помимо традиционных испытаний на животных данная задача также осуществляется путем прямого анализа на наличие ре-вертантов в сериях готовой вакцины. Количественный анализ нейровирулентных мутаций в геноме аттенуированных штаммов вируса полиомиелита является
.ПРЕПАРАТЫ
частью рекомендованного тестирования готовых серий живой полиомиелитной вакцины. Для проведения данного анализа проводиться ПЦР-амплификация участков генома тестируемого вируса с последующим рестрикционным расщеплением продуктов реакции (MAPREC). Несмотря на отличную корреляцию между содержанием мутаций в 5'-нетранслируемой области генома полиовируса (например, 472-С у штамма Sabin III) и уровнем остаточной нейровирулентности, определяемой тестированием на обезьянах и трансгенных мышах, метод MAPREC имеет ряд недостатков. Наиболее важным из них является то, что MAPREC позволяет контролировать мутации только в отдельно взятых ло-кусах, оставляя без внимания возможность накопления мутаций в других участках генома. Данные мутации могут существенно влиять на качество контролируемой вакцины и приводить к ложно-негативным результатам анализа методом MAPREC. В данной работе нами предложено применение технологии высокопроизводительного параллельного определения нуклеотидных последовательностей для надежного выявления и количественной оценки всей гаммы возможных мутаций в геноме полиовируса. Данный подход позволяет напрямую определять нуклеотидный состав каждой позиции генома анализируемого штамма вируса исходя из ре-
зультатов анализа нескольких тысяч (или десятков тысяч) индивидуальных вирусных частиц. Анализ серий готовой полиомиелитной вакцины и стандартных образцов, проведенный новым методом, показал отличную корреляцию с результатами тестирования данных образцов методом MApREC. Определение содержания мутаций в контрольных образцах утверждённых Всемирной Организацией Здравоохранения (ВОЗ) и используемых для калибровки метода MAPREC, проведенное предложенным методом, дало идентичные значения содержания ключевых мутаций. Это позволяет использовать существующие утверждённые ВОЗ стандартные образцы для контроля точности предложенного метода, а сам метод как прямую замену метода MAPREC при проведении разрешающего тестирования серий живой полиомиелитной вакцины для применения на людях. Профили мутаций, присутствующих в вакцинных препаратах в незначительных количествах, были характерны для образцов посевных вирусов, использованных для их производства, и, таким образом, могут быть использованы для определения происхождения партий вакцины. Предложенный метод является универсальным инструментом применимым для слежения за генетической стабильностью любых живых вирусных вакцин.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ МАССОВОЙ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ ГЕПАТИТА В В ОТДЕЛЬНЫХ РЕГИОНАХ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Шахгильдян И.В., Хухлович П.А., Ершова О.Н., Хасанова В.А., Сергеева Н.А., Кузина Л.Е., Брагинский Д.М., Лыткина И.Н., Шулакова Н.И., Романенко В.В., Патлусова В.В., Сармометов Е.В., Исаева Н.В., Попова И.В., Каира А.Н., Гунина О.М., Усачева Л.П.
НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского, Москва, Россия
Реализация широкомасштабных программ иммунизации против гепатита В позволяет осуществлять контроль заболеваемости гепатитом В. В Российской Федерации в 2006-2009 гг. против гепатита В было привито более 41 млн. человек.
Определение иммунологических показателей у привитых против гепатита В проводили в пяти субъектах Российской Федерации (Москва, Московская, Воронежская, Свердловская области и Пермский край) путем исследования 2558 сывороток крови вакцинированных против этой инфекции, главным образом, в 2006 - 2008 гг. Из числа обследованных 21,9% составили мужчины и 78,1% - женщины. 61% обследованных были в возрасте 20-39 лет. Маркеры гепатита В (HВsAg, ап^-НВБ с определением их концентрации, ап^-НВсог суммарные и класса ^М) в различные сроки после завершения курса вакцинации против ГВ определяли методом хе-милюминисценции на автоматическом анализаторе
«Архитект», с использованием коммерческих тест-систем фирмы «Эббот».
Для вакцинации против ГВ обследованных лиц был использован ряд вакцинных генно-инженерных препаратов как отечественного, так и зарубежного производства. Среди них вакциной «Шанвак В» было привито 1040 чел., «Энджерикс В» - 857, вакциной против гепатита В (ДНК рекомбинантной) - 273, «Вирион» - 94, «Эувакс В» - 94, «Эбербиовак» - 74, «Комбиотех» - 65 и др. Все обследованные лица были привиты против гепатита В по схеме трехкратно.
Частота обнаружения HBsAg у обследованных привитых составила 1%. Ни у одного из обследованных с наличием HBsAg в крови не обнаружены ап^-НВсог ^М. что может свидетельствовать о том, что HBsAg-емия у них предшествовала вакцинации против ГВ. Обращает на себя внимание, что у 20 привитых (0,7%) при отсутствии HBsAg и антител к этому антигену, определяли
О9
