CC BY
29
© Коллектив авторов, 1993 УДК 618.19-008.839.624-078.33
О. А Седельникова, Н.Н. Петровичев, А.Ю. Барышников
Иммуноморфологическая характеристика новых моноклональных антител ICO-84 И ICO-103
НИИ клинической онкологии
Применение моноклональных антител (МКА) в клинической практике позволило увеличить число методов диагностики новообразований. На основе панелей МКА создаются высокочувствительные тесты для диагностики опухолей in vitro, успешно дополняющие методы световой микроскопии. Среди отечественных публикаций довольно широко представлены работы, посвященные применению МКА на гистологическом материале [3, 5 ]. Несколько лет назад исследователи стали проявлять интерес к потенциальному использованию антител в диагностической цитологии [1, 4, 6—8]. Внедрение приемов иммуноцитохимии в цитологическую практику позволяет более углубленно и качественно проанализировать исследуемый материал.
Учитывая вышесказанное, нами было решено апробировать новые отечественные МКА ICO-84 и 1СО-ЮЗ, полученные в лаборатории клинической радиоиммунологии ОНЦ РАМН. Задачи работы: определить спектр реактивности МКА ICO-84 и 1СО-ЮЗ с опухолями различного гистогенеза; сравнить результаты исследования на гистологическом и цитологическом материале; выявить возможности использования этих антител в онкоцитологии для мечения злокачественных клеток. Материалы и методы. В качестве иммуногена для получения МКА ICO-84 (изотоп lgGI) использовали гомогенат опухолевых клеток рака молочной железы.
Иммуногеном для получения ICO-103 (изотип IgGI) явилась лишенная липидов фракция мембран жировых глобул женского молока.
Материалом для наших исследований послужили 120 биопсий, взятые при операциях от больных, проходивших лечение в ОНЦ РАМН. С каждого биоптата готовили криостатные срезы и мазки-отпечатки. Контролем послужили 4 случая нормальной молочной железы, взятые во время аутопсии от женщин, погибших в результате травмы, и случаи биопсий при мастопатии и фиброаденоме молочной железы.
Реакцию МКА изучали на множестве эпителиальных и неэпителиальных опухолей, представленных разнообразными нозологическими формами (см. таблицу). Все случаи были гистологически верифицированы. Для каждого случая проводили гистологический и цитологический контроль.
Для проведения иммуноморфологической реакции срезы фиксировали 5 мин в смеси ацетон—метанол (1:1), хранили при 4°С. Мазки-отпечатки высушивали на воздухе 2—3 ч, затем стекла заворачивали в алюминиевую фольгу для защиты от конденсата и хранили в морозильной камере при -18—20°С. Перед постановкой реакции препараты доставали из морозильной камеры и оставляли лежать в фольге при комнатной температуре 15—20 мин. Затем их доставали из фольги и фиксировали аналогично срезам. Препараты промывали в фосфатно-солевом буфере (ФСБ), pH 7,2—7,4. Дли ингибиции эндогенной пероксидазы использовали смесь метанол—перекись водорода 3%. С целью блокирования рецепторов неспецифического связывания наносили человеческую сыворотку IV группы. Затем проводили инкубацию МКА в рабочем разведении 1:100. Применяли непрямую иммунопероксидазную технику (пероксидазные конъюгаты против иммуноглобулинов мыши НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи, Москва) или ПАП-
O.A.Sedelnikova, N.NPetrovichev, A. Yu.Baryshnikov
Immunomorphological Characteristics of New Monoclonal Antibodies ICO-84 and ICO-103
Research Institute of Clinical Oncology
Application of monoclonal antibodies (Mab) in the clinical practice has broadened the range of methods for diagnosis of neoplasms Mab panels are a basis for highly sensitive tests of in vitro tumor diagnosis that successfully supplement light microscopy. There are a number of Russian publications dealing with employment of Mab in histological investigations [3, 5]. Over the last years investigators show interest to potential use of antibodies in diagnostic cytology [1, 4, 6—8]. Application of immunocytochemical techniques in the cytological practice allows profound and high quality analysis of the specimens under study.
In view of the above-said we studied new Mab’s ICO-84 and ICO-103 developed at the Laboratory of Clinical Radioimmunology of the CRC of the RAMS. The purpose of this investigation was to define reactivity spectrum of the Mab’s ICO-84 and ICO-103 with tumors of various histogenesis; to compare results of studies in histological and cytological specimens; to study possibility of using these antibodies in oncocytology to label malignant cells.
Materials and Methods. Homogenate of breast cancer cells was used as immunogen for producing Mab ICO-84 (isotype IgGI). To obtain ICO-103 (isotype IgGI) we used lipidless fraction of fat globule membranes from human milk as immunogen.
The study was performed on 120 intraoperative bioptic specimens taken from patients managed at the CRC of the RAMS. Cryostatic sections and smears were prepared from every bioptic specimens. Four samples of normal mammary glands taken during autopsy in women dead from traumas and bioptic specimens from women with mastopathy and fibrous adenoma were used as control.
The Mab reactivity was studied in a number of epithelial and non-epithelial tumors of various nosological forms (see the table). The diagnoses were verified histologically in all cases. Histological and cytological control tests were performed in every case.
To carry out immunomorphological reaction the sections were fixed for 5 min in aceton-methanol mixture (1:1) and stored at 4°C. The smears were air dried 2-3 h, the glasses were wrapped up in aluminium foil to protect from condensate and stored in a freezer ar -18-20°C. Before setting up the reaction the preparations were taken from the freezer and allowed to stay in the foil at room temperature 15-20 min. The preparations were then taken from the foil and fixed similarly to the sections to be washed in phosphate saline buffer (PSB) pH 7.2-7.4. To inhibit endogenous peroxidase we used a mixture of methanol-hydrogen peroxide 3%. Human group IV serum was added to block receptors of non-specific binding. Further the preparations were incubated with the Mab’s at a 1:100 dilution. We used the indirect immunoperoxidase technique (peroxidase conjugates against mouse immunoglobulins supplied by the N.F.Gamaleya Institute for Epidemiology and Microbiology, Moscow) or the PAP method (antibodies to murine IgG and PAP complex from the Research Institute for Epidemiology and Microbiology, Nizhny Novgorod). The peroxidase was developed using 3,3’-diaminobenzidine (DAB, Sigma USA). The nuclei were additionally stained with Ka-razi hematoxylin (sections 3 min, touch smears 10 min). The sections were then transferred into a balm. The immunomorphological method
Реактивность MKAICO-84 и ICO-103 с опухолям эпителиального и неэпителиального гистогенеза Reactivity of Mab’s ICO-84 and ICO-103 with epithelial and non-epithelial tumors
Гистологический диагноз ICO-84 ICO-ЮЗ
срезы мазки срезы мазки
КОНТРОЛЬНАЯ ГРУППА CONTROL GROUP 7/12 3/8 5/6 5/6
фиброаденома молочной железы fibrous adenoma of the breast 0/4 0/4 2/2 2/2
мастопатия mastopathy 4/4 3/4 HT HT
нормальная молочная железа normal breast 3/4 HT 3/4 3/4
РАК МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ BREAST CANCER 13/15 9/15 9/10 4/5
инфильтративный протоковый invasive ductal carcinoma 10/12 8/12 8/9 3/4
инфилыративный дольковый Invasive lobular carcinoma 3/3 1/3 1/1 1/1
РАК ЯИЧНИКА OVARY CANCER 4/10 2/10 2/10 6/10
эндометриоидная аденокарцинома endometrial adenocarcinoma 0/4 1/4 0/4 3/4
муцинозная аденокарцинома mucinous adenocarcinoma 1/2 0/2 2/2 0/2
серозная сосочковая аденокарцинома serous papillary adenocarcinoma 2/2 1/2 2/2 2/2
смешанная аденокарцинома mixed adenocarcinoma 1/2 0/2 0/2 1/2
РАК МАТКИ (аденокарцинома тела матки) UTERINE CANCER (adenocarcinoma of the uterine body) 2/10 2/10 7/10 7/10
РАК ЛЕГКОГО LUNG CANCER 8/10 7/10 5/10 4/10
плоскоклеточный squamous cell carcinoma 7/9 6/9 5/9 4/9
аденокарцинома adenocarcinoma 1/1 1/1 0/1 0/1
РАК ПИЩЕВОДА (плоскоклеточный paK)ESOPHAGEAL CANCER (squamous cell carcinoma) 5/10 6/10 4/10 5/10
РАК ЖЕЛУДКА GASTRIC CANCER 6/10 6/9 5/10 3/9
аденокарцинома adenocarcinoma 3/5 3/5 2/5 1/5
перстневидноклеточный signet-ring cell carcinoma 2/3 2/2 2/3 1/2
низкодифференцированный poorly differentiated carcinoma 1/2 1/2 1/2 1/2
РАК ТОЛСТОЙ И ПРЯМОЙ КИШОК COLORECTAL CANCER 7/10 9/10 4/10 6/10
аденокарцинома: adenocarcinoma:
низкодифференцированная poorly differentiated 1/2 2/2 0/2 2/2
умереннодифференцированная moderately differentiated 5/7 5/6 4/7 3/6
высокодифференцированная highly differentiated 1/1 1/1 0/1 1/1
со слизеобразованием mucinous HT 1/1 HT 0/1
РАК ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ THYROID CANCER 3/10 0/10 6/10 6/10
(папиллярная аденокарцинома) (papillary adenocarcinoma)
РАК ПОЧКИ (светлоклеточный) RENAL CANCER (clear cell carcinoma) 1/10 1/10 2/10 2/10
ГЕМОБЛАСТОЗЫ HEMOBLASTOSIS 0/10 0/10 0/10 0/10
(лимфосаркома, лимфогранулематоз) (lymphosarcoma, lymphogranulomatosis)
САРКОМЫ МЯГКИХ ТКАНЕЙ (синовиальная, SOFT TISSUE SARCOMA (synovial, 0/10 0/10 0/10 0/10
дерматофибросаркома, dermatofibrous sarcoma,
липосаркома, лейомиосаркома, liposarcoma, leiomyosarcoma,
злокачественная фиброзная гистиоцитома) malignant fibrous histiocytoma)
Histological diagnosis sections smears sections smears
ICO-84 I СО-103
Примечание. В числителе — число положительных случаев, в знаменателе — общее число исследований. НТ — не тестировали. Note. Numbers in the numerator show positive reactions, numbers in the denominator present the total of cases. NT stands for no test.
метод (антитела к IgG мыши и ПАП-комплекс Нижегородского НИИ эпидемиологии и микробиологии). Пероксидазу проявляли при помощи 3,3'-диаминобензидина (ДАБ, фирма "Sigma", США). Ядра докрашивали гематоксилином Караци (срезы 3 мин, мазки-отпечатки 10 мин). Срезы заключали в бальзам. Подробное описание иммуноморфологического метода в применении к цитологическим препаратам дано ранее 12].
Положительная иммунопероксидазная реакция выявлялась в виде желто-коричневого окрашивания. Мы оценивали интенсивность окрашивания следующим образом: если в цитологических препаратах прореагировало большинство опухолевых клеток и продукт реакции просматривается достаточно четко, то такую реакцию характеризовали как высокоинтенсивную; если прореагировала приблизительно половина опухолевых клеток и яркость окрашивания варьирует, то это равноценно средней степени интенсивности реакции; если окрашивались единичные опухолевые клетки или окрашивание едва просматривалось, то такую реакцию считали слабой. Реакция могла быть гомогенной или гранулярной.
as applied to cytological preparations was described in detail elsewhere [2].
The positive immunoperoxidase reaction manifested itself as yellowish brown staining. We assessed the staining intensity, as follows: if most tumor cells in a cytological preparation showed positive reaction and were seen clearly the reaction was considered highly intensive; if about half tumor cells presented positive reaction and the staining varied in intensity the reaction was evaluated as moderate; if only single tumor cells showed staining or the staining was hardly visible the reaction was considered weak. The reaction could be seen as homogeneous or granular staining. The immunoprecipitate was found on cellular external plasmatic membranes, in cytoplasm, sometimes in intercellular space.
Results and Discussion. The Mab ICO-84 showed a broad spectrum of reactivity with cells of human malignant neoplasms. As is seen in the table the
Иммунопреципитат выявлялся на наружной плазматической мембране клеток, в цитоплазме, частично — в интерцеллюлярном пространстве.
Результаты и обсуждение. МКА 1СО-84 имеет широкий спектр взаимодействия с клетками злокачественных новообразований человека. Как видно из таблицы, наиболее часто и интенсивно антитело реагирует с карциномами толстой и прямой кишок (в 80% случаев), легкого (75%), молочной железы (73,3%), желудка (63,4%), пищевода (55%). Гораздо реже и менее интенсивно положительное окрашивание в срезах и мазках-отпечатках наблюдается при раке яичника (30%), матки (20%), щитовидной железы (15%) и почки (10%). В контрольной группе (фиброаденомы молочной железы, мастопатии, нормальная молочная железа) 1СО-84 интенсивно реагирует в 47,9% случаев с эпителием протоков молочной железы.
Реакция МКА 1СО-ЮЗ также обнаружена во множестве различных эпителиальных опухолей (см. таблицу) . Наиболее часто высокоинтенсивная реакция появляется в опухолях молочной железы (85%), матки (70%), щитовидной железы (60%). Реже, но не менее интенсивно 1СО-ЮЗ реагирует с опухолями яичника (40%), легкого (45%) и почки (20%). Слабое взаимодействие наблюдается с раком пищевода (45%), желудка (41,7%), толстой и прямой кишок (50%). В контрольной группе антитело реагирует в 83,3% случаев.
На основании проведенных наблюдений нами выделены следующие типы реакции МКА 1СО-84 и 1СО-103: 1) продукт реакции локализуется по апикальной части клеток (рис. 1); 2) продукт реакции локализуется гомогенно или гранулярно в цитоплазме опухолевых клеток (рис. 2); 3) продукт реакции локализуется по мембране клетки и вокруг нее (рис. 3). Первый тип реакции наиболее характерен для аденокарциномы матки, яичников, легких, желудка, кишечника, щитовидной железы, а также для нормальной молочной железы и ее доброкачественных заболеваний. Второй тип окрашивания наблюдается при раке молочной железы, плоскоклеточном раке легкого и пищевода, низкодифференцированном раке желудка, светлоклеточном раке почки. Положительная реакция третьего типа может присутствовать во всех перечисленных опухолях. Может оказаться, что все 3 типа реакции встречаются в структурах одной опухоли (рис. 4). МКА 1СО-84 имеет особенности в характере реакции второго типа. Продукт реакции локализуется в цитоплазме опухолевых клеток, занимая только часть цитоплазмы, и интенсивно-коричневое окрашивание имеет вид разбросанных по опухолевому полю "хлопьев". Кроме эпителиальных клеток, 1СО-84 интенсивно реагирует с нейтрофильны-ми лейкоцитами, инфильтрирующими опухоль.
При сопоставлении наличия положительной реакции в гистологическом и цитологическом материале мы отметили ее идентичность. В небольшом проценте случаев выявлены различия (положительная реакция в срезах при отсутствии ее в мазках и наоборот). Вероятно, это
antibody reacted the most frequently and intensely with colorectal carcinoma (80%), cancer of the lung (75%), breasr (73,3%), stomach (63.4%), esophagus (55%). The positive reactivity in the sections and smears was much less frequent and intense with cancer of ovaries (30%), womb (10%), thyroid (15%), kidney (10%). The ICO-84 demonstrated high reactivity with breast ductal epithelium (47.9%) in the control group (breast fibrous adenoma, mastopathy, normal breast).
The Mab ICO-103 was reactive in a variety of epithelial tumors (see the table). Highly intense reaction was the most frequent in tumors of the breast (85%), womb (70%), thyroid (60%). The ICO-103 reactivity was less frequent but no less intense with tumors of ovaries (40%), lungs (45%) and kidneys (20%). The antibody reacted weakly with esophageal (45%), gastric (41.7%), colorectal (50%) cancer. The Mab reactivity rate in the control was 83.3%.
Based on the study performed we have distinguished three types of reactions of the Mab’s ICO-84 and ICO-103, as follows: 1) reaction product is localized in apical cellular regions (fig. 1); 2) reaction product is localized homogeneously or as granules in tumor cytoplasm (fig. 2); 3) reaction product is localized on cellular membranes or surrounds the cells (fig. 3). The first reaction type is characteristic of adenocarcinoma of the womb, ovary, lung, stomach, large intestines, thyroid, as well as of normal breast and its benign diseases. The second staining type is observed in breast cancer, squamous cell carcinoma of the lungs and esophagus, poorly differentiated gastric cancer, clear-cell renal cancer. The reactivity of the third type was found in all kinds of tumors mentioned above. In some cases all the three reaction types were encountered in the same tumor (fig. 4). The Mab ICO-84 exhibits some peculiar features in the second type reactivity. The reaction product looks like intensely brown flakes in tumor cell cytoplasm. Alongside with epithelial cells ICO-84 is highly reactive with neutrophil leukocytes infiltrating the tumor.
The comparison of the histological and cytological specimens showed their identity in regard of reactivity. A small percentage of cases demonstrated difference in staining (positive reaction in the sections and no response in the touch smears or vice versa.) This may be due to mechanical reasons (antigen washing out in some localizations). Conditions of touch smear preparation and storage may also account for the difference. The staining varied in intensity, e.g. was brighter both in the sections and the smears. Therefore, our findings show that immunochemical reactivity in cytological specimens is in a good agreement with results of a similar study in the histological sections and can be used in the cytological practice.
Thus, the Mab’s ICO-84 and ICO-103 are not specific for breast cancer; they are markers of epithelial tumors and may be employed in oncocytology to determine epithelial nature of malignant cells. They may also
Рис. 1 Рис. 2
Рис.З Рис. 4.
Рис. 1. Аденокарцинома прямой кишки.
Иммунопероксидазная реакция с МКА JCO-103. Продукт реакции локализован на апикальной мембране опухолевых клеток. х200.
Fig. 1. Rectal Adenocarcinoma
Immunoperoxidase reaction with Mab ICO-103. The reaction product is localized on apical membranes of tumor cells, x 200.
Рис. 2. Рак молочной железы.
Иммунопероксидазная реакция с МКА ICO-103. Продукт реакции локализован в цитоплазме опухолевых клеток. х200.
Fig. 2. Breast Cancer.
Immunoperoxidase reaction with Mab 1СО-ЮЗ. The reaction product is localized in tumor cytoplasm, x 200.
Рис. 3. Аденокарцинома тела матки.
Иммунопероксидазная реакция с МКА ICO-84. Продукт реакции локализован на наружной плазматической мембране опухолевых клеток. х500. Fig. 3. Adenocarcinoma Of The Uterine Body.
Immunoperoxidase reaction with Mab ICO-84. The reaction product is localized on external plasmatic membranes of tumor cells, x 500.
Рис. 4. Инфильтративный дольковый рак молочной железы.
Иммунопероксидазная реакция с МКА ICO-84. Продукт реакции локализован в цитоплазме опухолевых клеток или вокруг них. х200.
Fig. 4. Invasive lobular breast cancer.
Immunoperoxidase reaction with Mab ICO-84. The reaction product is localized in tumor cytoplasm or surrounds tumor cells, x 200.
можно объяснить механическими причинами (вымывание антигена при разной его локализации). Возможно также, что здесь играют роль и технические моменты в приготовлении и хранении мазков-отпечатков. Интенсивность реакции варьирует — окрашивание может быть более ярким как в срезах, так и в мазках-отпечат-ках. Следовательно, наши наблюдения показывают, что проведение иммунохимических реакций в цитологическом материале вполне адекватно отражает результаты аналогичных исследований в гистологических срезах и может быть использовано в цитологической практике.
Таким образом, МКА 1СО-84 и 1СО-ЮЗ не оказались специфичными для рака молочной железы; они являются маркерами эпителиальных опухолей и могут быть использованы в онкоцитологии для уточнения
be used together with other antibodies to distinguish metastatic and poorly differentiated tumors from lym-phoproliferative diseases. As these Mab’s differ in reactivity in some cases, each of them may be considered to possess individual specificity. Therefore, both antibodies can be included in diagnostic panels to be used in the histological and cytological practice.
Литература / References
1. Абраменко И.В., Евсеева А.Г., Глузман Д.Ф. и др. // Вопр.
онкол. — 1991. — Т.37, № 1. — С. 40-44.
2. Седельникова O.A. II Вестн. ВОНЦ. — 1991. — № 4. — С. Il-
П.
И
эпителиальной природы злокачественных клеток. Их можно применять также в комплексе с другими антителами для дифференциальной диагностики между метастатическими и низкодифферецированными опухолями и лимфопролиферативными заболеваниями. То, что реактивность этих антител по отношению к различным опухолям не всегда совпадет, дает нам право говорить об индивидуальной специфичности каждого из них. Поэтому возможно включение обоих антител в диагностическую панель для использования в гистологической и цитологической практике.
© Коллектив авторов, 1993. УДК 616-006.04-085.35-097
И.Ф. Абронина, Т.А. Куприянова, А.В. Болвачева, С.Н. Быковская, JI.H. Буачидзе, О.М. Дронова
Супрессорная активность в популяции лимфокинактивированных киллеров онкологических больных
Лаборатория клеточного иммунитета,
НИИ клинической онкологии
Ранее было показано [14, 15 ], что под действием интерлейкина-2 (ИЛ-2) наряду с лимфокинактивирован-ными киллерами (ЛАК) происходит образование супрессорных Т-клеток, подавляющих пролиферативный ответ и генерацию киллеров в свежих культурах лимфоцитов, стимулированных фитогемагглютинином (ФГА) и аллоантигенами. Кроме того, известно, что присутствие ИЛ-2 в культуральной среде необходимо для активации пролиферации и поддержания роста линии Т-супрессорных лимфоцитов [2, 12].
У онкологических больных и животных с опухолями в крови, селезенке и среди клеток, инфильтрирующих опухоль, были обнаружены Т-супрессоры и моноциты, подавляющие развитие иммунного ответа против аутологичной и сингенной опухоли [1, 4, 5, 9, 10, 16, 17]. Недавно было показано, что циркулирующие в крови онкологических больных Т-супрессоры могут быть активированы in vitro при длительном культивировании с ИЛ-2 [3, 8 ].
В настоящей работе представлены результаты изучения индукции супрессорной активности в популяции ЛАК-клеток онкологических больных, подвергнутых адоптивной иммунотерапии (АИТ) в ОНЦ РАМН в 1987—1988 гг. Одновременно возможность индукции супрессии изучалась в популяции ЛАК-клеток здоровых доноров.
Материалы и методы. При проведении первого курса АИТ по схеме Розенберга [11] у 7 больных меланомой и раком почки в возрасте 33—53 лет брали кровь из вены методом лейкофере-за, выделим из нее мононуклеарные клетки (МНЮ и культивировали из в ройллерных флаконах в среде, содержащей 1000 ед/мл рекомбинантного ИЛ-2—рИЛ-2 ('Биоген", Рига) для ге-
3. Ткачева Г.А., Пискунова Т.В. II Экспер. онкол. — 1991. — Т. 13. — №3. — С. 34-38.
4. Шабалова И.Г., Пугачев К.К, Ш имбирева И.Б.,
Руднева E. A. II Лабор. дело. — 1990. — № 12. — С. 49-52.
5. Якубовская Р.И., Барышников А.Ю., Кармакова Т.А. и др. // Арх. пат. — 1991. № 6. — С. 11-16.
6. Betta P.G., Pavesi М., Pastormelo М. II Pathologica. — 1991. — № 83. — P. 99-104.
7. Johnston W.W. II Acta Cytol. — 1987. — Vol. 31, № 5. — P. 537-556.
8. Kungl.T., Chan S.K, Lo E.S. II Ibid. — 1990. — Vol. 34, № 3. — P. 297-303.
Поступила 11.02.92. / Submitted 11.02.92.
I.F.Abronina, T.A.Kupriyanova, A.V.Bolvacheva, S.N.Bykovskaya, L.N.Buachidze, O.M.Dronova
Suppressor Activity in Lymphokine-Activated Killer
Population in Cancer Patients
Cell Immunity Laboratory, Research Institute of Clinical Oncology
It was shown previously [14, 15] that treatment with interleukin-2 (IL-2) in addition to generation of lym-phokine-activated killers (LAK) leads to production of T-suppressors inhibiting the proliferative response and the killer generation in fresh lymphocyte cultures stimulated with phytohemagglutinin (PHA) and alloan-tigens. It is also known that IL-2 is necessary to activate proliferation and maintenance of growth of T-sup-pressor lymphocytes in culture [2, 12].
T-suppressors and monocytes that inhibit the immune response to autologous and syngeneic tumors are found in cancer patients and animals with tumors in the blood, spleen, and among tumor infiltrating cells [1,4, 5, 9, 10, 16, 17]. As has recently been shown T-suppressors circulating in the blood of cancer patients can be activated in vitro in long-term cultivation with IL-2 [3,8].
This paper presents results of study of suppressor activity induction in LAK-cell population in cancer patients receiving adoptive immunotherapy (AIT) at the CRC of the RAMS during 1987—1988. The possibility of the suppression induction was also studied in LAK cell population in normal donors.
Materials and Methods. Blood samples were taken in 7 patients with melanoma and renal cancer during the First AIT cycle by Rosenberg’s schedule [11]. Mononuclear cells (MNC) were isolated from the samples by leukaphoresis and cultured in roller bottles in a medium containing 1000 u/ml of recombinant IL-2 — rIL-2 (biogen, Riga) — to generate LAK cells. 2.5—13.6x10^ LAK cells were administered intravenously 2-3 times to the same patients together with 75,000 units of rIL-2. The patients received 1-5 cycles of AIT depending upon their performance status.
MNCs of normal donors were cultivated in roller bottles under the same conditions and used as control in the study of suppression in-
