CC BY
8
лить первоочередность такого поражения в патогенезе интоксикации кадмием.
Таким образом, данные, полученные нами в остром опыте с перораль-ным введением крысам меченого изотопа кадмия, заставляют предположить, что в патогенезе кадмиевой интоксикации имеет место механизм его кумуляции по крайней мере по первичному эффекту в почке, печени, трубчатых костях и селезенке. Кроме того, можно считать, что органами-мишенями при интоксикации кадмием будут почка, костный мозг, сперма, печень, трубчатые кости и отчасти селезенка. Заслуживает внимания факт преимущественного накопления кадмия в сперме по сравнению с гонадами.
ЛИТЕРАТУРА. Альберт Э. Избирательная токсичность. М., 1971, с. 78, 264—265, 257. — Войнар А. О. Биологическая роль микроэлементов в организме животных и человека. М., 1953, с. 292—301. — Воробьева Р. С„ Шебалин а Л. П. — «Гиг. и сан.», 1975, № 2, с. 102—104. — Коган Ю. С., Штаб-с к и й Б. М. — Там же, 1974, № 11, с. 69—73. —Левина Э. Н. — Общая токсикология металлов. Л., 1972, с. 94—102, 102—121, 126—131. — М о с к а л е в Ю. И. — «Мед. радиол.», 1959, № 5, с. 52—57. — Он же. — Там же, 1959, № 3, с. 6—13. — Berlin М., Ullberg S. — «Arch, environm. Hlth», 1963, v. 6, p. 589—610,— Browning E. Toxicity of industrial Metals. London, 1969. — F r i b e r g L., OdebladE., Forssman M. — «Arch, industr. Hlth», 1957, v. 16, p. 163—168.
Поступила 14/X1 1975 г
THE PROBLEM OF CADMIUM DISTRIBUTION IN THE BODY
G. N. Krasovsky, О. I. Yurasova, 0. G. Charyev, A. I. Skrypnikov, L. G. Kretova
On the basis of an acute test (single introduction of Cd10») the authors found that in th^ pathogenesis of cadmium intoxication the mechanism of its action is due to its cumulation, at least, judging by its primary effect, in such organs as the kidneys, liver, tubular bones and the spleen. The finding was that in cadmium intoxication the organs-targets were the kidneys, bone marrow, sperm, liver, tubular bones and partially the spleen. Cadmium was found to accumulate mainly in the sperm.
УДК 612.017.1.014.46:615.285.7.025.I
Е. Ф. Горбачевская
ИММУНОЛОГИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ ОРГАНИЗМА ПРИ ПЕРОРАЛЬНОМ ВОЗДЕЙСТВИИ "у-ИЗОМЕРА ГЕКСАХЛОРЦИКЛОГЕКСАНА
Всесоюзный научно-исследовательский институт гигиены и токсикологии пестицидов, полимерных и пластических масс, Киев
Настоящее сообщение посвящено анализу состояния иммунологической системы организма кроликов в условиях хронического воздействия на него у-изомера гексахлорциклогексана (ГХЦГ) в дозе, способной вызывать интоксикацию или соответствующей допустимой суточной, исходя из установленной для человека х. В основу суждения о характере иммунологического статуса организма положено изучение аутоиммунного процесса, т. е. исследование гуморальных, клеточных факторов иммунитета и анализ антигенных свойств аутотканей, в частности печени, с учетом известного воздействия на нее именно хлорорганических соединений.
Эксперимент ставили на 50 половозрелых крольчихах породы шиншилла весом от 2500 до 3000 г. Животных разделили на 4 группы: 15 из них (1-я группа) получали через же-лудочно-кишечный тракт ежедневно в течение 3 мес у-изомер ГХЦГ в дозе 4 мг/кг (1/50 Ы)60) в виде 10% взвеси в подсолнечном масле; 10 самок (2-я группа) тем же путем и в течение того же срока получали только подсолнечное масло в количествах, соответствовавших тем, которые поступали в организм крольчих 1-й группы; 15 животным (3-я группа) тем же путем в течение 6 мес вводилась 10% взвесь у-изомера ГХЦГ в дозе 0,2 мг/кг (}11ао„ ЕО60); остальные 10 крольчих (4-я группа) получали только подсолнечное масло-в соответствующих количествах.
1 Справочник по пестицидам. Киев, «Урожай», 1974.
Иммунологическое обследование крольчих проводили до начала эксперимента, затем в динамике через каждые 2 нед и, наконец, по окончании опыта после забоя животных тотальным кровопусканием. Для анализа гуморальных антител разного порядка — полных солевых эритроагглютининов, неполных тепловых эритроконглютининов и эритропреципитинов использовали реакции конглютинации и агглютинации (по Ж. Доссе) с использованием 3% взвеси эритроцитов и титрации в пробирках (по О. Е. Вязову), микропреципитации в жидкой среде (по Н. Н.Клемпарской и Н. В. Раевой) и пассивной гемагглютинации (по П. А. Карташову, Н. Н. Клемпарской). Последние 2 реакции применяли и для определения антител против антигенов, полученных путем водно-солевой экстракции печени самок избранного вида, а по окончании эксперимента — и собственной печени крольчих опытных и контрольных групп.
Клеточные факторы иммунитета анализировали путем культивирования лимфоцитов животных с изолированными клетками их печени (по Луре в модификации Е. Ф. Горбачевской) и определения уровня аутогемолизинов (по Н. Н. Клемпарской). Последнее позволяло судить о состоянии антителогенеза в динамике.
Антигенные свойства нуклеопротеидов печени изучали при помощи метода анафилаксии с десенсибилизацией (по Л. А. Зильберу).
О развитии интоксикации у животных судили по результатам анализа их крови (также в динамике), включая учет ретикулоцитов (по П. В. Жгун) и качественное изучение глобина (по Э. М. Семенчевой).
Результаты экспериментальных исследований подвергли статистической обработке по И. А. Ойвину, Е. П. Тамбовцеву и соавт. и Л. Е. Полякову.
В результате 3-месячного хронического воздействия на организм у-изо-мера ГХЦГ в дозе 1/50 ЬО50 животные оказались резко анемизированными (2,62±0,10 млн. эритроцитов; 38± 1,12 ед. общего гемоглобина при исходных значениях тех же показателей 5,16±0,42 млн. и 76,2±2,57 ед.). При этом у них наблюдалось столь же достоверное (/><0,001) повышение уровня ретикулоцитов (45,6±0,45о/О(> при исходном уровне 20,7±0,88 °/00) и гемоглобина фетального типа (22,1±1,01 % при исходном уровне 5,79±1,19%.
У контрольных животных по истечении того же срока содержание эритроцитов составляло 5,07±0,30 млн., общего гемоглобина — 70,2± ±1,58ед. при исходных значениях 5,31 ±0,28 млн. (Р>0,5) и 74,98±1,92 ед. (Р>0,05) соответственно. Уровень ретикулоцитов равнялся 21,2±1,55с/00 при исходном значении 22,1± 1,06°/оо (Р>0,5), содержание фетального гемоглобина — 6,45±0,47 % при исходном — 5,80±0,13% (Р>0,2).
Развитие анемии у крольчих этой опытной группы сопровождалось нарастанием титров аутоимунных антител. Так, уже спустя 1 мес от начала затравки (по данным реакции агглютинации) средний титр (¿) аутоагглю-тининов равнялся 2 (+17,3;—14,7) % при Р<0,01, а к концу эксперимента достигал 64 (±0,00) % при Р<0,001. Повышение титров аутоантител против эритроцитов и печени (по данным реакции микропреципитации) также начиная с 1-го месяца («+ + +») и к концу эксперимента («+ + ++») считалось достоверным с весьма малой вероятностью ошибки (<1 %). Представление об этом дает рис. 1.
Рис. 1. Агглютинирующие (/) и преципитирующие (2) аутоантитела в сыворотке крови крольчих опытной и контрольной групп (по данным реакции
агглютинации и микропрецитнпации). На оси орднмат — титры антител; на оси абсцисс — время исследования.
Рис. 2. Агрессивное действие иммунных лимфоцитов самок, получавших ^-изомер ГХЦГ в дозе 1/10 ЬО10, по отношению к клеткам аутопечени.
Не у всех контрольных животных проявлялись аутоагглютинины, и средний титр через 3 мес достоверно не отличался от исходной величины —2 (+29,2; —22,6) % и 1,25 (+7,9;—7,3) % при Я>0,1 соответственно. Что касается преципитирующих аутоантител против эритроцитов и печени, то они также определялись не у всех животных (в титрах от «+» до «++») и достоверно не повышались (см. рис. 1).
Сыворотки животных этой опытной группы вступали во взаимодействие с антигенами аутопечени и собственными эритроцитами (по данным реакции пассивной гемагглютинации). Так, через 1 мес от начала затравки средний титр противопеченочных аутоантител достоверно (Я<;0,01) повысился по сравнению с исходным значением и составил 6,2 (+15,8; —13,9) % и 1,8 (+5; —4,8) % соответственно; средний титр противоэритроцитар-ных аутоантител был равен 6,9 (+14,3; —13,6) % при исходном— 1,49 (+5,1; —4,3) % /><0,01; к концу эксперимента средние титры аутоантител против печени и эритроцитов составляли 24 (±0,00) %, Р<0,001.
У контрольных животных соответствующие аутоантитела проявлялись не во всех случаях и не отмечалось достоверного повышения их титров: исходный и конечный средний титр аутоантител против эритроцитов был равен 1,25 (+7,9; —7,3) % и 1,35 (+7,9; —7,3)%, Р>0,1, а против печени — 1,29 (+8,1; —7,8) % и 1,41 (+8,7; —8) %, Р>0,1 соответственно.
Таким образом, у самок 1-й опытной группы (по сравнению с контрольной) зарегистрировано нарастание титров циркулирующих аутоиммунных антител. Кроме того, у этих животных резко повысился уровень ан-тителообразующих клеток, что свидетельствует в пользу ярко выраженного аутоиммунного процесса. Так, количество иммунокомпетентных клеток к концу опыта достигало 33,0± 1,26% при исходном значении 5,28±0,24% (/><0,001). У контрольных животных не обнаружено нарастания количества аутогемолизинов (6,9±0,59% при исходном значении 5,20±0,57%; Р>0,05).Лимфоциты самок 1-й опытной группы оказывали агрессивное, цито-токсическое действие на изолированные клетки аутопечени и в меньшей степени — на клетки печени контрольных животных. Последнее обусловливалось общностью общих и частных (печеночных) органоспецифических антигенов тканей и органов животных определенного вида (рис. 2).
И, наконец, нуклеопротеиды печени самок той же группы приобретали антигенные свойства, не присущие антигенам печени контрольных животных. В пользу этого свидетельствует тот факт, что у всех морских свинок после сенсибилизации нуклеопротеидами печени крольчих опытной группы, десенсибилизации нуклеопротеидами печени контрольных животных и «разрешения» нуклеопротеидами, которыми производили сенсибилизацию, наблюдался анафилактический шок со смертельным исходом. При «разрешении» морских свинок нуклеопротеидами печени контрольных крольчих, которыми производили и сенсибилизацию, анафилактический шок не развивался. Подчеркнем, что уже через 1 мес действие на организм у-изомера ГХЦГ характеризовалось повышенным выбросом в кровоток ретикулоцитов (32,4±0,97°/00, Р<0,001) и усиленным образованием фе-тального гемоглобина, уровень которого в указанный период превышал первоначальный по сути в 2 раза (9,47±0,41 %). Особо следует выделить то обстоятельство, что именно тогда же (через 1 мес) у всех без исключения животных опытной группы достоверно (>1 %) обнаруживались неполные тепловые аутоконглютинины. Этим изменениям сопутствовало напряжение антителогенеза — уровень аутогемолизинов соответствовал 21,3± 1,49%, превышая первоначальный в 3,5 раза (рис. 3).
Таким образом, повышенный выброс ретикулоцитов в общий кровоток, извращение синтеза глобина в сторону образования эмбриональной формы, усиленное проявление аутоиммунных противоэритроцитарных антител и нарастание иммунокомпетентных клеток наблюдались у таких животных раньше, чем наступала выраженная (сообразно другим показателям красной крови) интоксикация организма. Это подевердилось при сопоставлении
данных эксперимента с результатами исследования на крольчихах, подвергавшихся хроническому воздействию у-изомера ГХЦГ в значительно меньшей дозе (1/1ооо ЬО50). В этих условиях эксперимента достоверное (Р<0,001) повышение уровня ретикулоци-тов красной крови (20,1± ±0,38о/оо ПРИ исходном 16,5±0,72°/00) гемоглобина фетального типа (8,03±0,35% вместо 5,92±0,27 %) и количества иммунокомпетентных клеток (8,50±0,33 % вместо первоначального 5,18± ±0,24%) выявилось по прошествии хронического, 3-месячного поступления яда в организм и также сопровождалось проявлением (в 100% случаев) противоэритроцитарных аутоантител. Титр аутоагглютининов достоверно повысился через 3 мес (/ =1,8 (+5; —4,8) %, /><0,001), а к концу эксперимента соответствовал 2,6 (+5;—4,8)%;Я< <0,001). Аутоантитела, направленные против эритроцитов и печени, достоверно повысились также о 3-го месяца от начала затравки (>99 %), не превышая, однако, титр «++» (реакция микропреципитации).
По данным реакции пассивной гемагглютинации в тот же срок отмечено достоверное повышение противоэритроцитарных аутоантител (/=1,8 (+5; —4,8) %, Р<0,001), а к концу опыта — средний титр равнялся 3,09 (+5; —4,8) %, ЖО.СКМ); средний титр противопеченочных аутоантител достоверно (Я<0,001) повысился спустя 3 мес от начала затравки — 1,49» (+5; —4,8) % и к концу опыта достигал 2,69 (+5; —4,8) %, Р<0,001.
Заметим, что в указанный период у животных не наблюдалось развития анемии. К концу эксперимента, т. е. через 6 мес после первоначального введения яда в организм, уровень эритроцитов и общего гемоглобина у животных снизился, оставаясь, однако, в пределах нижних границ установленных исходных величин. Одновременно нарастало количество ретикулоцитов (22,4±0,51 %), фетального гемоглобина (до 10,54±0,33%) и иммунокомпетентных клеток (до 11,43±0,29%) (рис. 4).
Подчеркнем, что на протяжении всего эксперимента у животных, подвергавшихся воздействию у-изомера ГХЦГ в дозе 1/1000 ЬО&0 (в отличие от опытных животных предыдущей серии), аутоконглютинины не обнаруживались. Лимфоциты тех же крольчих (в отличие от предыдущих) не обладали цитотоксическим эффектом по отношению к изолированным клеткам собственной печени (рис. 5). Нуклеопротеиды последних не приобретали анормальных антигенных свойств. Следовательно, аутоиммунный процесс, наблюдавшийся у крольчих, подвергавшихся воздействию у-изомера ГХЦГ в дозе 1/1000 ЬО50, не носил агрессивного, повреждающего характера, как это установлено у животных с выраженной интоксикацией тем же ядом. Заметим, что результаты исследований по всем показателям у контрольных животных этой серии опытов практически не отличались от тех, которые зарегистрированы у контрольных крольчих предыдущей группы.
Отсюда следует, что определение уровней ретикулоцитов и гемоглобина фетального типа, а также выявление антиэритроцитарных аутоантител (методом пассивной гемагглютинации) можно рекомендовать как тесты для раннего выявления развивающегося аутоиммунного процесса при воздействии на организм кроликов малых доз у-изомера ГХЦГ. Иммунологический статус организма обусловлен интенсивностью воздействия на него
fit Н6Г БОК •/.. '/. У.
Опыт
Контроль
* 35 /3
30 /
50 -25 -25 /у
40 -20 -20 /У}2
30 -15 -15 г/ ■ •'
20 -10 -10 - 4 У О 2
/0 - 5 -5 - ^ 1 ■ 1 • -* 3 ■
/мес Змее
/мес Змее
Рис. 3. Уровни ретикулоцитов — Rt (/), фетального гемоглобина — HBF (2) и количества бляшко-образующих клеток — БОК (3) у самок опытной н
контрольной групп. На оси ординат — соответствующие показатели; на оси абсцисс — время исследования.
ао
17
fít H6F БОК
Уоо ■ % %
25 -20 -20 -
20 -15 -15 -
fS -10 -to
10 - 5 - 5
О Змее бмес
Рис. 4. Уровни ретикулоцитов — Rt (/) фетального гемоглобина — HBF (2) и количества бляшкообра-зующих клеток — БОК (3) у самок, получавших у-изомер ГХЦГ в дозе
'/юоо LD50. На оси ординат — соответствующие показатели; на оси абсцисс — время исследования.
I • •
•
• л
Рис. 5. Отсутствие феномена агрессии лимфоцитов самок, получавших у-изомер ГХЦГ в дозе 1/,00о по отношению к клет-
кам аутопечени.
химического вещества. Хроническое действие на организм у-изомера ГХЦГ в дозе VlM0 LD so проявилось усилением аутоиммуного компонента. При выраженной интоксикации организма тем же ядом (доза Уб0 LD50) развился иммунопатологический, аутоагрессивный процесс.
Полученные нами результаты подтверждают утверждение Э. М. Се-менчевой (1972) о повышении уровня фетального гемоглобина, нарастании количества ретикулоцитов и усиленном образовании и поступлении в кровь противоэритроцитарных аутоантител, свидетельствуя вместе с тем о том, что эта «триада» или ее отдельные компоненты проявляются и в скрытом периоде интоксикации, а следовательно, могут служить одним из ранних признаков Изменений в организме, требующих проведения профилактических мероприятий с целью предупреждения развития патологии химической этиологии.
ЛИТЕРАТУРА. Вязов О. Е. — В кн.: Лабораторные методы исследования в неинфекционной иммунологии. М., 1967, с. 156. — Доссе Ж- Иммуногематология. М., 1959. — Ж г у н П. В. — «Лабор. дело», 1962, N° 4, с. 28. — 3 и л ь б е р Л. А. — В кн.: Современные вопросы медицинской науки. М., 1951, с. 271—286. — К а р т а -шов П. А., КлемпарскаяН. Н. — «Лабор. дело», 1971, № 7, с. 426. — Клемпарская Н. Н. — «Ж. микробиол.», 1969, № 8, с. 18—21. — К л е м -парскаяН. Н., РаеваН. В. — «Бйзлл. экспер. биол.», 1961, № 5, с. 77,— Семенчева Э. М. — В кн.: Гигиена применения полимерных материалов и изделий из них. Киев, 1969, с. 467.— Она же. Типы гемоглобина в корме и при воздействии на организм некоторых химических веществ. Автореф. дис. докт. Киев, 1972,— J у р е Р. Т.— tJ. Cell. Physiol.», 1971, v. 78, p. 281.
Поступила 3/111 1976 r.
THE IMMUNOLOGIC STATE OF THE BODY IN PER OS ACTION OF HEXACHLORCYCLOHEXANE v-ISOMER
E. F. Gorbachevskaya
A comparative study of a number of immunologic tests showed that the determination of the level of the faetal type of reticulocytes and haemoglobin, and that of autoantibodies against erythrocytes can be suggested as indices of initial changes of the body immunologic state.
