CC BY
19
Иммунологические показатели организма овец при введении им живой аттенуированной вакцины против M.agalactiae
Ф.М.Кулибеков
Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической
безопасности, г. Казань
Успех профилактики и ликвидации инфекционных болезней животных, в том числе инфекционной агалактии овец и коз, во многом зависит от наличия эффективных в иммуногенном отношении вакцин.
Для борьбы с контагиозной агалактией овец и коз предложены в мире различные вакцины, в том числе живые аттенуирован-ные и инактивированные формальдегидом [1, 2, 3]. Нами был впервые в условиях Азербайджанской Республики, получен аттенуи-рованный штамм А-319 M. Agalactiae [4]. Нами же было установлено, что вирулентный штамм 8899 M. agalactiae, пассированный 25 раз на развивающихся куриных эмбрионах утрачивает свою вирулентность и сохраняет иммуногенность [5]. Новый аттенуирован-ный штамм А-319 M. agalactiae зарегистрирован нами как вакцинный.
Целью настоящих исследований явилось изучение некоторых показателей иммуногенеза при вакцинации овец против агалактии с применением живой аттенуированной вакцины из штамма А-319 M. agalactiae.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Опыты проводили в двух сериях. В первой серии в опыт были взяты 9 гол. взрослых овец, которых разделили на 3 группы.
Первая группа животных служила контролем, второй группе вакцину вводили в дозе 20 мл, третьей - 25 мл. В этой серии опытов определяли показатели естественной резистентности на 10, 20 и 30 сутки после введения им вакцины.
Фагоцитарную активность нейтрофилов проводили по С.А.Кост и М.И.Стенко (1974). В качестве тест-микроба использовали Staphylococcus aurens, шт.209 с наличием 2 млрд клеток в 1 мл. Фагоцитарную способность нейтрофилов определяли по показателям фагоцитоза: фагоцитарной активности нейтрофилов; фагоцитарному индексу, фагоцитарному числу и фагоцитарной емкости.
Лизоцимную активность сыворотки крови определяли по И.Ф.Храбустровскому и Ю.М.Маркову в модификации Украинского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии (1985).
Во второй серии опыты проводили на 12 взрослых овцах, разделенных на 3 группы по 4 гол. каждой. Овцам первой группы вакцину из аттенуированного штамма А-319 вводили в дозе 20 мл, второй группы -в дозе 25 мл, третья группа животных служила контролем. В этой серии опытов в периферической крови определяли уровень специфических антител с помощью реакции агглютинации по общепринятой ме-
Таблица 1. Показатели естественной резистентности овец первой серии опытов
Группа Фагоцитарная Фагоцитарное Фагоцитарный Фагоцитарная Лизоцимная
животных активность, % число, ед. индекс емкость, 109/л активность
Через 10 сут опыта
1 63,29±1,53 5,22±1,63 9,50±1,81 53,64±5,92 46,27±5,75
2 65,54±1,42 6,20±0,21 9,46±0,21 50,37±3,98 46,18±2,36
3 56,72±1,31 4,69±1,41 9,12±1,40 44,5±5,46 42,97±4,05
Через 20 сут опыта
1 63,29±1,53 5,22±1,63 9,50±1,81 53,64±5,92 46,27±5,75
2 67,62±2,56 6,36±0,65 9,48±0,18 52,93±6,97 46,41±6,34
3 54,43±1,31 4,12±0,76 8,74±1,23 38,06±3,54 38,81±0,45
Через 30 сут опыта
1 65,54±1,42 6,20±0,21 9,48±0,21 50,37±3,98 46,18±2,36
2 67,62±2,56 6,36±0,65 9,48±0,18 52,97±6,97 46,41±6,34
3 53,16±1,87 3,97±0,43 8,65±0,12 31,62±2,41 30,50±2,41
Таблица 2. Результаты определения титра антител в сыворотке крови овец,
иммунизированных M. agalactiae
№ животных РА ИФА
Дни исследований после иммунизации
5 10 15 25 5 10 15 25
Овцам вакцину вводили в дозе 20 мл (первая группа)
1 1:32 1:32 1:64 1:64 1:64 1:64 1:128 1:256
2 1:32 1:64 1:64 1:128 1:64 1:64 1:128 1:128
3 1:16 1:32 1:32 1:128 1:32 1:64 1:128 1:256
4 1:32 1:32 1:32 1:64 1:64 1:64 1:128 1:256
Овцам вакцину вводили в дозе 25 мл (вторая группа)
1 1:32 1:64 1:64 1:128 1:64 1:128 1:128
2 1:32 1:64 1:64 1:128 1:64 1:128 1:128
3 1:32 1:32 1:64 1:128 1:64 1:64 1:128
4 1:32 1:64 1:64 1:128 1:64 1:128 1:128
тодике и с применением иммуноферментного анализа (ИФА) по методике, разработанной нами [6]. Наставление по применению набора для определения в ИФА специфических антител в сыворотке крови овец больных инфекционной агалактией и вакцинированных против этой болезни утверждено начальником Госве-тслужбы при МСХ Азербайджанской Республики С.И.Рустамовой 20 июня 2011 года. Содержание Т- и В-лимфоцитов в периферической крови определяли методом спонтанного розеткообразования Е-РОК в описании И.П.Кондрахина (1985) [7].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. Клинические наблюдения показали, что введения вакцин в дозе 25 мл наблюдали повышение температуры на 1-2 градуса, прихрамывание, снижение аппетита. Указанные явления исчезали к 5-7 дню.
Параметры естественной резистентности животных первой серии опытов представлены в таблице 1.
Из таблицы следует, что введение вакцины в дозах 20 и 25 мл вызывает изменение показателей естественной резистентности, особенно в положительную сторону в группе овец, которым вакцину вводили в дозе 20 мл. Эти данные показывают положительную
тенденцию влияния вакцины в качестве активного иммуногена, что было подтверждено во второй серии опытов, в которой определяли уровень специфических антител и содержание Т- и В-лимфоцитов.
Из таблицы 2 видно, что однократное введение животным вакцины из штамма А-319 М. agalactiae вызвало у них индукцию противомикоплазменных антител. Специфические антитела в сыворотке крови животных обнаруживались уже на 5-й день после введения антигена в организм, содержание которых в дальнейшем постепенно увеличивалось и к 10-15 дню титр в реакции агглютинации составлял 1:32-1:64, а в иммунофер-ментном анализе они выявлялись в титрах 1:64-1:128. Следует отметить, что дозы вакцины равной 20 мл и 25 мл по интенсивности влияния на степень иммуногенеза особо не отличаются, но тем не менее эти данные позволяют высказать мнение об оптимальности вакцины иммунизирующей в дозе 20 мл. В последующем это мнение подтвердилось при определении количественной ха-
Таблица 3. Результаты определения розеткообразующих клеток (Е-РОК) в периферической крови овец иммунизированных вакциной А-319 M. agalactiae
Кол-во Количество клеток Е-РОК
Группа животных живот- до имму- после иммунизации через (дней)
ных низации 5 10 15 25
I - контроль 3 41,70±1,37 42,26±1,10 42,34±1,12 43,07±1,24 42,01±1,32
II - доза вакцины 20 мл 3 42,19±1,39 47,24±3,21 57,47±6,60 49,26±4,42 44,24±2,27
III - доза вакцины 25 мл 3 41,17±1,37 46,44±4,26 52,36±5,57 47,44±3,72 43,26±2,46
рактеристики розеткообразующих клеток (Е-РОК) в периферической крови вакцинированных овец.
Из данных таблицы 3 видно, что динамика изменения количества розеткообразующих клеток указывает о полноценном иммунологическом ответе организма овец, на введение им живой аттенуированной вакцины из штамма А-319 M. agalactiae. При этом увеличение количества иммунокомпетентных клеток сопровождалось повышением титра специфических антител.
Заключение. Установлено, что вакцина А-319 M. agalactiae в дозах 20-25 мл индуцирует выработку специфических противоми-коплазменных антител в высоких титрах с 510 дней после иммунизации овец. Иммунологическая перестройка в организме вакцинированных овец сопровождается увеличением количества иммунокомпетентных Т- и В-клеток, увеличение которых коррелирует с динамикой антителообразования и повышением показателей естественной резистентности.
ЛИТЕРАТУРА
1. Lambert, M. Assessment of a live attenuated vaccine against Mycoplasma agalactiae / Lambert M. // Contagious agalactia and other mycoplasmal diseases of small ruminants. - 1987. - P. 71-76.
2. Aarabi, I. Determination of the viability at +4C of freeze-dried attenuated live agalactiae vaccine / Aarabi I., Vand Yoosefi J. // Arch. Inst. Razi, 1990. - N 41. - P. 58-61.
3. Consenti, B. Profilassi dell"agalassia contagiosa degli ovi-caprini
/ Consenti B., Montagna C.O. // ODV Obiettivi Doc. Veter. - 1989. -T. 10. -N 5. - P. 31-33.
4. Кулибеков, Ф.М. Изучить эпизоотологию, усовершенствовать методы специфической профилактики и диагностики агалактии мелкого рогатого скота / Ф.М.Кулибеков, Г.Г.Дильбази, М.М.Фарзалиев // Отчет заключительный Азербайджанского научно-исследовательского ветеринарного института. - Баку, 1990.
5. Кулибеков, Ф.М. Аттенуация возбудителя инфекционной агалактии овец и коз / Ф.М.Кулибеков // Ветеринарный врач. - Казань, 2011. - №1. - С.12-13.
6. Кулибеков, Ф.М. Разработка метода иммуноферментного анализа для обнаружения специфических антител к M. agalactiae овец и коз / Ф.М.Кулибеков // Ветеринарный врач. - Казань, 2011. - №3. - С.11-13.
7. Кондрахин, И.П. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии: Справочник / И.П.Кондрахин, Н.В.Курилов, А.Г.Малохов и др. - М.: Агропромиздат, 1985. - 287 с.
SUMMARY
Sheep immunological parameters at using live attenuated vaccine against M.agalactiae F.Gulubayov
Federal Center for Toxicological, Radiation and Bioligical Safety, Kazan
A-319 M. agalactiae vaccine was identified to induce specific antibodies production against mycoplasma at 5-10 days at sheep immunization. Vaccinated sheep immunity rearrangement is accompanied by increasing of immunocompe-tend T- and B-cells number, which correlates with antibodies production and natural resistance enhancement.
Поступила 24.02.2012
