CC BY
15
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
257
клеток (МСК) представляют интерес как терапевтический инструмент для бесклеточной терапии онкологических заболеваний, поскольку описана иммуномодулиру-ющая активность генетически модифицированных МСК, синтезирующих различные цитокины.
МСК были выделены из жировой ткани человека и генетически модифицированы лентивирусом, кодирующим ген интерлейкина 2 (IL2). Для получения индуцированных мембранных везикул (иМВ) МСК обрабатывали цитохалазином B. Для оценки иммуномодулирующих свойств иМВ МСК мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) выделяли из периферической крови человека и культивировали совместно с иМВ (50 мкг/ мл) в течение 72 часов. Активацию МКПК определяли путем окрашивания антителами, специфичными для поверхностных маркеров различных популяций иммунных клеток человека. Для анализа противоопухолевой активности МКПК активированные иммунные клетки добавляли к клеткам трижды негативного рака молочной железы MDA-MB-231. Пролиферативную активность опухолевых клеток оценивали с помощью RTCA xCelligence (ACEA Biosciences, США) в течение 72 часов. Жизнеспособность опухолевых клеток оценивали через 24 часа после культивирования с МКПК с использованием Annexin V Apoptosis Detection Kit (Biolegend, США).
Количество активированных Т-киллеров было в 2 раза увеличено после инкубации с иМВ-^2 по сравнению с нативными МКПК и МКПК, инкубировавшимися с нативными иМВ. Через 24 часа после добавления активированных иМВ-^2 МКПК пролиферация клеток MDA-MB-231 снизилась в 4 раза по сравнению с нативными MDA-MB-231 и MDA-MB-231 инкубировавшихся с нативными МКПК и МКПК после нативных иМВ. Такое снижение пролиферации, вероятно, связано с тем, что часть опухолевых клеток подверглась апоп-тозу, что подтверждается анализом жизнеспособности клеток MDA-MB-231 после 24 часов культивирования с МКПК, активированных иМВ-^2.
Использование иМВ-^2 может быть эффективным для лечения трижды негативного рака молочной железы, поскольку иМВ-^2 способны активировать и стимулировать пролиферацию Т-киллеров, которые, в свою очередь, способны индуцировать апоптоз клеток рака молочной железы. Однако необходимы дальнейшие исследования эффективности иМВ на моделях опухолей in vivo. Работа выполнена за счет средств программы стратегического академического лидерства КФУ (ПРИ0РИТЕТ-2030).
ИММУНОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РЕГЕНЕРАЦИИ КОСТНОЙ ТКАНИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КОСТНОГО АУТОРЕГЕНЕРАТА
Г.П. Чупрынин, И.В. Супрун, Е.А. Солоп, А.А. Фоменко, А.А. Веревкин, М.Л. Муханов
ФГБОУ ВО КубГМУ Минздрава России, Краснодар, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: репаративный остеогенез, ауторегене-рат, иммуногистохимия.Нарушение сращения переломов, особенно на фоне дефекта костной ткани, остаётся существенной проблемой травматологии и ортопедии. Среди факторов, влияющих на темпы консолидации, можно назвать состояние микроциркуляторного русла, а также наличие таких веществ, как костные морфогенетические белки (ВМР), остеопонтин и остеокальцин.
Перспективным методом заживления кости выступает использование костного ауторегенерата — организующейся гематомы из области искусственно созданного перелома, богатой необходимыми для регенерации биологически активными веществами.
Целью исследования была оценка экспрессии специфических маркеров костной ткани в процессе консолидации перелома с применением ауторегенерата.
Модель травмы создавали на 12 баранах. В экспериментальной группе (п=7) для консолидации перелома использовали остеосинтез и ауторегенерат. В контрольной группе (п=5) ауторегенерат не применяли. Приготовили гистологические препараты из фрагмента регенерировавшей кости. Провели иммуногистохимическую реакцию с антителами к остеокальцину, остеопонтину, ВМР-7 и макросиалину (0068).
Гистологические препараты из экспериментальной группы характеризовались эффективным репаративным остеогенезом. Было выявлено большое количество костных трабекул с выраженным клеточным компонентом. Аналогичные препараты контрольной группы отличались тонкими трабекулами с малым количеством клеток. Существенных различий в строении и плотности микро-циркуляторного русла не выявлено.
Подавляющее большинство клеток в препаратах из экспериментальной группы демонстрировало осте-огенную дифференцировку. Об этом говорила резко положительная реакция на остеокальцин (85% всех клеток) и остеопонтин (80% клеток). ВМР-7 был выявлен в костной ткани и в прилегающей надкостнице и окружающих мягких тканях. В то же время, темпы остеокла-стической резорбции новообразованной кости были невысокими, о чем говорит низкое количество 0068-позитивных клеток. В препаратах контрольной группы экспрессия остеокальцина отмечалась в 60%, а остеопонтин — в 50% клеток. Экспрессия ВМР-7 отмечена на границе зоны репарации.
Морфологическая картина репаративного остеогене-за существенно различается в зависимости от применения костного ауторегенерата. Полноценное восстановление костной ткани, о котором свидетельствуют высокие уровни экспрессии специфических маркеров кости, можно связать с действием ростовых факторов и других биологически активных веществ, привнесённых в область регенерации.
КРОСС-КОРРЕКЦИЯ ДЕФИЦИТА (З-ГЕКСОЗАМИНИДАЗЫ А В МУТАНТНЫХ КЛЕТКАХ ПАЦИЕНТА С БОЛЕЗНЬЮ ТЕЯ-САКСА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
A.А. Шаймарданова, Д.С. Чулпанова,
B.В. Соловьева, Ш.С. Исса, А.И. Муллагулова, А.А. Титова, Я.О. Мухамедшина, А.А. Костенников, А.В. Тимофеева, А.М. Аймалетдинов,
И.Р. Нигметзянов, А.А. Ризванов
Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: GM2-ганглиозидоз, болезнь Тея-Сакса, болезнь Сандхоффа, лизосомные болезни накопления, генная терапия, клеточно-опосредованная генная терапия, ме-зенхимные стволовые клетки, рекомбинантные аденоассо-циированные вирусы.
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
