CC BY
65
target organ damage in primary hypertension // Hypertension. -2005. - Vol. 45. - P.991-996.
59. Wallace S.L., Robinson H., Masi A.T., et al. Preliminary criteria for the classification of the acute arthritis of gout // Arthritis Rheum. - 1977. - Vol. 20. - P.895-900.
60. Weiss T.E., Segaloff A. Gouty Arthritis and Gout. Springfield, III, Thomas. 1959. - P.7.
61. World Health Organization (WHO). Obesity: prevention
and management of the global epidemic. Report of the WHO Consultation. World Health Organ Tech. Rep Ser 2000. - Vol. 894 (i-xii). - 253 p.
62. World Health Organization (WHO). Prevention and management of the global epidemic of obesity. Report of the WHO Consultation on Obesity. - Geneva: WHO 1997.
63. Wyngaarden J.B., Kelley W.N. Gout and hyperuricemia. -New York, 1976. - 512 p.
информация об авторах: Маркелова Евгения Иннокентьевна - мл. научный сотрудник, 115522, г. Москва, Каширское шоссе, д 34/а тел.: (499) 614-39-65, 614-44-90, 614-44-69, факс: (499) 6144468; Барскова Виктория Георгиевна -заведующая лабораторией, профессор, д.м.н.; Корсакова Юлия Олеговна - врач.
© ЧУРБАКОВА О.В. - 2013 616.36-002.2.-053.2-074
иммунологическое состояние детей с хроническим гепатитом в до и после проведения терапии
Ольга Владимировна Чурбакова (Самарский государственный медицинский университет, ректор - акад. РАМН, д.м.н., проф. Г.П. Котельников, кафедра факультетской педиатрии, зав. каф. - д.м.н., проф. Г.В. Санталова)
Резюме. В статье рассматриваются иммунные факторы, влияющие на патогенез хронического вирусного гепатита В у детей. Проводились исследования сыворотки крови детей, больных хроническими вирусными гепатитами В в репликативную фазу для определения иммунологического статуса. Были изучены иммунологические показатели детей до лечения и после проведения терапии. В иммунном статусе больных регистрировались признаки комбинированной иммунной недостаточности. При анализе иммунограммы выявлен дисбаланс как клеточного, так и гуморального звеньев иммунитета. Отклонение иммунологических показателей в сыворотке крови больных с ХВГВ от нормальных показателей является индикатором активности хронического вирусного гепатита.
Ключевые слова: хронический вирусный гепатит, репликативная фаза, иммунологические показатели.
the immunologic state of children with chronic hepatitis b before and after conducting the therapy
O.V. Churbakova (Samara State Medical University)
Summary. In the paper the immune factors influencing on the pathogenesis of chronic viral hepatitis B in children are considered. The research of blood serum of children with chronic viral hepatitis B in a replicative phase for definition of the immunologic status has been carried out. The immunologic parameters of children before and after the treatment have been investigated. In the immune status of patients the attributes of the combined immune insufficiency have been registered. In the analysis of immunogram a disbalance of cellular, and humoral parts of immunity have been shown. The deviation of immunological parameters in blood serum of patients with CVHB from the normal parameters is the indicator of activity of chronic viral hepatitis.
Key words: chronic virus hepatitis, replicative phase, the immunologic parameters.
По данным литературы, в реализации инфекционного процесса при вирусных гепатитах одним из важных факторов является состояние иммунной системы. Нарушения иммунного статуса сопровождают фактически все патологические процессы и нередко приобретают важную, или даже ведущую роль в патогенезе заболеваний, в том числе и при ХГ [10]. Если рассматривать иммунологические аспекты в патогенезе в развитии и исходах ХВГ, решающее значение имеет состояние организма ребенка, в частности, его иммунной системы. Иммунодиагностика при всех процессах имеет значение для изучения этиопатогенеза заболевания, прогнозирования обострения, для выбора метода лечения и оценки его эффективности [9]. В соответствии с поставленными задачами и учитывая данные, полученные при клинико-биохимическом обследовании детей, нами проведено исследование состояния иммунной системы больных с хроническим вирусным гепатитом В (ХВГВ) в репликативную фазу до и после проведения противовирусной терапии.
Цель работы: проанализировать показатели клеточного и гуморального звеньев иммунитета у детей с хроническим вирусным гепатитом В в репликативную фазу до и после проведения терапии.
Материалы и методы
Под нашим наблюдением находилось 109 детей с ХВГВ в репликативную фазу в возрасте от 7 месяцев до 18 лет. Больные были разделены на 2 группы. До проведения терапии - 51 детей. Это дети, которые впервые обратились в стационар и не получали лечение. 2 группа - с вирусологическим ответом на проведенную терапию. Больные после 6 месяцев лечения, у которых улучшились биохимические показатели и снизилась вирусная нагрузка.
Научные исследования включены в программу НИР «Клинико-иммунологические аспекты прогнозирования течения и эффективности противовирусной терапии хронических вирусных гепатитов В и С у детей» 06.02.2011г., номер гос. Регистрации 0120.0602384.
Исследование проводилось в соответствии с Конституцией РФ, глава 2, ст.21, Этическим кодексом Российского врача, Хельсинской декларацией, Конвенцией Совета Европы «О правах человека и биомедицине». Все дети и их родители были информированы о целях и задачах работы, получены их согласие на проведение необходимых диагностических мероприятий и методах лечения (протокол №102 от 16.02.2010г. Комитета по биоэтике при ГОУ ВПО СамГМУ
Росздрава).
Диагноз ставился в соответствии с современными требованиями, с учетом классификации хронических гепатитов (Лос-Анжелес, 1994) и МКБ 10 пересмотр [5]. В соответствии с поставленными задачами были проведены клинические наблюдения и исследования с применением общеклинических, биохимических, инструментальных, иммунологических методов, позволяющих получить наиболее полную и объективную информацию о наблюдаемых детях, больных ХВГ. Верификация диагноза проводилась методом ПЦР и ИФА.
Иммунологические исследования проводились на базе Института экспериментальной медицины и биотехнологий Самарского государственного медицинского университета (директор - д.м.н., профессор Л.Т. Волова). Идентификацию лимфоцитов и их субпопуляций осуществляли стандартным методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием монокло-нальных антител (ИКО-86 и ИКО-31), выпускаемых Нижегородским НПК «Препарат», к их поверхностным антигенам (CD).
Полученные в ходе работы данные регистрировались в индивидуальных картах с одновременным кодированием для последующей компьютерной обработки. Для работы применялись статистические методы описательной статистики, определения статистической значимости разницы между данными в основной и контрольной группах на основе расчета критерия Стьюдента. Анализ проводился при помощи современных пакетов статистического анализа: STATGRAPHICS Plus for Windows версии 4.0, STATISTICA for Windows версии 8.0. Для оформления результатов исследований применялись пакеты из системы Microsoft 0ffice-2010 и CorelDraw-13.
Результаты и обсуждение
В своей работе мы обследовали больных с ХВГВ с определением показателей клеточного иммунитета (содержания основных популяций лимфоцитов), гуморального иммунитета (определение уровня основных иммуноглобулинов и содержание ЦИК в сыворотке крови): до проведения терапии, после лечения (с вирусологическим ответом на проведенную терапию). При лечении больные получали противовирусную и базисную терапию. Все получали препарат интерферон альфа2Ь. Кроме того, дети получали базисную терапию, включающую желчегонные, витаминные препараты и гепатопротекторы (эссенциале, карсил, урсосан).
При анализе иммунограммы мы определили дисбаланс хелперного и супрессорного звеньев иммунитета (табл. 1).
Таблица 1
Иммунологические показатели крови детей с ХВГВ в репликативную фазу
Показатели До начала лечения (n=51) После лечения (n=58) Контрольная группа
CD 3+ (%) 44,19±1,26*** 53,4±1,41*** 63,04±1,13
CD 4+ (%) 23,6±0,83*** 30,9±0,8** 33,03±1,75
CD 8+ (%) 18,31±1,15*** 22,3±0,27*** 24,2±0,81
CD 4+/CD8+ 1,15±0,25** 1,38±0,05** 1,76±0,15
CD 16+ (%) 5,6±0,9** 7,53±1,12** 9,02±1,08
CD 95+ (%) 49,1±1,94*** 43,25±1,72*** 32,5±3,28
HLA-DR (%) 16,0±2,19*** 19,56 ±0,73* 23,16±1,54
ЦИК 176,7±8,67*** 144,2±7,7*** 93,5±0,93
Ig A (г/л) 1,65±0,08** 1,49±0,04** 1,37±0,05
Ig G (г/л) 14,15±0,83*** 11,9±0,21** 9,80±0,76
Ig M (г/л) 1,32±0,06 *** 1,18±0,05 * 0,94±0,07
Примечания. Уровни статистической значимости различия с контролем: *- р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001.
СБ3+ -клетки секретируют инициальный и наиболее эффективный антивирусный фактор резистент-
ности - ИФН-у. В наших исследованиях выявлено снижение показателя СБ3+ маркера Т-лимфоцитов во всех исследуемых группах: у больных до начала лечения -44,19±1,26% и после лечения - 53,4±1,41%.
Субпопуляционный состав Т-лимфоцитов: Т-хелперы/индукторы (СБ4+). Т-клетки СБ4+ (Т-хелперы/индукторы) играют важную роль в индукции цитотоксических Т-лимфоцитов - СБ8+, привлечение макрофагов в очаг вирусной инфекции, а также необходимы для пролиферации и дифференцировки В-клеток. Отмечалось снижение показателя СБ4+ у больных до начала лечения - 23,6±0,83% и после лечения - 30,9±0,8%. В иммунологических показателях до начала лечения наблюдалось выраженное снижение относительного и абсолютного содержания СБ3+ и СБ4+ лимфоцитов [6], что подтверждается нашими результатами исследования.
СБ8+ - Т-лимфоциты (Т-цитотоксические/супрес-соры) обнаруживаются, в основном, во вторичных лимфоидных органах, которые вызывают разрушение инфицированных вирусом клеток по пути некроза и апоптоза. Из таблицы 1 видно, что концентрация СБ8+-лимфоцитов имела тенденцию к снижению по сравнению с контрольной группой: у больных до начала лечения - 18,31±1,15% и после лечения - 22,3±0,27%.
Выявлены низкие показатели иммунорегуляторно-го индекса СБ4+/СБ8+: у пациентов до начала лечения - 1,15±0,25, после лечения - 1,38±0,05. Более низкий показатель иммунорегуляторного индекса у детей, у больных до начала лечения, указывает на угнетение Т-хелперной составляющей с большим нарастанием активности хронического гепатита. Низкие значения содержания СБ4+, СБ8+ и их соотношения - СБ4+/СБ8+ свидетельствует о хелперно-супрессорном иммунодефиците. Стойкое угнетение Т-клеточного звена, резкий дисбаланс иммунорегуляторных клеток в сочетании с толерантностью к вирусу гепатита В определяют про-грессирование патологических процессов в печени, высокую репликативную активность [1].
СБ16+ - это рецептор, который является важным эффекторным механизмом противовирусной резистентности. ЫК-клетки также как и Т-лимфоциты служат источником образования ИФН-у. При ХГВ отмечается снижение количества цитотоксических Т-лимфоцитов [2] и повышение титра СБ16+ [4,8]. Значение показателей СБ 16+ в обе фазы ХВГВ был снижен во всех исследуемых группах по сравнению с контрольной группой: у больных до начала лечения - 5,6±0,9%, после лечения - 7,53±1,12%.
СБ95+-рецептор, индуцирующий Fas-зависимый апоптоз клетки. Содержание СБ95+ - лимфоцитов было увеличено во всех группах детей по сравнению с контрольной группой, особенно до начала проведения терапии: у больных до начала лечения - 49,1±1,94%, после лечения - 43,25±1,72%.
НЬЛ-БЯ - молекулы, экспрессирующиеся на активированных Т-клетках, В-клетках и моноцитах, рассматриваются как маркер состоявшейся активации. Значения показателя НЬЛ-БЯ были ниже, чем в контрольной группе и составили у больных до начала лечения - 16,0±2,19% и после лечения - 19,56±0,73%.
Показатели гуморального звена включали содержание ЦИК и количество иммуноглобулинов основных классов Л, М, О.
В таблице 1 представлены данные о состоянии гуморальных факторов иммунитета у больных с ХВГВ. Наблюдается увеличение содержание Л: у больных до начала лечения - 1,65±0,08 г/л, после лечения - 1,49±0,04 г/л. Хронические вирусные болезни печени протекают преимущественно с увеличением концентрации О и М [3], что подтверждается нашими результатами. Отмечалась тенденция к повышению содержания О: у больных до начала лечения - 14,15±0,83 г/л, после лечения - 11,9±0,21 г/л. Содержание М при ХВГВ в репликативную фазу у детей колебалась от 1,18±0,05 г/л
у детей после лечения до 1,32±0,06 г/л у больных до начала лечения.
Одним из способов элиминации антигенов при хронических вирусных гепатитах является формирование циркулирующих иммунных комплексов. В то же время их значительное и стойкое повышение может быть показателем предрасположенности к развитию иммунопатологических реакций [7]. По сравнению со здоровыми донорами отмечалось повышение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК): у больных до начала лечения - 176,7±8,67 и после лечения - 144,2±7,7.
Недостаток супрессоров СБ8+- клеток усиливает выработку антител и образование иммунных комплексов, что вызывает аутоиммунные поражения. Снижение СБ4+, СБ8+ у детей с ХВГВ в репликативную фазу свидетельствует о том, что Т-клеточный пролиферативный ответ на антигены вирусов гепатита В является достаточно слабым до лечения и усиливается после проведения терапии. Это указывает на выраженный иммунодефицит Т-клеточного звена. После проведения терапии увеличилось содержание СД16+- клеток. Дефицит ЫК клеток до начала терапии сменялся ростом их содержания у детей, ответивших на лечение. Высокие показатели СБ95+ во всех обследованных группах отражают готовность клеток к апоптозу, более выраженную у больных до проведения лечения.
Снижение показателей НЬЛ-БЯ клеток означает явление иммуносупрессии, более выраженной у детей до начала лечения.
Нами выявлен дисбаланс гуморального звена иммунитета в репликативную фазу заболевания при хроническом вирусном гепатите В у детей, который определялся по состоянию В-системы. Содержание Л в репликативную фазу было более повышено у больных до начала проведения лечения. Увеличенное содержание О обусловлено длительным персистированием вируса в организме человека. Повышение уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови говорит об активации гуморального звена иммунной системы на фоне хронической вирусной инфекции. Обнаруженное повышение ЦИК во всех группах, особенно у детей до проведения терапии, является показателем нарастания активности хронического гепатита.
Увеличение сывороточных иммуноглобулинов классов А, М, О и ЦИК свидетельствует о выраженной активации гуморального звена иммунитета в репликатив-ную фазу при ХВГВ у детей.
Таким образом, в иммунном статусе детей с ХВГВ в репликативную фазу до лечения и после проведения лечения отмечались признаки комбинированной иммунной недостаточности, которая проявлялась дисбалансе хелперного и супрессорного звеньев иммунитета и увеличении сывороточных иммуноглобулинов классов А, М, О и ЦИК. Выявленное повышение иммунных комплексов может определять прогрессирующее течение хронического вирусного гепатита В у детей в реплика-тивную фазу до начала лечения.
ЯИТЕРАТУРА
1. Бондаренко А.Л. Роль НЬЛ-фенотипа в формировании хронической НСУ-инфекции // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2002. - №3. - С.40-42.
2. Молочкова О.В., Чередниченко Т.В., Гаспарян М.О. Течение гепатита С у детей // Детские инфекции. - 2002. -№1. - С.21-23.
3. Подымова С.Д. Болезни печени: руководство для врачей. - М.: Медицина, 1998. - 703 с.
4. Птицына Ю.С., Отмахова И.А., Кравченко Г.А. Содержание растворимой формы антигена СЭ38 в сыворотке больных вирусным гепатитом В // Клиническая иммунология. - 2003. - №3. - С.162-164.
5. Радченко В.Г., Шабров А.В., Зиновьева Е.Н. Основы клинической гепатологии. Заболевания печени и билиарной системы. - СПб.: Диалект; М. : Бином, 2005. - С.191-194.
6. Садыкова Ш.С. Значение иммунологических показате-
лей в прогнозе эффективности лечения препаратами интер-лейкинов 1ß и 2 ХВГ С и В: Автореф. дис... канд. мед. наук.
- Алмааты, 2010 - 29 с.
7. Серов В.В., Бушуева Н.В., Игнатова Т.М., Апросина З.Г. Факторы вируса и хозяина в развитии и прогрессировании хронических вирусных гепатитов В и С // Российский журнал гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. - 2006. - №4. -С.12-23.
8. Цой Р.М., Жданюк Н.В., Пак И.В. Показатели иммунного ответа на антиген вируса гепатита В у жителей северного города // Иммунология. - 2001. - №3. - С.49-51.
9. Шахгильдян И.В., Михайлов М.И., Онищенко Г.Г. Парентеральные вирусные гепатиты (эпидемиология, диагностика, профилактика) - М.: ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ, 2003.
- 384 с.
10. Sibal A., Mishra D., Arora M. Hepatitis C in childhood // J. Indian. Med. Assoc. - 2002. - Vol. 100. №2. - P.93-98.
Информация об авторе: Чурбакова Ольга Владимировна - к.м.н., докторант кафедры, e-mail: [email protected], 443099 г. Самара, ул. Чапаевская, д. 89, тел. (846) 3332976
© СПРЫГИН В.г., КУШНЕРОВА Н.Ф., ФОМЕНКО С.Е. - 2013 УДК 615.322.03:616.36-02:547.412.133
влияние профилактического применения олигомерных проантоцианидинов на липидный обмен и антирадикальную активность печени крыс при поражении четыреххлористым углеродом
Владимир Геннадьевич Спрыгин, Наталья Федоровна Кушнерова, Светлана Евгеньевна Фоменко (Тихоокеанскоий океанологический институт им. В.И. Ильичева ДВО РАН, директор - акад. РАН В.А. Акуличев,
лаборатория биохимии, зав. - д.б.н., проф. Н.Ф. Кушнерова)
Резюме. Экспериментальное исследование выполнено на 50 крысах. Показано, что при интоксикации четыреххлористым углеродом (ЧХУ) в печени и плазме крови крыс отмечается снижение антирадикальной активности, основных структурных фосфолипидов мембран и метаболически активных фракций, накопление триа-цилглицеринов, свободных жирных кислот, лизофосфолипидов. Активируется перекисное окисление липидов. Профилактическое применение комплекса олигомерных проантоцианидинов (КОПЦ) до- и в период интоксикации ЧХУ, снижает уровень свободнорадикальных процессов в печени и плазме крови экспериментальных животных и сохраняет показатели липидного обмена. Профилактические свойства КОПЦ при поражении ЧХУ превосходят таковые эталонного гепатопротектора «Легалон».
Ключевые слова: четыреххлористый углерод, печень, плазма крови, олигомерные проантоцианидины, липид-ный обмен, антирадикальная активность.
