Интенсификация получения ферментных препаратов глюкоамилазы и ксиланазы для производства спирта из зернового сырья Текст научной статьи по специальности «Промышленные биотехнологии»

УДК 663.15 DOI 10.24411/0235-2486-2020-10042

Интенсификация получения ферментных препаратов глюкоамилазы и ксиланазы для производства спирта из зернового сырья

Е.В. Костылева*, канд. техн. наук; А.С. Середа, канд. техн. наук; И.А. Великорецкая, канд. техн. наук; Н.И. Игнатова; Н.В. Цурикова, канд. техн. наук

ВНИИ пищевой биотехнологии - филиал ФИЦ питания, биотехнологии и безопасности пищи, Москва Н.В. Хабибулина, канд. техн. наук

Российский химико-технологический университет им. Д.И. Менделеева, Москва

Дата поступления в редакцию 17.02.2020 * ekostyleva@list.ru

Дата принятия в печать 21.04.2020 ©, 2020

Реферат

При производстве спирта из зернового сырья помимо основных ферментов - альфа- и глюкоамилазы, обеспечивающих конверсию крахмала в сбраживаемые сахара, - используют карбогидразы, способные гидролизовать некрахмальные полисахариды злаковых культУр - арабиноксилан, целлюлозу, тюканы. С целью снижения вязкости замесов, повышения степени использования крахмала, увеличения концентрации сбраживаемых Углеводов в сусле широко применяют ферментные препараты целлюлаз и ксиланаз. На основе промышленного продуцента глюкоамилазы Aspergillus awamori ВУД Т2 был получен рекомбинантный штамм A. awamori Xyl-15, высокопродуктивный по глюкоамилазе и ксиланазе, синтезирующий также сопутствующие ферменты для расщепления целлюлозы и глюканов. ФП Ксилоглюкаваморин, получаемый на основе нового штамма, существенно повышает эффективность переработки зернового сырья при производстве этилового спирта без внесения дополнительных источников ксиланазы и целлюлаз. С целью повышения рентабельности процесса получения ФП Ксилоглюкаваморина были проведены исследования по оптимизации питательной среды для культивирования продуцента с использованием «БиоАкселя» - продукта переработки сои, оказывающего стимулирующее действие на биосинтетическую активность микрооганизмов. Установлено, что внесение в среды от 1 до 9% «БиоАкселя» приводит к увеличению биосинтеза штаммом глюкоамилазы, ксиланазы и эндоглюканазы. Максимальное увеличение биосинтетической активности - глюкоамилазы на 35%, ксиланазы и эндоглюканазы в 2 и 3,6 раза - наблюдалось при добавлении 3% «БиоАкселя». Полученный с использованием оптимизированной среды препарат Ксилоглюкаваморин БА с увеличенной долей ксиланазы и эндоглюканазы оценивали в сравнении с ФП Ксилоглюкаваморин К, полученным на среде без «БиоАкселя», методом постановки бродильных проб. Применение Ксилоглюкаваморина БА позволило интенсифицировать процесс сбраживания ржаного сусла. В опытных вариантах наблюдались снижение содержания несброженных углеводов по сравнению с контролем и увеличение концентрации спирта в бражке на 2,2%, что в пересчете на 1т условного крахмала дало увеличение выхода спирта на 1 %, или 0,8 Дал.

Ключевые слова

Aspergillus awamori, «БиоАксель», глюкоамилаза, ксиланаза, ржаное сусло Для цитирования

Костылева Е.В., Середа А.С., Великорецкая И.А., Игнатова Н.И., Цурикова Н.В., Хабибулина Н.В. (2020) Интенсификация получения ферментных препаратов глюкоамилазы и ксиланазы для производства спирта из зернового сырья // Пищевая промышленность. 2020. № 4. С. 39-42.

Intensification of the production of glucoamylase and xylanase enzyme preparations for ethanol production from grain raw materials

E.V. Kostyleva*, Candidate of Technical Sciences; A.S. Sereda, Candidate of Technical Sciences; I.A. Velikoretskaya, Candidate of Technical Sciences; N.I. Ignatova, N.V. Tsurikova, Candidate of Technical Sciences

All-Russian Scientific Research Institute of Food Biotechnology - Branch of the Federal Research Center of Nutrition, Biotechnology and Food Safety

N.V. Khabibulina, Candidate of Technical Sciences

Dmitry Mendeleev University of Chemical Technology of Russia, Moscow

Received: February 2, 2020 * ekostyleva@list.ru

Accepted: April 21, 2020 ©, 2020

Abstract

In ethanol production from grain raw materials, in addition to the main enzymes, alpha and glucoamylase, which convert starch into fermentable sugars, carbohydrases that can hydrolyze non-starch cereal polysaccharides arabinoxylan, cellulose, glucans are used. In order to reduce the viscosity of mashes, increase the degree of starch utilization and concentration of fermentable carbohydrates in the wort, enzymatic preparations of cellulases and xylanases are widely used. A recombinant Aspergillus awamori Xyl-15 strain was obtained possessing high glucoamylase and xylanase activity, and additionally synthesizing concomitant enzymes capable of cleaving cellulose and glucans. Enzyme preparation Xyloglucawamorin, obtained using the new strain, significantly increases the efficiency of processing grain raw materials in the production of ethanol without introducing additional sources of xylanase and cellulases. In order to increase the profitability of obtaining Xyloglucawamorin, studies were conducted to optimize the fermentation medium using BioAccel, a soybean derived by-product that has a stimulating effect on the biosynthetic activity of fungal strains. It was found that the addition of 1 to 9% BioAccel to the fermentation medium led to an increase in the biosynthesis of glucoamylase, xylanase, and endoglucanase. At an optimal BioAccel dosage of 3% the glucoamylase activity of A. awamori Xyl-15 increased by 35%, xylanase and endoglucanase activities - 2 and 3.6 times, respectively. The effectiveness of Xyloglucawamorin BA preparation with an increased proportion of xylanase and endoglucanase obtained using an optimized medium was evaluated in rye mash saccharification process in comparison with Xyloglucawamorin K obtained without BioAccel. It was shown that the use of Xyloglucawamorin BA made it possible to intensify the rye wort fermentation. Compared to the control, in the probes obtained using Xyloglucawamorin BA, a decrease in non-fermented carbohydrates content and an increase in the ethanol concentration in the wort by 2.2% was observed, which in terms of 1 ton of conventional starch gave an increase in ethanol yield by 1% or 0.8 Dal.

Key words

Aspergillus awamori, BioAccel, glucoamylase, xylanase, rye wort For citation

Kostyleva E.V., Sereda A.S., Velikoretskaya I.A., Ignatova N.I., Tsurikova N.V., Khabibulina, N.V. (2020) Intensification of the production of glucoamylase and xylanase enzyme preparations for ethanol production from grain raw materials // Food processing industry = Pischevaya promyshlennost'. 2020. No. 4. P. 39-42.

Введение. В качестве сырья для производства этилового спирта в России используются в основном злаковые культуры: рожь, пшеница, тритикале и др. [1]. При всех положительных аспектах применения зернового сырья основным его недостатком является высокое содержание некрахмальных полисахаридов (НКП), главным образом, арабиноксиланов, ß-глюканов и целлюлозы. НКП повышают вязкость развариваемой массы, увеличивают потери сбраживаемых углеводов на стадии водно-тепловой обработки, затрудняют процесс получения сусла с высокой концентрацией сухих веществ, что приводит к повышению себестоимости готового продукта [2, 3].

Для более полноценного использования сырья, повышения выхода конечного продукта и эффективности технологии в целом помимо амилолитических ферментных препаратов (ФП), традиционно применяемых для разжижения и оса-харивания крахмала, в зерновые замесы вносят ферменты, способные разрушать основные НКП зернового сырья -ксиланы, ß-глюкан, целлюлозу [2, 4]. Дополнительное внесение препаратов целлюлолитического и гемицеллюлоли-тического действия приводит к снижению вязкости замесов и, соответственно, затрат электроэнергии на их перемешивание и транспортировку, повышает доступ амилолитических ферментов к крахмалу и степень его использования, увеличивает концентрацию сбраживаемых углеводов [4, 5].

Цель исследования. Во ВНИИПБТ совместно с ФИЦ биотехнологии РАН на основе промышленного продуцента глюкоамилазы Aspergillus awamori ВУД т2 с применением методов мутагенеза и генной инженерии был получен реком-бинантный штамм Aspergillus awamori Xyl-15 (ВКМ F-4278D), обладающий высокой активностью глюкоамилазы и ксиланазы [6]. Помимо основных ферментов продуцент синтезирует сопутствующие карбоги-дразы, способные расщеплять целлюлозу и ß-глюкан. Ферментные препараты, получаемые на основе штамма A. awamori Xyl-15, предназначены для повышения эффективности процесса осахаривания сусла из зернового сырья в производстве этилового спирта и позволяют эффективно проводить осахаривание ржаных замесов без внесения дополнительных дорогостоящих ФП [7].

Результаты исследования и их анализ. Одним из способов повышения рентабельности производства ФП является

введение в состав ферментационных сред недорогих индукторов, способствующих повышению активности целевых ферментов. Перспективным индуктором биосинтеза ферментов микробными продуцентами является препарат «БиоАксель», образующийся в качестве вторичного продукта при получении соевых белковых концентратов в результате концентрирования экстрактивных веществ сои [8].

С целью увеличения продуктивности штамма А. awamoriХу1-15 и получения высокоактивных ФП для осахаривания зернового сырья при производстве этилового спирта было проведено исследование влияния соевого продукта «БиоАксель» на биосинтез штаммом А. awamori Ху1 -15 глюкоамилазы и ксиланазы и эффективности полученного на его основе ФП Кси-логлюкаваморина Гх при осахаривании ржаного замеса.

Культивирование штамма А. awamori Ху 1-15 проводили на термостатируемой качалке (250 об./мин) при 35 °С в течение 168 ч в колбах объемом 750 мл со 100 мл ферментационной среды, содержащей 20 % пшеничной муки, обработанной а-амилазой (2 ед./г крахмала), в водопроводной воде, рН естественный 5,7-6,2. В ферментационную среду в концентрации от 1 до 9 % (по вариантам опыта) вносили «БиоАксель» - концентрат низкомолекулярных веществ сои (ЗАО «Партнер-М», г. Малоярославец) с содержанием белка 14,5±0,3% а. с. в., общих сахаров - 53,1±1,5% а. с. в., массовой долей влаги - 4,8%. Для засева колб использовали посевной материал, выращенный на агаризованном солодовом сусле 7 °с и хранившийся при температуре 5 °С в течение 1,5 месяцев. Биомассу культуры, выращенной глубинно, отделяли центрифугированием при 10750 д в течение 5 мин. Супернатант культуральной жидкости (ФП Ксилоглюкаваморин Гх) использовали для определения активности целевых ферментов, а также для осахаривания ржаного замеса.

Активность глюкоамилазы (ГлА) определяли по скорости образования глюкозы из растворимого крахмала глюкозооксидазно-пероксидазным методом. За единицу глюкоамилазной активности принимали такое количество фермента, которое приводит к образованию 1 мкмоля глюкозы из 1 %-ного раствора крахмала за 1 мин при 30 °С и рН 4,7 [9]. Активность ксиланазы (КсА) и эндоглюка-назы (ЭГ) определяли по скорости образования восстанавливающих сахаров (ВС) методом Шомоди-Нельсона при гидролизе ксилана из древесины березы, Na-соли карбоксиметилцеллюлозы соответственно

[10, 11]. За единицу активности принимали такое количество фермента, которое приводит к образованию 1 мкмоль ВС за 1 мин при рН 5,0, 50 °С при концентрации субстрата в реакционной смеси 0,5%.

Подготовку ржаного сусла с концентрацией сухих веществ 18 % осуществляли по механико-ферментативной схеме. Для разжижения крахмала на стадии декстринизации использовали ФП термостабильной а-амилазы в дозировке 0,3 ед. АС/ г крахмала. На стадии осаха-ривания вводили ФП Ксилоглюкавамо-рин Гх из расчета 6 ед. ГлА /г крахмала, при стандартной дозировке глюкоа-милазы для сусла такой концентрации 8 ед. ГлА/г крахмала, так как присутствие дополнительных карбогидраз повышает эффективность действия препарата и обеспечивает получение сусла с необходимыми характеристиками. Для сбраживания подготовленного зернового сусла использовали расу спиртовых дрожжей Saccharomyces cerevisiae 985-Т.

Исходя из полученных результатов (рис. 1), внесение соевого продукта «БиоАксель» в ферментационную среду с 20% гидролизата пшеничной муки привело к увеличению биосинтеза рекомбинант-ным штаммом А. awamori Ху1 -15 целевых ферментов - глюкоамилазы и ксиланазы, а также сопутствующей карбогидразы -эндоглюканазы. Эндоглюканаза играет ключевую роль при гидролизе целлюлозы, способствуя быстрому снижению вязкости замесов, повышая доступность крахмала зерна для действия амилолити-ческих ферментов. Максимальный прирост активности ферментов наблюдался при увеличении концентрации в среде «БиоАкселя» от 1 до 3%: активность глю-коамилазы увеличилась на 27% по сравнению с вариантом с 1 % «БиоАкселя» и на 35% по отношению к контрольной среде. Активность ксиланазы и эндо-глюканазы увеличилась соответственно в 1,3 и 2 раза по отношению к варианту с 1% «БиоАкселя» и в 2 и 3,6 раза соответственно в сравнении с контрольной средой. Дальнейшее повышение концентрации «БиоАкселя» до 5-9% не привело к заметному возрастанию активности исследуемых ферментов: увеличение активности глюкоамилазы и ксиланазы не превышало 5 % по сравнению с вариантом с 3% «БиоАкселя», а активность эндоглю-каназы имела тенденцию к небольшому снижению на средах с 7 и 9% «БиоАкселя». Поэтому на следующем этапе работы для культивирования штамма А. awamori Ху1-15 использовали среду, содержащую 3% «БиоАкселя».

ГлА КсА ЭГ

1 3 5

Концентрация «БиоАкселя», %

Рис. 1. Влияние соевого продукта «БиоАксель» на биосинтез глюкоамилазы, ксиланазы и эндоглюканазы штаммом A. awamori Xyl-15

Ксилоглюкаваморин К 15

12 Ксилоглюкаваморин БА

24 48 72

Продолжительность брожения,ч

Рис. 2. Выделение С02 клетками дрожжей в процессе сбраживания ржаного сусла

Показатели зрелой бражки (на 72 ч) и выход спирта из ржаного сусла, полученного с использованием ФП Ксилоглюкаваморин К и Ксилоглюкаваморин БА

ФП Дозировка активностей, ед./г крахмала РВ, г/100 см3 ОРВ, г/100 см3 Концентрация спирта в бражке, % Выход спирта из 1 т усл. крахмала, Дал

Ксилоглюкаваморин К ГлС - 6,0 КсА - 1,3 ЭГ - 0,28 0,78±0,03 0,86±0,04 9,1±0,2 64,9±1,5

Ксилоглюкаваморин БА ГлС - 6,0 КсА - 2,1 ЭГ - 0,75 0,70±0,03 0,82±0,04 9,3±0,2 65,7±1,5

Следует отметить, что на средах с внесением «БиоАкселя» изменилось соотношение глюкоамилазы и ферментов, гидролизующих некрахмальные полисахариды зернового сырья. Учитывая, что дозирование ФП в спиртовом производстве осуществляется по активности глюкоамилазы, увеличение доли целлю-лазы и гемицеллюлазы в препарате может повысить эффективность осахаривания зернового замеса.

Для подтверждения этого предположения из культуральной жидкости А. awamori Ху1-15, выращенного на стандартной среде и среде с 3% «БиоАкселя», были получены препараты Гх (супернатан-ты КЖ) - Ксилоглюкаваморин К и Ксилоглюкаваморин БА соответственно. Эффективность препаратов при осахаривании ржаных замесов сравнивали методом постановки бродильных проб. Следует отметить, что при одинаковой дозировке глюкоамилазы количество ксиланазной активности на 1 г крахмала при использовании Ксилоглюкаваморина БА увеличилось на 61 %, а эндоглюканазной -в 2,5 раза (см. таблицу).

Из полученных данных (рис. 2) можно сделать предположение, что за счет повышения доступности питательных компонентов зерна и улучшения массооб-менных процессов в результате снижения вязкости замеса в опытном варианте более активно накапливались клетки дрожжей, о чем свидетельствовало увеличение количества выделяемого дрожжами углекислого газа, особенно на первые

и вторые сутки брожения. Концентрация в сусле дрожжевых клеток на 48 ч брожения увеличилась на 7,3% - с 96 до 103 млн кл/см3. Более высокая активность эндоглюканазы и ксиланазы по отношению к глюкоамилазе в Ксилоглюкаваморине БА позволила получить более глубоко вы-броженную бражку по сравнению с контролем, что подтверждалось снижением содержания несброженных углеводов (табл. 1). Концентрация спирта в бражке увеличилась на 2,2 %, выход спирта из 1 т условного крахмала - на 1, или 0,8 Дал.

Таким образом, увеличение в препарате доли ферментов, способных гидролизо-вать основные некрахмальные полисахариды зерна ржи - ксиланы, глюканы и целлюлозу, - способствовало интенсификации роста дрожжей, улучшению показателей зрелой бражки и повышению выхода спирта.

Полученные результаты свидетельствуют о перспективности использования ферментационных сред, содержащих соевый продукт «БиоАксель», при культивировании штамма A.awamor¡Ху1-15. Повышение активности основного фермента - глюкоамилазы - на 35% при внесении «БиоАкселя» позволит существенно снизить себестоимость производства ферментных препаратов, а увеличение в них доли карбогидраз, способных гидролизовать ксиланы, глюканы и целлюлозу, повысит эффективность применения препаратов при обработке зернового сырья в спиртовом производстве.

Научно-исследовательская работа по подготовке рукописи проведена за счет средств субсидии на выполнение государственного задания в рамках Программы фундаментальных научных исследований государственных академий наук на 20192021 гг. (тема № 0529-2019-0057).

ЛИТЕРАТУРА

1. Кононенко, В.В. О производстве и перспективах применения этилового спирта в России/ В. В. Кононенко, М. В. Туршатов,

B. П. Леденев [и др.] // Хранение и переработка сельхозсырья. - 2018. - № 2. -

C. 44-47.

2. Шариков, А.Ю. Перспективы использования экструдата ржи в биотехнологии эта-нола/А.Ю. Шариков, В.И. Степанов, В.В. Иванов [и др.] // Достижения науки и техники АПК. - 2014. - № 5. - С. 66-68.

3. Яковлева, С.Ф. Биотехнология этанола из ржи с применением мультиэнзимной композиции; автореферат ... канд. техн. наук. -Воронеж, 2012.

4. Зуева, Н. В. Влияние ферментных препаратов на основные показатели продуктов при разработке технологии переработки концентрированного сусла на этанол/Н.В. Зуева, Г.В. Агафонов, М. В. Корчагина [и др.] // Вестник Воронежского государственного университета инженерных технологий. -2017. - Т. 79. - № 2 (72). - С. 191-197.

5. Долгов, А.Н. Глубокая переработка зернового сырья с получением этилового спирта и белкового продукта; дисс. . канд. техн. наук. - Воронеж, 2015.

6. Рожкова, А. М. Создание системы экспрессии гетерологичных генов на основе штамма гриба Aspergillus awamori/А.М. Рожкова, А.С. Середа, Н.В. Цурикова [и др.] // Прикладная биохимия и микробиология. -2011. - Т. 47. - № 3. - С. 308-317.

7. Середа, А.С. Исследование гидролитической способности комплексных ферментных препаратов, полученных на основе высоко-

эффективных рекомбинантных штаммов Aspergillus awamori, по отношению к полисахаридам зернового сырья/А.С. Середа, Н. И. Игнатова, М.Б. Оверченко [и др.] // Хранение и переработка сельхозсырья. -2011. - № 3. - С. 54-56.

8. Середа, А.С. Использование препарата на основе низкомолекулярных веществ сои для повышения активности ксиланазы и эн-доглюканазы мутантного штамма Trichoderma reesei Co-44/ А. С. Середа, Е. В. Костылева, И.А. Великорецкая [и др.] // Биотехнология. -2019. - Т. 35. - № 5. - С. 70-79.

9. ГОСТ Р 54330-2011. Ферментные препараты для пищевой промышленности. Методы определения амилолитической активности.

10. ГОСТ Р 55302-2012. Ферментные препараты для пищевой промышленности. Метод определения ксиланазной активности. Введ. 29.11.2012. - М.: Стандартинформ, 2013. -11 с.

11. ГОСТ Р 55293-2012. Ферментные препараты для пищевой промышленности. Метод определения целлюлазной активности (с Поправкой, с Изменением No. 1). Введ. 01.01.2014. - М.: Стандартинформ, 2014. -20 с.

REFERENCES

1. Kononenko VV, Turshatov MV, Ledenev VP, Krivchenko VA, Moiseeva ND, SoLov'ev AO, KiriLLov EA, ALekseev VV. O proizvodstve i perspektivah primeneniya etiLovogo spirta v Rossii [On the production and prospects of the use of ethyL aLcohoL in Russia]. Hranenie i pererabotka sel'hozsyr'ya [Storage and processing of agricuLturaL raw materiaLs]. 2018. No. 2. P. 44-47.

2. Sharikov A Yu, Stepanov VI, Ivanov VV, Rimareva LV, Ignatova NI, Skvorcova LI. Perspektivy ispoL'zovaniya ekstrudata rzhi v biotekhnoLogii etanoLa [Prospects for the use of rye extrudate in ethanoL biotechnoLogy].

Dostizheniya nauki i tekhniki APK [Achievements of science and technology APK]. 2014. No. 5. P. 66-68.

3. Yakovleva SF. Biotekhnologiya etanola iz rzhi s primeneniem mul'tienzimnoj kompozicii [Rye ethanol biotechnology using a multienzyme composition]. Abstract dissertation ... Candidate of Technical Sciences. Voronezh, 2012.

4. Zueva NV, Agafonov GV, Korchagina MV, Dolgov AN. Vliyanie fermentnyh preparatov na osnovnye pokazateli produktov pri razrabotke tekhnologii pererabotki koncentrirovannogo susla na etanol [The influence of enzyme preparations on the main indicators of products in the development of technology for processing concentrated wort to ethanol]. Vestnik Voronezhskogo gosudarstvennogo universiteta inzhenernyh tekhnologij [Bulletin of Voronezh State University of Engineering Technology]. 2017. Vol. 79. No. 2 (72). P. 191-197.

5. Dolgov AN. Glubokaya pererabotka zernovogo syr'ya s polucheniem etilovogo spirta i belkovogo produkta [Deep processing of grain raw materials to produce ethyl alcohol and protein product]. Thesis ... Candidate of Technical Sciences. Voronezh, 2015.

6. Rozhkova AM, Sereda AS, Curikova NV, Rimareva LV, Nurtaeva AK, Semenova MV, Rubcova EA, Zorov IN, Sinicyna OA, Sinicyn AP. Sozdanie sistemy ekspressii geterologichnyh genov na osnove shtamma griba Aspergillus awamori [Creation of a heterologous gene expression system based on Aspergillus awamori strain]. Prikladnaya biohimiya i mikrobiologiya [Applied biochemistry and microbiology]. 2011. Vol. 47. No. 3. P. 308-317.

7. Sereda AS, Ignatova NI, Overchenko MB, Curikova NV, Rimareva LV, Rozhkova AM, Zorov IN, Sinicyn AP. Issledovanie gidroliticheskoj sposobnosti kompleksnyh fermentnyh preparatov, poluchennyh na

osnove vysokoeffektivnyh rekombinantnyh shtammov Aspergillus awamori, po otnosheniyu k polisaharidam zernovogo syr'ya [Investigation of the hydrolytic ability of complex enzyme preparations obtained on the basis of highly effective Aspergillus awamori recombinant strains in relation to polysaccharides of grain raw materials]. Hranenie i pererabotka sel'hozsyr'ya [Storage and processing of agricultural raw materials]. 2011. No. 3. P. 54-56.

8. Sereda AS, Kostyleva EV, Velikoreckaya IA, Curikova NV, Habibulina NV, Bikbov TM, Bubnova TV, Nemashkalov VA. Ispol'zovanie preparata na osnove nizkomolekulyarnyh veshchestv soi dlya povysheniya aktivnosti ksilanazy i endoglyukanazy mutantnogo shtamma Trichoderma reesei Co-44 [The use of a preparation made of low molecular weight soy substances to increase the xylanase and endoglucanase activity of Trichoderma reesei Co-44 mutant strain]. Biotechnologiya [Biotechnology]. 2019. Vol. 35. No. 5. P. 70-79.

9. GOST P 54330-2011. Fermentnie preparati dlya pischevoy promyshlennosti. Metodi opredeleniya amiloliticheskoy activnosti [Enzyme preparations for the food industry. Methods for determination of amylolytic activity].

10. GOST P 55302-2012. Fermentnie preparati dlya pischevoy promyshlennosti. Metod opredeleniya xilanaznoy activnosti [Enzyme preparations for the food industry. Method for determination of xylanase activity] Introduction 29.11.2012. Moscow: Stardartinform, 2013. 11 p.

11. GOST P 55293-2012. Fermentnie preparati dlya pischevoy promyshlennosti. Metod opredeleniya tselluloznoy activnosti [Enzyme preparations for the food industry. Method for the determination of cellulase activity (with the amendment, with the change 1)]. Introduction 01.01.2014. Moscow: Stardartinform, 2014. 20 p.

Авторы

Костылева Елена Викторовна, канд. техн. наук, Середа Анна Сергеевна, канд. техн. наук, Великорецкая Ирина Александровна, канд. техн. наук, Игнатова Надежда Иосифовна, Цурикова Нина Васильевна, канд. техн. наук,

ВНИИ пищевой биотехнологии - филиал ФИЦ питания, биотехнологии и безопасности пищи, 111033, Москва, ул. Самокатная, д. 4Б Хабибулина Наталья Викторовна, канд. техн. наук Российский химико-технологический университет им. Д. И. Менделеева, 125047, Москва, Миусская пл., д. 9, as.sereda@gmai1.com, ekosty1eva@1ist.ru, smirnova_i.a@mai1.ru, nina.tsurikova@gmai1.com, ignatova59@1ist.ru, khabibu1ina.nata1ia@partnermk.ru

Authors

Elena V. Kostyleva, Candidate of Technical Sciences, Anna S. Sereda, Candidate of Technical Sciences, Irina A. Velikoretskaya, Candidate of Technical Sciences, Nadezhda I. Ignatova,

Nina V. Tsurikova, Candidate of Technical Sciences

All-Russian Scientific Research Institute of Food Biotechnology -Branch of the Federal State Budgetary Institution of Science of the Federal Research Center of Nutrition, Biotechnology and Food Safety, 4B, Samokatnaya str., Moscow, 111033, Natalya V. Khabibulina, Candidate of Technical Sciences Dmitry Mendeleev University of Chemical Technology of Russia, 9, Miusskaya square, Moscow, 125047, as.sereda@gmail.com, ekostyleva@list.ru, smirnova_i.a@mail.ru, nina.tsurikova@gmail.com, ignatova59@1ist.ru, khabibulina.natalia@partnermk.ru