Ингибирование клеточной инвазии и индуцирование аноикоза в клетках меланомы у мышей при помощи противовоспалительного препарата DTCM-глутаримида Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

4

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

ЙДЕдшивная1»идЯцпия1и1ВнКВи5пйя

ИНГИБИРОВАНИЕ КЛЕТОЧНОЙ ИНВАЗИИ И ИНДУЦИРОВАНИЕ АНОИКОЗА В КЛЕТКАХ МЕЛАНОМЫ У МЫШЕЙ ПРИ ПОМОЩИ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРЕПАРАТА DTCM-ГЛУТАРИМИДА

А. Канеда, Ш.Х. Ганцев, К. Умезава

Университет Кейо, кафедра прикладной химии, факультет науки и технологии, Япония, г. Йокохама ГБОУ ВПО Башкирский государственный медицинский университет Научно-исследовательский институт онкологии, г. Уфа, Россия

Медицинский университет Аичи, кафедра скрининга молекулярной таргетной медицины, Школа Медицины, Япония, г. Нагакутэ

Канеда Аюми, научный сотрудник кафедры прикладной химии, факультет науки и технологии университета Кейо, Йокохама 223-0061, Япония

Ганцев Шамиль Ханафиевич, зав. кафедрой онкологии с курсами онкологии и патологической анатомии ИПО, д-р мед. наук, профессор,

Умезава Казуо, профессор кафедры скрининга молекулярной таргетной медицины, Школа Медицины, Медицинский университет Аичи, Нагакутэ, 480-1195, тел./ факс 81-561-61-1959, e-mail: umezawa@aichi-med-u.ac.jp

Разработан новый противовоспалительный препарат DTCM-глутаримид для ин-гибирования активации макрофагов. Он показал свою противовоспалительную активность in vivo. В настоящем исследовании была оценена противометастатическая активность данного препарата, используя клетки B16-F10 меланомы мыши. DTCM-глу-таримид ингибировал клеточную инвазию в камере с использованием геля Matrigel, снизив при этом матричную экспрессию металлопротеиназы 9 (MMP9). Препарат также индуцирует аноикоз в пластинах, с покрытием polyHEMA. Он увеличивает экспрессию Bax и снижает Bcl-X, активирует p53, понижая при этом экспрессию MDM2. Было установлено, что DTCM-глутаримид ингибирует клеточную инвазию и индуцирует аноикоз в клетках. B16-F10. Он не токсичен, легок в изготовлении, поэтому может стать кандидатом на использование в качестве противоопухолевого препарата.

Ключевые слова: DTCM-глутаримид, инвазия, аноикоз, Bax, Bcl-X, p53.

INHIBITION OF CELLULAR INVASION AND INDUCTION OF ANOIKIS IN MOUSE MELANOMA CELLS BY AN ANTI-INFLAMMATORY AGENT DTCM-GLUTARIMIDE

A. Kaneda, Sh.Kh. Gantsev, K. Umezawa

Keio University, Department of Applied Chemistry, Faculty of Science and Technology, Japan, Yokohama

Bashkir State Medical University

Scientific Research Institute of Oncology, Ufa, Russia

Aichi Medical University, Department of Molecular Target Medicine Screening, School of Medicine, Japan, Nagakute

Previously, we designed DTCM-glutarimide as a novel anti-inflammatory agent inhibiting macrophage activation. It also showed anti-inflammatory activity in vivo. In the present research, we evaluated the anti-metastatic activity of this agent using mouse melanoma B16-F10 cells. DTCM-glutarimide inhibited the cellular invasion in the Matrigel chamber assay, lowering matrix, metalloproteinase 9 (MMP9) expression. It also induced anoikis rather than apoptosis in polyHEMA-coated plates. It increased Bax and decreased Bcl-XL expressions, and activated p53 lowereing the MDM2 expression. Thus, DTCM-glutarimide was found to inhibit cellular invasion and to induce anoikis in B16-F10 cells. It is non-toxic, and easily prepared, therefore, is considered to be a new candidate of anti-metastasis agent.

The key words: DTCM-glutarimide, Invasion, Anoikis, Bax, Bcl-X, p53.

КРедВН1я1Хицу5пиЯ1и1дНкоЯппиЯ

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

5

Введение

В ходе скрининга ингибиторов транскрипционного фактора NF-kB мы выделили антибиотик, 9-метилстриптимидон из культурального фильтрата микроорганизмов. В анализе, проведенном по гену репортёру, 9-метилстрептимидон ингибировал активность NF-kB и показал селективную цитотоксич-ность по отношению к клеткам Т-клеточной лейкемии взрослых, в которой NF-kB был активирован [13]. Затем мы попытались получить большее количество этого природного соединения, но продуцирование им микроорганизмов было слабым, а его химический синтез не был эффективным. Далее мы синтезировали около 20 производных, среди которых нами был отмечен DTCM-глутаримид, подавляющий индуцированное липополисахаридами производство NO в клетках макрофагов линии RAW264.7 [7]. DTCM-глутаримид не ингибировал индуцированную липополисахаридами активацию NF-kB в течение 30 мин. Однако было обнаружено, что он ингибирует NF-kB в течение 24 часов. Препарат также показал противовоспалительную активность in vivo, ингибировав отторжение трансплантата у мыши после операции по трансплантации сердца [1l].

Метастатическая активность раковых клеток часто бывает связана с активностью клеточной инвазии. Меланома - распространенный вид рака кожи, является одним из наиболее злокачественных канцеров с высокой метастатической способностью. Радикальные клетки роста меланомы часто неинвазивны, однако на стадии вертикального роста меланомы и при экспрессии Akt (серин/треониновой протеин-киназы) они становятся высоко инвазивными [4]. Клетки B16 меланомы мыши часто используются для анализа метастазов и инвазии в связи с их потентной инвазивной активностью in vitro и in vivo [5]. Путем последовательных экспериментов на животных была выбрана клеточная линия B16-F10 в качестве линии, обладающей высокой метастатичностью. Аноикоз является видом апоптоза; он возникает из-за недостаточных или ненадлежащих контактов в клеточной матрице [2,6]. Аноикоз играет важную роль в регуляции тканевого гомеостаза при реконструкции ткани, а также в развитии опухолевых метастаз, поэтому наличие сопротивляемости аноикозу считается важным фактором для метастазирования раковых клеток. Таким образом, вещества, индуцирующие аноикоз, могут стать новым противометастатичес-ким средством. Как и апоптоз, аноикоз усиливается Bax и ингибируется Bcl-XL, а также другими белками, ингибирующими апоптоз. Белок р53 играет важную роль в индуцировании аноикоза [1,12]. Активность р53 регулируется белком-ингибитором MDM2, который может фосфорилировать при помощи Akt [11]. В настоящем исследовании нами изучалась антиметастатическая активность DTCM-глутаримида; было обнаружено, что он ингибирует инвазию и индуцирует аноикоз в клетках B16-F10.

Материалы и методы

DTCM-глутаримид (3-[(додецилтиокарбонил) метил] глутаримид) был синтезирован нами, как

было описано выше [7]. Монолокальное антитело мыши анти-р53 было куплено в компании Merck Bioscience (Токио, Япония). Поликлональные анти-MDM2, анти-Вах и анти-Bcl-XL. кролика были приобретены у компании Santa Cruz Biotechnology (Санта-Крус, штат Калифорния). Монолокальные антитела анти-а-тубулин мыши были куплены в Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури). У компании GE Healthcare (Little Chalfont, Великобритания) были приобретены антитела: анти-кролик-IgG, полученный от козы и анти-мышь-IgG, полученный от овцы.

Культура клеток

Высоко метастатичные клетки меланомы мыши B16-F10 были выращены в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла (DMEM; Nissui, Токио, Япония) с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки (MP Biomedicals Inc, Ирвин, Калифорния), 200 цг/мл канамицина (Sigma, Сент-Луис, Миссури), 100 ед./мл пенициллина G (Sigma), 600 цг/мл L-глютамина (Sigma), и 2,25 г/л NaHCO3 при температуре 370 до 5% CO2 плюс воздух. Клетки фибробласты мыши NIH-3T3 также выращенные и модифицированные по способу Дульбекко в среде Игла (Nissui) с добавлением 10% телячьей сыворотки (MP Biomedicals Inc), 200 цг/мл канамицина, 100 ед./мл пенициллина G, 600 цг/мл L-глютамина и 2,25 г/л NaHCO3 при температуре 370 до 5% CO2 плюс воздух.

Анализ в камере Matrigel

In vitro нами был проведен анализ инвазии с помощью 24-луночной инвазивной камеры Matrigel с размером пор 8,0 цм (BD Biosciences). Фильтры, покрытые гелем Matrigel, были инкубированы в бессывороточной среде по способу Дульбекко в течение 2 часов перед проведением анализа. Фибробласты мышей NIH-3T3 инкубировали в течение 18 часов в бессывороточной среде, содержащей 50 цг/мл L-аскорбиновой кислоты. Эти условные среды использовались в качестве источника хемоатрактан-тов 24-26. Они были разведены в соотношении 1:5 с бессывороточной средой, содержащей 0,1% BSA, и 750 цл были помещены в нижний отсек пластины Transwell. Затем клетки B16-F10 были ресуспендиро-ваны в 500 цл той же среды, содержащей 0,1% BSA, и помещены в верхний отсек пластины Transwell. После этого клетки инкубировали в течение 24 часов. Их фиксировали и окрашивали при помощи Diff-Quik (Sysmex, Кобе, Япония). Клетки на верхней поверхности фильтра были удалены механически, ватным тампоном; при наблюдении через световой микроскоп были определены инвазивные фенотипы путем подсчета клеток, которые вторглись в нижнюю часть фильтра. Результаты выражали в среднем ±S.E.M. из четырех экземпляров определений.

РНК изоляция и полуколичественный ПЦР с обратной транскрипцией

Вся клеточная РНК была выделена из клеток B16-F10 с помощью реагента TRIzol (Invitrogen Corp, Карлсбад, Калифорния). Обратная транскрипция проводилась при 370 в течение 120 мин. в наборе для обратной транскрипции с ДНК с высокой про-

в

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

ИиËlfflиBHlЯIЯидliñйЯIйIюHlииюñHЯ

пускной способностью (Applied Biosystems, Токио, Япония).

ДНК использовали для ПЦР-амплификации с rTaq ДНК-полимеразой (Takara Inc, Шига, Япония). Количество циклов ПЦР для каждого продукта было определено после подтверждения эффективности усиления и линейной экспоненциальной порции усиления. Последовательности праймеров для полуколичественного ПЦР с обратной транскрипцией, число циклов и температуры отжига были следующими:

MMP9, 5'-ACCCTGTGTGTTCCCGTTCAT-3' (вперед), 3'-GATACTGGATGCCGTCTATGTCGT-5' (реверс), 30 циклов, 550; GAPDH, 5'-TGAAGGTCGGTGT GAACGGATTTGGC-3' (вперед),

3'-CATGTAGGCCATGAGGTCCACCAC-5' (реверс), 25 циклов, 550. Продукты ПЦР подвергали электрофорезу в 2% агарозном геле, окрашивали бромидом этидия и визуализировали с помощью ультрафиолетовой лампы.

Вестерн блоттинг

Клетки B16-F10 в полной среде (3*105 клеток / на блюдо) были посеяны в блюда размером 60 мм (Corning Inc, Корнинг, Нью-Йорк, США). На следующий день среда была заменена на бессывороточную среду, содержащую 0,1% BSA, а затем клетки обрабатывали DTCM-глутаримидом в течение нужного количества времени. Для полного клеточного экстракта клетки лизировали с помощью лизисного буфера (50 мМ HEPES [pH7.4], 150 мМ NaCl, 10 мМ EDTA-NaOH, 200 мМ NaF, 4 мМ №3 VO4, 1% нони-дета Р-40, 0,1 мг / мл леупептина, 15 мм и 1 мм бен-замидина PMSF). Для ядерных экстрактов собранных клеток были суспендированы в 400 цл буфера А (10 мМ HEPES [рН 7,8], 10 мМ KCl, 2 мМ MgCl 2, 0,1 мМ EDTA, 1 мМ DTT 0,1 мМ PMSF) и инкубировали на льду в течение 15 мин. Ядра осаждали центрифугированием в течение 5 мин. при 14000 оборотах в минуту и температуре 40, ресуспендировали в 20 ~ 40 цл буфера C (50 мМ HEPES [рН 7,8], 50 мМ KCl, 300 мМ NaCl, 0,1 мМ ЭДТА, 1 мМ DTT, 0,1 ммоль PMSF, 25% глицерина (в объемном отношении), инкубировали на льду в течение 20 мин. и центрифугировали в течение 10 мин. при 14000 оборотах в минуту и температуре 40. Надосадочная жидкость использовалась в качестве ядерного экстракта. Все клеточные экстракты или ядерные экстракты (около 10 ~ 30 цг) варили в буфере загрузки Laemmli и подвергли электрофорезу в SDS полиакриламид-ном геле. Белки были переведены на 200 мА в течение 1 ч. на мембране Hybond-P (GE Healthcare, Little Chalfont, Великобритания). Мембраны инкубировали 30 мин. при комнатной температуре для блокировки в Tris-буферном растворе с Tween - 20 (TBST), состоящего из: 10 мМ Tris -HCl, pH8.0, содержащем 150 мМ NaCl, 0,1% Tween-20 (в объемном соотношении), а 5% (вес/объем) обезжиренного сухого молока или 5% BSA для фосфорилирован-ных белков. После блокировки мембраны инкубировали в течение ночи при температуре 40 в разводе 1:1000 первичного антитела в TBST. По истечении 1 часа после смывки TBST мембраны далее инкуби-

ровали в течение 2 часов при комнатной температуре в 1:5000 анти-IgG кролика или анти-IgG мыши, связанных пероксидазой хрена. Иммунореактив-ные белки были визуализированы с использованием ECL системы обнаружения, Immobilon Western (Millipore, Billerica, MA).

Воздействие для пленок RX-U (Fuji Film, Кана-гава, Япония) производилось, начиная с 10 сек., и доводилось до 30 мин.

Анализ аноикоза

Анализ аноикоза был выполнен при помощи Набора для Анализа Аноикоза Cytoselect™ (Cell Biolabs Inc., Сан-Диего, Калифорния). Клетки B16-F10 были лишены возможности присоединения к пластиковой пластине при помощи культивирования их в 24-луночном планшете с покрытием polyHEMA. Клетки высеивались в лунки с покрытием polyHEMA в бессывороточной среде. После 24 часов роста в суспензии живые клетки окрашивались Calcein - AM, а мертвые - EthD-1. Клетки были сфотографированы с помощью флуоресцентной микроскопии. Кроме того, интенсивность флуоресценции EthD-1 измеряли микропланшетным флуориметром при 525/595 нм.

Определение изменения электрофорети-ческой подвижности (EMSA)

Реакционная смесь для связывания содержала ядерный экстракт (5 цг белка), 2 цг поли dI-dC, и 10000cpm32 Р-меченый зонд (олигонуклеотид, содержащий NF-kB или AP-1 или NFATc1) в связывающем буфере (75 мМ NaCl, 1,5 мМ EDTA, 1,5 мМ DTT, 7,5% глицерина, 1,5% NP-40, 15 мМ Tris -HCl, рН 7,0). Образцы инкубировали в течение 20 мин. при комнатной температуре в этой смеси. Комплексы ДНК/белок были отделены от свободной ДНК в 4% полиакриламидном геле в буфере TBE на 0,25 мМ. ДНК-зонды использовались для присоединения к NF-kB или AP-1 и были приобретены у компании Promega (Мэдисон, Висконсин, США). Следующие последовательности были использованы в качестве NF-kB : 5'-AGTTGAGGGACTTTCCCAGGC-3'. Эти оли-гонуклеотиды были помечены [у-32Р]-АТР (3000 Ки/ммоль, (GE Healthcare, Little Chalfont, Великобритания) с использованием полинуклеотидкиназа Т4 (Takara, Оцу, Япония) и очищали, пропуская через Nick column (GE Healthcare, Little Chalfont, Великобритания).

О

DTCM-glutarimide

Рис. 1. Структура DTCM-глутаримида

КРеати1н1я1ницу5пиЯ1и1онкошпиЯ

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Результаты и обсуждение

Высоко метастатические клетки мыши В16^10 показали высокую инвазивную активность в камере с использованием МаЫде1 в течение 24 часов. DTCM-глутаримид в количестве 3 цг/мл слабо ин-гибирует рост в сывороточной среде и не токсичен в среде с дефицитом сыворотки (рис. 2А, 2В, 2С).

DTCM-G (3 цд/ml)

DTCM-glutarimfeie (цд/ml)

Рис. 2А. Влияние DTCM-глутаримида на рост клеток и цитотоксичность. Клетки В16-П0 были

инкубированы с указанной концентрацией DTCM-глутаримида в среде с 10% сывороткой.

Количество клеток было подсчитано для анализа роста, а их жизнеспособность измерена трипановым синим красителем. Жизнеспособность клеток в бессывороточной среде была лишь незначительно ниже по сравнению с клетками в полной среде

120

f 100 ■е

о и

Ъ 80

so

.Q 40

(Я

20

* : Р<0.001

1

DTCM-glutarimide (цд/ml)

Рис. 2B. Ингибирование инвазии клеток B16-F10 препаратом DTCM-глутаримид при инвазивном анализе в камере Matrigel. Клетки инкубировали в камере в течение 24 часов. Инвазивность клеток

была подсчитана после окрашивания. Результаты выражали в среднем±5.Е.М из четырех экземпляров определений

DTCM-глутаримид ингибирует инвазию в количестве 1-3 цг/мл, как показано на рис. 2B. Что касается механизма ингибирования, мы обнаружили, что DTCM-глутаримид снизил экспрессии матрич-

ММР-9 GAPDH

DTCM-G (3 цд/ml)

ММР-9 a-tubulin

Western blotting (h)

TCL

Рис. 2С. Ингибирование экспрессий ММР при помощи DTCM-глутарамида. Клетки инкубировали DTCM-глутаримидом в количестве 3 уг/ мл, а экспрессия ММР-9 была измерена при помощи RT-PCR (верхний столбик). Белковая экспрессия ММР-9 была проанализирована способом Вестерн блоттинг (нижний столбик)

ной металлопротеиназы 9 (ММР 9), как показано на рисунке рис. 2С. Он существенно ингибировал экспрессию ММР 9 при анализе ПЦР с обратной транскрипцией и Вестерн блоттинге.

Далее изучалось, может ли препарат изменить экспрессии апоптоза регуляторных генов. Было установлено, что DTCM-глутаримид подавляет экспрессию Вс1-Х|_ и повышает ее у Вах (рис. 3А). Он также увеличил ядерное количество р53 и снизил экспрессию MDM2, которая стабилизирует р53 (рис. 3А). Затем мы исследовали влияние DTCM-глутари-мида по индукции аноикоза с помощью ро1уНЕМА покрытия пластин. Он индуцировал аноикоз при количестве 3 цг/мл, в то же время лишь слабо индуцировал апоптоз в пластинах без покрытия, как показано на рис. 3В и 3С.

Phase-contrast

Calcein AM (alive cells)

EthD-1 (dead cells)

Merge

Control (normal)

DTCM-G 3 цд/ml (normal)

Control (poly-HEMA)

DTCM-G 3 цд/ml (poly-HEMA)

Рис. 3А. Эффект DTCM-глутаримида на апоптоз/ аноикоз регуляторных белков. (А) Эффект на Вс1Х и Вах. Количество белка в полной клеточной лизате измерялось анализом Вестерн блоттинг

8

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

ЙДЕдшивная1»идмцпия1и1ВнКВи5пйя

2000

И 1500 ■

1000

500

DTCM-glutarimide (мд/ml)

Рис. 3В. Эффект на активность р53 и экспрессию MDM2. Количество р53 было оценено как в ядерном экстракте, так и в общей клеточной лизате, в то время как MDM2 - в общей лизате

DTCM-G (3 цд/ml)

DTCM-G (цд/ml)

24 (h)

DTCM-G (3 цд/ml)

DTCM-G (цд/ml)

Рис. 3С. Индуцирование аноикоза при помощи DTCM-глутаримида в клетках В16-Н0. Клетки обрабатывались DTCM-глутаримидом в количестве 3 рг/мл в течение 24 часов, как в пластинах с покрытием ро1уНЕМА, так и в пластинах без покрытия. Са^п АМ окрасил живые клетки, в то время как EthD-1 - мертвые клетки. В общей колонке клетки, окрашенные Са^п АМ - зеленого цвета, а EthD-1 - красного

р53 LamlnA/C

DTCM-G (3 цд/ml) 0 8 16 24 (h)

DTCM-G (3 цд/ml) О 8 16 24 (h)

DTCM-G (цд/ml) О 0.3 1 3

DTCM-G (цд/ml) О 0.3 1 3

Рис. 3D. Количественный анализ апоптоза / аноикоза, индуцированного DTCM-глутаримидом. Клетки обрабатывались, как показано на рис. 3й

Экспрессии ММР9 и Вс1^ зависят от транскрипционного фактора ^-кВ. Таким образом, мы исследовали влияние DTCM-глутаримида на NF-кB. Было установлено, что ^-кВ слабо активируется в

клетках B16-F10 без стимуляции. DTCM-глутаримид ингибирует активность при количестве 0,3-3 цг/мл, как показано на рис. 4.

DTCM-G (цд/ml)

NF-KB-

Free probe-

Рис. 4. Ингибирование активности NF-kB при помощи долгосрочной инкубации с DTCM-глутаримидом. Клетки обрабатывались

DTCM-глутаримидом в течение 24 часов, а активность NF-kB измерялась с помощью EMSA

Было установлено, что DTCM-глутаримид обладает противораковой активностью в культуре клеток B16-F10 с высокой метастатичностью меланомы мышей. Он сильно ингибировал клеточную инвазию и индуцировал аноикоз, а не апоптоз (рис. ЗА и ЗВ). Индуцирование аноикоза может способствовать ингибированию роста метастаз in vivo путем удаления рассеянных раковых клеток в организме. Также была снижена экспрессия ММП - 9 (рис. 2) и Bcl-xL (рис. 3C), возможно косвенно ингибируя активность NF-kB (13,14). DTCM-глутаримид не ингибировал активность NF-kB, индуцированную ли-пополисахаридами в течение 30 мин. (рис. 4), но позже было установлено, что для ингибирования необходимо 24 часа. (рис. 3). Экспрессия NF-kB в клетках B16-F10 относительно слабая, но DTCM-глу-таримид ингибировал неиндуцированную активность через 24 часа (рис. 4).

DTCM-глутаримид проявляет противовоспалительную активность, ингибируя отторжение трансплантата без токсичности (4), и данный препарат может быть легко синтезирован (2). Поэтому, несмотря на то, что ее молекулярная цель не была выяснена, это вещество может стать новым средством борьбы с метастазами.

Конфликт интересов:

Конфликт интересов отсутствует.

Благодарности:

Работа, описанная в этой статье, была частично поддержана грантами от программы грантов «Grants-in-Aid for Scientific Research (B)», и «Grants-in-Aid for Scientific Research» в инновационных областях Министерства образования, культуры, спорта, науки и технологий Японии.

КРеати1н1я1ницуРпиЯ1и1онкошпиЯ

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

9

Список литературы

1. Chen F., Wang W., EI-Deiry W. S. Current strategies to target p53 in cancer // Biochem. Pharmacol.

- 2010. - Vol. 80. - P. 724-730.

2. Coates J.M., Galante J.M., Bold R.J. Cancer therapy beyond apoptosis: autophagy and anoikis as mechanisms of cell death // J. Surg. Res. - 2010. - Vol. 164.

- P. 301-308.

3. Downward J. PI3-kinase, Akt and cell survival // Semin. Cell. Dev. Biol. - 2004. - Vol. 15. - P. 177-182.

4. Govundarajan B, Sligh J.E., Vincent B.J., Li M., Canter J.A., Nickloff B.J., et al. Overexpression of Akt converts radical growth melanoma to vertical growth melanoma // J. Clin. Invest. - 2007. - Vol. 117. - P. 719729.

5. Griswold D.P. Consideration of the subcutane-ously implanted B16 melanoma as a screening model for potential anticancer agents // Cancer Chemother. Rep. - 1972. - Vol. 3. - P. 315-324.

6. Grossmann J. Molecular mechanisms of detachment-induced apoptosis-anoikis // Apoptosis. - 2007.

- Vol. 7. - P. 247-260.

7. Ishikawa Y., Tachibana M., Matsui C., Obata R., Umezawa K., Nishiyama S. Synthesis and biological evaluation on novel analogs of 9-methyl-strepti-midone, an inhibitor of NF-kB // Bioorg. Med. Chem. Lett. - 2009. - Vol. 19. - P. 1726-1728.

8. Lee C.S., Kwon Y.W., Yang H.M., Kim S.H., kim T.Y., Hur J. et al. New mechanism of rosiglitazone to

reduce neointimal hyperplasia: activation of glycogen synthase kinase-3beta followed by inhibition of MMP-9. Arterioscler. Thromb // Vasc. Biol. - 2009. - № 29.

- p. 472-479.

9. Mendes S.S., Candi A., Vansteenbrugge M., Pignon M. R., Bult H., Boudjeltia K.Z., Munaut C., Raes M. Microarray Analyses of the Effects of NF-kappaB or PI3K Pathway Inhibitors on the LPS-induced Gene Expression Profile in RAW264.7 Cells : Synergistic Effctts of rapamycin on LPS-induced MMP9-overexpression // Cell Signal. - 2009. - №21. - P. 1109-1122.

10. Ogawara Y. Akt enhances Mdm2-mediated ubiquitination and degradation of p53 // J. Biol. Chem.

- 2002. - Vol. 277. - P. 21843-21850.

11. Takeiri M., Tachibana M., Kaneda A., Ito A., Ishikawa Y., Nishiyama S., Goto R., Yamashita K., Shi -basaki S., Hirokata G., Ozaki M., Todo S., Umezawa K. Inhibition of macrophage activation and suppression of graft rejection by DTCM-glutarimide, a novel piperi-dine derived from the antibiotic 9-methylstreptimidone // Inflammation Research. - 2011. - Vol. 60. - P. 879888.

12. Vousden K.H., Lu X. Live or let die: the cell's response to p53 // Nature Rev. Cancer. - 2002. - Vol. 2.

- P. 594-604.

13. Wang Z., Igarashi M., Ikeda Y., Horie R., Umezawa K. Inhibition of NF-kappa B activation by 9-meth-ylstreptimidone isolated from Streptomyces // Hetero-cycles. - 2006. - Vol. 69. - P. 377-383.

СООТНОШЕНИЕ ТКАНЕВЫХ КОМПОНЕНТОВ И ПРОГНОСТИЧЕСКИЕ ИНДЕКСЫ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ВАРИАНТОВ ИНФИЛЬТРИРУЮЩЕГО ТИПА РАКА

МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

В.В. Кометова, О.В. Воробьева, Р.М. Хайруллин

ГОУ ВПО Ульяновский государственный университет, кафедра анатомии человека, г. Ульяновск ГОУ ВПО Чувашский государственный медицинский университет, кафедра общей и клинической патологии с курсом судебной медицины

Кометова Влада Владимировна,

аспирант кафедры анатомии человека, Воробьева Ольга Васильевна, доцент кафедры общей и клинической патологии с курсом судебной медицины, канд. мед. наук,

Хайруллин Радик Магзинурович, зав. кафедрой, доктор медицинских наук, профессор, 432017, Россия, г. Ульяновск, ул. Л. Толстого, д. 42, тел. 8 (842) 232-79-45, e-mail: vladastasiatema@mail.ru

У128 пациенток, больных, инфильтрирующим типом рака молочной железы, установлены статистически значимые различия в количественном соотношении тканевых компонентов, средних, значений Ноттингемского прогностического индекса (НПИ) и суммарного балла злокачественности при разных гистологических, вариантах.. Показано, что определение НПИ эффективно независимо от показателей продолжительности жизни пациенток.

Ключевые слова: рак молочной железы, паренхима, строма, ноттингемский прогностический индекс, выживаемость.